胎膜早破产妇细胞凋亡因子Caspase-3、Caspase-9水平表达的临床研究

目的对胎膜早破（premature rupture of membranes,PROM）产妇细胞凋亡因子半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3（cysteinylaspartate specific proteinase-3,Caspase-3）、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-9（cysteinylaspartate specific proteinase-9,Caspase-9）水平表达进行临床研究。方法选取2012-02/2013-02月在作者医院进行剖宫产产妇20例（剖宫组）、阴道分娩产妇20例（自然生产组）及PROM产妇20例（实验组）作为研究对象,采用免疫组织化学法检测其胎膜中Caspase-3、Caspase-9的表达,并用光镜观察胎膜细胞的结构变化,电镜观察胎膜凋亡细胞的改变。结果 3组的Caspase-3、Caspase-9的表达实验组〉自然生产组〉剖宫组,各组间差异均具有统计学意义（P〈0.05）。光镜下实验组胎膜组织结构呈现出明显的改变,电镜下发现凋亡细胞。结论 PROM产妇胎膜组织中的Caspase-3、Caspase-9明显增高,可能是导致PROM的主要原因之一。     

Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9在胎膜早破中的作用

目的:通过检测自发性胎膜早破患者、正常分娩产妇和择期剖宫产产妇胎膜中凋亡因子Caspase-3,-8,-9蛋白的表达及定位,探讨凋亡因子Caspase-3-、8-、9在自发性胎膜早破中的作用。方法:取自发性胎膜早破未发动分娩行剖宫产的患者的胎膜(即胎膜早破组)8例,正常经阴道分娩产妇的胎膜(即阴道分娩组)8例以及无产科并发症择期剖宫产的产妇的胎膜(即剖宫产组)8例,其中,阴道分娩组和剖宫产组均作为对照组。应用免疫组化方法(SP法)对三组胎膜中Caspase-3,-8,-9蛋白的表达及定位进行检测,同时在光学显微镜下观察胎膜组织形态学的改变,在透射电镜下观察胎膜细胞超微结构的变化。结果:Caspase-3,-9蛋白在3组胎膜中均表达,Caspase-3,-9蛋白主要表达在羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养层细胞,少数表达于网状细胞和间叶细胞,均为胞浆表达,胎膜早破组Caspase-3蛋白表达量(OD)为[(62.86±3.83)×10-2],高于阴道分娩组[(42.33±2.99)×10-2]和剖宫产组[(20.97±2.94)×10-2],在阴道分娩组的表达高于剖宫产组,两两比较,差异有统计学意义(P<0.05);胎膜早破组Caspase-9蛋白表达量为[(52.20±3.28)×10-2],高于阴道分娩组[(25.87±5.52)×10-2]和剖宫产组[(17.65±1.78)×10-2],在阴道分娩组的表达高于剖宫产组,两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Caspase-8在3组几乎不表达。胎膜早破组胎膜在光镜下观察发现组织形态学发生明显改变,电镜下可观察到大量凋亡细胞。结论:Caspase-9和Caspase-3分别作为凋亡的线粒体途径的启动因子和效应因子,在胎膜早破中表达明显增高,超微结构也观察到大量凋亡细胞。因此推测线粒体途径的凋亡在胎膜早破发病机制中可能起到一定的作用。     

水通道蛋白-9和Caspase3在胎膜组织中的表达及与羊水过少的相关性研究

目的 探讨水通道蛋白-9(AQP-9)和凋亡蛋白Caspase3在羊水过少产妇和羊水量正常的产妇胎膜中的表达差异。方法 采用免疫组化方法(SP法)分别检测30例羊水过少和30例羊水量正常产妇胎膜组织中AQP-9和Caspase3的蛋白表达水平,并分析这两种蛋白的表达强度。结果 AQP-9和Caspase3蛋白在实验组与对照组产妇的胎膜中均有阳性表达。实验组胎膜中的AQP-9蛋白表达水平明显比对照组低,Caspase3的表达却明显比对照组高,而两者的表达差异均有统计学意义(P＜0.05);同时AQP-9与Caspase3在羊水过少组胎膜细胞中的表达却呈负相关(r=-0.72,P＜0.05)。结论 羊水过少组孕妇胎膜中AQP-9蛋白的低表达与Caspase3蛋白的高表达,提示AQP-9和Caspase3在产妇胎膜中的异常表达可能是羊水过少发生的原因之一。     

