五味子脂A增强卡铂对人卵巢癌Skov3细胞的促凋亡作用及其机制

目的：探讨五味子脂A（GA）与卡铂（CBP）联合应用对卵巢癌Skov3细胞凋亡的影响,阐明GA的协同抑瘤作用。方法：采用不同浓度GA和CBP单独及联合对卵巢癌Skov3细胞株进行干预,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,根据其结果选择GA和CBP合适浓度。卵巢癌Skov3细胞分为对照组、GA（0.04μmol·L^-1）组、CBP（16mg·L^-1）组、GA（0.04 μmol· L^-1）联合CBP（16mg·L^-1）组（联合用药组）,药物处理48h后,观察各组细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,TUNEL染色观察细胞凋亡指数（AI）,JC-1染色观察细胞线粒体膜电位变化,RT-PCR和Western blotting法检测凋亡相关基因Bax、ccaspase-3和Stat3 mRNA和蛋白表达水平。结果：GA联合CBP作用后细胞增殖抑制率高于GA和CBP单独应用组（P<0.01）,且GA及CBP浓度分别为0.04 μmol·L^-1和16 mg·L^-1时量效比最佳（细胞增殖抑制率为52.1%）。与对照组比较,GA组和CBP组细胞折光性减弱,细胞回缩明显,部分脱落呈悬浮状;联合用药组细胞回缩现象更为明显,并见大量脱落细胞。流式细胞术和TUNEL检测,与对照组、GA组和CBP组比较,联合用药组Skov3细胞凋亡率和AI均明显升高（P<0.05或P<0.01）。JC-1染色检测,与GA组和CBP组比较,联合用药组Skov3细胞线粒体膜电位降低。RT-PCR和Western blotting法检测,联合用药组细胞中Bax和caspase-3mRNA和蛋白表达水平高于对照组、GA组和CBP组（P<0.05）,Bcl-2mRNA和Stat3 mRNA及蛋白表达水平低于对照组、GA组和CBP组（P<0.05）。结论：GA能增强CBP对卵巢癌Skov3细胞的促凋亡作用,其机制可能与上调Bax和caspase-3的基因表达、下调Bcl-2的基因表达有关,可协同CBP诱导细胞凋亡。     

桦木醇对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的: 研究桦木醇对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法: 培养结肠癌SW480细胞,传代后用于实验。SW480细胞分为对照组和不同剂量桦木醇(1、5、10、20、50和100 mg·L^-1)组,MTT法测定各组细胞的增殖抑制率;以不加桦木醇的SW480细胞为对照组,DAPI染色观察15 mg·L^-1桦木醇作用SW480细胞6、12和24h后的形态学变化;流式细胞术分析Sub-G₁细胞百分比即细胞凋亡率,体外caspase活力测定法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的激活情况,Western blotting法检测各组细胞caspase-3底物多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)断裂和凋亡蛋Bcl-2、Bcl-xL和cytochrome C的表达情况。结果: MTT法检测,与对照组比较,随着桦木醇剂量(1、5、10、20、50和100 mg·L^-1)增加SW480细胞的增殖抑制率逐渐增加(P<0.05或P<0.01),其增殖抑制率呈剂量效应关系,半数抑制浓度(IC₅₀)为12.875 mg·L^-1。DAPI染色,与对照组比较,15 mg·L^-1桦木醇组正常细胞数量减少,在12和24 h时呈现出典型的细胞凋亡特征(膜气泡,核固缩、变形及染色质浓缩等)。流式细胞术检测,与对照组比较,随着作用时间的延长,15 mg·L^-1桦木醇组SW480细胞中处于Sub-G₁期的细胞逐渐增多,即细胞凋亡率逐渐增加。caspase活力测定,与对照组比较,caspase-3和 caspase-9活性明显增加(P<0.05或P<0.01)。免疫印迹检测,与对照组比较,15 mg·L^-1桦木醇组SW480细胞中PARP出现断裂,凋亡蛋白Bcl-xL表达下调,cytochrome C表达上调,而Bcl-2蛋白表达无明显变化。结论: 桦木醇可抑制结肠癌SW480细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能是通过下调Bcl-xL表达启动线粒体介导的cytochrome C释放进而激活caspase-9凋亡途径实现。     

