用经氢化可的松处理的小鼠胸腺细胞测定白细胞介素2

白细胞介素2(IL-2)是重要的免疫调节因子。对IL-2的检测,国外一般采用依赖IL-2的T细胞株CTLL细胞进行测定。该细胞在国内来源困难,不易维持。国内亦有用鼠胸腺细胞增殖试验来测定IL-2者,但由于不能消除IL-1的非特异影响,因此,该方法受一定局限。本文参照Christine的报道,用经Con-A(4μg/ml)诱导及氢化可的松(0.04μg/ml)处理的鼠胸腺细胞(HCIT)进行IL-2测定,并同时用CTLL-2细胞测定方法进行比较,结果证实:用HCIT细胞测定IL-2与用CTLL-2细胞测定两种方法有很好的相关性、相关系数r=0.94。但用CTLL细胞比用HCIT细胞较敏感。在本试验条件下,前者敏感量为0.4IL-2活性单位,后者为1.3IL-2活性单位。因此用HCIT细胞进行IL-2测定,也可以达到特异(对IL-1不发生反应),灵敏、重复性好的效果。且由于胸腺细胞容易获取,操作技术简便、易于掌握,是一种在没有CTLL细胞情况下测定IL-2的较好的方法。     

S-O_2-1菌苗诱生干扰素的研究 Ⅱ小鼠脾脏细胞体外诱生

本文表明S-O_2-1菌苗具有较强的诱导小鼠脾细胞产生干扰素的能力。将事先用菌苗免疫的C57BL/6小鼠脾细胞体外培养时,即使不加菌苗也能产生较高滴度的干扰素活性,该活性在免疫后4天制备的脾细胞培养中开始出现,免疫后7天则达高峰(7.47±0.31 log_2U/ml),以后逐渐下降。若培养时添加菌苗,干扰素高峰出现稍晚些,于免疫后10天达高峰,但滴度明显上升(9.10±0.26 log_2U/ml)。另外,C57BL/6正常小鼠的脾细胞(5×10~6细胞/ml)添加菌苗(0.1亿菌/ml)体外培养12小时后可开始测出干扰活性,培养48小时后活性达高峰(8.23±0.30log_2U/ml)。该干扰素具有小鼠Ⅱ-型干扰素相同的特性。我们在实验中还发现,将S-O_2-1菌苗与刀豆素A(Con A)合用诱生的干扰素滴度明显高于两者单独使用时诱生滴度的累加值。     

重症甲型H1N1 流感病毒感染诱导小鼠胸腺凋亡萎缩

目的:探讨重症流感病毒感染介导的胸腺萎缩及其作用机制。方法:4～6周龄SPF级BALB/c小鼠滴鼻给予50μl TCID_(50)甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(1×10~6个/ml),构建重症流感病毒感染小鼠模型;检测各感染时间小鼠体质量、胸腺大小及重量;HE染色检测胸腺组织病理变化;流式细胞术检测胸腺内不同发育阶段T细胞数量及凋亡;原位TUNEL法检测胸腺细胞凋亡;细胞凋亡相关基因芯片和荧光定量PCR检测验证促凋亡和抗凋亡相关基因变化。结果:成功建立小鼠重症甲型H1N1流感病毒感染模型。感染2～3 d后小鼠胸腺萎缩变小,以胸腺皮质区萎缩为主,感染5～7 d皮质区完全消失。主要存在于皮质区的双阳性T细胞(CD4~+CD8~+),随感染过程进展逐渐减少直至消失。细胞凋亡,尤其是皮质区细胞凋亡增多是胸腺萎缩的重要原因。促凋亡相关基因表达增加,尤其Fas介导的细胞凋亡可能是胸腺皮质区细胞凋亡的重要机制。结论:重症流感病毒感染可诱导胸腺(尤其是皮质区)萎缩,FasL-Fas介导的细胞凋亡是胸腺萎缩的重要原因。     