胎膜早破与细胞凋亡及细菌性阴道病的相关性研究

目的 探讨细胞凋亡增加及细菌性阴道病是否为胎膜早破的一个发病机理或危险因素.方法 随机选择经阴道分娩的足月初产妇60例,其中胎膜早破者30例作为研究组,其他30例为对照组,用免疫组化法检测两组胎膜组织中Bax、Bcl-2、细胞色素C的表达情况.两组产妇产前均行宫颈液基薄层细胞学检查.结果 胎膜早破组促凋亡蛋白Bax、细胞色素C的阳性表达率高于对照组(P<0.05),但抑凋亡蛋白Bcl-2阳性表达率两组间无统计学差异(P>0.05);胎膜早破组细菌性阴道病的发生率明显高于对照组(P<0.05).结论 胎膜早破的发生与促凋亡蛋白Bax,Cyt-c表达的增强相关,基因调控下胎膜细胞凋亡增加可能是胎膜早破的一个重要的发病机制;妊娠合并细菌性阴道病与胎膜早破明显相关,有必要对妊娠妇女进行常规BV筛查和系统治疗.     

凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2与胎膜早破的关系

目的探讨细胞凋亡相关基因蛋白Bax、Bcl-2在胎膜早破（PROM）组与孕足月胎膜未破裂组胎膜组织上的表达情况及与PROM发病因素的相关性。方法PROM孕妇44例（孕36周以后）作为研究组，26例孕足月无胎膜破裂孕妇作为对照组，采用光镜、透射电镜观察2组胎膜上的细胞是否存在凋亡现象。采用免疫组化法检测凋亡相关基因蛋白Bax、Bcl-2在2组胎膜组织上的表达情况。结果bax的阳性率及表达强度在PROM组中高于对照组（P〈0．01），Bcl-2的阳性率及表达强度在PROM组中低于对照组（P〈0．01）。PROM组44例胎膜组织中Bax、Bcl-2的表达强度无相关性（rs=0．07162，P〉0．05）。结论Bax与Bcl-2的表达失衡可能是胎膜组织上的细胞凋亡基因促凋亡的作用机制。     

bFGF、Bax及细胞凋亡在胎膜中的表达及与胎膜早破的关系

目的研究bFGF、Bax及细胞凋亡在胎膜早破发生发展中的作用。方法选择行剖宫产分娩的初产妇90例,其中胎膜早破者（PROM组）45例,足月完好胎膜者（对照组）45例,采集胎膜组织。①采用免疫组化法检测胎膜组织中bFGF和Bax蛋白的表达;②采用原位末端TUNEL法检测胎膜组织中的凋亡细胞。结果①bFGF和Bax在PROM组中的表达水平显著高于对照组（P〈0．05）;②PROM组凋亡细胞较正常对照组明显增加（P〈0．05）。结论①Bax在PROM患者胎膜组织中呈高表达,提示Bax／Bcl-2比值失衡可能是诱发PROM的细胞凋亡途径之一;②内源性bFGF可能参与胎膜损伤后的自身应激性修复过程,因而有可能作为临床上PROM的治疗手段。     

组织因子途径抑制物-2在胎膜早破中表达的实验研究

目的通过检测组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）在胎膜早破的胎膜中的变化，探讨其在胎膜早破中的作用。方法实验组：胎膜早破20例，其中未临产行剖宫产者10例（胎膜早破剖宫产组），阴道分娩者10例（胎膜早破阴道分娩组）；对照组：未临产剖宫产者10例。采用RT-PCR方法检测上述3组孕妇胎膜TFPP-2 mRNA的表达。Imagetoo图像分析仪分析各组标本相对密度（TFPb2／β-actin），单因素方差分析各组相对密度差异。结果TFP-2 mRNA在实验组的表达量低于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），在胎膜早破剖宫产组中的表达高于胎膜早破阴道分娩组，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论胎膜早破中，胎膜的TFP-2表达减少，胎膜细胞外基质降解增多并导致胎膜破裂。     

