影响抗A杂交瘤细胞抗体分泌的部分因素

目的 研究影响抗Ａ杂交瘤细胞抗体分泌的部分因素。方法 通过试管法和玻片法检测Ａ抗体的效价和亲和力。结果 ０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ、０．５ｍｍｏｌ／Ｌ丁酸钠和０．０１Ｕ／ｍＬ胰岛 能明显提高抗Ａ抗体的效价和亲和力,ＨＡ 筛上体积细胞迅速死亡,抗Ａ抗体的效价和新和力明显提高。结论 丁酸钠、胰岛素和ＨＡＴ重筛选可提高抗Ａ杂交瘤细胞抗体的分泌。     

低血清培养杂交瘤细胞及提高单克隆抗体产量的研究——Ⅰ、静止培养条件下的研究

单克隆抗体(McAb)在诊断,免疫纯化和治疗等领域的应用日益广泛,使得对McAb的需求量不断增加。小鼠腹水法简便易行,但腹水含有大量杂蛋白,包括小鼠正常Ig。这就给提纯工作带来了困难。所以目前多用体外培养法大量生产McAb。遗憾的是杂交瘤细胞通常需在含有较高浓度(10～20％)小牛血清的培养液中生长繁殖,且培养上清中的抗体浓度比小鼠腹水的抗体浓度低得多。但也用有低血清培养杂交瘤细胞的成功报道。同时改善培养条件可提高培养上清液中的抗体浓度。为了使发酵罐能在成本较低的情况下生产较高滴养度的McAb。我们首先对静止培养的杂交瘤细胞进行了两个方面的研究——驯化适应低血清培的杂交瘤细胞株和添加蛋白质不同水解物以提高培养上清中的抗体产量。     

体外诱导人类B细胞分泌HLA抗体的实验研究

目的:探索体外诱导人类B细胞产生特异性HLA抗体的理想培养条件。方法:以EBV转化致敏肾移植患者B淋巴细胞系(BLCL)为模型,采用ELISA和ELISPOT方法,比较3种培养体系:(1)RPMI1640 抗OPTI单克隆抗体(mAb);(2)RPMI1640 0·1mmol/L非必需氨基酸液 1mmol/L丙酮酸钠 40mg/L转铁蛋白;(3)Hybridoma无血清培养液,以及3种培养条件:(1)对照组(仅培养液),(2)培养液 rIL-4 rIL-10 鼠抗人CD40(α-CD40),(3)培养液 rIL-4 rIL-10 重组人CD40配体(CD40L),人类B细胞产生免疫球蛋白(Ig)和特异性抗HLA抗体的能力。结果:BLCL细胞在Hybridoma SFM培养体系所产生的IgG和IgM浓度分别为25·2～28·1mg/L和7·14～7·95mg/L,高于其他两种培养条件(P<0·05)。BLCL细胞在添加了IL-4、IL-10和α-CD40或CD40L的杂交瘤无血清培养液中能产生特异性抗HLA-I抗体,所获得的斑点频数分别为3·06/每104个BLCL细胞和3·55/每104个BLCL细胞,高于对照组(1·77/每104个BLCL细胞)。结论:BLCL细胞在杂交瘤无血清培养液中和添加了IL-4、IL-10和α-CD40或CD40L的培养条件下,提高分泌IgG和IgM的能力和特异性抗HLA-I类分子的抗体。     

杂交瘤细胞系适应低血清和无血清培养的生理变化(文摘)

作者用生物化学方法和流式细胞仪研究了两种小鼠杂交瘤细胞系167.4G 5.3和S3H5/r2bA2在适应低血清和无血清培养过程中的生理变化,比较了生长曲线、细胞代谢、抗体产生速度等指标。 试验表明:两种细胞系适应低血清或无血清培养后,对血清浓度的依赖性大大降低。适应低血清培养后的细胞再在高血清培养液中培养,其生长曲线与在低血清培养液中的生长曲线相似;适应无血清培养液OPTI     

