抗人血清型IgA单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和鉴定

本文使用从IgA骨髓瘤患者血清中提出的IgA,免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合的方法,获得4株针对IgA的单克隆抗体杂交瘤细胞系。抗体效价培养上清为10~(-2),诱生腹水ELISA测定为10~(-1)～10~(-6),冻存6个月后复苏,腹水效价仍保持10~(-1)～10~(-6)。染色体分析为102,基本上是Sp2/0骨髓瘤细胞染色数68和小鼠脾细胞42之和,说明为杂交瘤细胞。专一鉴定:本McAb经ELISA测定证明,仅与IgA起反应,小鼠亚类测定证明为IgG_1本McAb与     

用基因工程表达的HBcAg制备抗-HBcAg单克隆抗体及其初步应用

用基因工程表达的NBcAg免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,以ELISA抑制法检测抗体,获得28株分泌抗-HBc McAb的杂交瘤细胞系。对其中7株进行了克隆化,培养上清抗体滴度1:320～1:2560,免疫小鼠腹水和血清滴度1:10万～1:80万。Ig类型测定2株IgG1、2株IgG2a、1株IgG3、2株IgM。杂交瘤细胞系在体外连续传代培养6个月及液氮冻存的细胞系经复苏后仍能稳定地分泌McAb。得到的McAb只与HBcAg反应且能被HBcAg特异阻断,证明其特异性高。用ELISA间接法测定了McAb的相对亲和力,从50％最大结合的浓度分析结果,7株McAb的相对亲和力为2E6>2F5>2B11>2C10>1A7>1B7>1H7,浓度范围为0.6～10μg/ml。2E6和2C10 2株McAb与HRP结合,用ELISA双抗休夹心法筛选出2F5、2B111和H7 3株McAb适合作为包被抗体。2F5与2E6-HRP配对,建立了快速McAb-ELIS抑制法测定患者血清中抗-HBc。用本法测定了222份临床患者血清标本,结果与“华美”试剂盒测定结果基本一致。     

肾综合征出血热病毒血凝素单克隆抗体的研制与鉴定

本文报道,从肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染乳鼠鼠脑中提取高滴度的血凝素(HAN),以该血凝素免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行融合。融合率为60％和78％,阳性孔率为15％和44％。IFA筛选后共获得56株分泌抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系。对其中1A_3,2A_(11),1B_3,3D_8,2F_7,1G_4,1G_9,3G_1,3G_(11),2H_1十株细胞系用有限稀释法进行了3～4次克隆化,阳性克隆率达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养巳6个多月,仍能稳定地分泌单克隆抗体。冻存的细胞系经复苏后仍能稳定地分泌McAb。应用血凝抑制(Hl)试验证明其中9株为特异性分泌抗HFRSVHHAN McAb 的杂交瘤细胞系,1株(2A_(11))是抗HFRSV McAb的杂交瘤细胞系,其中(1:81920)和3G_1(1:40960)具有高滴度的血凝抑制活性。应用微量细胞培养中和试验(NT)证明其中6抗1A_8,1B_3,3D_8,1G_4,3G_1,3G_(11))具有中和活性.尤其3D_8(1:5120)和3G_1(>1:10240)有较高的中和效价。IFA测定了10株杂交瘤细胞的McAb与HFRSV陈株抗原片反应的抗体效价,其中培养上清为1:40～1:320,杂交瘤腹水为1:1万～1:8万。10种单克隆抗体与JEV、HSV-I和正常Vero-E_6细胞抗原片均无交叉反应。但均能与不同疫区、不同宿主分离的HFRSV陈株81-14A,A9和R_(22)抗原片反应,说明HFRSV血凝素McAb具     

抗人淋巴细胞T8抗原样McAb的研制和初步鉴定

用杂交瘤技术,将经人外周血E花环阳性细胞免疫小鼠脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合后,产生一分泌IgG_1亚型McAb杂交瘤株。其所分泌抗体经微量放射免疫测定及间接免疫荧光法分析,表明它只能与T细胞系、76％的胸腺细胞及22％的外周血T淋巴细胞反应,不与其它各种不同细胞反应。将此抗体所识别入外周血T淋巴细胞亚群与抗Leu-2a识别T8~+细胞、抗Leu-3a识别T4~+细胞比较,发现此抗体与抗Leu-2a识别同一群细胞。此抗体能从T细胞表面沉淀出30KD(还原条件)或78KD(非还原条件)分子,并完全阻断FITC标记抗Leu-2a与T细胞的结合,说明此抗体是识别T8抗原样的McAb。     

