多巴胺受体调节对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后焦虑样行为的影响

目的 观察缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠远期黑质酪氨酸羟化酶（TH）的表达及焦虑样行为的变化以及多巴胺（DA）受体拮抗剂干预对其远期焦虑样行为的影响。方法 将120 只7 日龄（P7）SD大鼠分为正常对照组、假手术组、HIBD 组及HIBD+DA 受体拮抗剂组。Rice 法制作HIBD 模型;假手术组予右侧颈总动脉分离,但不予结扎和低氧处理;HIBD+DA 受体拮抗剂组在造模前后予腹腔注射DA 受体拮抗剂,其余组予等量的生理盐水腹腔注射。各组分别于P14、P21 及P28（n=10）进行高架十字迷宫（EPM）实验检测动物的焦虑样行为及应用免疫组织化学方法测定其大脑黑质TH 的表达。结果 P21 及P28 时HIBD 组开放臂停留时间（OT）及开放臂次数比率较正常对照组、假手术组及HIBD+DAR 组增高（P<0.05）,且HIBD+DAR 组OT较正常对照组增高（P<0.05）。P14、P21 及P28 时HIBD 组及HIBD+DAR 组TH 水平均低于正常对照组及假手术组,且HIBD 组低于HIBD+DAR 组（P<0.05）。结论 初生时给予DA 受体拮抗剂能改善HIDB 对青春期焦虑样行为的异常作用并能减轻多巴胺能神经元的损伤。     

线粒体自噬对新生大鼠缺氧缺血脑损伤的影响

目的了解缺氧缺血脑损伤的动物模型中线粒体自噬情况,探讨其在缺氧缺血脑损伤中的作用。方法将120只新生7日龄Sprague-Dawley大鼠分为假手术组、缺氧缺血脑损伤(HIBD)组、自噬抑制剂干预组(3MA组)。HIBD组行右侧颈总动脉结扎后置于低氧仓(8%氧气和92%氮气)2.5 h,3MA组腹腔注射2μL 3MA 30 min后再进行结扎和低氧处理,假手术组不予结扎和低氧处理。在造模后提取各组单细胞悬液,用Mitotracker标记线粒体、Lysotracker标记自噬小体、LC3标记自噬进行免疫荧光共定位观察线粒体自噬情况;荧光探针JC-1染色后,采用流式细胞仪检测线粒体膜电位。TTC染色法检测脑梗死灶大小。提取皮质神经元中的细胞浆蛋白,Western blot法检测线粒体自噬相关蛋白的表达情况。结果与假手术组相比,HIBD组线粒体膜电位明显降低(P0.05),线粒体自噬增加(P0.05),线粒体分裂相关蛋白Drp1、Fis1的表达升高,线粒体外膜蛋白受体Tom20与内膜蛋白受体Tim23的表达降低(P0.05);3MA组膜电位比HIBD组降低更为明显(P0.05),但线粒体自噬程度明显减少(P0.05)。3MA组大鼠脑组织梗死程度较HIBD组明显增加(P0.05)。结论 HIBD能够增加线粒体自噬的发生,抑制线粒体自噬会加重新生大鼠HIBD的损伤程度。     

电刺激小脑顶核对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经元超微结构的影响

目的 探讨电刺激对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠额叶皮质神经元超微结构及突触超微结构的影响.方法 新生7日龄健康SD大鼠60只,随机分成缺氧缺血组(模型组)、电刺激组(干预组)及假手术组(对照组),每组各20只.采用结扎左侧颈总动脉并吸人氮氧混合气体2 h制作新生大鼠HIBD模型.干预组大鼠于于术后第2天开始给予电刺激,30 min/次,1次/d,电刺激小脑顶核时长分刖为3、14、21 d,模型组、对照组不予电刺激,相应时段仅予捕捉固定.电刺激结束后,分别于相应时段各组各取5只大鼠处死.应用透射电镜观察大脑额叶皮质神经元超微结构及突触超微结构的变化.结果 模型组额叶皮质神经元细胞发生固缩性改变,细胞器数量减少,细胞质水肿明显,线粒体肿胀明显,突触数量减少,突触间隙融合不清,突触小泡明显减少;与模型组同时间相比,干预组神经元细胞线粒体水肿明显减轻,突触间隙较清楚,突触小泡增加,至21 d时神经细胞及突触趟微结构接近正常.结论 电刺激可促进HIBD脑组织神经元及突触的超微结构恢复.     