杂交瘤细胞系在低血清和无血清培养基长期培养中抗体产生能力的丧失

本文报道了分泌特异性抗磷酰胆碱McAb(IgG_1)的鼠杂交瘤细胞系(167.4 G5.3),在不同血清浓度(10％、5％、2.5％、1.25％胎牛血清FBS)及无血清培养基OPTI—MEM中适应培养6个月以上,以观察其生长和细胞分泌抗体能力的变化。结果所有的适应细胞随着血清含量的升高,其分泌抗体能力越稳定。适应培养,虽然提高了该细胞系在低血清或无血清培养基中的生长率,但在低血清培养基中(1.25％FBS)细胞产生抗体能力丧失。在1.25％FBS条件下培养,     

分泌抗脲酶单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和初步应用

用脲酶(Urease)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞用PEG融合。ELISA法筛选分泌抗脲酶单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,建立起6株杂交瘤细胞。细胞分泌抗体滴度高、亲和力强、特异性好,长期传代稳定。     

在无血清培养液(CBSF)中制备单克隆抗体

将已建立能在CBSF培养液中生长传代的Sp2/0骨髓瘤细胞与经TE-1单抗免疫的Wistar大鼠的脾细胞进行异种间细胞融合。TE-1单抗是抗天花粉蛋白IgE单抗,免疫用TE-1单抗是从TE-1小鼠淋巴细胞杂交瘤细胞株诱生的腹水,经过亲和层析分离得到。通过无血清HAT选择培养液筛选,用间接ELISA法检测抗体及四次克隆化,全部过程均在无血清培液中进行,最终得到了能在CBSF中稳定生长,连续分泌抗体的异种杂交瘤细胞株,并能顺利经受液氮保存和复苏。收集杂交瘤细胞培养上清液(CBSF)用硫酸铵沉淀法能得到粗制单克隆抗体。     

人—人杂交瘤免疫球蛋白分泌稳定性的研究

对三株人—人杂交瘤细胞株的免疫球蛋白分泌稳定性作了研究。研究中注意到用有限稀释法多次克隆的杂交瘤细胞(C_(10),13H_2)与未经克隆的细胞株(F_3)在体外培养和扩增中,其细胞形态大小,染色体数和抗体分泌能力有不同程度的变化。研究证实杂交瘤球蛋白分泌稳定性与染色体丢失或不分泌群体的过度生长有关。我们用HAT筛选培养液进行再处理,注意到C_(10)这一株细胞的四倍体细胞数明显增加,抗体分泌量也有所增加。结果提示对杂交瘤细胞及早克隆,或适时用HAT进行重筛选,对稳定分泌群体可能有一定的效果。     

不同培养基对人杂交瘤细胞培养效应的影响

培养液是细胞培养的基本要素,选择适当的培养液是人杂交瘤技术成功的重要因素之一。我们分析比较了三种商品化培养液RPMI1640、DMEM、IMDM对分泌人单抗杂交瘤细胞的培养效应,包括对维持细胞的活力、增殖、克隆效率及抗体分泌等参数的观察比较,发现RPMI1640对人-(人×鼠)杂交瘤细胞“87-3”与人-鼠杂交瘤“87-3”培养效应最佳,为首选培养液。     

谷氨酰胺对JAL1杂交瘤细胞生长代谢的影响

为研究不同浓度的谷氨的酰胺对JAL1 杂交瘤细胞生长、葡萄糖消耗、乳酸及氨生成等代谢过程的影响。在细胞培养箱中 ,用含不同浓度谷氨酰胺的培养液培养细胞 ,培养条件为pH 7 0～ 7 5 ,温度 37℃ ,5 %CO2 。实验表明 ,适宜于该株杂交瘤细胞生长的谷氨酰胺浓度为 2mmol/L ,谷氨酰胺浓度与细胞的葡萄糖消耗呈反比 ,与乳酸生成浓度呈反比 ,与氨的生成浓度呈正比     

抗猪囊虫单克隆抗体的制备及应用

目的利用杂交瘤技术制备抗猪囊虫单克隆抗体,建立抑制性酶联免疫吸附法I-ELISA并应用于临床.方法运用自提的猪囊虫囊液与福氏不完全佐剂加干扰素混合免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,反复筛选及克隆化;用低温无水乙醇沉淀法分离纯化单抗IgG(腹水抗体效价13200);用改良的过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标单抗;用I-ELISA检测患者脑脊液和血清中囊虫特异性抗体.结果获得了3株稳定分泌抗猪囊虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株,单抗的免疫球蛋白亚类鉴定为2株IgG3,1株IgM.标记的HRP-IgG酶标单抗,经临床病例标本验证,确诊的脑囊虫病患者脑脊液63例,抗体阳性61例,阳性率为96.83%;血清标本60例,抗体阳性53例,阳性率为88.33%;其他颅内感染性疾病患者脑脊液标本240例、血清标本240例,肝肺包虫病患者血清10例,正常脑脊液25例(阑尾炎手术腰麻患者),健康志愿者血清32例,检测结果均为阴性.结论本研究制备的HRP-IgG酶标单克隆抗体经临床应用,证实对脑囊虫病有良好诊断价值.     