分泌抗A群脑膜炎球菌多糖单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立

用A群脑膜炎球菌悬液免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞,经50％PEG处理进行融合。采用微量被动血凝试验(PHA)筛选及有限稀释法克隆化后,获得4株分泌抗A群脑膜炎球菌多糖单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系(WSA—C_(11),WSA—E_6,WSA—D_4,WSA—F_8),培养上清和诱生的小鼠腹水的特异性抗体的PHA和ELISA滴度分别为1.28—5.12×10~(-2)和1×10~(-5)—10~(-6)、4株McAb和PHA滴度均被A群脑膜炎球菌多糖抗原抑制,其血凝抑制滴度与所加抑制抗原的量成线性关系,4株McAb均与3株A群脑膜炎球菌菌株呈现强的玻片凝集反应,3株B群,2株C群,1株D群,及7株新群脑膜炎球菌菌株不发生效义玻片凝集反应。试验证明4株杂交瘤细胞所分泌的抗体是针对具有群特异性的A群脑膜炎球菌多糖抗原的。4株McAb具有很高的亲和力,经80～160倍稀释与A群脑膜炎球菌菌株仍呈现强的玻片凝集反应,而A群脑膜炎球菌诊断血清(Pc-Ab)高于10倍稀与本菌的玻片凝集反应明显减弱,McAc的细菌试管定量凝集反应滴度也较PcAb诊断血清高16～32倍。4株McAb均属小鼠IgM类。杂交瘤细胞系染色体计数为91～95条。4株条交瘤细胞在体外连续培养4个多月,40余代,经液氮冻存复苏后仍保持稳定的分泌抗体的能力。     

抗人肺癌单克隆抗体(3D3)的研制及其特性鉴定

本文用人肺腺癌组织免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合,获得1株单克隆抗体(McAb 3D3)。Ig类测定为IgG_1型。杂交瘤培养上清液和腹水的效价分别为1∶10~3～10~4和1∶10~6。采用间接免疫荧光法(IFA)观察到McAb3D3主要与肺腺癌细胞株A549和L342反应,与其它组织肿瘤细胞株没有反应。ABC免疫酶染色试验显示McAb3D3主要与肺腺癌组织反应,与正常肺组织没有反应。     

抗尿激酶单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗尿激酶单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用市售的尿激酶(UK),免癌BALB/c小鼠。取脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞FO融合,获得六株分泌抗尿激酶单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1UB_5、1UD_2、3UA_2、3UD_(12)、3UG_2、3UH_7。其中,1UB_5及1UD_2连续传代培养4个月以上,其培养液抗体的ELISA效价仍为10~(-2)～10~(-3)。两株细胞经扩大培养后,注入C_(57)×BALB/c杂交后的F_1代小鼠,诱生的腹水抗体效价为5×10~(-6)～10~(-7)1UB_5、1UD_2所分泌的抗体经ELISA鉴定,分属IgG_1和IgG2a。用高纯度的低分子量UK包被,ELISA检测后表明,两株细胞所分泌的为抗高分子量UK的McAb。 抗UK的McAb用于粗制品UK的纯化及监察某些肿瘤发生与发展的进一步工作正在进行之中。     

抗兔出血症病毒单克隆抗体的研究

本文利用兔出血症病毒(RHDV)感染发病兔肝组织液,经高速离心提取病毒抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和Sp2/0细胞融合,接种24孔板融合率为100％,96孔板融合率为42％,经ELISA试验测定分泌抗体阳性率分别为35％和10％,选其一株进行3次克隆并连续传代2月余,经酶联检测分泌McAb性能稳定。杂交瘤细胞培养上清液滴度为1:40～1:80,小鼠腹水单抗为1:1600～1:3200,Sp2/0细胞培养上清液,正常鼠血清对照为阴性。同时利用腹水McAb     

