胞苷脱氨酶基因治疗肿瘤研究进展

肿瘤自杀基因治疗是目前肿瘤基因治疗研究热点之一,胞苷脱氨酶(简称ＣＤ)基因是其中之一。本文把ＣＤ基因治疗肿瘤近年有关文献作一简要综述。1　胞苷脱氨酶基因结构及治疗肿瘤机理ＣＤ基因是一个由3000个碱基对组成的分子。ＣＤ蛋白由427个氨基酸组成。ＣＤ是一个非哺乳?..     

肿瘤的基因治疗

基因治疗(Gene Therapy)是指在基因水平上对疾病进行治疗,具体讲就是通过基因操作,将正常有功能的基因转入人体内并使之表达,或使有害基因关闭,从而达到治疗的目的。自从1990年9月在美国开展的世界首例腺苷脱氨酶(ADA)缺乏症的4岁女孩的基因治疗获得巨大成功以来,短短不到两年时间,基因治疗这一领域发展迅速,它不仅为遗传病的治疗开拓了广阔的前景,而且也可以应用于肿瘤、传染病及老年性疾病等治     

婴儿双歧杆菌/胞嘧啶脱氨酶肿瘤靶向性基因治疗系统的构建

目的 构建婴儿双歧杆菌/胞嘧啶脱氨酶肿瘤靶向性基因治疗系统。方法 PCR扩增胞嘧啶脱氨酶(CD)基因，TSS法在大肠杆菌，M109中扩增pGEX-1LambdaT质粒。EcoRⅠ和BamHⅠ对CD基因和pGEX-1LambdaT质粒分别进行双酶酶切。琼脂糖电泳凝胶分离并切取其中4．9kb和1．3kb两个片段长度的凝胶。凝胶DNA提取试剂盒提取其中所含的DNA片段，T4DNA连接酶连接这两个片段，最后用电穿孔法将重组片段转染婴儿双歧杆菌，并挑选阳性菌落，提取质粒双酶切后进行琼脂糖凝胶电泳检测。结果 应用电穿孔法转染婴儿双歧杆菌，获得含6．2kbp重组质粒的阳性转染婴儿双歧杆菌。结论 成功构建婴儿双歧杆菌/胞嘧啶脱氨酶肿瘤靶向性基因治疗系统。     

应用Fludarabine治疗毛细胞白血病

毛细胞白血病(HCL)是一种以浸润骨髓、肝、脾为主引起全血细胞减少、脾大及各种免疫低下为特征的慢性B淋巴细胞增生性疾病。脾切除是治疗本病的主要手段,临床有效率为75％。α-干扰素、2-去氧助间型霉素(DCF)和-2氯脱氧腺苷也可治疗HCL,DCFα-干扰素治疗耐药的HCL仍然有效,变异型的HCL(HCL-V)对一般治疗效果较差。 fludarabine是一种腺嘌呤核苷的类似物,其结构与DCF和2-氯脱氧腺苷相似,能抑制腺苷脱氨酶的活性,对慢淋和某些淋巴瘤     

婴儿双歧杆菌/胞嘧啶脱氨酶肿瘤靶向性基因治疗系统的构建(英文)

目的构建婴儿双歧杆菌/胞嘧啶脱氨酶靶向性基因治疗系统。方法 PCR 扩增 CD 基因,EcoR Ⅰ,BamH Ⅰ对 CD 基因和 pGEX-1LamdaT 质粒同时进行双酶切,获得4.9 kb、1.3 kh 两个 DNA 片段。T4 DNA 连接酶连接这两个片段构建重组的CD/pGEX-1LamdaT 质粒,然后用电穿孔法将重组质粒转染婴儿双歧杆菌。从阳性转染的婴儿双歧杆菌中提取重组质粒,双酶切后检测切取片段长度,采用 Sanger 双脱氧链终止法对提取的重组质粒中的插入片段进行测序。结果从阳性转染的婴儿双歧杆菌中获得了6.2 kb大小的重组质粒,该质粒经双酶切后,得到了4.9 kb 和1.3 kb 两个长度的片段,其长度分别与 pGEX-1LambdaT 及 CD 基因的长度相同。测序结果显示,提取的重组质粒中插入的基因片段全长及核苷酸序列与 CD 基因完全相同。结论外源性 CD 基因被准确插入 pGEX-1LambdaT 质粒并转入婴儿双歧杆菌中,婴儿双歧杆菌/胞嘧啶脱氨酶靶向性基因治疗系统被成功构建。     