抗解脲脲原体单克隆抗体的制备

作者用提纯的解脲脲原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞FO融合,获得3株稳定分泌抗解脲脲原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株进行了鉴定。用ELISA法测定该抗体腹水效价为1:64000～1:2048000,1F9、2B2抗体的Ig类型为IgG1,5H1为IgG2b。建立的3株能稳定分泌抗解脲脲原体的McAb杂交瘤细胞林,经液氮冻存后复苏,其分泌抗体能力不受影响。     

丁酸钠对人乳头状瘤病毒诱导的永生化食管上皮细胞恶性转化的促进作用

目的 在人乳头状瘤病毒（HPV）18E6E7基因诱导人胚食管上皮细胞永生化的基础上,观察高、低剂量丁酸钠在细胞恶性转化过程中的促癌作用。方法 永生化食管上皮细胞SHEE先用高剂量于酸钠（80mmol/L),后用低剂量丁酸钠（5mmol/L)各处理8周,再经无丁酸钠条件继续培养14周。用相差显微镜、免疫组织化学SABC法和流式细胞仪检查细胞形态、增殖和调亡状况;用Hoechst33342和碘化丙啶检查活细胞和死细胞;细胞软琼脂集落形成及移植裸小鼠和严重联合免疫缺陷小鼠检查成瘤性。结果 当细胞暴露在80mmol/L丁酸钠,细胞死亡,只剩少量活细胞。在含5mmol/L丁酸钠培养基中细胞出现第一增殖期;撤去丁酸钠,细胞进入危象期,细胞倍增时间延长,如老化细胞。度过危象期,细胞进入第二增殖期,细胞继续增生和异型增生。在第二增殖期末细胞出现恶变,软琼脂培养有大集落形成,移植裸小鼠和SCID小鼠成瘤。结论 SHEE永生化上皮由丁酸钠诱导的恶性变通过了两个阶段的死亡威胁：高浓度丁酸钠引起细胞死亡,缺乏丁酸钠引起细胞危象。高剂量丁酸钠引起永生化细胞死亡,低剂量引起细胞增殖,说明丁酸钠对体外培养细胞有促恶变作用。     

雪卡毒素单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备雪卡毒素的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以雪卡毒素类似物莫能菌素为半抗原,分别采用混合酸酐法将其与载体牛血清白蛋白(BSA)偶联合成免疫抗原M-BSA,碳二亚胺法与卵清白蛋白(OVA)偶联合成包被抗原M-OVA。以M-BSA免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤。以自制雪卡毒素提取物为竞争抗原,间接竞争ELISA法筛选稳定分泌雪卡毒素抗体的特异性细胞株。小鼠体内诱生腹水,辛酸硫酸铵沉淀法进行纯化。采用抗体亚型鉴定试剂盒鉴定所得抗体的亚型,间接竞争ELISA法鉴定抗体的特异性和交叉性。结果获得3株稳定分泌抗雪卡毒素抗体的杂交瘤细胞株1D5、2G11、3G11,其Ig亚型均属于IgG1亚型。交叉反应结果表明3株单克隆细胞产生的抗体除与莫能菌素有较高的交叉反应外,与其他雪卡毒素类似物均无明显交叉反应。结论成功筛选到了分泌雪卡毒素抗体的细胞株,为雪卡毒素免疫分析方法的进一步研究奠定基础。     