抗肌红蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用

目的 制备和鉴定抗肌红蛋白(Mb)单克隆抗体,为人肌红蛋白检测试剂的研制奠定基础.方法 用人肌红蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行细胞融合,用ELISA方法筛选,有限稀释法进行克隆化培养阳性杂交瘤细胞株.ELISA法测定小鼠腹水滴度,CLIA法对抗体进行配对实验与特异性鉴定.结果 筛选培养出9株分泌抗肌红蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水滴度为1∶5×104 ～ 1∶2×105.通过配对实验,有5株抗体6种组合可以成功配对.这5株抗体的亲和常数为6.46×108 ～ 3.68×109 L/mol.用5株抗体所建立的6种化学免疫分析方法与人Hb交叉反应率为7.434×103％ ～2.904×10-2％,与人ALB交叉反应率为4.980×10-7％ ～3.830×10-5％.用Mb17B6与Mb21E8两株抗体建立的CLIA标准曲线的线性系数为0.997,灵敏度为6.02ng/mL.结论 成功制备了可以应用于免疫分析的抗肌红蛋白单克隆抗体.     

抗解脲脲原体单克隆抗体的制备

作者用提纯的解脲脲原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞FO融合,获得3株稳定分泌抗解脲脲原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株进行了鉴定。用ELISA法测定该抗体腹水效价为1:64000～1:2048000,1F9、2B2抗体的Ig类型为IgG1,5H1为IgG2b。建立的3株能稳定分泌抗解脲脲原体的McAb杂交瘤细胞林,经液氮冻存后复苏,其分泌抗体能力不受影响。     

抗大肠杆菌_(506)株36kD蛋白单抗的制备及其在人精子上的免疫定位

用纯化的36kD蛋白免疫Balb/c小鼠。取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以PEG进行细胞融合,融合率为86％。采用ELISA筛选出杂交瘤细胞阳性孔。经过4～7次有限稀释克隆化,共获得7株能稳定分泌36kD相应MCAb的杂交瘤细胞。将杂交瘤细胞分别注射小鼠腹腔,测定腹水McAb的效价为1:5×10~3～1:1×10~5,抗体亚型均为IgG1。用荧光显微镜观察,结果发现EC2作用的人精子头颈部出现明显荧光反应,提示共同抗原存在于人精子头颈部。这些结果有助于进一步探讨细菌感染引起男性不育的机制以及研制细菌避孕疫苗等工作。     

32株分泌抗HBsAg单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

<正> 取纯化HBsAg免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,选原始抗体阳性孔细胞进行多次克隆化。两次融合试验共得32株分泌抗HBsAg-McAb的杂交瘤细胞株。其培液上清的PHA效价为1:32～1:1,024,对流(CEP)效价为1:2～1:16。诱生小鼠腹水的PHA效价,25/32株为10~(-4) ～10~(-5),7/32株>10~(-6),其中8/32株ELISA法效价可达10~(-7)。CEP和AGD效价最高分别达1:6,400和1:3,200。 选出21株分泌抗体能力较强者进行冻存,并对其纯度和特异性进行鉴定。结果证明,21株杂交瘤分泌的McAb均属小鼠IgG_1亚类,能较好地中和乙肝患者血清中的HBsAg。与人白蛋白或正常人血清进行CEP或AGD试验,均无沉淀线出现。说明这些McAb具有良好的纯度和专一性。     

分泌抗脲酶单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和初步应用

用脲酶(Urease)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞用PEG融合。ELISA法筛选分泌抗脲酶单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,建立起6株杂交瘤细胞。细胞分泌抗体滴度高、亲和力强、特异性好,长期传代稳定。     

分泌抗人Ig Kappa和Lambda轻链单克隆抗体细胞株的建立及其抗体的临床应用

本文报告获得的5株能稳定分泌高效价的McAb,其中3株为抗人McAb(1D1、5C3、11A7),2株为抗K McAb(4G12、14A6)。这5株杂交瘤细胞冻存一年后复苏其腹水滴度仍 在6.4×10~4～12.8×10~4之间。 特异性分析:①该5株McAb分别与纯的游离λ和κ链进行免疫双扩散试验,只与λ链或κ链形成清晰沉淀线,不与α、γ和μ链发生沉淀反应。②免疫电泳分析,5种McAb与正常     

抗hCG-β单克隆抗体的产生及初步鉴定

本文报道用hCG免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合,获得6株分泌抗hCG单克隆抗体的杂交瘤细胞。其中,2B5和2D8二株细胞的分泌抗体,对hCG-β亚基呈强阳性反应。其培养液抗体的ELISA效价为10~(-2)～10~(-4);注入同系小鼠腹腔诱生的腹水抗体效价达10~(-5)～10~(-7)。2B5抗体为IgA,2D8抗体属IgG_1。它们对hCG-β的亲和常数(K_a)分别为0.8×10~9升/克分子和1.8×10~9升/克分子.在以~(125)I-hCG-β作为标记物的检测系统中,2B5抗体在50％抑制时同hLH的交叉反应为5.7％,而2D8抗体为3.1％.     