低氧预适应对缺氧缺血性脑损伤大鼠脑保护作用及机制研究

目的 探讨低氧预适应对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑保护作用及相关机制.方法 选用生后7 d SD大鼠48只,随机分为对照组(6只)、假手术组(6只)、HIBD组(18只)和HIBD+低氧预适应(HPC)纽(18只).用湿化的氧浓度为8%的氮氧混合气体以0.3 L/min的流量灌入建立HPC模型.用免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术,分别行大脑皮层和海马神经细胞凋亡、Bcl-2和Caspase-3表达强度的检测.结果 HIBD、HIBD+HPC组TUNEL染色阳性细胞较假手术组明显增多(P<0.05);HIBD+HPC组较HIBD组明显减少(P<0.05).对照组和假手术组大脑皮层、海马可见极少量Bcl-2和Caspase-3表达,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);HIBD、HIBD+HPC组Bcl-2和Caspase-3表达明显高于假手术组,HIBD+HPC组Bcl-2表达高于HIBD组,Caspase-3表达低于HIBD组(P均<0.05).结论 低氧预适应过程中,HIBD大鼠大脑皮层和海马区通过Bcl-2的高表达和Caspase-3的低表达,抵御神经细胞凋亡,参与脑保护机制.     

电针可下调缺氧缺血性脑损伤幼鼠大脑皮层硫化氢含量

目的 建立缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠模型,研究电针干预后大鼠大脑皮层硫化氢(H2S)含量及相关酶的表达变化,探讨电针治疗神经系统疾病的气体生物学机制.方法 SD大鼠32只,日龄7 d,随机分为4组,假手术(sham)对照组,sham+电针(EA)组,HIBD对照组和HIBD+EA组,每组8只.Sham+EA组、HIBD+EA组大鼠于造模次日开始予以电针刺激百会、大椎穴,30min/d,14 d为1疗程.对照组仅固定四肢,不予针刺.疗程结束次日将大鼠处死、取材.应用敏感硫电极法测定大脑皮层H2S含量;应用免疫组织化学法定位和半定量检测胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)表达;应用蛋白质免疫印迹技术定量分析大脑皮层组织CBS表达.结果 HIBD对照组幼鼠脑皮层H2S含量为(26.83±4.31)nmol/mg蛋白,较sham对照组[(22.78±1.54)nmol/mg蛋白]明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01);HIBD+EA组幼鼠脑皮层H2S含量为(18.08±2.71)amol/mg蛋白,sham+EA组为(18.91±2.78)amol/mg蛋白,较相应对照组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01);EA组大鼠脑皮层CBS表达较相应对照组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 电针可下调大脑皮层H2S/CBS体系,这可能是电针发挥对脑损伤修复作用的机制之一.

Abstract：

Objective To establish hypoxic-ischemic brain damaged (HIBD) rat model,investigate whether H2S and cystathionine-β-synthase (CBS), the key enzyme for its generation, may be a mediator of electro-acupuncture(EA) stimulation treatment for HIBD. Methods Thirty-two healthy Sprague-Dawley neonatal rats were divided into four groups randomly: sham control group ( n = 8 ); sham + EA group ( n =8); HIBD control group ( n = 8); and HIBD + EA group ( n = 8 ). HIBD rat models were established on their 7-day-old. From the next day ,rats of sham + EA group and HIBD + EA group were electric stimulated 30 min daily for 14 d,BAIHUI and DAZHUI as the acupoints. Control ones were just fixed at the same time,without acupuncture. The rats were sacrificed on the 22 nd day, one day after the treatment course. Cortical H2S concentration was measured by sensitive sulphur electrode assay. The CBS protein expression was measured by western blot analysis and immunohistochemistry for localization. Results The concentration of cortical H2S in HIBD control group was (26. 83 ± 4. 31 ) nmol/mg protein, which was significantly higher than that of sham control group[(22. 78 ± 1.54) nmol/mg protein]( P ＜ 0. 01 ). The H2 S levels in HIBD + EA group and sham + EA group were ( 18.08 ± 2.71 ) nmol/mg protein and ( 18.91 ± 2. 78 ) nmol/mg protein, respectively. Compared with corresponding control group, they were much lower( P ＜ 0. 01 ). The expression of CBS protein in rats with EA stimulation decreased in cortex compared to corresponding control group( P ＜0. 05 ).Conclusion EA can down-resulate H2S/CBS pathway. This may be one of the mechanisms of how EA contributes to the recovery of brain damage.     