CSV—IL—6的构建及其在COS7细胞中的表达

利用基因重组、PCR扩增、定点突变及转译优化等程序,构建了人白细胞介素6重组表达载体CSV-IL-6(1)和CSV-IL-6(2);并利用DEAE-Dextran法转染猴细胞系COS7获得了有生物活性IL-6的暂时性高表达。IL-6ELISA定量测定表达水平:转染后48小时收集的上清CSV-IL-6(1)2573pg/ml,72小时1476pg/ml;CSV-IL-6(2)分别为8261Pg/ml与7101pg/ml。利用IL-6依赖的杂交瘤细胞株7TD1检测转染后48小时收集的培养上清的IL-6生物活性结果为:CSV-IL-6(1)10~4U/ml、3.9×10~9U/mg;CSV-IL-6(2)6.3×10~4U/ml,7.6×10~9U/mg。     

八株小鼠胸腺基质细胞系产生白细胞介素1及白细胞介素6的水平

应用IL-1诱导LBRM33-IA5细胞产生IL-2、及支持IL-6依赖细胞系KD-83细胞的增殖,分别测定了本室所建8株小鼠胸腺基质细胞系自发分泌IL-1及IL-6的能力.8株MTSC 分泌IL-1水平不同,>100U/ml者,1株;30～40U/ml 者,2株.8株细胞均能产生IL-6,其中7株的分泌水平>80U/ml;1株为38U/ml.比较各株分泌IL-1及IL-6的水平,本文显示,在MTSC 各系中,尚存在IL-1非依赖性IL-6分泌途径.本文尚比较了两种测定IL-1活性的方法,支持胸腺细胞增殖法测得者,实为IL-1+IL-6的效应,不能反映IL-1的实际水平.     

基因重组肿瘤坏死因子对LAK细胞体内外抗肿瘤作用的增强效果

TNF单独不能诱导LAK活性,也不能进一步提高最适剂量IL-2(1000U/ml)诱导的LAK活性,但能显著增强亚适剂量IL-2(10～100U/ml)诱导的LAK活性。抗TNF单抗和抗IL-2受体β链(p75)单抗显著抑制TNF/IL-2对LAK活性的协同诱导作用。实验证明,TNF能显著增强IL-2/LAK细胞的体内抗肿瘤效果,对于腹水型肝癌小鼠,以联合腹腔内注射TNF/IL-2/LAK细胞的体内抗肿瘤效果最佳。     

雌二醇在体外对脾细胞和胸腺细胞增殖反应的影响

本文研究在体外细胞培养系统中直接加入雌二醇(E_2)对脾细胞和胸腺细胞的作用,发现高剂量(≥5μg/ml)的E_2可直接抑制脾细胞对ConA诱导的增殖反应;但在胸腺细胞的实验中,无论低或高剂量(10~(-2)ng/ml～20μg/ml)的E_2均未发现它对ConA诱导的增殖反应产生明显影响。表明E_2在体外对脾细胞和胸腺细胞的作用存在差异。     

HFRSV感染乳鼠的脾细胞增殖及IL-2产生能力的变化

本文研究了HFRSV感染3～5日龄BALB/C新生乳鼠脾脏的病理变化、脾细胞对丝裂原或/和细胞因子诱导的增殖效应及IL-2产生能力的变化。结果表明:感染组鼠较正常组鼠(1)脾脏体积明显缩小,脾细胞数量显著减少;(2)脾细胞在无刺激原条件下培养,~3H-TdR掺入cpm值明显升高;(3)脾细胞对ConA或/和rHuTNF-α、rHu IL-2诱导的增殖反应显著降低,但是rHu IL-2、rHuTNF-α对ConA诱导的感染鼠脾细胞增殖反应仍有明显的促进作用,且这两种细胞因子有协同效应;(4)脾细胞经ConA诱导后的IL-2产生能力显著降低。此结果对于进一步了解HFRSV感染过程中细胞免疫功能变化有重要意义,同时也为临床应用细胞因子进行免疫治疗提供了有价值的实验依据。     

