ELISA检测可溶性白细胞介素2受体夹心法的临床应用及其评价

应用双单克隆抗体夹心法ＥＬＩＳＡ对甲型肝炎、肾综合征出血热、小儿呼吸道合胞病毒感染以及肾移植术后患者等血清中可溶性白细胞介素２受体进行了定量检测，并对该方法的敏感性、重复性等参数进行了对比观察。结果表明，该广方法敏感性高、特异性强、重复性好，变异率低于国外同类产品，所检测的临床疾病ＳＩＬ－２Ｒ水平的变化与文献报道相符，并与病情、病程相关性良好，可用于基础和临床免疫学研究。     

ELISA检测可溶性白细胞介素2受体夹心法的临床应用及其评价

应用双单克隆抗体夹心法ＥＬＩＳＡ对甲型肝炎、肾综合征出血热、小儿呼吸道合胞病毒感染以及肾移植术后患者等血清中可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ２Ｒ）进行了定量检测，并对该方法的敏感性、重复性等参委大进行了对比观察。结果表明，该方法敏感性高、特异性强．重复性好，变异率低于国外同类产品，所检测的临床疾病ｓＩＬ－２Ｒ水平的变化与文献报道相符，并与病情、病程相关性良好，可用于基础和临床免疫学研究。     

测定尿激酶含量夹心法ELISA的建立

采用两种识别不同抗原决定簇的抗尿激酶(UK)单克隆抗体建立了测定人 UK 含量的夹心法ELISA.本法灵敏度为0.15ng/ml,批内 CV4.3%,批间 CV8.7%,平均回收率98%.应用本法测定了部分正常细胞和肿瘤细胞株培养上清中的 UK 含量,肿瘤细胞培养上清 UK 量明显高于正常细胞.测定82名正常人血浆中 UK 含量,其结果为1.31±0.6ng/ml.     

检测马白细胞介素-18双抗体夹心ELISA方法的建立

目的:建立检测马白细胞介素-18(equine interleukin-18,EIL-18)的双抗体夹心ELISA,为马传染病的免疫学研究提供新方法.方法:将识别不同表位的EIL-18的2株单克隆抗体(mAb)B1G1和S6A3纯化后,利用生物素标记试剂盒对B1G1株mAb进行标记,以重组马白细胞介素-18(rEIL-18)为捕获抗原进行ELISA检测来建立EIL-18双抗体夹心ELISA.结果:经过方阵滴定试验确定捕获抗体的最佳浓度为4 mg/L,检测抗体的工作效价为1:2 000.建立的方法可检测马血清中的EIL-18,与猪、牛和羊血清中的IL-18不发生交叉性反应,此方法检测敏感度达到15 ng/L,特异性良好. 结论:成功建立了EIL-18的双抗体夹心ELISA,为马细胞免疫学研究提供了方法,也为下一步EIL-18 ELISA试剂盒的商品化开发奠定了坚实基础.     

抗HBsAg单克隆抗体在诊断中应用错位点双单克隆抗体ELISA夹心法的建立

对5种过氧化物酶标记的抗HBsAg单克隆抗体和14种固相物包被用单克隆抗体做了筛选试验，以探讨实际应用中各单克隆抗体的较佳配用方案。试验结果表明，用正交法所得的安验结果中，最佳配用情况下，包被用抗体和主要的酶标记抗体的作同位点是错位的。即捕捉抗体与标记抗体分别作用在HBsAg的不同位点上，两者之间基本上没有位阻现象。这种双单克隆抗体央心去的本底很低．可以目测判定结果。敏感性和特异性较好。HBsAg阳性，滴度为1：16(对流电泳法)的患者血清稀释至2^19时仍可得到P／N比≥2．1的读数，目测判定结果对至少在2^18稀释度下可明确地判定出阳性结果。     