丁酸钠对卵巢癌细胞株SKOV-3表达H3K9Ac、H3K14Ac、H4K20TriMe蛋白的影响

目的观察不同浓度丁酸钠处理SKOV-3细胞后对H3K9Ac、H3K14Ac、H4K20TriMe蛋白表达的影响。方法在上皮性卵巢癌细胞株SKOV-3培养过程中给予不同浓度的丁酸钠处理，观察细胞生长情况，用western blot方法测定处理前后SKOV-3细胞中H3K9Ac、H3K14Ac、H4K20TriMe蛋白表达情况。结果①当丁酸钠浓度为4～16mmol／L时，对SKOV-3细胞体外生长均有明显的抑制作用。②丁酸钠可影响SKOV-3细胞的形态。③丁酸钠处理48h后H3K9Ac的表达明显增高，而H3K14Ac、H4K20TriMe蛋白表达无明显变化。结论①组蛋白去乙酰化酶抑制剂具有抗肿瘤作用。②去乙酰化酶抑制剂可通过逆转特异位点的组蛋白乙酰化而发挥抗肿瘤的作用，这可能与其上调一系列关键基因的表达有关。     

抗鸡免疫球蛋白(IgM、IgG)单克隆抗体的制备与鉴定

本文报道将SRBC免疫鸡的血清经33％硫酸铵沉淀,再经Sephadex G-200凝胶柱两次层析,收集第Ⅰ,Ⅱ蛋白峰作为免疫原免疫BALB/c小鼠。建立了2株(3A7、1C4)分泌抗鸡IgG和4株(6AS、5E2、6C7、6B1)抗鸡IgM特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系;琼脂扩散试验表明6株细胞系分泌的单克隆抗体均为IgG1亚类。所制腹水的ELISA滴度达10~5～10~6。用免疫印迹技术(IB,Immunobllotting)对其中2株(3A7和6A5)的特异性作了进一步鉴定。     

抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制

目的　利用纯化的重组人肝再生增强因子(hALR)制备抗hALR的单克隆抗体,建立hALR的检测方法。方法 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,经ELISA和免疫印迹证明其特异性。结果获得了4株分泌抗hALR特异性抗体的杂交瘤 细胞系;无血清培养液效价为1×10-2,腹水效价为1×10-5;亚类鉴定表明2株单克隆抗体为IgGl,另2株为IgG2b;免疫印迹 显示抗体结合抗原的分子量与hALR相符,为特异性抗hALR抗体。结论通过杂交瘤技术,获得了抗hALR的单克隆抗体 为以后的工作奠定了基础。     

抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1单克隆抗体的制备和鉴定

目的 制备具有中和活性的抗肠道病毒EV71型外壳蛋白VP1的单克隆抗体.方法 人工合成SP55和SP70(分别包含VP1的第163-177,208-222位氨基酸)两段VP1的多肽,分别免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术进行细胞融合,用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选阳性杂交瘤细胞并测定效价.用分泌的单抗和EV71病毒在RD细胞上进行中和试验以检验其中和活性.结果 得到2株能稳定分泌抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,2株单抗的中和效价分别为1:8和1:16.结论 成功制备出2株具有中和活性的抗肠道病毒EV71型VP1蛋白单克隆抗体,为其下一步应用打下基础.     

丁酸钠对食管永生化上皮细胞增殖、分化和凋亡的作用

目的 研究丁酸钠对永生化食管上皮的增殖、分化和凋亡的作用。方法 用HPV18E6E7诱发的人胚食管上皮永生化细胞株SHEE,培养在50ml培养瓶和24孔培养板,实验组分别加入1mmol/L和5mmol/L丁酸钠,对照组未加药,作用4d。统计细胞克隆数,细胞超微结构用电镜检查;细胞周期和凋亡细胞数用流式细胞仪检查;Ki-67、细胞角蛋白用免疫组织化学SP法检查;激光共聚焦扫描显微镜检查用鬼臼毒素标记的F-肌动蛋白。结果 加入1mmol/L和5mmol/L丁酸钠4d克隆形成率分别为65.5%和25.5%,比对照组73.5%减少。细胞周期检查1mmol/L组S期细胞明显减少（4.6%),多停留在G0/G1期（83.8%)。与对照组比较,1mmol/L组细胞Ki-67表达降低,F-肌动蛋白和角蛋白表达增加,5mmol/L组细胞凋亡明显增多。结论 丁酸钠可以诱导SHEE细胞增殖停滞和细胞凋亡,并有促细胞分化作用。其与用药剂量和时间有关。