低氧预适应对缺氧缺血性脑损伤大鼠脑保护作用及机制研究

目的探讨低氧预适应对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑保护作用及相关机制。方法选用生后7dSD大鼠48只,随机分为对照组(6只)、假手术组(6只)、HIBD组(18只)和HIBD+低氧预适应(HPC)组(18只)。用湿化的氧浓度为8%的氮氧混合气体以0.3L/min的流量灌入建立HPC模型。用免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术,分别行大脑皮层和海马神经细胞凋亡、Bcl-2和Caspase-3表达强度的检测。结果HIBD、HIBD+HPC组TUNEL染色阳性细胞较假手术组明显增多(P<0.05);HIBD+HPC组较HIBD组明显减少(P<0.05)。对照组和假手术组大脑皮层、海马可见极少量Bcl-2和Caspase-3表达,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);HIBD、HIBD+HPC组Bcl-2和Caspase-3表达明显高于假手术组,HIBD+HPC组Bcl-2表达高于HIBD组,Caspase-3表达低于HIBD组(P均<0.05)。结论低氧预适应过程中,HIBD大鼠大脑皮层和海马区通过Bcl-2的高表达和Caspase-3的低表达,抵御神经细胞凋亡,参与脑保护机制。     

高压氧对缺氧缺血1周内新生大鼠脑皮质细胞线粒体膜电势的影响

目的研究高压氧（HBO）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）1周内脑皮质细胞线粒体功能的影响,探讨HBO对HIBD可能的保护作用及其机制。方法新生SD大鼠360只分为正常对照组、HIBD组和HIBD+HBO组,每组120只。HIBD组和HIBD＋HBO组结扎左侧颈总动脉后暴露于8% O2＋92% N2低氧环境中2 h制备HIBD模型。HIBD+HBO组在缺氧缺血后立即予HBO干预（压力为2 ATA, 每次持续60 min,每日1次,连续7 d）,HIBD组不予HBO干预,正常对照组不予结扎左侧颈总动脉和HBO干预。以HIBD模型建立后设为缺氧缺血后0 h时点,3组于0 h、2 h、4 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d和7 d时点断头处死（各组各时点n=10）,取损伤侧脑皮质制备单细胞悬液,予细胞线粒体膜电势（ΔΨm）标记物罗丹明123（Rho123）孵育,用流式细胞仪检测Rho123的平均荧光强度（MFL）,并以该MFL值作为ΔΨm值。 结果①正常对照组脑皮质细胞ΔΨm值为（4.66±0.80）MFL,HIBD组各时点脑皮质细胞ΔΨm值均低于正常对照组相应时点,且最低为0 h时点［（2.85±0.56）MFL］,各时点差异均有统计学意义（P<0.05）;②HIBD组及HIBD+HBO组脑皮质细胞ΔΨm均呈现降低-恢复-再降低的变化规律,两组ΔΨm初次降低时间均为缺氧缺血后0 h时点,初次恢复时间均为缺氧缺血后2~12 h,再次降低的时间均为缺氧缺血后1~4 d,HIBD+HBO组ΔΨm的再次降低程度更明显且最低为缺氧缺血后3 d时点［（2.62±1.03）MFL］;③HIBD组脑皮质细胞ΔΨm在再次降低后未再回复,而HIBD+HBO组ΔΨm在再次降低后,于缺氧缺血后5 d时点后开始恢复,6和7 d时点ΔΨm值逐渐趋近但低于正常对照组水平,差异无统计学意义（P<0.05）。 结论HBO在HIBD后0 h至3 d内不能改善缺氧缺血损伤侧脑皮质细胞的线粒体功能,HIBO后过早开始HBO治疗可能导致受损脑皮质细胞的进一步损伤,但HBO可能在HIBD后5~7 d内可通过改善脑皮质线粒体功能促进HIBD受损细胞功能恢复。     