细胞色素C、Smac与胎膜早破相关性的研究

目的探讨细胞色素c（cytochrome c,Cyt-c）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶激活剂（second mitochondria-derived activator of caspase,Smac）在胎膜早破中的表达以及与胎膜早破的关系。方法胎膜早破孕妇40例,20例正常孕妇（无妊娠合并症、并发症）作为对照组,均取胎膜破口处组织（2cm×1.5cm×0.5cm）,常规石蜡包埋切片,采用免疫组织化学方法测定细胞色素C、Smac在胎膜组织中的表达。结果①两组病例的胎膜组织均见Cyt-c、Smac的表达;③Cyt-c实验组平均光密度值为0.18±0.04,对照组为0.10±0.02,差异有显著性（〈0.05）;Smac实验组平均光密度值为0.18±0.03,对照组为0.10±0.03,差异有显著性（〈0.05）;③胎膜早破组Cyt-c、Smac的表达呈正相关（r=0.34,〈0.05）。结论胎膜早破中Cyt-c、Smac高表达,推测胎膜早破的发生与细胞凋亡有关。     

实时荧光定量PCR检测胎膜早破胎膜组织中MMP-9 mRNA表达

目的：通过实时突光定量PCR检测胎膜早破胎膜组织中基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase, MMP-9） mRNA 的表达,探讨MMP-9在胎膜早破中的作用。方法：利用实时荧光定量PCR方法测定胎膜早破组35例（足月胎膜早破25例, 足月前胎膜早破10例）和未胎膜早破组25例胎膜组织中MMP-9 mRNA的表达水平。结果：（1）两组胎膜组织中均表达MM-mRNA。（2）胎膜早破组胎膜组织中MMP-9 mRNA明显高于未胎膜早破组（P〈0. 01）,足月胎膜早破和足月前胎膜早破 两组间比较差异无统计学意义（P 〉0.05）。结论：胎膜早破患者胎膜组织中MMP-9 mRNA表达水平高于未胎膜早破组,提 示MMP-9可能参与了胎膜早破的发生。     

人质膜型唾液酸酶对丁酸钠诱导细胞凋亡的影响及其机制

目的：研究人质膜型唾液酸酶(hmSD)对丁酸钠(NaBT)诱导人雄激素非依赖型前列腺癌细胞(PC3细胞)凋亡的影响及其可能机制。方法：以前列腺癌细胞PC3和稳定转染hmSD的前列腺癌细胞(PC3-hmSD)为靶细胞,分别设对照组、NaBT 2.5 mmol•L^-1组、NaBT 5.0 mmol•L^-1组、NaBT 10.0 mmol•L^-1组,采用MTT法检测细胞存活率,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色方法检测细胞凋亡情况,DCFH-DA激光共聚焦法检测细胞内ROS,Western blotting方法检测Bcl-XL、P65和Caspase 9蛋白表达。结果：① NaBT作用48和72 h时,PC3-hmSD细胞的生存率明显高于PC3细胞（P<0.05）;② NaBT 5.0 mmol•L^-1作用4 h,PC3-hmSD组细胞凋亡数明显少于PC3细胞（P<0.05）;③ NaBT诱导细胞内活性氧产生,PC3-hmSD细胞与PC3细胞比较差异无显著性;④ NaBT作用下,与PC3细胞比较,PC3-hmSD细胞Bcl-XL、P65蛋白表达水平增强,而 Caspase 9蛋白表达水平减低（P<0.05）。结论：① hmSD具有抵抗NaBT诱导细胞凋亡的作用;② hmSD对NaBT诱 导活性氧产生无抑制作用;③ hmSD抗凋亡作用可能与Bcl-XL和P65表达上调、Caspase 9表达下调有关。     

Ets-1和MMP-9与亚临床绒毛膜羊膜炎的关系探讨

目的研究Ets-1和MMP-9与亚临床绒毛膜羊膜炎的关系。方法采用免疫组织化学方法检测Ets-1和MMP-9在胎膜早破组及相对应孕周未破膜妊娠组(对照组)胎膜中的表达,同时将所有病例的胎膜进行病理组织学检查。结果 Ets-1和MMP-9在胎膜早破组中的表达明显高于对照组,两者差异有显著意义(P<0.05),而且在发生绒毛膜羊膜炎的研究组中表达更高,两者差异有极显著意义(P<0.01),胎膜早破组中绒毛膜羊膜炎的发生率(68%)明显高于对照组(22.22%)。结论 Ets-1和MMP-9在胎膜早破组中的表达明显增高,其表达程度与感染程度相关。     