银杏叶提取物各组分对高糖培养下系膜细胞增殖及细胞外基质积聚的抑制作用

目的: 探讨银杏叶提取物(GBE)不同组分对高糖培养下系膜细胞增殖及细胞外基质(ECM)积聚的作用,阐明其作用机制。方法: 高糖培养的系膜细胞分别给予GBE、总黄酮、总内酯、总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚、异鼠李素、银杏内脂A、银杏内脂B和银杏内脂C,药物浓度分别为0(高糖对照组)、3.125、6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1,同时设低糖对照组,MTT法检测各组系膜细胞增殖情况。高糖培养的系膜细胞分别给予GBE、总黄酮、总内酯、银杏内脂A、银杏内脂B和银杏内脂C,药物浓度分别为0(高糖对照组)、0.05、0.50、5.00和50.00 mg·L^-1,同时设低糖对照组,ELISA法检测条件培养基中Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)水平。结果: MTT检测,与高糖对照组比较, 50.000 mg·L^-1GBE组细胞增殖活性明显降低(P<0.01),25.000 和50.000 mg·L^-1总黄酮组细胞增殖活性明显降低(P<0.05或P<0.01),总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚和异鼠李素各浓度组细胞增殖活性均明显降低(P<0.01),50.000 mg·L^-1内脂C组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);其他各组细胞增殖活性与高糖对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测,与高糖对照组比较,5.00和50.00 mg·L^-1GBE 组Col Ⅳ和FN水平均明显降低(P<0.01), 0.50 mg·L^-1GBE组FN水平明显降低(P<0.05),0.50、5.00和50.00 mg·L^-1总黄酮组Col Ⅳ水平降低(P<0.05或P<0.01),50.00 mg·L^-1总内脂组Col Ⅳ和FN水平降低(P<0.05或P<0.01),50.00 mg·L^-1内脂 C 组FN水平降低(P<0.05)。结论: GBE在高浓度时(50.000 mg·L^-1)抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖而低浓度(自0.500 mg·L^-1起)时抑制系膜细胞ECM积聚;GBE中总黄酮在抑制细胞增殖和ECM积聚方面起主要作用,总内脂无明显效果;苷元抑制系膜细胞增殖的作用远远强于糖苷。     

力达霉素抑制K562细胞增殖和诱导凋亡作用及其机制

目的: 研究力达霉素(LDM)对人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制。方法: 选取处于对数生长期的人CMLK562细胞,采用不同浓度(0.01、0.10和1.00nmol·L^-1)LDM处理48h,作为0.01、0.10和1.00nmol·L^-1LDM组,不加药物的正常细胞为对照组。台盼蓝染色观察各组K562细胞生长抑制率,MTT法检测细胞存活率,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法观察凋亡细胞的形态表现,AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞中caspase-3和caspase-8蛋白相对表达量。结果: 台盼蓝染色,LDM对K562细胞增殖有一定的抑制作用,各浓度LDM组细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05);MTT法检测,随LDM作用浓度的升高,细胞存活率下降,LDM对K562细胞作用的半数抑制浓度(IC₅₀)为(0.1±3.2)nmol·L^-1。AO/EB染色,荧光显微镜下观察到LDM能够引起细胞发生凋亡(胞质呈芽状突起,胞核碎裂成点状)。流式细胞术检测,各浓度LDM组K562细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05)。Western blotting法检测,0.10和1.00nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.01)。0.01nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论: LDM能够有效抑制K562细胞增殖,低浓度LDM可能通过上调细胞中caspase-8和caspase-3表达诱导K562细胞发生凋亡。     