米诺环素对未成熟新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的作用

目的 研究米诺环素(minocycline,MN)对未成熟新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的作用.方法 生后2 d(P2)Sprague-Dawley(SD)大鼠192只,随机分成正常对照组、假手术组、HIBD组、HIBD+MN组,每组48只.通过结扎左侧颈总动脉及8%氮氧混合气缺氧4 h,制作未成熟新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型.假手术组只分离左侧颈总动脉,正常组未予任何处理.HIBD+MN组动物于HI后腹腔注射米诺环素45 mg/kg,此后2 d每24小时腹腔注射1次.HI后3 d,1、2、4周,行常规HE染色及病理评分,HI后3 d及2周,行抗O4、抗O1免疫组化及髓鞘脂碱性蛋白(MBP)免疫组化.HI后4周行神经行为学检测.结果 HIBD组病理可见脑室周围白质损伤,HIBD+MN组病变较轻;O4阳性细胞计数:HIBD+MN组与正常组差异无统计学意义,P＞0.05,而HIBD组较正常组,假手术组、HIBD+MN组减少,差异有统计学意义(23.67±12.00 vs 52.89±10.68,39.28±11.78,41.63±8.41,P＜0.05);O1阳性细胞计数:正常组,假手术组、HIBD组、HIBD+MN组组间差异无统计学意义,P=0.093;MBP阳性纤维束计数:HIBD+MN组与正常组、假手术组差别有统计学意义,P＜0.05,而HIBD组较正常组、假手术组、HIBD+MN组减少,差异有统计学意义(14.71 ±7.42 vs 36.67±6.50,35.50±3.24,26.33±5.92,P＜0.05);HIBD组HI后4周出现明显远期行为学异常,在斜坡试验、悬吊试验及Cylinder试验中,HIBD+MN组与正常组、假手术组差别无统计学意义,P＞0.05;HIBD组与正常组、假手术组及HIBD+MN组差异有统计学意义,P＜0.05;在旷场试验中,HIBD+MN组与HIBD组差异无统计学意义,P=0.772,两组与正常组,假手术组差异均有统计学意义,P＜0.05.结论 米诺环素对未成熟新生大鼠缺氧缺血性脑损伤有早期及远期保护作用.     

PI3K/Akt 信号通路对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后学习记忆能力的影响

目的：研究PI3K/Akt 信号通路抑制剂 wortmannin 对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后远期学习记忆及认知功能的影响。方法：于制备新生大鼠左脑 HIBD 模型前 30 min,应用脑立体定位仪定位大鼠左侧海马区,注射wortmannin 2 μL,同时建立 HIBD+DMSO 组、HIBD模型组、假手术组及空白对照组。于大鼠 28 日龄时用 Morris水迷宫试验检测各组大鼠的学习记忆能力。结果：随游泳次数增加各组大鼠逃避潜伏期（EL）时间均有不同程度缩短;从第 2 天开始,HIBD+wortmannin 组EL明显长于假手术组和空白对照组 (t=2.637,P=0.023;t=3.585,P=0.003),且随着时间的延长差距逐渐扩大。到第 4 天和第8天时,HIBD+wortmannin 组EL值明显长于其他4组(P<0.05; P<0.01)。而在空间探索试验撤去平台后 120 s 内,HIBD+DMSO组和 HIBD 组的穿越平台次数低于假手术组和空白对照组（P<0.05）,HIBD+wortmannin组的穿越平台次数低于 DMSO+HIBD 组和 HIBD组（P<0.05）, 同时亦明显低于假手术组和空白对照组（P<0.01）。结论：抑制PI3K/Akt信号通路可加重大鼠认知功能障碍,从而影响远期的学习记忆及认知功能。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠皮质脑组织硫化氢的动态变化

