中国国内首次检测到犬细小病毒CPV-2c

目的分析犬细小病毒(CPV)流行毒株的分子生物学特征,研究犬细小病毒遗传进化规律,了解CPV流行毒株现状。方法收集CPV阳性犬粪PCR扩增CPV-2c后进行RFLP分析,并进行病毒结构蛋白VP2基因的克隆、测序并进行序列分析。结果经RFLP分析及序列测定,2份样品均为CPV-2c阳性,序列分析显示CPV-06/09及CPV-07/09VP2序列与国外CPV-2c的基因序列同源性在99%以上。进化分析表明CPV-06/09及CPV-07/09在进化树中形成一个独立的分支,不同国家的CPV-2c存在一定的差异。结论通过RFLP分析及测序证实2份犬粪便样品为CPV-2c阳性,首次在我国检测到CPV-2c。系统进化树显示两分离株CPV-2c与国外CPV-2c有所差异,可能是传入我国的CPV-2c在向适应地区条件的方向进化,也可能是我国已有CPV变异。     

昌吉州健康人群部分疫苗免疫抗体水平监测分析

目的了解新疆昌吉回族自治州(昌吉州)健康人群麻疹抗体和乙型病毒性肝炎(乙肝)表面抗体水平状况,为免疫规划工作提供科学依据。方法按分层抽样法在全州3个县(市)抽取健康人群226人,进行部分疫苗免疫抗体水平监测。结果本次共调查监测226人,检测出麻疹抗体阳性212人,阳性率为93.81%,麻疹IgG抗体含量均值(GMC)为1 017.59 mIU/ml;检测出乙肝抗-HBs阳性195人,阳性率为86.28%,乙肝表面抗原(HBsAg)阳性率为2.21%。结论昌吉州健康人群麻疹抗体和乙型肝炎表面抗体水平维持较高水平,但仍需进一步提高接种水平,构建全人群的免疫屏障。     

诺如病毒病毒样颗粒的表达及其与Caco-2细胞的结合活性研究

目的在杆状病毒表达系统转染的昆虫SF-9细胞中表达诺如病毒（NorovirUSes,NoV）的衣壳蛋白VPl,并芎令证其与Caco-2细胞的结合活性。方法利用杆状病毒表达系统转染的昆虫SF-9细胞进行诺如病毒VPl蛋白表达,用蔗糖密度梯瞍超速离心方法纯化,采用Westernblot鉴定表达产物,采用流式细胞术检测NoV病毒样颗粒（Virus-likeparticles,VLPs）与Caco-2细胞的结合活性。结果重组质粒转染细胞表达产物经蔗糖密度梯度超速离心后进行SDS~PAGE,在分子质量单位55~70ku之间有3条蛋白带,与预期重组蛋白NoV—VI-Ps大小相符;Westernblot分析各蛋白组分均能被兔抗NoV多抗血清识别;流式细胞仪分析届示,加入重组蛋白NoV—VI—Ps后荧光信号较阴性对照组显著增强,表明表达的重组蛋自NoV—VI．Ps能够与Caco-2结合,且3个组分的结合能力不同（P〈i0·05）,以组分5与Caco-2细胞结合的能力最强（P〈O．05）。结论NoVVI．Ps表达成功,并证明NoV-VI—Ps具有与Caco2细胞结合活性,为N。V疫苗的开发和防治药物的研制奠定了基础。     

HPV 6b结构蛋白L1和沙眼衣原体CTL表位嵌合病毒样颗粒在昆虫细胞中的表达

目的为研制能同时防治人乳头瘤病毒(HPV)和沙眼衣原体(Ct)的嵌合疫苗。方法将Ct主要外膜蛋白(MOMP)插入到HPV衣壳蛋白L1羧基端,通过PCR、酶切、连接等方法构建了杆状病毒表达载体,进一步在大肠杆菌中组装成重组杆状病毒,经感染昆虫细胞表达嵌合病毒样颗粒,并经SDS-PAGE电泳和Westernblot分析鉴定,电镜负染。结果嵌合蛋白HPV6bL1/CtMOMP249-268在昆虫细胞中得到了表达,表达产物的相对分子质量为56000,与HPV6bL1单抗产生特异性反应,电子显微镜观察到病毒样颗粒形成。结论在昆虫细胞中表达的含HPV6bL1和CtCTL表位的嵌合蛋白,能自行组装成病毒样颗粒,为人乳头瘤病毒和沙眼衣原体嵌合疫苗的研究奠定基础。     