测定人血清纤维连接蛋白含量的双抗体夹心ELISA法的建立

４株经细胞融合获得的针对纤维连接蛋白（Ｆｎ）的单克隆抗体，经ＥＬＩＳＡ抗体相加试验和抗体竞争试验证实，为作用于Ｆｎ不同位点的单克隆抗体。选择其中２株单克隆抗体，应用于测定人血清Ｆｎ含量的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法．其批内差异为４．５％，批间差异为５．９％．建立的标准曲线相关系数为０．９８２，测定１３２例献血员血清Ｆｎ合量为０．２５５±０．０２８ｍｇ／ｍｌ，与文献报道相符．     

检测肌糖蛋白C夹心ELISA方法的建立及初步应用

目的:以已经制备的抗肌糖蛋白C(TN-C)的单克隆抗体(mAb)为基础,建立能定量检测肌糖蛋白C浓度的夹心ELISA方法,并初步于临床血清标本检测.方法:将3株mAb(克隆号分别为:1A8、3H7和4D6)制备腹水后纯化,分别与辣根过氧化物酶交联后,两两配对,以重组肌糖蛋白C 蛋白为检测抗原,分析抗体之间最佳组合;利用建立的夹心ELISA方法检测收集的临床骨肉瘤患者和正常人血清标本.结果:包被1A8 mAb,HRP-4D6配对敏感性最高;骨肉瘤患者血清中肌糖蛋白C浓度明显高于正常人.结论:成功建立检测肌糖蛋白C的夹心ELISA方法,并利用其检测到肌糖蛋白C在骨肉瘤患者中的浓度异于正常人.     

蛋白酶K单抗研制及其双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立

目的 研制蛋白酶K单克隆抗体并构建定量检测蛋白酶K的双抗体夹心ELISA方法 ,用于生物制品中蛋白酶K的检测。方法 用杂交瘤技术制备抗蛋白酶K的单抗,用棋盘法优化ELISA条件,建立定量检测蛋白酶K的双抗体夹心ELISA方法,分析其特异性、精密性和准确性。结果 经免疫、融合、克隆、筛选到稳定分泌蛋白酶K单抗的杂交瘤细胞。获得1株阻断蛋白酶K活性的单抗5G6,以5G6为包被抗体、4D3为酶标抗体,构建蛋白酶K定量检测的ELISA方法。本方法线性相关系数R=0.99,线性范围为293.4~2 500 pg/ml;定量限度为293.4 pg/ml;变异系数为CV<15%;回收率介于89.3%~129.2%之间,37℃6 d的回收率>80%;与蛋白酶K以外的其他蛋白无交叉反应。结论 获得阻断蛋白酶K活性的单抗,构建出灵敏、特异的蛋白酶K定量检测方法。     

单克隆与多克隆双抗体夹心法测定血清可溶性IL-2受体

建立了灵敏的酶标双抗体夹心法测定血清可溶性IL-2受体(sIL-2R)。主要步骤为以单抗包被,加入待检抗原,再加多克隆兔抗IL-2 R血清作用,最后加酶标羊抗兔示踪并放大其反应。本法简便、重复性好、灵敏度达100u/ml.可适用于临床与基础研究。     

An ELISA that detects cells-associated and released rat IL-2 receptors in a soluble form

A mouse anti-rat interleukin-2 receptor (IL-2R) monoclonal antibody (mAb), ART-65, has recently been developed which recognizes the rat IL-2R but binds to an epitope distinct from that recognized by the mAb ART-18. The availability of two mAb against the rat IL-2R molecule permitted the development of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) which detects soluble and solubilized rat IL-2R. Using this ELISA, time course studies of ConA and LPS-activated rat splenocytes revealed that IL-2R are released into their environment during the culture period, and that IL-2R can be detected in rat sera. The significance of the results is discussed.     

The significance of serum soluble IL-2 receptor as a marker for active visceral leishmaniasis in Sicilian patients.

Sera from nine Sicilian patients with confirmed visceral leishmaniasis (Leishmania donovani infantum; VL), at the moment of the diagnosis, during the course of the disease and after clinical recovery, were analysed for the concentration of soluble IL-2 receptor (sIL-2R). The results show that sIL-2R is a marker of disease activity, since it is in high concentration at the beginning of infection and returns to the normal range following successful chemotherapy. At the same time of serum analysis for sIL-2R, peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of VL patients were stimulated with phytohaemagglutinin (PHA) or antigen and supernatant tested for IL-2 and interferon-gamma (IFN-gamma) production. Data demonstrate that there is an inverse relation between concentration of IL-2 and IFN-gamma in the supernatants and sIL-2R secretion in the sera.     