目的 探讨缺氧缺血性脑损伤(HIBD)病理过程中不同时间点新生大鼠皮质脑组织硫化氢(H2S)水平动态变化.方法 SD新生大鼠56只随机分成7组:正常组,假手术组,HIBD 12h组、24h组、48h组、72h组及7d组,每组各8只.HIBD各组大鼠乙醚麻醉后,颈部正中切口,分离左侧颈总动脉,两端结扎中间凝断,消毒后缝合切口,2～4h置常压缺氧舱中,以1.5L/min的速度通入80mL/L氧气和920mL/L氮气的氮氧混合气体2h制成HIBD模型,观察动物行为学变化以确定建模是否成功,舱温控制在37℃左右,湿度为(70±5)%,而后放回原饲养环境继续母乳喂养.正常组不做任何处理.假手术组仅切开颈正中皮肤和分离左侧颈总动脉,不结扎,不吸人氮氧混合气体.HIBD组新生大鼠分别在建模后12、24、48、72h及7d时间点快速断头取脑,分离出左侧大脑皮质,用生化反应方法测定不同时间点新生大鼠皮质脑组织内源性H2S水平.结果 与假手术组相比,HIBD 12h组新生大鼠大脑皮质中H2S水平升高,是假手术组的1.5倍(P＜0.01);之后开始降低,HIBD 48h时,大脑皮质中H2S水平降至最低,与假手术组比较差异非常显著(P＜0.01).HIBD 72h组、7d组新生大鼠皮质脑组织H2S水平与假手术组比较无显著差异.结论 在HIBD过程中新生大鼠皮层脑组织H2S水平呈动态变化,H2S可能参与HIBD新生大鼠的发生发展过程.     

电刺激对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织血管内皮细胞生长因子及其受体表达的影响

目的探讨电刺激对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体表达的影响。方法新生7日龄健康SD大鼠75只。随机分成假手术组(对照组)、缺氧缺血组(模型组)及电刺激组,每组25只。采用结扎其左侧颈总动脉并吸入氮氧混合气体2 h,制作新生大鼠HIBD动物模型。电刺激组大鼠于术后12 h开始予小脑顶核电刺激,30 min.次-1,1次.d-1,时长分别为1 d、3 d、7 d、14 d、21 d。模型组、对照组不予电刺激,相应时段仅予捕捉固定。电刺激结束后,分别与相应时段各取5只大鼠处死后,应用免疫组织化学技术观察其脑组织海马区VEGF及其受体fam样酪氨酸激酶受体(flt-1/VEGFR1)、胎肝激酶受体(flk-1/KDR/VEGFR2)的表达变化情况。应用SPSS15.0软件进行统计学处理。结果电刺激组各时间点VEGF及VEGFR1、VEGFR2表达均显著高于模型组和对照组(Pa<0.05);模型组各时间点VEGF及VEGFR1、VEGFR2表达均显著高于对照组(Pa<0.05);电刺激组和模型组VEGF表达于第3天达高峰,持续14 d开始下降,至21 d仍有表达,VEG...     

促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后神经干细胞的影响

目的探讨外源性促红细胞生成素(Epo)对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后神经干细胞的影响以及Epo的神经保护机制。方法72只新生7日龄Wistar大鼠随机分为对照组、HIBD组和干预组,每组24只。结扎大鼠右侧颈总动脉和8%低氧暴露2h制备新生大鼠HIBD模型。对照组仅游离右侧颈总动脉,不予结扎和缺氧处理。干预组大鼠缺氧缺血后立即腹腔注射重组人促红细胞生成素(rh-Epo)5000IU/kg,每天1次,连用3d。HIBD组大鼠缺氧缺血后连续腹腔注射等量生理盐水3d。每组随机取8只分别于术后4、7、14d处死。应用免疫组化方法和计算机图像分析技术检测不同时点海马齿状回巢蛋白(nestin)标记阳性细胞的变化。结果各时点HIBD组nestin阳性细胞数较对照组增加(P<0.05);各时点干预组nestin阳性细胞较对照组和HIBD组均增加(P<0.05)。3组大鼠海马齿状回区nestin阳性细胞数均于术后7d达高峰。结论早期给予rh-Epo可促使新生鼠HIBD后海马齿状回区nestin表达增加,促进神经干细胞的增殖再生,在HIBD后神经再生、修复中发挥一定的保护作用。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤远期行为学和超微结构改变

