全反式维甲酸对白血病NB4细胞PRAM蛋白的影响

目的:探讨在NB4细胞增殖过程中PRAM蛋白表达情况,并且用全反式维甲酸（ATRA）进行干扰,观察其对PRAM蛋白的影响。方法:①细胞增殖抑制实验:体外培养NB4细胞共5天,用台盼蓝染色法筛选ATRA有效干预浓度后,选取ATRA(1×10^-6mol/L)为目的干预浓度。②Western blot:ATRA(1×10^-6mol/L)持续干扰NB4细胞1、2、3天后检测PRAM蛋白的相对表达量。结果:①与对照组比较,4种浓度ATRA组细胞与NB4细胞的增殖率呈量效与时效关系;浓度越大,抑制率越高;于培养第4天出现最强抑制。②选取1×10^-6mol/L ATRA干扰NB4细胞共3天,对照组及ATRA组PRAM蛋白的表达在时间上有规律性:第2天表达最强烈。③1×10^-6mol/L ATRA使PRAM蛋白在第2天的相对表达量较对照组低（P<0.05）。④1×10^-6mol/l ATRA使NB4细胞PRAM蛋白在第2天出现最大表达量,同时该组细胞出现生长抑制。结论:ATRA能通过PRAM位点来达到抑制APL增殖分化的目的。     

全反式维甲酸对白血病细胞的体外诱导分化研究

应用ＡＴＲＡ对４２例各种不同类型白血病细胞进行了体外诱导化化研究。结果发现经ＡＴＲＡ１－５μｍ浓度诱导分化后，２６例ＡＰＬ患者获得与临床疗效相一致的结果。ＡＴＲＡ诱导分化组织除形态趋于成熟外，还伴有功能上的成熟。经ＡＴＲＡ治疗后，所有ＡＰＬ病例的ＣＦＵ－Ｌ形成明显减低，正常造血细胞集落则恢复至正常水平。表明ＡＴＲＡ除有诱导ＡＰＬ细胞分化，成熟这一特性外，在参于造血重建中有重要作用。     

辛伐他汀联合全反式维甲酸诱导NB4细胞分化凋亡过程中apoM基因表达的变化

目的探讨羟甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶的抑制剂辛伐他汀(SV)联合全反式维甲酸(ATRA)对NB4细胞增殖、分化与凋亡的影响,以及载脂蛋白M(apo M)基因的表达变化。方法以不同浓度辛伐他汀联合ATRA处理NB4细胞,取对数生长期各组细胞分别进行细胞形态观察;MTT法观察细胞增殖能力;流式细胞测定NB4细胞分化指标CD11b和细胞凋亡指标AnnexinⅤ/propidium iodide变化;Real-time RT-PCR测定apoM基因表达。结果重复三次实验结果显示:15μmol/L SV,10μmol/L SV和5μmol/L SV单独处理NB4细胞,随着培养时间延长,细胞抑制率增加(F=7.15,P=0.000),CD11b的表达水平逐渐升高(F=3.41,P=0.014),AnnexinV表达水平逐渐增高(F=43.38,P=0.000),apo M基因表达水平逐渐增高(F=50.31,P=0.000),其中以15μmol/L SV组NB4细胞变化最明显。辛伐他汀和ATRA两药合用CD11b表达协同升高,具有明显交互作用(F=4.09,P=0.025)。ATRA处理NB4细胞后其apo M基因表达水平逐渐下降(F=46.05,P=0.000),而辛伐他汀联合ATRA处理NB4细胞后培养不同时间,apo M基因表达水平不如辛伐他汀和ATRA单药处理变化明显,15μmol/L SV联合ATRA处理NB4细胞72hapo M基因表达水平(32.87±3.60)较24h(24.73±1.78)升高(P<0.05),提示ATRA可以拮抗辛伐他汀引起NB4细胞apo M基因表达水平代偿性升高。结论辛伐他汀以剂量依赖方式体外抑制NB4细胞生长,诱导NB4细胞的分化,促进凋亡,升高apo M基因表达,而ATRA可以拮抗辛伐他汀引起apo M代偿性升高,两药具有协同治疗急性早幼粒细胞白血病的潜能。     