过表达CXCR4促进小鼠骨髓间充质干细胞的归巢和增殖

目的研究过表达CXC趋化因子受体4(CXCR4)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)体内外归巢特性和细胞增殖活性的影响。方法利用慢病毒载体介导小鼠BMMSC过表达CXCR4,构建过表达CXCR4的细胞(CXCR4-BMMSC)。Transwell~(TM)小室实验检测基质细胞衍生因子1(SDF-1)对BMMSC迁移能力的影响;噻唑蓝(MTT)法检测BMMSC的增殖能力。BALB/c小鼠接受全身照射(TBI)后,随机分为2组,每组10只。BMMSC对照组:小鼠经TBI后,输注5×10~5个绿色荧光蛋白标记的BMMSC(GFP-BMMSC);CXCR4-BMMSC组:小鼠经TBI后,回输5×10~5个携带GFP的CXCR4-BMMSC。尾静脉回输细胞后,取小鼠胸腺进行冰冻切片,荧光显微镜下观察回输的细胞归巢至胸腺组织的情况;流式细胞术检测BMMSC归巢至受鼠体内胸腺的效率。结果 Transwell~(TM)小室实验证实CXCR4可促进SDF诱导的BMMSC的跨膜迁移;与BMMSC对照组相比,CXCR4-BMMSC的增殖活性显著升高。与BMMSC对照组相比,过表达CXCR4可明显提高BMMSC归巢至胸腺组织的效率;流式细胞术检测结果提示BMMSC归巢至胸腺数量高于对照组。结论过表达CXCR4可增强SDF-1对BMMSC的迁移募集,体内可促进BMMSC归巢至损伤胸腺。CXCR4还可促进小鼠BMMSC的增殖。     

α-半乳糖神经酰胺对小鼠肺iNKT细胞数量、活性和气道炎症反应的影响

目的观察α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)对小鼠肺iNKT细胞数量、活性和气道炎症反应的影响。方法 12只野生型Balb/c小鼠随机分为α-GalCer治疗组和正常对照组,每组6只;12只CD1d~(-/-)Balb/c小鼠随机分为CD1d~(-/-)α-GalCer治疗组和CD1d~(-/-)对照组,每组6只。野生型和CD1d~(-/-)α-GalCer治疗组小鼠单次腹腔注射α-GalCer 2μg,并用等量PBS对照。分别采用流式细胞仪检测小鼠肺iNKT细胞、IL-4~+和IFN-γ~+i NKT细胞的数量;HE和PAS染色观察肺组织炎症和气道杯状细胞增生;姬姆萨染色检测肺泡灌洗液(BALF)细胞总数和分类计数;ELISA法检测BALF中IL-4、IL-5、IL-10、IL-13水平和脾细胞培养上清液中IL-4、IL-5、IL-13水平。结果野生型α-GalCer治疗组小鼠肺iNKT细胞、IL-4~+和IFN-γ~+i NKT细胞的数量明显高于野生型正常对照组(P0.05)。野生型α-GalCer治疗组小鼠肺组织无炎症改变和基底膜杯状细胞增生;BALF中细胞总数和分类计数、BALF及脾细胞培养上清液中IL-4、IL-5和IL-13水平与野生型对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。野生型α-GalCer治疗组小鼠BALF中IL-10水平明显高于野生型正常对照组(P0.01),但CD1d~(-/-)α-GalCer治疗组小鼠BALF中IL-10水平与野生型正常对照组和CD1d~(-/-)对照组比较差异无统计学意义(均P0.05)。结论腹腔注射α-GalCer可以增加小鼠肺iNKT细胞数量和活性,但不能诱导气道炎症反应。     

