鼻咽癌的癌基因与抗癌基因癌蛋白表达的研究

应用免疫组化方法检测了５８例鼻咽癌和２４例鼻咽良性疾患的表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ），Ｎ－ｒａｓ，ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｅｒｂＢ－２，Ｐ５３和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达情况。结果发现鼻咽癌中ＥＧＦＲ，Ｎｒａｓ，ｃ－ｍｙｃ，Ｐ５３和ｃ－ｅｒｂＢ－２的阳性率分别为２９．３％，１７．２％，１２％，８．６％和１２％。鼻咽癌中ＰＣＮＡ的阳性率为１７．９１％，鼻咽良性疾患为６．６７％，两者有极显著的差别（ｔ＝     

大肠癌上皮c-myc蛋白、表皮生长因子受体和增殖细胞核抗原的表达及其与预后意义

应用免疫组化ＬＳＡＢ法检测ｃ－ｍｙｃ、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）对有随访资料的大肠癌的表达。结果提示：ｃ－ｍｙｃ阳性表达中，大肠癌（７０４９％）明显高于正常粘膜（２６６％，Ｐ＜０．０５）。正常大肠粘膜未发现ＥＧＦＲ阳性表达，而大肠癌有较高表达（７７０４％）。ＰＣＮＡ阳性表达中，大肠癌（４６４０±２６．５）％明显高于正常粘膜（１５１２±５．４４）％，Ｐ＜０．０５）。ＥＧＦＲ表达与大肠癌Ｄｕｋｅｓ分期有关（Ｐ＜０．０５）。ＰＣＮＡ表达与大肠癌分化程度及Ｄｕｋｅｓ分期有关（Ｐ＜０．０５）。大肠癌４年生存率ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ表达＞６５％组均明显低于＜２５％组（Ｐ＜０．０５），ＥＧＦＲ－ＬＩ和ＰＣＮＡ－ＬＩ与生存期均有明显负相关。结论表明：ｃ－ｍｙｃ、ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ表达与大肠癌的大肠癌细胞增殖有相关性。ＥＧＦＲ和ＰＣＮＡ表达与大肠癌的生存期均有明显负相关，该两项指标对大肠癌临床诊治和预后的评估有重要价值。     

P53与C－myc基因产物在肝细胞癌中的表达

应用免疫组织化学ＡＢＣ法检测了广东地区３０例人肝细胞癌（ＨＣＣ）Ｐ５３基因及Ｃ－ｍｙｃ基因产物。结果显示ＨＣＣ中Ｐ５３蛋白表达阳性率为４６．７％，ｍｙｃＰ６２蛋白表达阳性率为５６．７％，Ｐ５３蛋白表达阳性率与肿瘤细胞的分化程度有关，分化越差Ｐ５３阳性率越高。ＨＣＣ中同时有Ｐ５３基因和Ｐ６２基因表达者占２３．３％。结果提示：Ｐ５３基因突变和Ｃ－ｍｙｃ基因的激活均与ＨＣＣ的发生发展有关，但两者之间不一定存在依存关系。     

p53、c-myc基因蛋白产物及增殖细胞核抗原在肝细胞癌中的同步检测

目的为弄清Ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ基因和细胞增殖活性与肝细胞癌（ＨＣＣ）发生发展的关系。方法应用免疫组化方法检测了３０例肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中Ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ基因蛋白产物以及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。结果Ｐ５３,ｃ－ｍｙｃ基因表达率分别为４６．７％和５６７％。ｐ５３在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级肝癌组织的表达率有递增趋势;而ｃ－ｎｌｙＣ基因在三级间的表达率却无明显区别。ｐ５３与ｃ－ｍｙｃ基因的同时表达率为２３３％。ＰＣＮＡ阳性细胞的分布在ＨＣＣ中呈四种类型：散在型、边缘型、镶嵌型和弥漫型。ＰＣＮＡ标记指数与ＨＣＣ的分级相关。ｐ５３阳性的ＨＣＣ中ＰＣＮＡＬＩ为５３．８±２４．３,阴性的为３３．１±１５．７（Ｐ＜０．０５）;ｃ－ｍｐｃ基因表达阳性与阴性的ＰＣＮＡＬＩ分别为３８、７±２２．９、４２．８±２１．６（Ｐ＞０．０５）。结论ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ基因均与ＨＣＣ的发生、发展有关,但两者之间无依存关系;伴有ｐ５３基因突变的ＨＣＣ中癌细胞增生活跃,恶性程度高。     