线粒体融合素基因-2对肝癌细胞Caspase蛋白表达的影响及意义

目的研究外源性线粒体融合素基因-2（mitofusin-2 gene,mfn2）对肝癌细胞Caspase蛋白表达的影响及意义。方法用脂质体2000将质粒pEGFPmfn2、空质粒pEGFP-N2分别转染肝癌细胞株HepG2,分别检测转染后48h HepG2细胞mfn2 mRNA的表达、蛋白表达及凋亡特异性蛋白酶Caspase3、Caspase 9及proCaspase 9蛋白表达的变化。结果经脂质体2000转染后,HepG2细胞基因组中存在有目的基因特异性片段,转染后细胞中有Mfn2蛋白表达;转染pEGFPmfn2组细胞中Caspase 3、Caspase 9表达明显增加（P〈0.05）,而proCaspase 9的表达明显减少（P〈0.05）。结论外源性mfn2基因转染可激活Caspase 3、Caspase 9,进而激活细胞凋亡信号通路,这可能是mfn2基因诱导肝癌细胞凋亡的可能机制。     

基质金属蛋白酶-9、Ⅲ型胶原、纤维黏连蛋白在胎膜早破发病机制中的作用

目的:观察并检测基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、Ⅲ型胶原、纤维黏连蛋白（FN）在胎膜早破孕妇血清及胎膜组织中的表达水平,探讨其参与胎膜早破的发病机制。方法:40例胎膜早破孕妇,其中未足月胎膜早破组（pPROM组,20例）,足月胎膜早破组（tPROM组,20例）,另外选取同期正常足月妊娠孕妇20名作为对照组。应用酶联免疫吸附试验及免疫组织化学方法检测血清及胎膜组织中MMP-9、Ⅲ型胶原、FN的表达水平,并对测定结果进行相关性分析。结果:3组孕妇血清MMP-9、Ⅲ型胶原、FN含量差异均有统计学意义（P < 0.01）,其中,tPROM组MMP-9显著高于pPROM组,后者又显著高于对照组（P < 0.01）;pPROM组Ⅲ型胶原、FN水平显著低于tPROM组,而后者又显著低于对照组（P < 0.01）。MMP-9在pPROM组和tPROM组胎膜组织中的阳性表达率均高于对照组（P<0.05）。MMP-9在tPROM组胎膜组织中的阳性表达率高于pPROM组,但差异无统计学意义（P > 0.05）。Ⅲ型胶原和FN在pPROM组和tPROM组胎膜组织中的阳性表达率均低于对照组（P<0.05）。Ⅲ型胶原和FN在tPROM组胎膜组织中的阳性表达率低于pPROM组,但差异无统计学意义（P > 0.05）。在pPROM组和tPROM组中,MMP-9和Ⅲ型胶原的表达水平均呈负相关关系（r=-0.874,r=-0.988,P<0.01）,MMP-9与FN的表达水平均呈负相关关系（r=-0.760,r=-0.875,P<0.01）,Ⅲ型胶原与FN的表达水平均呈正相关关系（r=0.529,r=0.876,P<0.05）。在胎膜组织中,MMP-9和Ⅲ型胶原的表达水平呈负相关关系（r=-0.468,P<0.01）,MMP-9和FN的表达水平呈负相关关系（r=-0.493,P<0.01）,Ⅲ型胶原和FN的表达水平呈正相关关系（r=0.885,P<0.01）。结论:MMP-9、Ⅲ型胶原、FN参与胎膜早破的发生,孕妇血清及胎膜组织中MMP-9含量升高、Ⅲ型胶原和FN含量降低,这些因素均可能导致胎膜早破的发生。     