CD基因对人胰腺癌细胞株Patu 8988杀伤作用的研究

目的　探讨腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶 (CD )基因对人胰腺癌细胞株Patu 8988的杀伤作用。方法　采用细菌内同源重组方法 ,构建含胞嘧啶脱氨酶 (CD)基因重组腺病毒载体 ,经 2 93细胞包装、扩增 ,氯化铯密度梯度离心制备纯化高效的重组腺病毒 ,体外转染人胰腺癌细胞株Patu 8988,并给予前药 5 Fc ,观察其体外杀伤效果。结果　含CD基因的腺病毒载体经酶切鉴定正确 ,包装纯化后 ,检测病毒滴度为 2× 10 11pfu/ml ,将重组腺病毒转染胰腺癌细胞株Patu 8988,加用前药 5 Fc后 ,转染CD基因的Patu 8988细胞及混育的胰腺癌细胞生长明显受抑制。结论　CD腺病毒不仅转染效果强 ,而且可直接或通过旁观者效应杀伤胰腺癌细胞。自杀基因治疗有可能成为治疗胰腺癌的有效方法     

小肠、结肠、直肠（051001～051039）

阑尾类癌的临床特征及治疗原则(附13例报告)；全反式维甲酸对结肠癌不同增殖潜能细胞株增殖的抑制作用的研究；白介素-2基因增强胞嘧啶脱氨酶基因的抗结肠癌效应；影像学检查对结肠癌手术切除可能性评估的价值；结肠癌单个淋巴结转移的分布特点和临床意义；腹腔镜结肠直肠手术的初步经验；     

人肝癌SMMC-7721细胞中POLD1基因CDS突变的检测

目的检测人肝癌细胞株SMMC-7721中POLDl基因CDS的突变情况,以期从DNA复制最关键酶的编码基因POLDl的突变为干预细胞恶性增殖提供新的思路。方法设计人POLDl基因CDS特异性引物,以人肝癌细胞株SMMC．7721总RNA为模板进行RT—PCR扩增,将扩增产物纯化后加入“腺嘌呤”并与T载体连接,将连接产物进行测序,与数据库中的序列进行比对。结果成功扩增了人肝癌细胞中POLDl基因的CDS片段。SMMC．7721细胞中POLDl基因的CDS存在11个碱基替换,1个碱基缺失。结论人肝癌细胞SMMC-7721中POLDl基因的CDS发生了突变,进而导致其编码的氨基酸序列发生改变。     

T细胞及相关免疫分子在淋巴细胞趋化因子增强肿瘤自杀 …

本室以往的研究表明，用腺病毒作为载体将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠淋巴细胞趋化因子（Ｌｉｎ）基因联合体内转染，具有显著的抗肿瘤效应。本文对其免疫机理进行了进一步研究，发现ＣＴ２６结肠腺癌细胞体外经过ＣＤ／Ｌｉｎ基因转染并给予前体药物５－ＦＣ后，ＣＴ２６结肠腺癌细胞表达ＣＤ８０和ＣＤ５４分子明显增加，提示经ＣＤ自杀基因和Ｌｉｎ基因联转移后，肿瘤细胞免疫原性增加。荷瘤小鼠体内经联合治疗后，小     

大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的 克隆大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因，构建真核表达载体，本研究拟探索该基因在肿瘤基因治疗中的应用基础。方法 根据GenBank数据库提供的CD基因核苷酸序列，设计并合成一对引物，采用PCR方法，从大肠杆菌基因组DNA中扩增出CD基因，并与pcDNA3．1定向连接，构建受控于人巨细胞病毒启动子的重组真核载体pcDNA3．1-CD，并用限制性内切酶、PCR和DNA测序进行鉴定。结果克隆了大肠杆菌CD基因，并构建了真核表达载体，经限制性内切酶酶切、PCR扩增和DNA测序证实了其正确性。结论 pcDNA3．1-CD真核表达载体构建成功。     

腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶自杀基因联合IL—2基因疗法的肿瘤治 …

以腺病毒作为载体,将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因与小鼠ＩＬ－２基因联合转移,研究其体内抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞后３天,肿瘤局部 注射表达ＩＬ－２的重要腺病毒ＡｄＩＬ－２和表达的ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ,然后连续０天给予５－氟胞嘧啶３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗。     

腺病毒介导的CD／5FC自杀基因疗法对小鼠结肠腺癌的治疗？…

大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶ＣＤ可以将前体药物５ＦＣ代谢为毒性产物５ＦＵ，具有抗肿瘤作用。本课题我们观察了腺病毒介导的ＣＤ／５ＦＣ自杀基因治疗对小鼠结肠癌生长的治疗作用并探讨其作用机理。结果表明，首次，ＣＤ／５ＦＣ自杀基因疗法小鼠结肠癌ＣＴ２６体内外生长均具有显著的抑制作用，４０％的荷瘤小鼠经过治疗后长期存活；其次，我们还研究了自杀基因疗法治疗肿瘤时可能涉及的免疫机理。结果发现在以ＣＤ／５ＦＣ系统治疗结肠     

人生长抑素受体-2和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶共表达细胞系的建立及其对5-氟胞嘧啶杀伤的敏感性

目的建立共表达人生长抑素受体2(SSTR2)和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)的细胞系,为"自杀基因"/前体药物系统联合SSTR2介导的放射性免疫杀伤和显像治疗肿瘤提供细胞模型.方法应用反转录PCR方法从人胚肾293细胞中克隆人sstr2基因,通过基因重叠延伸拼接(SOE)结合PCR方法将CD、内部核糖体进入位点(IRES2)和sstr2连接,并构建表达载体.体外转染人乳腺癌SKBr3细胞并筛选,通过间接免疫荧光检测SSTR2的表达,并研究前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)对上述细胞的杀伤作用.结果成功克隆了人sstr2基因,并构建了CD和sstr2基因的双顺反子表达载体,进一步建立了稳定转染上述表达载体的SKBr3细胞系,间接免疫荧光证实了SSTR2的表达,同时建系细胞能够被前体药物5-FC高效杀伤.结论本研究建立的人乳腺癌细胞系可以共表达sstr2和CD基因,为在体内研究放射性核素标记的SSTR2配体显像和免疫杀伤,并协同CD/5-FC治疗肿瘤奠定基础.     

慢病毒介导CD-TK融合基因转染神经干细胞后杀伤C6胶质瘤的研究

[日的]观察慢病毒介导的CD—TK融合基因转染神经十细胞（NSCs）对C6胶质瘤生长的抑制作用以及疗效。[方法]利用慢病毒介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（CD）和单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSVTK）融合基因转染NSCs,植入C6胶质瘤模型。用流式细胞仪技术检测C6胶质瘤生长凋亡情况。[结果]成功构建CD．TK基因转染NSCs模型。实验组坏死细胞（17．80％）、早期凋产细胞及晚期凋亡细胞（33．30％）较对照组增加。CDglyTK．NSC±GCV／5-Fc治疗组肿瘤体积为9．36±2．35mm3,小于其他处理组及对照组的肿瘤体积（P〈0．05）。[结论]转染NSCs的CD—TK基因对C6胶质瘤细胞有抑制作用,抗肿瘤效果明显,优于单一的自杀基因系统。     

CD自杀基因联合淋巴细胞趋化因子基因疗法的肿瘤治疗？…

本研究以腺病毒作为载体，将大肠杆菌胸嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠淋巴细胞趋化因子（Ｌｔｎ）基因体内联合转染，观察了其抗肿瘤效应并分析了免疫机理。小鼠皮下接种结肠腺癌ＣＴ２６细胞后３天，肿瘤局部注射表达Ｌｔｎ的重组腺病毒ＡｄＬｔｎ和表达ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ，然后连续１０天给予５－氟胸嘧啶（５－ＦＣ）３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗，结果表明，联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长受到明显抑制，小鼠存活期明     