Th1型和Th2型细胞因子对人中性粒细胞吞噬结核杆菌活性的影响

Objective To establish a flowcytometry method for detecting phagocysis of Mycobacterium tuberculosis(Mth) by the human peripheral blood neutrophils( PMNs), and to explore the effects of Thl and Th2 cytokine on phagocytotic activity of PMNs. Methods By using acid-fast staining the phagocytosis of Mtb by human neutrophil was observed by microscopy, and the phagocytosis of FTTC labeled Mtb by human neutrophils was detected under confocal microscope. The whole fresh peripheral blood of healthy adults was incubated with FTTC labeled Mtb and the phagocytosis were measured by flow cytometry. The altered phagocytosis of FTTC-Mtb by neutrophils pretreated with IL-2, IFN-γ, GM-CSF or IL-4 were measured. Results Human peripheral blood neutrophils activity of Mtb phagocytosis was observed by acid-fast staining and confocal microscope. The percentage of phagocytosis of Mtb was dependent on the time of incubation with Mtb. The percentages were 47% at 5 min and reached plateau about 66% ～72% at 15 min to 20 min.Pretreatment with different concentrations of IL-2 or IFN-γincreased the phagocytosis of Mtb by 76.7% and 75.2%, respectively; but pretreatment with IL-4 decreased the phagocytosis by 31.7%. Conclusion IL-2and IFN-γcan increase phagocytosis of Mth by neutrophils; while IL-4 can reduced neutrophil activity of phagocytosis of Mtb by human neutrophils, and demonstrate that Th1/Th2 type cytokins involve in regulating the acitvities of neutrophils anti-Mtb infection.     

Th1型和Th2型细胞因子对人中性粒细胞吞噬结核杆菌活性的影响

Objective To establish a flowcytometry method for detecting phagocysis of Mycobacterium tuberculosis(Mth) by the human peripheral blood neutrophils( PMNs), and to explore the effects of Thl and Th2 cytokine on phagocytotic activity of PMNs. Methods By using acid-fast staining the phagocytosis of Mtb by human neutrophil was observed by microscopy, and the phagocytosis of FTTC labeled Mtb by human neutrophils was detected under confocal microscope. The whole fresh peripheral blood of healthy adults was incubated with FTTC labeled Mtb and the phagocytosis were measured by flow cytometry. The altered phagocytosis of FTTC-Mtb by neutrophils pretreated with IL-2, IFN-γ, GM-CSF or IL-4 were measured. Results Human peripheral blood neutrophils activity of Mtb phagocytosis was observed by acid-fast staining and confocal microscope. The percentage of phagocytosis of Mtb was dependent on the time of incubation with Mtb. The percentages were 47% at 5 min and reached plateau about 66% ～72% at 15 min to 20 min.Pretreatment with different concentrations of IL-2 or IFN-γincreased the phagocytosis of Mtb by 76.7% and 75.2%, respectively; but pretreatment with IL-4 decreased the phagocytosis by 31.7%. Conclusion IL-2and IFN-γcan increase phagocytosis of Mth by neutrophils; while IL-4 can reduced neutrophil activity of phagocytosis of Mtb by human neutrophils, and demonstrate that Th1/Th2 type cytokins involve in regulating the acitvities of neutrophils anti-Mtb infection.     

淫羊藿甙协同诱生IL—2,3,6作用的研究

采用依赖细胞株法，分别检测了淫羊藿甙协同诱生ＩＬ－２、ＩＬ－３及ＩＬ－６的作用。结果表明：淫羊藿甙可协同ＰＨＡ诱导扁桃体单个核细胞产生ＩＬ－２、３、６，呈剂量依赖关系；动力学观察表明：ＩＬ－２、ＩＬ－６的最大分泌时相为４８ｈ，ＩＬ－３的最大分泌时相为７２ｈ。提示，淫羊藿甙是一种有效的生物反应调节剂。     