五味子多糖对人结肠癌HT-29细胞体外增殖及侵袭能力的抑制作用

目的:探讨五味子多糖(ASPS)对人结肠癌HT-29细胞增殖和侵袭活性的影响,阐明ASPS的抗肿瘤作用。方法:40只 Wistar大鼠随机分为对照组(给予生理盐水)和100、200、400 mg·kg^-1 ASPS组,每组10只,取各组大鼠血清,HT-29细胞体外培养,以各组大鼠血清进行预处理,采用MTT法和Transwell小室检测各组HT-29细胞的增殖抑制率和侵袭活性抑制率;Western blotting法检测各组细胞上清液中bcl-2、bax和Caspase-3蛋白表达水平。结果:与对照组和100 mg·kg^-1 ASPS组比较,200和400 mg·kg^-1 ASPS组HT-29细胞增殖抑制率和侵袭活性抑制率均升高(P<0.05,P<0.01)。400 mg·kg^-1 ASPS组HT-29细胞上清液中bcl-2蛋白表达水平低于其他组(P<0.05,P<0.01),bax和Caspase-3蛋白的表达水平高于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:ASPS能显著抑制细胞的体外增殖和侵袭能力,其机制可能与下调HT-29细胞的bcl-2基因表达,上调bax和Caspase-3基因表达,激活细胞凋亡通道有关联。     

灵芝酸A对人炎性乳腺癌细胞体外增殖和凋亡的影响

目的：探讨灵芝酸A在体外对人炎性乳腺癌SUM149细胞增殖和凋亡的影响,阐明其可能机制。方法：人炎性乳腺癌SUM149细胞分为对照组和不同浓度（0.1、0.5、1.0、5.0和10.0 μmol·L^-1）灵芝酸A组,每组设4个复孔,分别于培养24、48和72h取样本。MTT法检测各组SUM149细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组SUM149细胞凋亡率和细胞周期,免疫细胞化学染色法检测各组SUM149细胞Ki67和Livin蛋白表达水平。结果：MTT法检测,与0.1μmol·L^-1灵芝酸A组比较,其他浓度灵芝酸A组SUM149细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05或P<0.01）,并呈浓度和时间依赖性。流式细胞术检测,与对照组比较,不同浓度灵芝酸A组SUM149细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）,并呈浓度和时间依赖性;同时细胞周期发生明显变化,与对照组比较,随着灵芝酸A浓度的增加和作用时间的延长,不同浓度灵芝酸A组G₁期细胞百分率明显增加（P<0.05）,S期细胞百分率减少（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较,不同浓度灵芝酸A组细胞中Ki67和Livin蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论：灵芝酸A通过诱导细胞凋亡抑制人炎性乳腺癌SUM149细胞增殖。     

肝细胞生长因子和血管紧张素Ⅱ对肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制

目的: 探讨肝细胞生长因子(HGF)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(TEMT)的影响,并阐明其作用机制。方法: 体外培养人近曲小管上皮HK-2细胞,取Ⅳ期细胞分为对照组、AngⅡ(1×10^-6mol·L^-1)组、HGF(8 μg·L^-1)组和AngⅡ(1×10^-6mol·L^-1)+HGF(8 μg·L^-1)组。采用CCK8法检测HK-2细胞增殖情况,RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达水平,Western blotting法检测α-SMA的蛋白表达水平。结果: 与对照组比较,AngⅡ组HK-2细胞增殖活性降低(P<0.01),HGF组HK-2细胞增殖活性升高(P<0.05),AngⅡ+HGF组HK-2细胞增殖活性降低(P<0.05)。与对照组比较,AngⅡ组 HK-2细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01),HGF组HK-2细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01), AngⅡ+HGF组HK-2细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05); 与AngⅡ 组比较,AngⅡ+HGF组细胞增殖活性升高(P<0.05),α-SMA mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论: AngⅡ抑制肾小管上皮细胞增生而促进TEMT, HGF促进肾小管上皮细胞增生而抑制TEMT,HGF可能介导AngⅡ抑制HK-2细胞增生及促进TEMT的作用。     