P53与C—myc基因产物在肝细胞癌中的表达

应用免疫组织化学ＡＢＣ法检测了广东地区３０例人肝细胞癌基因及Ｃ－ｍｙｃ基因产物。结果显示ＨＣＣ中Ｐ５３蛋白表达阳性率为４６．７％，ｍｙｃＰ６２蛋白表达阳性率为５６．７％。Ｐ５３蛋白表达阳性率与肿瘤细胞的分化程度有关，分化越差Ｐ５３阳性率越高。ＨＣＣ中同时有Ｐ５３基因和Ｐ６２基因表达者占２３．３％。结果提示：Ｐ５３基因突变和Ｃ－ｍｙｃ基因的激活均与ＨＣＣ的发生发展有关，但两者之间不一定存在依存关系。     

VP—16诱导PC—3细胞凋亡和bcl—2及kc—myc基因表达的研究

目的 研究ＶＰ－１６诱导ＰＣ－３细胞凋亡和癌基因ｂｌｃ－２及Ｃ－ｍｙｃ表达的关系。方法 用末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和流式细胞术（ＦＣＭ）研究ＰＣ－３细胞凋亡,以免疫组化方法研究ｂｃｌ－２及Ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。结果 ＴＵＮＥＬ和ＦＣＭ检测表明,ＰＣ－３细胞的凋亡率随ＶＰ－１６作用浓度增加和作用时间延长而升高;免疫组化结果显示：ｂｃｌ－２和ｃ－ｍｙｃ基因表达的阳性百分率随ＶＰ－１６作用浓度增加和作用     

P53,C—erbB—2过表达与预后相关因素的关系及临床意义

用癌基因和抑癌基因蛋白产物在乳癌中过表达,探讨与病理分级,肿瘤生物学行为和预后指标雌激素受体（ＥＲ）表达的关系,为临床治疗及预后的判断提供客观参数。方法：应用免疫组化Ｓ－Ｆ法检查４８例乳癌中Ｐ５３,Ｃ－ｅｒｂＢ－２,ＰＣＮＡ和ＥＲ表达水平。结果：４８例乳癌中Ｐ５３,Ｃ－ｅｒｂＢ－２,ＰＣＮＡ和ＥＲ阳性表达率分别为５４％,４３％,５２％和４１．６％。Ｐ５３,Ｃ－ｅｒｂＢ－２随着组织分级增高呈递增趋势     

胃癌组织P^53基因突变,蛋白产物的表达及与病人预后的关系

采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法对正常胃粘膜和胃癌组织中Ｐ＾５３基因第２４８和２４９编码区点突变进行分析，同时采用免疫组化方法对Ｐ＾５３蛋白的表达进行观察。结果表明，胃癌组织Ｐ＾５３第２４８编码区点突变率为７．２％，２４９编码区未发现有点突变。胃癌组织Ｐ＾５３染色阳性率为３６．５％，肿瘤大于５ｃｍ组，有淋巴结转移和浆膜侵犯及Ⅲ、Ⅳ期胃癌组Ｐ＾５３染色阳性率分别显著高于肿瘤小于５ｃｍ、无淋巴结转移和浆膜侵犯及     

恶性疟原虫不同虫株间环子孢子蛋白基因多态性分析

本文采用ＰＣＲ方法扩增了恶性疟原虫云南株（ＰＦＤ－３／ＹＮ）环子孢子蛋白（ＣＳＰ）部分基因，将扩增的基因片断克隆于Ｍ１３测序载体进行了基因序列测定。用ＰＣＧＥＮＥ软件对恶性疟原虫不同虫株ＣＳＰ基因序列进行了一系列比较分析。其结果表明恶性疟原虫虫株间ＣＳＰ基因存在多态性，ＰＦＤ－３／ＹＮ株ＣＳＰ基因序列与Ｔ４、Ｗｅｌｃｏｍｅ、ＮＦ５４、３Ｄ７及７Ｇ８等虫株均有不同程度的差异。     

H—2K^b cDNA的克隆及其在多种真核细胞中的表达

目的 克隆Ｈ－２Ｋ＾ｂｃＤＮＡ及研究其在多种真核细胞中的表达。 方法 ＲＴ－ＰＣＲ法扩增Ｈ－２Ｋ＾ｂｃＤＮＡ,克隆入双顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ,ＰＡ３１７包装出重组病毒后,分别感染ＮＩＨ３Ｔ３、ＣＯＳ７及ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ,ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ分析目的基因表达,ＦＡＣＳ分析Ｈ－２Ｋ＾ｂ在细胞膜上的表达。结果 以双顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ介导,分别建立了Ｈ－２Ｋ＾ｂ基因转导细胞：ＮＩＨ３Ｔ     