胎膜早破与抗凋亡蛋白Bcl-2表达的研究

目的探讨胎膜早破与抗凋亡蛋白Bcl-2表达之间的关系。方法选择2003年6月～2004年5月在该院住院分娩的足月妊娠胎膜早破孕妇24例(胎膜早破组),另选择同期妊娠足月无胎膜早破的孕妇24例(非胎膜早破组)。全部病例均于自然分娩后立即取胎膜破裂处的胎膜组织5cm×5cm大小,同时胎膜早破组除在上述部位取胎膜组织外,另在距胎膜破口处10cm以上的部位再取同样大小的胎膜组织。全部胎膜组织经石蜡包埋切片后采用免疫组织化学方法进行抗凋亡蛋白Bcl-2表达的测定。结果在两组病例的胎膜组织均可见到Bcl-2的表达;在胎膜早破组的胎膜组织中Bcl-2表达的阳性单位为(9.55±0.24),而非胎膜早破组为(21.37±0.32),两者比较P<0.01,有统计学意义;而在胎膜早破组非破口部位胎膜组织中Bcl-2表达的阳性单位为(9.66±0.19),破口部位Bcl-2表达的阳性单位为(9.55±0.24),两组比较P>0.05,无统计学意义。结论胎膜早破的发生与抗凋亡蛋白Bcl-2表达的减弱相关。     

胎膜早破与难产270例临床分析

目的探讨胎膜早破与难产的关系。方法对1675例无妊娠合并症及并发症的产妇资料进行回顾性分析。其中胎膜早破组270例,胎膜未破病例1405例,从中随机抽取270例作为对照组。结果胎膜早破组270例发生难产102例,难产发生率为37．8％;对照组270例中发生难产54例,发生率为20％。结论胎膜早破是难产的警戒信号,对胎膜早破的孕妇加强临床观察,一旦有难产发生,应及时处理,以减少母儿并发症的发生。     

凋亡相关蛋白Survivin 及Caspase3 在肾细胞癌中的表达及其与凋亡的关系

目的　探讨凋亡相关蛋白Survivin及Caspase 3在肾细胞癌表达及其与肾细胞癌凋亡的关系。方法　应用SP免疫组织化学法检测60例肾细胞癌石蜡切片中 Survivin和 Caspase 3 表达的情况, 并用原位末端标记法 (in situend labeling, ISEL) 标记凋亡细胞, 结合临床资料进行分析。结果　Survivin 在肾细胞癌标本中的表达阳性率为88. 3% (53/60), 而正常对照组中无一例呈阳性表达; Caspase 3在肾细胞癌标本中的表达阳性率为 81 .6% (49/60),与对照组相比差异无显著性意义。Survivin 的表达与肾细胞癌的组织学分级和临床病理分期均显著相关 (均 P<0 .01), 但与组织学分型无关。Caspase 3的表达与肾细胞癌的组织学分级、临床分期及组织学分型均无关。肾细胞癌中Survivin与Caspase 3的表达没有相关性。Survivin阳性组凋亡指数明显低于阴性组 (P<0. 01)。结论　Survivin的表达与肾细胞癌的分化程度和临床病理分期密切相关, Caspase 3蛋白的表达情况与肾细胞癌关系不密切。Survivin 能显著抑制癌细胞的凋亡, 但不能抑制Caspase 3的表达。     

联合检测母血MMP-9、IL-6预测胎膜早破、亚临床绒毛膜羊膜炎的临床意义

目的:通过检测胎膜早破孕妇母血、胎膜组织中MMP-9、IL-6的表达水平,探讨其与胎膜早破、亚临床绒毛膜羊膜炎的相关性,探索预测和诊断亚临床绒毛膜羊膜炎的可行性的生物学指标。方法:ELISA方法检测胎膜早破及对照组孕妇血清MMP-9、IL-6的水平,同时取胎膜破口边缘处胎膜,采用免疫组化法(SP法)检测MMP-9、IL-6在胎膜上的表达;且病理检查确定有无组织学绒毛膜羊膜炎。结果:①胎膜早破孕妇血清MMP-9、IL-6水平明显高于正常对照组;②胎膜早破组胎膜中MMP-9、IL-6表达明显高于正常对照组;③母体血清MMP-9浓度为82.97 pg/ml时,IL-6浓度为46.38 pg/ml时,可作为预测临床绒毛膜羊膜炎的阈值。结论:MMP-9、IL-6可作为预测胎膜早破、合并亚临床绒毛膜羊膜炎的可行性生物学指标,联合检测更有利于早期诊断和预测。