IL-2、IL-4和IL-7体外诱导人外周血淋巴因子激活的杀伤细胞效应的比较

比较了淋巴因子ＩＬ－２、ＩＬ－４和ＩＬ－７在体外诱导健康人外周血淋巴因子激活的杀伤 （ＬＡＫ）细胞活性的效应。结果表明，ＩＬ－７可单独，亦可与ＩＬ－２、ＩＬ－４协同诱导ＬＡＫ细胞，而且ＩＬ－７ 诱导ＬＡＫ细胞的效应不被抗ＩＬ－２、抗ＩＬ－４所抑制。ＩＬ－７单独诱导的ＬＡＫ细胞活性高峰迟于ＩＬ－ ２或ＩＬ－４所诱导的活性高峰，且与增殖反应曲线一致。抗ＣＤ８抗体明显抑制ＩＬ－７诱导ＬＡＫ细胞 的效应，而ＩＬ－７诱导ＬＡＫ细胞的效应不能被抗ＮＫＨ－１所抑制。提示：ＩＬ－７ 激活ＬＡＫ细胞的效应 机制不依赖ＩＬ－２和ＩＬ－４，并很可能成为肿瘤过继治疗中的重要淋巴因子。     

模拟mIL-18天然生成真核表达体系的构建及生物活性初探

目的：构建模拟小鼠IL-18(mIL-18)天然生成真核表达体系，并探讨其与人IL-2(hIL-2)真核表达载体pVR1012-hIL-2(phIL-2)体内外共转染对细胞免疫功能的影响。方法：分别构建小鼠IL-18前体(mproIL-18)和小鼠IL-1β转换酶(mICE)的真核表达载体pVR1012-mpmIL-18(pmproIL-18)和pEGFP-N1-mICE(pmICE)。两者单独或共转染COS-7细胞，分别在mRNA和蛋白水平检测IL-18的表达；将pmproIL-18、pmICE和phIL-23种真核表达载体分别通过体内、外共转染，初步检测其生物学活性。结果：pmproIL-18及pmICE构建正确，分别转染COS-7细胞后能检测到相应mRNA表达。在pmproIL-18单独或pmproIL-18／pmICE共转染的COS-7细胞中能检测到前体和成熟2种不同形式的mIL-18蛋白表达，并且mIL-18能分泌到上清；所分泌的mIL-18与hIL-2体外联合作用可增强小鼠脾细胞增殖能力。pmproIL-18、pmICE和phIL-23种真核表达载体联合肌肉注射的小鼠脾细胞体外杀伤同基因型肿瘤细胞的能力显著提高。结论：构建的模拟mIL-18天然生成的真核表达体系(pmproIL-18／pmICE)与phiL-2共转染有可能用于肿瘤的基因治疗。     

Th1型和Th2型细胞因子对人中性粒细胞吞噬结核杆菌活性的影响

目的 建立用流式细胞术检测人外周血中性粒细胞(PMNs)吞噬结核分枝杆菌(Mtb)的方法 ,并探讨Th1和Th2型细胞因子对PMNs吞噬Mtb活性的影响.方法 运用抗酸染色、激光共聚焦显微镜观察人PMNs吞噬Mtb,并用流式细胞术检测人PMNs对FTTC标记Mtb的吞噬活性.外周血预先分别与IL-2、IFN-γ、GM-CSF和IL-4等细胞因子孵育,再加FTTC标记Mtb后,用流式细胞术检测PMNs对Mtb吞噬率,并与对照组比较吞噬率的变化.结果 抗酸染色和激光共聚焦显微镜均能观测到人PMNs吞噬Mtb.用流式细胞术检测健康人外周血PMNs对Mtb的吞噬率在5 min时为47%,15～20 min达到平台期,为66%～72%.外周血预先加IL-2或IFN-γ作用后,PMNs对Mtb的吞噬率可分别增加76.7%和75.2%;而预先加IL-4作用后,吞噬率降低31.7%.结论 IL-2和IFN-γ对PMNs吞噬Mtb功能有增强作用,而IL-4有降低作用,表明Th1型和Th2型细胞因子参与调节PMNs抗结核杆菌感染的免疫作用.     