淫羊藿苷对NB4白血病细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的:研究淫羊藿苷(ICA)对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:选取处于对数生长期的 NB4细胞,随机分为空白对照组和不同浓度(4、8、16、32和64 μmol·L^-1)ICA组,采用MTT法检测作用不同时间(24、48和72h)后各组 NB4细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞24h时细胞周期进程及48h时凋亡情况,采用Western blotting法检测各组NB4细胞48h时凋亡相关蛋白的表达水平。结果:细胞培养不同时间(24、48和72h)后,各ICA组细胞增殖抑制率高于空白对照组(P<0.05),随ICA浓度增加和作用时间延长,细胞增殖抑制率升高(P<0.05)。各浓度ICA(4、8、16、32和64μmol·L^-1)组NB4细胞48 h后细胞凋亡率分别为(6.52±4.12)%、(10.07±2.36)%、(15.41±3.64)%、(25.18±1.24)%和(29.41±1.43)%,与空白对照组[(2.39±1.87)%]比较差异均有统计学意义(P< 0.05)。各浓度ICA(8、16、32和64μmol·L^-1)组NB4细胞24 h后 S期NB4细胞百分率降低,G₁期细胞百分率升高,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blotting 检测,与空白对照组比较,各浓度ICA组NB4细胞Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:ICA通过抑制Bcl-2蛋白表达水平和上调Bax蛋白表达水平诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株凋亡。     

消癌平联合X射线照射对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的：通过检测消癌平（XAP）联合X射线照射后肝癌HepG₂细胞增殖、周期和凋亡的变化,阐明二者联合抗肿瘤作用的相关机制。方法：选取处于对数生长期的人肝癌HepG₂细胞,分为对照组、XAP组、2 Gy照射组和XAP+2 Gy照射组。采用75 mg·L^-1终浓度XAP注射液处理细胞,12 h后给予2 Gy X射线照射。采用CCK8试剂盒检测细胞增殖活性,采用PI单染和Annexin Ⅴ-FITC双染流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,采用Western blotting法检测凋亡蛋白caspase-3的表达。结果：经药物处理后,在12、24和48 h时,与对照组比较,XAP组、2 Gy照射组和XAP+2 Gy照射组细胞增殖活性明显降低（P<0.05或P<0.01）,S期和G₂/M期细胞周期百分率明显增加（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）;且与XAP组和2 Gy照射组比较,XAP+2 Gy照射组变化更明显（P<0.05或P<0.01）;Western blotting法检测,caspase-3被切割成相对分子质量为17000和19000的片段,与对照组比较其表达水平升高。结论：XAP联合X射线照射可以抑制肝癌细胞增殖、诱导G₂/M期细胞阻滞和凋亡,二者联合应用具有协同抗肿瘤作用。     

穿心莲内酯对人肾细胞癌786-0细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的：研究穿心莲内酯（Andro）对肾细胞癌（RCC）786-0细胞的增殖、迁移和克隆形成能力的抑制作用及诱导其程序性凋亡的作用,并探讨其相关作用机制。方法：取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度（5、10、20、40和80 μmol·L^-1） Andro作为实验组,以0 μmol·L^-1 Andro组作为空白对照组,MTS法检测各组细胞增殖率。取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度（0.50、1.25和2.50 μmol·L^-1） Andro作为实验组,以0 μmol·L^-1 Andro组作为空白对照组,采用克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力。取对数生长期786-0细胞,加入不同浓度（10、20和40 μmol·L^-1） Andro作为实验组,以0 μmol·L^-1 Andro组作为空白对照组,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,10、20、40和80 μmol·L^-1 Andro组细胞增殖率明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,0.50和1.25 μmol·L^-1 Andro组细胞克隆形成率明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,10、20和40 μmol·L^-1 Andro组细胞划痕愈合率均明显降低（P<0.01）,20和40 μmol·L^-1 Andro组细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）。与空白对照组比较,40 μmol·L^-1 Andro组细胞中DNA损伤蛋白γ-H2AX表达水平明显升高（P<0.01）,Caspase-8表达水平明显降低（P<0.05）,Caspase-8剪切体表达水平明显升高（P<0.01）。结论：Andro能够有效地抑制RCC细胞的增殖、迁移和克隆形成能力,并诱导其凋亡,其诱导凋亡作用的机制与诱导DNA损伤及JNK/H2AX和Caspase-8介导的细胞程序性凋亡途径有关。     