抗人尿激酶单克隆抗体制备和鉴定

用人高分子量尿激酶(HMW-UK)为抗原,通过杂交瘤技术获得了两株阳性杂交瘤细胞(2B8、3A2)。采用葡萄球菌 A 蛋白(SPA)亲和层析或 Water's650快速蛋白分离系统纯化抗 UK 单克隆抗体(McAb).3A2McAb 为 IgG 1亚类,特异地识别 HMW-UK 和低分子量 LMW-UK,抑制 UK 活性,表明3A2McAb 所作用的位点为 UK 的 B 链,即活性中心。EIA 测定3A2McAb 与 UK 的亲和常数为8.43×10~8M~(-1)。2B_8McAb 亦为IgG_(?)亚类,特异地识别 HMW-UK 及其氨基端1～135氨基酸片段(ATF),不抑制活性,EIA 测定2B_8McAb 与UK 的亲和常数为2.8×10~9M~(-1)。2B_8McAb 可用于导向溶栓的研究以及 UK 与其受体间反应的研究。     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗休的研究——Ⅰ、产生抗单纯疱疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用HSV—1SM_(44)株免疫C×S/1小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP 2/0融合,经HAT选择培养,细胞融合率为100％。ELISA筛选后获得53孔产生抗HSV抗体的杂交瘤阳性孔。对1A12、2A8、1G8、1D10、2C55株细胞系用有限稀释法做2—5次克隆化,阳性克隆率均达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养4个月,仍能稳定产生单克隆抗体,冻存的细胞系经复苏后亦能稳定产生抗体。应用ELISA及IF试验证明,5种单克隆抗体均与HSV—1和HSV—2标准株呈特异性反应。ELISA测定,杂交瘤培养上清抗体效价为10~(-2)—10~(-3),制备免疫腹水效价为10~(-4)—10~(-7)。5种单克隆抗体与EBV、CMV、JEV和HFRSV无交叉反应。     

巨细胞病毒单克隆抗体的制备及其初步应用

用CMV AD-169株感染自制人胚肺纤维母细胞,制备抗原,免疫BALB/c小鼠,取其牌细胞与Sp2/0-Ag14细胞融合,建立了一株稳定分泌抗HCMV特异性McAb的3B_6杂交瘤细胞株。3B_6McAb经鉴定属于IgG_3亚类。用间接免疫荧光法和间接酶免疫法证实为抗CMV特异性抗体。用微量细胞培养中和试验证实3B_6McAb在加有豚鼠血清后可阻止HCMV感染后细胞病变的出现。3B_6 McAb经间接免疫荧光法检测中,晚期孕妇羊水细胞中HCMV抗原,在68例标本中有一例为阳性,阳性率为1.47％。该法方便,快速可为在胎儿时期诊断先天性HCMV感染提供依据。     

北亚立克次体单克隆抗体的产生及用于我国斑点热立克次体的鉴定

本文报道以斑点热立克次体精河株全细胞抗原免疫BALB/c小鼠,取10~8免疫小鼠脾细胞与10~7 Sp 2/0小鼠骨髓瘤细胞用50％PEG 1000融合,以微量间接免疫荧光(Micro-IFA)检测抗体。本试验融合率为79.2％,抗体分泌阳性率为22.7％。选择抗体滴度较高的三孔进行扩大培养及克隆化,选出三株杂交瘤细胞1—2C_(12),1—2F_5和1—2C_5,其腹水单克隆抗体     

抗人巨细胞病毒单克隆抗体的建立及初步临床应用

应用人巨细胞病毒AD169株(HcMV-AD169)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得两株(1F9 2H10)分泌抗HCMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。经鉴定,两株McAb的Ig亚类为IgG1,腹水效价间接ELISA法为10~(-5)和10~(-6)。两株McAb仅与HCMV反应,而与其他疱疹病毒无反应,2H10有中和病毒作用而1F9则无。用HCMV-McAb建立抗体捕获ELISA法测定150例孕妇血清中HCMV-IgM抗体,阴阳性总符合率与间接ELISA法相比较,为99.3％(149/150)。文中尚对HCMV-McAb用途作了讨论。