细胞因子及特异性抗体的检测在肾综合征出血热诊断中的意义

探讨检测血清细胞因子及肾综合征出血热(HFRS) 病毒特异性抗体IgM和IgG的含量在HFRS发病机制及诊断中的意义.选择24例HFRS患者及30例健康人血清标本,采用生物素-亲和素-酶免疫技术检测IL-2、IL-6和TNF-α,ELISA方法检测血清HFRS病毒特异性抗体IgM和IgG,并对其进行统计学分析. 结果显示, ELISA法检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为75.00 % 和50.00 %,健康对照组的抗体阳性率为零;HFRS患者血清IL-2、IL-6、TNF-α的含量分别为10.88±2.31pg/mL、256.46±102.51pg/mL和45.63±5.32pg/mL,高于健康对照组0.59±0.24pg/mL(P＜0.01)、53.8±19.21 pg/mL(P＜0.01)和5.81±3.58 pg/mL(P＜0.01). 结论 :HFRS患者血清IL-2、IL-6和TNF-α及血清特异性抗体IgM和IgG的含量较健康人明显升高,检测这些指标对该病发病机理、诊断及预后评价有一定意义.     

加味宣肺透解剂对流感病毒感染小鼠细胞因子的影响

目的：观察加味宣肺透解剂（JXT）对流感病毒感染小鼠细胞因子的影响。方法：复制流感病毒鼠肺适应株（FM1）小鼠肺炎模型，以加味宣肺透解剂灌胃治疗。ELISA法检测感染后第5天血清中IL-2、TNF-α、IL-6、IFN-γ的含量，肺组织切片HE染色。结果：加味宣肺透解剂明显升高血清中IL-2、IFN-γ水平，降低TNF-α、IL-6水平，减轻肺组织病变。结论：调节细胞因子的分泌，可能是加味宣肺透解剂减轻病毒感染小鼠肺组织损伤的机制之一。     

玉竹提取物B抗肿瘤机制的初步研究

目的：研究玉竹提取物B(the extract B of Polygonsham odoratum,EB-PAOA)对S—180荷瘤鼠细胞因子产生水平的影响及诱导人结肠癌CL-l87细胞调亡的作用，以初步探讨EB-PAOA的抗肿瘤作用机制。方法：采用MTT法，检测EB-PAOA对S—180荷瘤鼠产生IL-2、IFN—γ、IL-1和TNF—α等细胞因子水平的影响；体外培养人结肠癌CL-l87细胞株，用MTT法测定EB-PAOA对CL-187细胞的抑制率；用电镜观察并确认有无凋亡细胞；通过流式细胞仪检测凋亡率。结果：EB-PAOA处理后的荷瘤鼠产生IL-2、IL-1和TNF—α的能力均有所增强；EB-PAOA能抑制CL-l87细胞的增殖；电镜下可见到大量凋亡细胞；流式细胞仪DNA直方图上出现了凋亡峰，凋亡率呈时间依赖性。结论：EB-PAOA抗肿瘤的作用机制可能是通过促进荷瘤鼠脾细胞分泌IL-2以及腹腔巨噬细胞分泌IL-1和TNF—α增强细胞免疫功能并具有直接诱导肿瘤细胞调亡作用而实现的。     

铁缺乏孕妇外周血单个核细胞IL-2、IL-6分泌水平研究

目的探讨铁缺乏及不同补铁浓度对孕妇外周血单个核细胞（PBMC）IL-2、IL-6分泌水平的影响,为临床补铁提供理论依据。方法孕妇血肝素抗凝,分离PBMC。给予LPS或PHA刺激后,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同铁浓度环境下健康及铁缺乏孕妇PBMC的IL-2、IL-6分泌水平。结果体外试验表明：给予LPS或PHA刺激后,铁缺乏患者PBMC的IL-2分泌水平低于健康孕妇平均水平,IL-6高于健康孕妇平均水平;不同补铁浓度对IL-2分泌水平无影响,但IL-6分泌水平有所提高。结论孕期应该注重含铁食物的摄入,平衡膳食,预防因铁营养缺乏而导致的免疫功能下降;铁缺乏孕妇适量补铁有利于提高IL-6的分泌水平,促进机体造血功能的改善与恢复。