纳米SiO2对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡诱导作用及其机制

目的:探讨纳米二氧化硅(SiO₂)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡和周期的影响,阐明其作用机制。方法:选取不同浓度粒径为90 nm的SiO₂颗粒作用于SH-SY5Y细胞,分别为0、3.125、6.250、12.500、25.000、50.000 mg·L^-1 SiO₂组,其中0 mg·L^-1组为对照组。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率;采用AO/EB染色和 Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期百分比和细胞中活性氧(ROS)水平。结果:MTT检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于对照组 (P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于3.125 mg·L^-1 SiO₂组 (P<0.05)。AO/EB染色和 Annexin V-FITC/PI法检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于3.125 mg·L^-1 SiO₂组(P<0.05)。FCM检测,3.125、6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞中ROS水平高于对照组 (P<0.05)。25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₀/G₁期细胞百分比低于3.125 mg·L^-1SiO₂组和对照组(P<0.05),50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₂/M期细胞百分比高于对照组 (P<0.05)。结论:纳米SiO₂ 可降低SH-SY5Y细胞的活力,诱导细胞凋亡,增加细胞中ROS水平,可干扰细胞周期进程,对SH-SY5Y细胞的增殖具有抑制作用。     

褪黑素联合卡铂对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖及凋亡的影响

目的: 探讨褪黑素(MLT)、卡铂(CBP)单独及联合应用在体外对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,阐明MLT和CBP的药物协同作用。 方法: 将体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、MLT组(1和2 mmol·L^-1)、CBP组(12.5、25.0和50.0mg·L^-1)、联合用药组(不同浓度MLT及CBP联合用药)。应用MTT比色法、流式细胞术(FCM)测定各组SKOV3细胞的增殖抑制率及凋亡情况,并应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定各组SKOV3细胞中Bcl-2和Bax基因表达水平。 结果: MTT法检测,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率高于MLT组,且高于 50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2 mmol·L^-1MLT联合50mg·L^-1CBP 组效果最佳,增殖抑制率为(70.7±4.2)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05)。流式细胞术检测,联合用药组SKOV3细胞凋亡率高于MLT组,且高于50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2mmol·L^-1MLT 联合50mg·L^-1CBP组SKOV3细胞凋亡率为(58.9±2.0)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。与同浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞中Bax基因表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2基因表达水平明显降低(P<0.05)。 结论: MLT可增强CBP在体外对卵巢癌SKOV-3细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用,通过增强Bax基因表达及下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。     