目的：建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型,观察远期行为学及超微结构改变。方法：60只7日龄新生Sprague-Dawley大鼠随机分为HIBD组和假手术组,每组30只。生后5周进行Morris水迷宫试验及感觉功能测试;取脑组织切片行尼氏染色计数神经元数目;取皮层、海马行透射电镜,观察突触结构,测量突触后致密区（PSD）厚度及活性区长度,并与行为学结果进行相关分析。结果：Morris水迷宫试验中,HIBD组大鼠寻找平台潜伏期时间明显长于假手术组（P<0.05）;HIBD组大鼠穿越平台次数较假手术组少（P<0.05）。感觉运动功能试验中,HIBD组测试结果明显差于假手术组。尼氏染色提示HIBD组神经元数目明显减少（P<0.01）。电镜显示HIBD组大鼠突触数量减少,PSD厚度及活性区长度变薄变短。HIBD组大鼠PSD厚度与Morris水迷宫试验寻找平台潜伏期时间呈负相关（r=-0.861,P<0.01）,与三项感觉功能评估得分之和亦呈负相关（r=-0.758,P<0.05）。结论：缺氧缺血可致新生鼠远期神经元减少和超微结构损伤,造成远期行为学功能障碍。     

枸橼酸咖啡因对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后髓鞘碱性蛋白的影响

目的研究枸橼酸咖啡因对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑白质髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的影响及其相关机制。方法将48只7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组、HIBD组和枸橼酸咖啡因干预组,每组16只。左侧颈总动脉结扎并缺氧(80 m L/L氧气和920 m L/L氮气)2 h制作HIBD模型;假手术组仅分离左侧颈总动脉,不行结扎及缺氧处理;干预组在缺氧缺血前、缺氧缺血后0、24、48、72 h给予枸橼酸咖啡因(20 mg/kg)腹腔注射,HIBD组分别在同一时间点以等量生理盐水行替代腹腔注射。各组大鼠于12日龄处死,采用免疫组织化学法检测左侧脑皮层下白质MBP的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应技术(Real-time PCR)检测各组大鼠左侧脑组织腺苷A1受体(A1R)和A2a受体(A2a R)m RNA的含量。结果 HIBD组左侧脑皮质下白质MBP表达较假手术组明显减少(P0.05),干预组较HIBD组MBP表达增多,但仍低于假手术组(P0.05);HIBD组A1R m RNA较假手术组显著上调(P0.05),干预组A1R m RNA较HIBD组显著下降(P0.05)。结论枸橼酸咖啡因能减轻缺氧缺血后新生大鼠脑白质损伤,这种保护作用可能与下调腺苷A1R表达有关。     