恶性肿瘤患者血清sIL—2R的检测

本文采用ELISA夹心法,对66例恶性肿瘤患者血清中可溶性白细胞介素2受体进行检测,以39例健康学生做对照,结果显示恶性肿瘤患者血清slL-2R 含量明显高于对照组(P<0.01)。并对血清sIL-2R 水平在肿瘤诊断及预后判断中的意义进行了探讨。     

可溶性白细胞介素2受体与白血病相关性的初步研究

检测34例白血病患者的血清可溶性白细胞介素2受体(sIL—2R)水平,並分析了sIL—2R与病情变化的相关性。结果显示:1.各组患者的sIL—2R水平明显高于正常(p<0.01);2.sIL-2R水平>2000u/ml的6名患者中有5名在采血后1个月内死亡,余1例亦在1年内死亡;3.患者血清sIL—2R水平与末梢血白细胞总数及单个核细胞数无明显关系。分析表明:sIL—2R测定适用于对急性淋巴细胞性、单核细胞性白血病及淋巴瘤合并白血病的病情监测及预后判断。     

HIV核心抗原p24检测方法的建立及应用

ＨＩＶ感染的检测在预防ＡＩＤＳ传播方面有重要作用。本研究以重组抗原ｐＧ１免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了５株识别ＨＩＶ核心抗原ｐ２４的杂交瘤细胞株Ｄ３，１Ｈ１，２Ｇ１０，３Ｈ５和４Ｈ６。经鉴定这５株ＭｃＡｂ与其它病毒抗原无交叉反应，分别识别３个不同的抗原表位。应用两株识别不同表位的ＭｃＡｂ２Ｇ１０和３Ｈ５建立了检测ＨＩＶｐ２４抗原的夹心ＥＬＩＳＡ法，并初步检测了２４份ＨＩＶ抗体阳性血清。     

肺癌患者化疗前后血清IL-2,SIL-2R检测的临床意义

目的 :分析了 36例肺癌患者化疗前后血清中IL - 2和SIL - 2R水平的变化。方法 :采用放射免疫分析法测定患者血清中IL - 2和使用ELISA法测定SIL - 2R含量 ,并与 35名正常健康人作比较。结果 :化疗前IL- 2活性明显低于正常人 ,SIL - 2R水平明显高于正常人 (P <0 .0 1 ) ,化疗后 6个月复发者IL - 2 /SIL - 2R水平持续异常 ,未复发者IL - 2 /SIL - 2R水平恢复正常。结论 :观察肺癌患者免疫功能的变化与患者的病情和预后密切相关。     

自制NSE单抗的鉴定及其双抗夹心ELISA方法的建立

目的:制备并鉴定NSE(Neuron-specific enolase)单克隆抗体,建立可检测NSE蛋白的双抗夹心ELISA方法。方法:用本实验室已表达纯化的NSE融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用WB、IP、IF、IHC等方法对获得的NSE单抗进行鉴定及亚型检测。利用辣根过氧化物酶标记纯化后的NSE单抗,建立一个可检测NSE蛋白的双抗夹心ELISA法。结果:通过分析和鉴定,选定2株可稳定分泌抗NSE抗体的杂交瘤细胞株,效价达4.2×107～6.5×107,亚型为IgG2b。免疫印迹结果显示,该抗体不仅能识别细胞内源NSE蛋白,还能识别分泌到细胞培养上清液中的NSE蛋白,此外还可用于免疫荧光及免疫组化检测。文中所建立的双抗夹心ELISA法,最低检测极限为8.85 ng/ml。结论:成功获得了效价高、灵敏度好及特异性强的NSE单抗,建立了一个双抗体夹心ELISA检测系统,具有良好的临床应用前景。