N-乙酰半胱氨酸对纳米二氧化硅所致细胞毒性的抑制作用

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对纳米二氧化硅(SiO₂)颗粒导致细胞中活性氧(ROS)水平升高的抑制作用,阐明纳米SiO₂颗粒致细胞毒性的机制。方法:选用粒径为68 nm的纳米SiO₂颗粒,以体外培养的人正常肝细胞(L-02)为模型,分为对照组和不同浓度(1、2、5、10 mmol·L^-1)NAC预处理组、不同浓度(10、20、50、100 mg·L^-1)纳米SiO₂颗粒暴露组和NAC预处理的纳米SiO₂颗粒暴露组。采用MTT法测定不同浓度NAC预处理后的细胞存活率以及不同浓度NAC预处理后暴露于纳米SiO₂颗粒的细胞存活率;倒置显微镜观察NAC预处理后暴露于纳米SiO₂颗粒的细胞形态;荧光酶标仪检测NAC预处理后暴露于不同浓度纳米SiO₂颗粒的细胞中ROS水平。结果:NAC预处理组细胞存活率均高于对照组,在5 mmol·L^-1 浓度时达到峰值,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);不同浓度NAC能使暴露于纳米SiO₂颗粒的细胞存活率升高,以5 mmol·L^-1 NAC的作用最明显(P<0.05);与纳米SiO₂颗粒暴露组比较,NAC预处理的纳米SiO₂颗粒暴露组细胞数目增多,细胞边界较明显;随纳米SiO₂颗粒浓度的升高,细胞中 ROS水平随之升高,呈现剂量依赖效应,在50和100 mg·L^-1浓度时与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);与相同浓度纳米SiO₂颗粒暴露组比较,NAC预处理的纳米SiO₂颗粒暴露组细胞中ROS水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NAC在一定程度上能够抑制纳米SiO₂颗粒所致的细胞存活率下降和细胞中ROS水平升高,细胞中ROS水平升高是纳米SiO₂颗粒导致人正常肝细胞毒性的作用机制之一。     

黄芪中新型FLT3受体相互作用凝集素的生物学活性分析

目的: 从黄芪中提取、纯化Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)受体相互作用凝集素(FRIL),分析鉴定其生物学活性。方法: 采用亲和层析方法纯化黄芪水浸粗提物,用BCA蛋白测定法测定FRIL含量,糖抑制红细胞凝集实验鉴定FRIL与糖结合的生化特性;培养Raji细胞,分为对照组和20及40 mg·L^-1FRIL组;培养FLT3受体高表达细胞株HL-60细胞,分别设置对照组和2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mg·L^-1 FRIL组;流式细胞术和MTT法分别检测FRIL对Raji细胞和HL-60细胞的增殖作用。结果: 从黄芪中分离得到含有4个亚基的凝集素FRIL达到27 mg;FRIL主要与α-D-甘露糖有很高的亲和性,证实FRIL能与糖专一性结合具有凝集素活性;40 mg·L^-1FRIL组Raji 细胞凋亡率明显低于20 mg·L^-1FRIL组(P<0.01);与对照组比较, 5.0~40.0 mg·L^-1FRIL组HL-60细胞体外增殖活性增加(P<0.05)。结论: 成功从黄芪中分离得到具有凝集素活性的FRIL蛋白,对表达FLT3受体的细胞具有刺激增殖作用。     

纳米二氧化硅颗粒对肝HL-7702细胞的毒性作用

目的:探讨纳米二氧化硅(SiO₂)颗粒对肝细胞HL-7702的毒性作用,阐明其作用机制。方法:体外培养的人正常HL-7702肝细胞随机分为阴性对照组和12.5、25.0、50.0、100.0 mg·L^-1 SiO₂组。采用透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)法对纳米SiO₂颗粒进行表征和粒径检测。细胞处理 24 h 后,HE染色观察各组细胞形态学;MTT实验检测各组细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)活力实验检测各组细胞培养液中LDH活力;流式细胞术(FCM)检测各组细胞中活性氧(ROS)水平。结果:TEM观察,纳米SiO₂呈球形,颗粒大小较均匀一致,分散性较好,颗粒平均粒径为(65.87±9.02)nm;DLS法检测,纳米SiO₂颗粒在高纯水和RPMI-1640培养液中的水合粒径明显增大,分别为(124.57±8.02)和(139.32±9.93)nm。HE染色,纳米SiO₂颗粒能够导致HL-7702细胞形态改变,25.0和50.0 mg·L^-1 SiO₂组细胞数目减少,排列紊乱;100.0 mg·L^-1 SiO₂组细胞质皱缩、细胞排列稀疏,部分细胞呈凋亡的形态学表现。与阴性对照组比较,各浓度纳米SiO₂组HL-7702细胞存活率均下降,50.0和100.00 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率明显下降(P<0.05);50.0和100.00 mg·L^-1 SiO₂组培养液中LDH 活力明显升高(P<0.05),细胞中ROS水平明显升高(P<0.05)。结论:纳米SiO₂颗粒能够对HL-7702细胞产生毒性作用,并呈一定的浓度依赖效应;其毒性作用机制可能与细胞中ROS的产生有关联。     