三氧化二砷及全反式维甲酸对白血病NB4细胞PML/RARA融合基因的影响

目的探讨在NB4细胞增殖过程中PML/RARA融合基因表达的情况,并用三氧化二砷(As2O3)和/或全反式维甲酸(All trans retinoic acid,ATRA)干扰后观察目的基因的变化。方法用As2O3(1×106 mol/L)或/和ATRA(1×106 mol/L)干扰体外培养成熟的NB4细胞,后用real/Time PCR检测PML/RARA融合基因的相对表达量。结果ATRA及As2O3均使PML/RARA融合基因表达抑制,但双药联用无明显协同作用(P<0.05)。As2O3对PML/RARA融合基因表达抑制较同剂量ATRA强。结论 ATRA及As2O3均能下调PML/RARA融合基因。As2O3对PML/RARA融合基因的下调作用及对NB4细胞的增殖抑制均比同剂量的ATRA强。双药联用与单药干预,无叠加效应。     

反义核酸和维甲酸对早幼粒白血病细胞NB4的诱导分化

目的：探讨反义核酸和维甲酸对早幼粒白血病细胞株ＮＢ４细胞生长分化的影响。     

冈田酸促进ATRA诱导NB4细胞的分化及增殖抑制

目的：研究蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸（Okadaic acid，OKA）对全反式维甲酸（ATRA）诱导NB4细胞分化及增殖抑制作用的影响。方法：选用ATRA、OKA、ATRA＋OKA分别作用于NB4细胞，采用MTT法测定细胞增殖率，瑞氏染色法和NBT还原实验观察细胞形态的变化，流式细胞仪分析细胞表面CD11b的表达，丝／苏氨酸磷酸化酶试剂盒检测细胞内PP2A活性。结果：（1）MTT结果显示，OKA对NB4细胞增殖的抑制作用不明显；ATRA、ATRA＋OKA作用7天，对NB4细胞的增殖抑制率分别为25．1％、38．4％，ATRA＋OKA组与其他两组相比差异具有统计学意义（P〈0．05）。（2）细胞形态学、NBT及流式细胞仪结果显示，加入OKA能促进ATRA诱导的NB4细胞分化。（3）酶活性分析显示，ATRA诱导的NB4细胞分化过程中，PP2A活性较对照组明显下降，ATRA＋OKA作用后PP2A活性下降更加明显。结论：OKA促进ATRA诱导的NB4细胞增殖抑制作用，可能通过抑制PP2A活性参与细胞分化过程。     

全反式维甲酸诱导对乳腺癌细胞放射敏感性影响的研究

目的 探讨不同浓度全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,ATRA)分化诱导对乳腺癌细胞的放射敏感性影响.方法 MTT法检测细胞体外增殖能力,电镜形态学的观察,流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 全反式维甲酸分化诱导乳腺癌A431细胞株,细胞增殖能力下降,凋亡增加,更多的细胞被阻止于G1/G0期,放射敏感性增强.结论 全反式维甲酸分化诱导能增强乳腺癌A431细胞株放射治疗敏感性,并与浓度成量效关系.     

全反式维甲酸和苯乙酸钠联合对人肝癌细胞的诱导分化作用

目的　探讨全反式维甲酸 (ATRA)和苯乙酸钠 (Na-PA)两者对人肝癌细胞联合作用 .方法　应用台盼蓝染色、MTT法、流式细胞仪、甲胎蛋白测定等方法检测 ATRA和Na PA两者联合对人肝癌细胞的诱导分化作用 .结果　 10μmol· L- 1 ATRA,2 .5 mmol· L- 1 Na PA及两者联合作用 ,可抑制人肝癌细胞株 SMMC- 772 1细胞的生长 ,使细胞恶性表型向正常转化 ,其联合作用组 7d抑制率达 6 6 .5 % ,并能明显降低甲胎蛋白的分泌量 4 9.2 % ,使细胞周期 G0 / G1 期延长5 8.7% ,S期下降 35 .8% (P<0 .0 5 ) ,影响 DNA合成 ,最终产生抑制增殖诱导细胞分化的作用 .结论　 ATRA,Na PA及两者联合应用均可抑制 SMMC- 772 1细胞生长 ,诱导细胞分化 ,ATRA和 Na PA联合对人肝癌细胞的诱导分化有协同作用 .     