犬贾第虫病毒转染载体介导的绿色荧光蛋白在犬贾第虫体内的表达

目的 构建犬贾第虫病毒（Giardia canis virus，GCV）转染载体。 方法 根据GCV基因组（DQ238861）的转录起始位点、复制起始位点及包装位点的序列特征和表达外源基因的顺式作用元件，将绿色荧光蛋白（GFP）基因替换GCV基因部分编码区，构建GCV基因与 GFP基因的嵌合体，并置T7启动子之下。用T7 RNA聚合酶体外转录后经电穿孔转染犬贾第虫滋养体，并用荧光显微镜检测GFP表达情况，间接ELISA测定转染后GFP的表达量。 结果 构建了犬贾第虫病毒重组质粒pGCV634/GFP/GCV2174, 经SacⅠ和NotⅠ双酶切得到约2.0和3.5 kb两条带，与预计值相符。由其介导的绿色荧光蛋白在犬贾第虫体内得到了高效表达，其表达量在转染后第1天达高峰(A₄₉₀=1.8)；以后随时间的延长而逐渐下降，14 d后绿色荧光信号基本消失。 结论 成功构建了犬贾第虫病毒转染载体，为贾第虫细胞基因表达调控的研究提供了方法。     

HepG2.2.15细胞模型功能的重新评价:分泌HBVDNA、cccDNA及血清学标志物的动态变化研究

目的研究HepG2.2.15细胞分泌特点及动态变化,建立稳定的抗HBV药物筛选平台。方法采用微量细胞培养法培养HepG2.2.15细胞株,于第3、6、9、12、15d收集培养上清液,采用ELISA方法检测preS1、HBsAg和HbeAg,采用Abbot试剂盒定量检测HBVDNA,采用Roche荧光定量PCR试剂盒检测HBVcccDNA。结果 HepG2.2.15细胞分泌preS1、HBsAg、HBeAg、HBVDNA的量随着细胞培养时间的延长逐渐增加,其中HBsAg在第9d达到分泌高峰,其余均在第12d达到分泌高峰。HBVcccDNA在第9d检测值仍为0,第12d时检测值达24×103copies/ml。结论 HepG2.2.15细胞具有稳定的分泌HBV病毒及相关抗原的生物学功能,是比较理想的病毒复制及抗HBVDNA药物筛选的细胞模型。本研究所用细胞株及实验方法可靠、稳定且重复性好,适用于抗HBV药物筛选等研究。     

乙型肝炎病毒X蛋白对人肝L-02细胞中COX-2表达的影响

目的:研究在人肝细胞L-02中乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对环氧化酶2(COX-2)表达的影响.方法:构建HBx基因表达载体pIRES2-AcGFP-HBx,转染入人肝细胞L-02中,RT-PCR和Westernblot检测HBx对COX-2表达的影响;通过细胞生长曲线和细胞周期变化,检测HBx蛋白对细胞分裂增殖的作用.同时将含有COX-2启动子核心片段的荧光素酶报告载体pGL3-COX-2转染入上述转染细胞,检测细胞荧光素酶荧光值以观察HBx蛋白对COX-2启动子活性的影响.结果:RT-PCR结果显示仅在HBx基因转染组细胞中有HBxmRNA的表达,且该组细胞中COX-2mRNA相对表达量显著高于空载体对照组和空白对照组(0.76±0.12vs0.28±0.04,0.25±0.03,均P<0.01);Westernblot结果显示,仅HBx基因转染组可见HBx蛋白有明显印迹条带,且该组细胞中COX-2蛋白免疫印迹较两对照组深;细胞生长曲线测定表明HBx基因转染组细胞在第3、4、5天的生长较两对照组显著加快(P<0.05);细胞周期测定显示与两对照组相比,HBx基因转染组G0-G1期比例显著降低,S期和G2-...     