荞麦花叶芦丁对高糖刺激血管损伤的保护作用

目的: 观察荞麦花叶芦丁(RBFL)对高糖所致血管损伤的保护作用,并探讨其可能机制。 方法: 45只SD大鼠随机取出8只作为正常对照组,其余37只空腹一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60 mg·kg^-1)建立1型糖尿病动物模型。将造模成功大鼠分为模型组 (n=10)和低剂量(45 mg·kg^-1,n=8)、中剂量(90 mg·kg^-1,n=8)及高剂量(180 mg·kg^-1,n=8)RBFL干预组,灌胃给药,每天1次,连续8周;正常对照组和模型组大鼠灌胃等量生理盐水。给药8周后观察各组大鼠的一般状况,记录血糖和体质量,检测不同浓度乙酰胆碱 (Ach)(1×10^-9~1×10^-5 mol·L^-1)和硝普钠 (SNP)(1×10^-10~1×10^-5 mol·L^-1)诱导的各组大鼠胸主动脉血管舒张率,检测各组大鼠血清中氧自由基(ROS)、一氧化氮(NO)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)及总一氧化氮合酶(tNOS)活性。正常大鼠处死并迅速分离胸主动脉,分为正常葡萄糖对照组(11 mmol·L^-1 葡萄糖),高浓度葡萄糖损伤(HG)组(44 mmol·L^-1 葡萄糖),低剂量RBFL(0.2 mg·L^-1)、中剂量RBFL(0.4 mg·L^-1)和高剂量RBFL(0.8 mg·L^-1)处理组,HG+亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)组,HG+L-NAME+RBFL组,HG+亚甲蓝(MB)组,HG+MB+RBFL组(n=6)。检测不同浓度Ach 和SNP诱导的各组大鼠胸主动脉血管舒张率,检测正常葡萄糖对照组、HG和RBFL处理组大鼠胸主动脉组织中SOD和NOS活性。 结果: 与正常对照组比较,模型组大鼠体质量下降,血糖升高(P<0.01);与模型组比较,RBFL干预组大鼠体质量升高,血糖降低(P<0.05或P<0.01)。与正常对照组比较,模型组大鼠胸主动脉Ach诱导的血管舒张率降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,RBFL干预组Ach诱导的血管舒张率均升高(P<0.05或P<0.01),且该作用可被L-NAME和MB所取消;各组大鼠SNP诱导的血管舒张率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠血清ROS水平升高(P<0.01),NO水平及SOD和NOS活性降低(P<0.01);与模型组比较, 高剂量RBFL干预组大鼠血清ROS水平降低(P<0.01), NO水平及SOD和NOS活性升高(P<0.01)。各组大鼠血清GSH-Px活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常葡萄糖对照组比较,HG组大鼠Ach诱导的胸主动脉血管舒张率降低(P<0.01);与HG组比较,不同剂量RBFL(0.2、0.4和0.8 mg·L^-1)处理组大鼠Ach诱导的血管舒张率均升高(P<0.05或P<0.01),且该作用可被L-NAME和MB所取消;各组大鼠SNP诱导的血管舒张率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常葡萄糖对照组比较,HG组大鼠血管组织中SOD和tNOS活性下降(P<0.01);与HG组比较,高剂量RBFL 处理组大鼠血管组织中SOD和tNOS活性升高(P<0.01)。 结论: RBFL慢性整体给药和急性处理可以有效改善小鼠高糖刺激血管内皮依赖性舒张功能,其保护作用与增强血管SOD活性、减少ROS过量生成及促进血管内皮细胞合成NO有关。     