丹参酮A与全反式维甲酸协同诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株的分化和凋亡

目的　研究丹参酮 A(Tanshinone A,Tan A)联合全反式维甲酸 (ATRA)对早幼粒细胞白血病细胞 (NB4 )诱导分化及凋亡的协同效应。方法　 0 .5 μg/ m l Tan A分别联合 0 .5 μg/ ml、0 .2 5 μg/ ml和 0 .12 5 μg/ml ATRA作用 NB4细胞 5 d,观察 NB4细胞形态学变化 ,检测硝基蓝四氮唑 (NBT)还原能力 ;流式细胞术检测CD11b,CD33的表达 ,并进行细胞周期和细胞凋亡分析。结果　 Tan A联合 ATRA可协同诱导 NB4细胞分化和凋亡。联合作用组第 5 d细胞生长抑制率均超过 80 % ;90 %左右的 NB4细胞分化 ,其中杆状和分叶核细胞比例超过6 5 % ;NBT还原能力显著升高。流式细胞术分析显示 CD11b表达升高 ,CD33表达降低 ;G0 / G1 期细胞增加 ,有明显的细胞凋亡 ,与 Tan A或 ATRA单独作用组相比均有显著性差异 (P<0 .0 1)。Tan A与 ATRA(0 .12 5 μg/ m l～0 .5 μg/ m l)联合对 NB4细胞的影响没有明显的浓度依赖倾向。结论　 Tan A联合 ATRA对 NB4细胞诱导分化和凋亡有协同作用 ;在 ATRA一定浓度范围内 ,这种协同作用无 ATRA剂量依赖性。     

全反式维甲酸诱导NB4细胞分化过程中泛素-蛋白酶体系统的表达变化

目的筛选在全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化过程中,参与早幼粒细胞白血病-维甲酸α受体(PML-RARα)融合蛋白降解的泛素-蛋白酶体系统相关基因。方法采用基因芯片技术检测泛素-蛋白酶体系统相关基因在ATRA诱导NB4细胞分化过程中的表达情况,并运用实时荧光定量RT-PCR和Western Blot方法在基因和蛋白水平对基因芯片部分结果进行验证,同时对这些基因在ATRA诱导急性早幼粒细胞性白血病(APL)初诊患者原代细胞分化时的表达情况进行检测。结果在ATRA诱导NB4细胞向粒系分化的过程中,发现许多泛素-蛋白酶体系统相关的基因主要在ATRA作用12h后表达上调,其中PSMB8和PSMB9这两个基因的芯片结果通过实时荧光定量RT-PCR和Western Blot得到验证。同时在ATRA作用于APL初诊患者原代细胞后,这些基因的变化情况也与作用于NB4细胞相似。结论在ATRA诱导APL细胞分化过程中筛选出一些受ATRA调控的参与PML-RARα融合蛋白降解的泛素-蛋白酶体系统分子。     

全反式维甲酸对人骨肉瘤细胞凋亡的诱导作用

目的研究全反式维甲酸对人骨肉瘤细胞凋亡的影响。方法在培养液体系中加入不同浓度的全反式维甲酸(ATRA)进行不同时间长度的诱导,以MTT法,流式细胞术,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果1~50μmol/LATRA均能抑制骨肉瘤细胞增殖。5、10、50μmol/L ATRA作用细胞4 d后的凋亡率分别为(12.46±2.37)%、(18.36±1.32)%(、27.15±2.17)%,与对照组[(4.09±1.18)%]比较差异均有显著性意义(均P<0.05)。ATRA浓度越高,抑制作用越明显,呈明显的剂量依赖效应。50μmol/L ATRA作用细胞1、2、34、d后的凋亡率分别为(7.35±1.28)%、(10.72±1.68)%、(17.65±2.14)%(、27.15±2.17)%,与对照组[(4.09±1.18)%]比较差异均有显著性意义(均P<0.05)。ATRA作用时间越长,抑制作用也越明显,呈明显的时间依赖效应。结论ATRA能够诱导人骨肉瘤细胞发生凋亡,呈时间和剂量依赖效应。     

齐墩果酸对体外培养的人白血病NB4细胞增殖的影响

目的用体外培养法探讨齐墩果酸（oleanolic acid,OA）对人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞生长的抑制作用。方法 40、60、80和100μmol.L-1的OA分别处理体外培养的人白血病NB4细胞24、48和72小时后,MTT法检测OA对NB4细胞增殖的影响。结果 OA在体外具有明显的细胞毒性,可抑制NB4细胞增殖,且呈现时间和剂量依赖性。结论 OA在体外可有效抑制人白血病NB4细胞的生长。     

三氧化二砷对NB4细胞珠端粒酶活性的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对NB4细胞珠端粒酶活性的影响,并探讨与细胞增殖、分化及细胞周期之间的关系。方法:应用MTT法、BNT法检测细胞的增殖抑制率、细胞分化率、流式细胞仪检测CD11b的表达率、细胞周期时相比率,以PCR为基础的TRAP法检测端粒酶活性。结果:As2O3能有效地使NB4细胞增殖抑制、诱导分化,伴随着端粒酶活性的变化为活性降低。细胞周期分析发现,G0/G1期高或S期低对应低水平端粒酶活性,G0/G1期低或S期高对应高水平端粒酶活性。结论:As2O3可抑制NB4细胞端粒酶活性,并与细胞分化、细胞周期时相有关。     