IL-2基因与自杀基因联合转移对小鼠红白血病的治疗作用

用腺病毒作为载体,将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因体外转染小鼠红白血病FBL-3细胞,结果CD基因转移后该细胞对5-氟胞嘧啶(5-FC)的敏感性提高了近1000倍,FBL-3细胞有明显的凋亡发生,且观察到明显的旁观者效应.小鼠体内接种FBL-3红白血病细胞后3天,肿瘤局部注射小鼠白细胞介素2(IL-2)基因的表达载体(Ad-IL-2)和Ad-CD腺病毒载体,然后连续10天给予5-FC 300mg/kg行治疗.结果FBL-3皮下肿瘤的生长明显受到抑制,部分小鼠肿瘤消失.联合治疗小鼠的存活期明显大于单用Ad-IL-2治疗组和单用自杀基因CD与5-FC治疗组.体内免疫功能检测表明,经小鼠自杀基因与IL-2联合基因治疗后小鼠脾细胞的CTL杀伤     

体内复制缺陷型腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶基因转染胶质瘤细胞对5-氟胞嘧啶敏感

病毒介导的化学敏感基因的转染,为肿瘤的治疗提供了一条有希望的新途径,目前脑肿瘤的基因治疗集中在将包装携带TK基因的逆转录病毒的细胞系植入肿瘤,其主要局限性是逆转录病毒在体内的转染几乎无效,即只有和包装细胞非常接近的胶质瘤细胞才易被转染,且TK基因疗法所产生的旁观者效应需依赖细胞间的直接接触。本文介绍通过复制缺陷的腺病毒载体介导将细菌胞嘧啶脱氨酶(cd)基因转染至大鼠9L胶质瘤细胞,使其对在正常细胞没有毒性的核苷-5-氟胞嘧啶(5-Fc)敏感。     

胞嘧啶脱氨酶基因重组逆转录病毒载体构建及对PA317细胞的转移表达

逆转录病毒载体是向真核细胞中进行基因转移的高效载体之一,是比较成熟和应用范围最广的基因转移和基因治疗载体。胞嘧啶脱氨酶（ｃｙｔｏｓｉｎｅｄｅａｍｉｎｅｓｅ,ＣＤ）基因是一重要的自杀性基因,我们研究的目的是克隆构建含有ＣＤ基因的重组逆转录病毒载体,并将该基因导入ＰＡ３１７包装细胞,建立完整的和安全高效的逆转录病毒表达载体系统,为开展ＣＤ基因与前体药物５氟胞嘧啶（５ｆｌｕｏｒｏｃｙｔｏｓｉｎｅ,５Ｆｃ）联合用于肿瘤的实验治疗研究奠定基础。材料与方法　１－主要试剂：限制性内切酶、Ｔ４ＤＮＡ连接酶…     

乳腺癌rAdCDES基因治疗的体内外实验研究

恶性肿瘤已成为一类严重威胁人类健康和生命的疾病.目前,将多种目的基因融合后行肿瘤基因治疗已为众多学者所关注.将胞嘧啶脱氨酶(CD)基因和内皮抑素(ES)基因融合成重组腺病毒rAdCDES,并观察其在体内外对乳腺癌细胞生长抑制作用,以期为乳腺癌的基因治疗提供新的研究方向.     

人结肠癌来源的肿瘤体内转染腺病毒介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨后对5-FC敏感性增高

癌症基因治疗中的一个基本策略是局部控制肿瘤生长,体内基因转染可以使目的基因集中在靶组织内,用这一方法可以转染一些编码酶的基因,当它们在肿瘤细胞内或周围组织中表达时,一些全身应用的非抗肿瘤的低毒性药物在这一局部被代谢成抗肿瘤的具有较高毒性的产物,使其在肿瘤局部发挥作用,并避免了全身毒性。胞嘧啶脱氨酶(CD)是这类基因中的一种。为观察体内转染