鹿茸多肽对冈田酸致大鼠海马神经元损伤时Tau、Bcl-2和Caspase-3表达的影响

目的：观察冈田酸诱导大鼠海马神经元（HT22细胞）损伤时神经元微管相关蛋白（Tau蛋白）和凋亡相关因子的变化,探讨鹿茸多肽对神经细胞损伤的保护作用,阐明其相关作用机制。方法：大鼠HT22细胞体外传代培养,冈田酸诱导HT22细胞损伤。HT22细胞分为正常对照组、DMSO对照组、冈田酸损伤模型组和不同浓度鹿茸多肽组（终浓度分别为50、500及1000 mg·L^-1）,37℃、5% CO₂孵育24 h。采用免疫细胞化学染色法、Western blotting法和RT-PCR法检测各组细胞中Tau蛋白磷酸化水平及凋亡相关因子Bcl-2和Caspase-3的表达。结果：免疫细胞化学染色法染色,磷酸化Tau蛋白的表达呈棕黄色颗粒,与正常对照组比较,冈田酸损伤模型组细胞中棕黄色颗粒明显增多;与冈田酸损伤模型组比较,500和1000 mg·L^-1鹿茸多肽组细胞中棕黄色颗粒明显减少。Western blotting法检测,与冈田酸损伤模型组比较,各浓度鹿茸多肽组细胞中Tau蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,1000 mg·L^-1鹿茸多肽组细胞中Bcl-2表达水平明显升高（P<0.05）,各浓度鹿茸多肽组细胞中Caspase-3表达水平均无明显变化（P>0.05）。RT-PCR法检测,与冈田酸损伤模型组比较,各浓度鹿茸多肽组细胞中Tau mRNA表达水平明显降低、Bcl-2mRNA表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,500和1000mg·L^-1鹿茸多肽组细胞中Caspase-3mRNA表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论：鹿茸多肽可能通过抑制Tau过度磷酸化及抑制细胞凋亡调控机制,对冈田酸诱导的神经细胞损伤起到保护作用。     

五味子提取物对脑胶质瘤神经球细胞增殖的抑制作用

目的：探讨五味子提取物对脑胶质瘤神经球细胞生长的作用,并初步探讨其可能的机制。方法：培养脑胶质瘤SHG-44细胞,将其置入干细胞培养液［神经培养基加入B27添加物、表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF）］中进行培养,3代以后用于实验。将脑胶质瘤SHG-44细胞分为对照组,50、100和200 mg•L^-1 五味子提取物组,MTT法检测各组神经球细胞的增殖抑制率,酶联免疫吸附实验检测五味子提取物作用后神经球培养上清中Bcl-2、Bax和caspase-3 蛋白表达水平。结果：MTT法检测,与对照组比较,50、100和200 mg•L^-1 五味子提取物组SHG-44神经球细胞24、48和72 h时增殖抑制率均升高（P<0.01）;酶联免疫吸附实验,不同浓度五味子提取物作用神经球48 h后,培养上清中Bcl-2和Bax蛋白表达水平均下降,以Bcl-2蛋白表达水平下降更为明显,与对照组比较,100和200 mg•L^-1 五味子提取物组Bcl-2蛋白表达水平明显下降（P<0.05或P<0.01）;与对照组比较,不同浓度五味子提取物组Bax/Bcl-2值均升高（P<0.05或P<0.01）,50 mg•L^-1 五味子提取物组培养上清中caspase-3蛋白水平较对照组明显升高（P<0.01）。结论：五味子提取物可能是通过上调Bax/Bcl-2值后促凋亡因素占优势,使神经球细胞凋亡而抑制胶质瘤神经球细胞的生长。