人巨细胞病毒 pp65基因重组蛋白在昆虫细胞中的表达与分析

目的为了制备人巨细胞病毒(HCMV)pp65基因疫苗,应用BacToBac系统对HCMVpp65基因进行表达,并对重组蛋白质的特异性及生物活性进行确定。方法通过脂质体法用HCMVpp65基因重组病毒感染Sf9昆虫细胞,并在感染的不同时期收集细胞,用特异性的HCMVpp65MAb对重组蛋白进行Westernblot,并选择HCMVIgG阳性及阴性的孕妇血清与重组蛋白进行免疫印迹反应。结果重组Bacmid大分子DNA直接转染昆虫细胞可得到100%的阳性重组病毒,病毒滴度为3×107pfu/ml,重组病毒组在感染后48h开始出现一相对分子质量为65000大小的特异带,感染后72h量明显增加,持续至感染后96h,在野生型AcNPV感染细胞及正常昆虫细胞的空白对照中未见该蛋白带。Westernblot显示目的蛋白条带与HCMVpp65MAb发生特异反应。6例阳性血清中有5例与重组pp65发生特异性反应,而阴性对照组未见特异性反应带。结论HCMVpp65基因可在Sf9昆虫细胞中有效表达,且所表达的重组蛋白pp65与人体中感染的野生型HCMVpp65具有相同的抗原性。因此有望为疫苗的制备打下基础。     

乙型肝炎病毒X蛋白上调HepG2细胞中SMYD3的表达

目的 探讨HBV是否通过调控组蛋白甲基化酶SMYD3的表达参与肝癌细胞的恶性生物学行为.方法 通过向肝癌细胞HepG2转染HBx筛选出表达HBx蛋白的细胞株HepG2-HBx.用激光共聚焦定位细胞内HBx蛋白和SMYD3蛋白的表达;实时逆转录PCR、Western blot检测转染HBx前后HepG2细胞中SMYD3 mRNA和蛋白质的表达水平;流式细胞仪检测转染HBx前后HepG2细胞增殖、凋亡的变化情况.对数据进行单因素方差分析. 结果 HBx转染后HepG2细胞中SMYD3 mRNA和蛋白质表达水平明显上调(SMYD3 mRNA:0.18±0.05与0.98±0.15,F=37.240,P<0.05;SMYD3蛋白:0.28±0.03与0.58±0.06,F=21.042,P<0.05).转染HBx后HepG2细胞凋亡率下降(7.90%±0.42%与2.23%±0.14%,P<0.01),细胞增殖能力增强(28.46%±4.33%与36.46%±0.17%,P<0.01).结论 乙型肝炎病毒X蛋白能够上调HepG2细胞中SMYD3 mRNA和蛋白质表达水平;HBx可能通过SMYD3-组蛋白甲基化途径抑制HepG2细胞凋亡、促进细胞增殖.     

重组人白介素-2痘苗病毒对MKN45胃癌细胞感染性及白介素-2蛋白表达

目的　体外研究表达人白介素 2 (hIL 2 )的重组痘苗病毒 (vacciniavirus ,VV)对MKN45胃癌细胞的作用。方法　应用分子病毒学同源重组技术构建能表达hIL 2的重组VV(VMJ6 0 1hIL 2 )。用DNA杂交技术鉴定VMJ6 0 1hIL 2 ,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)检测VMJ6 0 1hIL 2基因产物。用VMJ6 0 1hIL 2体外感染MKN45胃癌细胞株 ,探讨其对体外胃癌细胞的作用。结果　VMJ6 0 1hIL 2对体外MKN45胃癌细胞株有较强的感染性 ,VMJ6 0 1hIL 2感染的MKN45胃癌细胞能分泌具有生物活性的hIL 2蛋白。结论　VMJ6 0 1hIL 2的构建与鉴定 ,进一步为胃癌的免疫基因治疗打下了坚实的基础。     