LMO4的异位表达对NB4细胞增殖和分化的影响

目的 探讨LMO4 对急性早幼粒白血病细胞系NB4细胞增殖和分化的影响. 方法 利用 qRT-PCR和 Western blot法检测 NB4 中 LMO4 表达;利用慢病毒介导 LMO4 的cDNA感染NB4 细胞后,建立过量表达 LMO4 的 NB4 细胞株;采用MTT法检测细胞增殖;使用全反式维甲酸( ATRA)诱导NB4细胞分化0 ~48 h,瑞氏染色观察分化的细胞特性;流式细胞术分析NB4 细胞分化后产生CD11b阳性的细胞比例. 结果 qRT-PCR 和 Western blot 结果均提示 NB4中LMO4表达增加;ATRA诱导NB4分化时,LMO4的表达降低;MTT结果证实过量表达LMO4促进NB4增殖;瑞氏染色和流式细胞术结果均显示,过量表达LMO4能够促进ATRA诱导NB4细胞分化. 结论 LMO4参与调节NB4细胞的增殖,并能增加NB4细胞对ATRA的敏感性,促进其分化.     

曲古菌素A调节NB4细胞组蛋白乙酰化和p21WAF1/CIP1表达

目的研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatinA，TSA)对人急性早幼粒细胞白血病细胞NB4组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制剂p21^WAF1/CIP1。表达的影响。方法应用300、150、75、37．5、18．75nmol／L浓度的TSA分别作用NB4细胞4、8、12、24、48h，提取细胞的总mRNA和总蛋白，采用RT-PCR技术检测p21^WAF1/CIP1表达情况，并用免疫印迹技术(Western blot)观察组蛋白H3的乙酰化水平变化及p21^WAF1/CIP1蛋白的表达水平。结果TSA对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化；在低浓度时就可引起组蛋白H3的乙酰化。TSA对p21^WAF1/CIP1 p21^WAF1/CIP1蛋白表达的影响呈时间和剂量依赖性。结论TSA能够明显上调NB4细胞组蛋白H3的乙酰化水平，促进细胞周期依赖性激酶抑制剂p21^WAF1/CIP1的表达。     

补骨脂素加长波紫外线诱导HL-60、NB4细胞凋亡时对线粒体膜电位的影响

目的研究补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病细胞HL-60、NB4凋亡时对线粒体膜电位（ΔΨm）的影响。方法细胞与不同浓度PSO,接受或不接受UVA照射后共同培养,电镜下观察细胞超微结构改变,流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化,采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果PUVA处理后的HL-60、NB4细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变;PSO、UVA照射及PUVA均可使细胞凋亡率增加,ΔΨm下降,PUVA的作用显著强于前两者（P〈0.01）。结论PUVA可诱导人白血病细胞发生凋亡,诱导凋亡的途径之一为下调线粒体膜电位水平。     

四硫化四砷对NB4细胞增殖的抑制作用

目的探讨四硫化四砷(As4S4)在体外对NB4细胞增殖的抑制作用。方法As4S4(处理)NB4细胞后,应用台盼蓝排斥实验测定细胞活力,用MTT实验测定细胞增殖抑制率,并观察As4S4对NB4细胞集落形成能力的影响。结果NB4细胞在As4S4存在下进行培养,其细胞活力受到显著抑制,应用MTT实验检测到的As4S4对NB4细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性,半数抑制浓度为2.86μmol/L。同时As4S4以剂量依赖的方式抑制NB4细胞的集落形成能力。结论As4S4在体外具有降低NB4细胞活力、抑制NB4细胞增殖及其克隆形成能力的作用。     

青蒿油多相脂质体对SMMC-7721和NB4细胞株的抑制作用

目的：研究青蒿油多相脂质体对不同肿瘤细胞株的抑制作用。方法：以不同药物浓度的青蒿油多相脂质体作用于SMMC-7721及NB4细胞48h,阿霉素为阳性对照药,采用MTT法检测该制剂对两种细胞株的生长抑制作用。结果：青蒿油多相脂质体对SMMC-7721细胞的半抑制浓度IC50为69.125μg.mL-1,浓度在157.500μg.mL-1时,抑制率高达94.73﹪;对NB4细胞的半抑制浓度IC50为0.098μg.mL-1,浓度在0.315μg.mL-1时,抑制率达到84.96﹪。结论：青蒿油多相脂质体制剂对SMMC-7721和NB4细胞株均具有明显的抑制作用,多相脂质体新剂型对青蒿油抗SMMC-7721细胞有一定的增敏效果。