雄激素对HIBD新生大鼠脑保护作用的量效关系及副作用研究

目的 探讨雄激素对HIBD新生大鼠脑保护作用及量效关系,初步揭示雄激素的远期副作用.方法 3日龄SD大鼠72只随机分为:假手术组(n=8)、HIBD对照组(n=32)、雄激素组(n=32).雄激素组和HIBD对照组各分为4个剂量组,每个剂量组8只.3日龄时雄激素组每个剂量组每只大鼠分别腹腔注射30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg和240 mg/kg的丙酸睾酮,HIBD对照组每个剂量组每只大鼠腹腔注射相应毫升数的花生油,每日1次,连续3 d.7日龄时雄激素组和HIBD对照组制作HIBD模型.所有动物饲养至成年后进行水迷宫实验以测定空间学习记忆能力;成年雌鼠每日做阴道涂片,明确每只大鼠的完整发情周期,对于处于发情期的雌鼠及时与雄鼠合笼,次日晨雌鼠做阴道细胞涂片检查,并观察有无阴栓,以查到精子或观察到阴栓作为受孕成功标志,记录各组雌鼠的妊娠率以及妊娠胚胎数目,进行统计学处理,比较组间差异.计算成年雄鼠睾丸系数和附睾系数.结果 水迷宫实验中,HIBD对照组较假手术组平均潜伏期(27.71±3.19)s和首次穿越平台时间(5.34±0.83)s明显延长,HIBD对照组较假手术组穿越目标象限次数(18.88±1.89)明显减少,均有统计学意义(P均＜0.01,P=0.0005＝.雄激素组中各相应剂量组平均潜伏期(34.89±3.68,33.71±3.38,33.84±3.45,35.43±2.43)和首次穿越平台时间(5.39±1.51,6.28±2.07,5.09±1.61,5.85±0.87)较HIBD对照组明显缩短,穿越目标象限次数(12.75±2.05,14.88±3.36,14.88±2.36,14.38±1.60)较HIBD对照组明显增加,均有统计学意义(P均＜0.01,P=0.0001＝.雄激素组各剂量组以上指标相比均无统计学意义(P均＞0.05,P=0.159).雄激素各剂量组雄性大鼠睾丸系数(0.89 ±0.07,0.92±0.08,0.88±0.11,0.87±0.09)和附睾系数(0.25±0.02,0.24±0.05,0.26±0.04,0.23 ±0.05)与假手术组和HIBD组相比,差异均无统计学意义(P＞均0.05,P=3.207),雄激素组各剂量组间相比无统计学差异(P＞0.05,P=6.663);雄激素各剂量组雌性大鼠的怀孕率(均100%)及妊娠胚胎数(14.52±3.34,14.69±2.28,14.98±2.67,15.38±3.07)与假手术组和HIBD组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05,P=5.085).结论 HIBD对大鼠的空间学习记忆能力有影响,可降低其空间学习记忆能力.雄激素干预后可明显降低HIBD对大鼠学习记忆能力的影响.雄激素的早期干预对成年后大鼠的生殖能力无影响.

Abstract：

Objective To explore brain-protective effect of androgen, its dose-effect relationship and long-term adverse reaction. Method Seventy two 3-day-old SD rats were randomized into androgen group( n = 32) , HIBD model group ( n = 32 ) and sham operated group ( n = 8 ). The androgen group and HIBD model group were further randomized into 30 mg/kg group, 60 mg/kg group, 120 mg/kg group and 240 mg/kg group, respectively. In androgen group and HIBD group, every rat was given testosterone or peanut oil, one time a day. Three days later, HIBD model was established by occlusion of the left common carotid artery and inhalation of 8% oxygen plus 92% nitrogen for 2.5 hours. Adult rats' ability of learningand memory was determined by water maze test. Escape latencies were recorded and analyzed by statistics.Vaginal cells of all female rats were examined everyday for identifying their estrous cycle. Female rats were allowed to live with normal adult male rats if the female rats were in estrous period. Vaginal cells were examined everyday until sperm was seen, which was the signal of gestation. Pregnancy rate and the number of embryos were recorded and analyzed by statistics. Acropetal coefficient was calculated. The testes and epididymis were taken from adult male rats, histopathological sections were made, and the structure of testis and epididymis were studied under light microscope. Result In Morris experiment, escape latencies (EL)of HIBD group were much longer than those of sham operation group( 27.71 ± 3.19)s, time of first enter target ( 1st ET) was later than that of sham operation group(5.34 ±0.83)s, times of target cross (TC) was less than that of sham operation group ( 18.88 ± 1.89 ) ( P ＜ 0.01, P = 0. 0005 ). EL of androgen group (34.89 ± 3.68,33.71 ± 3.38,33.84 ± 3.45, 35.43 ± 2.43 ) were much shorter than that of HIBD group,1st ET (5.39 ± 1.51,6.28 ±2.07,5.09 ± 1.61, 5.85 ±0.87)was earlier than that of HIBD group, TC ( 12.75 ± 2.05,14.88 ± 3.36,14.88 ± 2.36,14.38 ± 1.60) was more than that of HIBD group ( P ＜ 0.01,P=0.0001). Among the four doses groups of androgen group, EL, 1st ET and TC had no statistical significance (P ＞0.05, P =0.159). There were no statistical significance between male rats of androgen group [Testes acropetal coefficient ( 0.89 ± 0.07,0.92 ± 0.08, 0.88 ± 0.11,0.87 ± 0.09 ), epididymis acropetal coefficient ( 0.25 ± 0.02,0.24 ± 0.05,0.26 ± 0.04,0.23 ± 0.05 )], HIBD group and sham operation group( P ＞ 0.05, P = 3.207 ). Among the four doses groups of androgen group had no statistical significance ( P ＞ 0.05, P = 6.663 ). There were no statistical significance between female rats of androgen group( pregnancy rate, 100%; times, 14.52 ± 3.34,14.69 ± 2.28,14.98 ± 2. 67, 15.38 ± 3.07 ), HIBD group and sham operation group in pregnancy rate and times. Conclusion The intellectual ability of rats decreased after HI. Androgen could reduce the effect of HI on intellectual ability. Androgen had no adverse reaction to the reproductive capacity of adult rats.     