大肠埃希菌O157:H7环介导等温扩增可视化检测方法的建立

目的建立肠出血性大肠埃希菌O157︰H7环介导等温扩增(LAMP)可视化快速检测方法。方法针对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157︰H7编码脂多糖rfbE基因保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,评价LAMP方法的特异性和灵敏性。结果建立的LAMP法对O157︰H7rfbE基因的最低检出限约为100copy/反应管,检测肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)、宋内志贺菌、福氏志贺菌均为阴性。体系的扩增效率较高,可在40min内出结果。结论建立的基于颜色判定的EHEC O157︰H7LAMP检测方法具有特异、灵敏,设备要求简单等特点,适用于EHEC O157︰H7的快速检测。     

EB病毒相关性肺淋巴瘤样肉芽肿病继发噬血细胞综合征1例

肺淋巴瘤样肉芽肿病(pulmonary lymphomatoid granulomatosis, PLG)临床特征呈非特异性, 与其他常见的肺部疾病类似, 包括各种感染性疾病、结节病、血管炎、肺癌等, 易被临床医师忽视。现报道1例36岁男性患者, 反复发热, 双肺可见多发团片状高密度影, 经分子病理学检测与免疫组织化学检查诊断为EB病毒相关性PLG(3级), 继发噬血细胞综合征, PLG(3级)进展迅速, 预后差。提示活组织检查对PLG的早期病理诊断和有效治疗至关重要。     

非小细胞肺癌中 ALDH1 和 ABCG2 的表达及其临床意义简

目的 检测ALDH1和ABCG2在人非小细胞肺癌组织中的表达状况,探讨二者的相关性及其与临床病理特征的关系.方法采用免疫组化 ElivisionTM plus法检测60例NSCLC和30例癌旁正常肺组织中ALDH1、ABCG2的表达情况.结果 在癌旁正常肺组织中ALDH1、ABCG2的表达率分别为10%、0%,在NSCLC 组织中分别为63.3%、48.3%,差异有显著（P＜0.05）;其阳性表达与肿瘤细胞分化程度、临床分期、淋巴结转移（P均＜ 0.05）; ALDH1的表达与ABCG2的表达无明显相关（P＞0.05）.结论 ALDH1、ABCG2的表达在NSCLC的发生、发展中起重要作用,可以作为预后判断的指标.     

病毒储存库优化方案治疗人类免疫缺陷病毒抑制患者2例

现报道2例在规律抗病毒治疗下人类免疫缺陷病毒(HIV)载量抑制成功而CD4+ T淋巴细胞增长并不理想的HIV抗体阳性患者。根据HIV病毒储存库(HIV DNA)信息对患者的抗病毒治疗方案进行优化后, 2例患者的CD4+ T淋巴细胞数量有所提升。通过总结患者的诊疗经过, 希望能给临床医师带来启发。     

重组人干扰素α-1b对RSV感染性肺炎患儿免疫及TLR4蛋白表达的影响

目的研究重组人干扰素α-1b(rhIFNα-1b)对呼吸道合胞病毒(RSV)感染性肺炎患儿单核细胞Toll样受体4(TLR4)蛋白表达、免疫功能的影响。方法本研究为病例对照研究。采用单纯随机抽样法, 选取青岛市胶州中心医院2017年9月至2018年9月104例RSV感染性肺炎患儿作为研究对象, 按照随机抽签法分为观察组与对照组, 每组各52例。对照组采用常规治疗, 观察组在对照组基础上加用rhIFNα-1b, 持续治疗8 d。观察2组临床疗效、临床症状的改善情况、治疗前后免疫指标水平[CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、血清免疫球蛋白(IgE)]、治疗前后单核细胞TLR4表达情况(TLR4 mRNA、TLR4阳性率)、药物不良反应发生情况。结果治疗后观察组总有效率高于对照组(90.38%比73.08%, χ2=5.22, P=0.022);观察组白细胞计数及体温恢复正常时间、咳嗽症状消失时间、哮喘缓解及喘息音消失时间、肺部查体阳性体征消失时间及住院时长等临床疗效指标均优于对照组(P值均<0.05);而CD3+、CD4+、CD4+/CD8+高于对照组(P值均<0...