Survivin、Her-2、P16和PTEN在膀胱癌中的表达及意义

目的研究Survivin、Her2、P16和PTEN蛋白在膀胱癌中的表达及其生物学意义。方法采用免疫组织化学SP法检测43例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱组织中以上4种蛋白的表达。结果4种蛋白在膀胱癌中的表达与在正常膀胱黏膜比较差异均有显著性意义(均为P<0.01)。不同临床分期间Her2和PTEN表达的差异具有显著性意义(P<0.05);不同病理分级间Survivin、Her2和PTEN表达的差异具有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。Her2和Survivin蛋白表达间存在正相关(r=0.821,P<0.05)。结论Her2和Survivin的高表达是膀胱癌预后不良的指征;P16可作为早期诊断的标记物;PTEN则可作为膀胱癌预后不良的独立性指标。     

原发性胃腺癌P53,bcl-2及nm23-H1蛋白表达

①目的 原发性胃腺癌中Ｐ５３,ｂｃｌ－２及ｎｍ２３－Ｈ１蛋白的表达与肿瘤发展的关系。②方法 应用免疫组织化学技术检测８５例原发性胃腺癌标本中Ｐ５３,ｂｃｌ－２及ｎｍ２３－Ｈ１蛋白的表达。③结果 ８５例原发性胃腺癌标本中,Ｐ５３蛋白阳性表达率为４１．１８％,进展期胃腺癌Ｐ５３蛋白阳性表达率高于早期胃腺癌（Ｘ＾２－４．０９７,Ｐ〈０．０５）;淋巴结转移组高于未发生淋巴结转移组（Ｘ＾２＝１１．０１６,Ｐ     

胃癌组织中p16，p53和P-糖蛋白的表达与预后

目的：探讨胃癌及癌前病变组织中p16,p53蛋白和P－糖蛋白（P－gP）的表达与预后的关系。方法应用免疫组化检测20例胃癌前病变、76例腺癌和10例正常组织中p16,p53和Pg-P的表达状况。结果p16,p53蛋白和P-gP在正常对照组、癌前病变组和腺癌组的阳性率分别为90％、705,50％;10％,20％,53％,0,5％,51％,p16,p53和P-gP在癌前病变与腺癌之间的阳性表达以及P16蛋白在临床分期Ⅰ和Ⅱb之间的表达均有显著差异（P＜0．05）,但与肿瘤与化无关,p53蛋白与P-gP阳性表达之间有显著相关（P＜0．05）。结论p16,p53蛋白的异常表达与胃癌的发生有关,胃癌组织中p16蛋白的低表达和p53蛋白高表达均提示该患者预后较差,其中p53蛋白的高表达也提示该肿瘤细胞对某些化疗药物具有耐药性。     

bFGF对NIH3T3细胞TPK,PKC,ERK活性的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NIH3T3细胞酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)及胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的影响,探讨其信号转导机制.方法:分别加入bFGF及PKC抑制剂H-7、MEK1抑制剂PD98059孵育细胞,利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法测定活性.结果:bFGF可使细胞膜TPK、细胞质PKC及ERK活性明显升高.H-7 bFGF、PD98059 bFGF组与只加bFGF组比较TPK活性保持不变,而PKC及ERK活性均下降.结论:TPK、PKC、ERK介导bFGF的信号转导.ERK与PKC是TPK受体下游的两个分支,PKC与ERK可以互相激活.     

鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定

目的建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法。方法通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化。超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白。通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定。结果本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯。与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异。研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了最优的鼠尾胶原蛋白提取条件,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05mol/L醋酸溶液。结论为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础。     

C-erbB-2 ,nm23 蛋白表达与结直肠癌浸润转移的相关性

目的　探讨癌基因C- erbB- 2及转移抑制基因nm23在结直肠癌组织中的表达, 及其与局部浸润、淋巴结转移的关系。方法　采用免疫组化SP法, 检测66 例原发性结直肠癌患者手术切除的癌组织中C- erbB -2 及nm23 蛋白的表达。结果　C- erbB -2 蛋白阳性表达率与结直肠癌组织的分化程度无明显相关性(P>0 05), 与浸润深度、淋巴结的转移呈正相关( P<0. 05, P<0 .01)。nm23 蛋白在结直肠癌无淋巴结转移组中的阳性表达率显著高于有转移组(P<0. 01) , 其阳性表达率与结直肠癌淋巴结转移呈负相关。而且, 在淋巴结转移组中C -erbB -2 蛋白的阳性表达率与nm23 蛋白呈负相关。结论　C- erbB- 2 及nm23 蛋白的异常表达在结直肠癌的发生、发展和淋巴结转移中可能起重要作用。     