骨髓基质细胞脑内移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑白质的保护作用

目的：探讨骨髓基质细胞 (BMSCs)脑内移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑白质损伤的保护作用。方法：34只7日龄新生SD大鼠，随机分为正常对照组（n＝10）、HIBD组（n＝12）和移植组（n＝12），后两组大鼠结扎左颈总动脉后低氧暴露2 h制作HIBD模型，移植组大鼠在HIBD后24 h在大鼠脑立体定位仪下，将体外培养3~5代的SD大鼠BMSCs用Hochest 33324标记24 h后脑内移植于左侧海马。日龄45 d时处死大鼠，用荧光显微镜观察BMSCs在脑内的存活及BMSCs的O4的阳性表达。行髓鞘碱性蛋白（MBP）检测左侧胼胝体和皮质下白质MBP表达，行O4免疫组织化学检测左侧侧脑室周围和皮质下白质O4的表达。结果：BMSCs移植后37 d，移植部位及左侧皮层区（损伤侧）均可见到胞核蓝色的BMSCs，移植细胞表达O4的阳性率为（3.70±1.09）%。HIBD组左侧（损伤侧）胼胝体和皮质下白质MBP染色变浅，有不同程度的髓鞘脱失改变，左侧侧脑室周围和皮质下白质O4阳性细胞数较对照组明显减少，差异均有显著意义（P<0.01）。移植组胼胝体和皮质下白质MBP染色较深，部分有髓鞘脱失改变，相同部位O4阳性细胞数较对照组稍减少，比HIBD组明显增加，其差异有显著意义（P＜0.01）。结论：BMSCs脑内移植对HIBD新生大鼠脑白质损伤具有保护作用。     

AQP-4 mRNA在新生鼠缺氧缺血损伤脑组织的表达及与脑水肿的关系探讨

目的观察水通道蛋白4 mRNA(aquaporin-4,AQP-4 mRNA)在新生鼠缺氧缺血损伤脑组织的表达,探讨其变化及与脑水肿发生的可能关系。方法健康7日龄SD大鼠共240只,随机分为对照组120只和缺氧缺血性脑损伤模型组(HIBD组)120只。HIBD组经右侧颈总动脉结扎后,吸入8%O21h,建立HIBD模型。对照组仅行假手术,不予颈总动脉结扎和缺氧。两组均于HIBD模型制成后0、6、24、48h和72h分别处死动物(各时间点动物24只),进行脑含水量观察,RealtimePCR检测脑组织AQP-4 mRNA表达。结果HIBD组6、24、48h和72h脑组织含水量均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,HIBD组脑组织AQP-4 mRNA表达在48h内呈下降趋势,72h出现恢复,但仍低于对照组(P<0.05)。结论AQP-4 mRNA在脑组织表达下降可能与脑水肿的发生有关,我们推测AQP-4可能参与了HIBD时脑水肿的调节机制。