胃癌P-耐药糖蛋白和P53、mdm2蛋白表达关系的研究

目的：探讨P－耐药糖蛋白（P－gp)和P53、mdm2蛋白在胃癌组织中的表达关系。方法：应用免疫组化SABC法对79例胃癌进行P－gp、P53、mdm2蛋白表达的检测。结果：P－gp、P53及mdm2蛋白在胃癌组织中的阳性率分别为40．5％（32／79）、58．2％（46／79）、15．2％（12／79）；P－gp表达与淋巴结转移有关（P＜0．01），与胃癌的组织学类型和浸润深度无关（P＞0．05）；P53表达与胃癌的浸润深度和淋巴结转移有关（P＜0．05）；mdm2与胃癌的组织学类型、浸润深度及淋巴结转移无关（P＞0．05）。P－gp过表达与P53过表达呈正相关（P＜0．01），与mdm2过表达呈正相关（P＜0．05）。结论：P－gp、P53及mdm2蛋白多并存于胃癌组织中，可为临床判断病人耐药程度、预后提供依据。     

人骨肉瘤中P27、cyclinE和ki-67的表达

目的 :探讨P2 7、cyclinE和ki 67蛋白在骨肉瘤发生、发展中的作用 ,了解其在人骨肉瘤和骨软骨瘤中的表达。方法 :采用免疫组化S P法检测了 3 0例骨肉瘤和 10例骨软骨瘤中P2 7、cyclinE和ki_67蛋白的表达情况。结果 :P2 7蛋白在骨肉瘤和骨软骨瘤中阳性表达率分别为 3 3 3 3 %和 80 0 0 % ,二者差异有显著性 (P<0 0 5 )。P2 7蛋白在骨肉瘤和骨软骨瘤中表达强度的差异有显著性 (P <0 0 5 )。cyclinE蛋白在骨肉瘤和骨软骨瘤中阳性表达率分别为 93 3 3 %和 3 0 0 0 % ,二者相比差异有显著性 (P <0 0 5 )。cyclinE蛋白在骨肉瘤和骨软骨瘤中表达强度的差异有显著性 (P <0 0 5 )。ki 67蛋白在骨肉瘤和骨软骨瘤中阳性表达率分别为66 67%和 10 0 0 % ,二者差异有显著性 (P <0 0 5 )。ki 67蛋白在骨肉瘤和骨软骨瘤中表达强度的差异有显著性 (P <0 0 5 )。P2 7和cyclinE蛋白在骨肉瘤中的表达强度呈显著负相关 (rs=-0 43 2 ,P <0 0 5 )。P2 7蛋白表达强度与ki 67表达强度之间无相关性 (rs=-0 0 3 4,P >0 0 5 )。cyclinE蛋白表达强度与ki_67蛋白表达强度之间呈显著正相关 (rs=0 64l,P <0 0 1)。结论 :P2 7蛋白在骨肉瘤中呈低表达 ,cyclinE和ki 67蛋白在骨肉瘤中均为高表达 ,三者与骨肉瘤发生、发展密     

胰腺癌组织中rasP21,C—erbB—2和P16蛋白的表达意义

目的：分析胰腺癌组织中rasP21,C-erbB-2和P16蛋白表达的临床意义。探讨诊断胰腺癌的有效方法。方法：40例胰腺闾民埋标本连续切片5μm,HE染色确定肿瘤分化程度,应用S－P法进行免疫组化染色,PBS代替一抗做阴性对照。结果：rasP21,C-erbB-2在胰腺癌组织中的阳性率分别为65．0％（26／40）和47．5％（19／40）。在高、中、低分化肿瘤中阳性率分别为55．56％、66．67％和80．00％及38．89％、50．00％和60．00％,经检验无显著性差异（P＞0．05）,但各级阳性表达率呈逐渐增高趋势。P16蛋白在胰腺癌组织中的表缺失率为55％,在高、中、低分化肿瘤中缺失率分别为27．78％、66．67％和90．005,经检验有非常显著性差异（P＜0．01）。P16蛋白和rasP21,C-erbB-2的蛋白表达具有负相关性（P＜0．05）。结论：检测胰腺癌组织中ras癌基因突变及其蛋白产物可作为胰腺癌诊断的分子生物不手段。rasP21蛋白和C-erbB-2蛋白的表达与肿瘤的恶性度有关;P16蛋白的表达可反映胰腺癌的恶性度,且同一肿瘤有多基因表达。     

nm23低表达和P^53过表达与卵巢上皮癌浸润与转移的关系

探讨Ｐ＾５３蛋白和ｎｍ２３蛋白表达产物二磷酸核苷酸的表达及与肿瘤浸润转移的临床意义。方法：应用免疫组织化学染色方法，对５例卵巢良性上皮肿瘤，５例交界性上皮肿瘤，２４例卵巢上皮癌组织的Ｐ＾５３和ｎｍ２３进行检测。结果：Ｐ＾５３和ｎｍ２３在良性，交界性，卵巢Ⅲ期，卵巢Ⅳ组中表达率分别为０，０，４５％和４６％，４０％，４１％，５４％和２３％，在卵巢上皮肿，ｎｍ２３在没有淋巴结转移组中表达８３％，淋巴结转