山莨菪碱、旋覆花素、苦碟子对过度训练大鼠肾细胞凋亡的影响

目的 评价山莨菪碱、旋覆花素、苦碟子对过度训练大鼠肾细胞凋亡的影响。方法 雄性Wistar大鼠72只，体重200-220g，随机分为5组：正常对照组（C组，n=8）、力竭对照组（E组，n= 16）、山莨菪碱组（A组，n=16）、旋覆花素组（IB组，n=16）、苦碟子组（IS组，n=16）。采用游泳至力竭建立过度训练动物模型。A组于力竭前即刻腹腔注射山莨菪碱10 mg／kg，IB组于力竭前24 h及力竭前即刻胃肠灌入旋覆花素25 ml／kg，IS组于力竭前即刻腹腔注射苦碟子20 ml／kg，力竭后6、24 h处死大鼠取肾脏标本，采用流式细胞术及TUNEL法检测肾细胞凋亡，并计算肾细胞凋亡率。结果 与C组比较，E组、A组、IB组和IS组力竭后6、24 h肾细胞凋亡率升高（P〈0.05或0．01）;与E组比较，A组、IB组和IS组力竭后6、24 h肾细胞凋亡率降低（P〈0．05）。结论 山莨菪碱、旋覆花素及苦碟子预先给药可减轻过度训练诱发大鼠肾细胞凋亡。     

山莨菪碱、旋覆花素、苦碟子对过度训练致急性心肌损伤大鼠的影响

目的探讨山莨菪碱、旋覆花素、苦碟子对过度训练致急性心肌损伤大鼠的影响。方法雄性Wistar大鼠80只,体重200～220 g,随机分为5组:正常对照组(C组,n=8)、力竭对照组(E组, n=24)、山莨菪碱组(A组,n=16)、旋覆花素组(IB组,n=16)、苦碟子组(IS组,n=16)。采用游泳致力竭建立过度训练动物模型。A组于力竭前即刻腹腔注射山莨菪碱10 mg/kg,IB组于力竭前24 h和力竭前即刻口腔灌入旋覆花素25 ml/kg,IS组于力竭前即刻腹腔注射苦碟子20 ml/kg。取标本检测大鼠血清磷酸肌酸激酶(CK)及其同工酶(CK-MB)的活性,光镜观察心肌组织形态学,采用流式细胞术及TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡,并计算心肌细胞凋亡率。结果与C组比较,E组、A组、IB组和IS组血清CK及CK-MB升高,心肌细胞凋亡率升高(P<0.05);与E组比较,A组、IB组及IS组大鼠血清CK及CK-MB及心肌细胞凋亡率均降低(P<0.05)。光镜下,E组的心肌细胞核深染,有固缩现象;而A组、IB组及IS组的心肌心肌组织学变化均未见异常。结论山莨菪碱、旋覆花素、苦碟子预先给药通过抑制心肌细胞的凋亡,可减轻过度训练致大鼠的心肌损伤。     

山莨菪碱与旋覆花素及苦碟子对过度训练大鼠肾组织上皮钙黏素表达的影响

目的：探讨过度训练大鼠肾组织上皮钙黏素表达的变化及山莨菪碱、旋覆花素、苦碟子干预的影响。方法：将80只雄性Wistar大鼠随机分为安静对照组（CN）、力竭运动组（ES）、山莨菪碱干预组（AD）、旋覆花素干预组（IB）、苦碟子干预组（IS）。CN组为安静对照;ES组又根据力竭后恢复时间分为力竭即刻（ESI）、力竭后6h（ES6h）和力竭后24h（ES24h）;AD组、IB组、IS组均分别于力竭后6h和力竭后24h4取材观察各项指标。每个时间点8只大鼠。采用大鼠游泳至力竭建立过度训练模型。采用免疫组织化学法检测各组肾组织E-Cadherin蛋白表达的变化;采用CMIAS病理图像分析仪测量E-Cadherin蛋白表达的平均光密度。结果：对照组大鼠肾组织有E-Cadherin的丰富表达,广泛分布于肾小管上皮细胞膜上及细胞浆内;力竭即刻、6h及24hE-Cadherin表达逐渐减弱（P〈0.05）。山莨菪碱、旋覆花素和苦碟子组大鼠肾组织E-Cadherin表达比同期力竭组明显增强（P〈0.05）。结论：过度训练可引起肾组织E-Cadherin的表达下调,山莨菪碱、旋覆花素和苦碟子干预后可逆转这种变化,这可能是过度训练引起急性肾损伤及上述3种药物减轻OTIAKI的重要机制之一。     

旋覆花素及苦碟子对过度训练大鼠肾组织细胞凋亡调控基因的影响

目的：观察旋覆花素及苦碟子对过度训练大鼠肾组织细胞Bax和Bcl-2的表达以及Bax/Bcl-2比值变化的影响,探讨上述二种药物抗肾组织细胞凋亡的分子机制。方法：采用大鼠游泳至力竭建立过度训练模型,将大鼠随机分为安静对照组、力竭运动组（力竭6h、力竭24h）、旋覆花素防治组（旋覆花素6h、旋覆花素24h）,苦碟子防治组（苦碟子6h、苦碟子24h）。采用免疫组织化学方法检测大鼠肾组织Bax、Bcl-2蛋白的表达;采用CMIAS病理图像分析仪测量Bax、Bcl-2蛋白表达的平均光密度。结果：力竭后6h及24h大鼠肾组织Bax的表达增强（P〈0.05）,Bcl-2的表达减弱（P〈0.05）,Bax/Bcl-2比值明显增高（P〈0.05）;旋覆花素和苦碟子6h及24h组大鼠与同期力竭组比较,Bax的表达减弱（P〈0.05）,Bcl-2的表达增高（P〈0.05）,Bax/Bcl-2比值降低（P〈0.05）。结论：旋覆花素和苦碟子均可通过调节Bax、Bcl-2及Bax/Bcl-2比值而起到抗过度训练大鼠肾组织细胞凋亡的作用。     

旋覆花素对过度训练致急性心肌损伤大鼠caspase-3和细胞色素c表达的影响

目的 探讨旋覆花素对过度训练致急性心肌损伤大鼠半胱氨酸天冬氨酸酶-3(caspase3)和细胞色素c表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠48只,体重200 ～ 220 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组:正常对照组(C组,n=8)、过度训练组(E组,n=24)和旋覆花素组(IB组,n=16).E组和IB组采用游泳致力竭法制备过度训练致大鼠急性心肌损伤模型.IB组于过度训练前24 h及过度训练前即刻分别经口灌入旋覆花素25 ml/kg.E组于过度训练后即刻、6、24h时,IB组于过度训练后6、24h时分别取8只大鼠,采集下腔静脉血样,采用ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度;然后处死大鼠,取心肌组织,采用免疫组化法检测心肌组织caspase-3和细胞色素c表达,光镜下观察心肌组织病理学结果.结果 与C组比较,E组和IB组过度训练后各时点血清cTnI浓度升高,心肌组织caspase-3与细胞色素c表达上调(P＜0.05);与E组比较,IB组过度训练后6、24h时血清cTnI浓度降低,心肌组织caspase-3与细胞色素c表达下调(P＜0.05).IB组心肌损伤程度轻于E组.结论 旋覆花素可减轻过度训练致大鼠急性心肌损伤,其机制与下调心肌组织caspase-3及细胞色素c表达有关.     

山莨菪碱对过度训练致急性心肌损伤大鼠caspase-1和IL-18表达的影响

目的 评价山莨菪碱对过度训练致急性心肌损伤大鼠caspase-1和IL-18表达的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠48只,体重200～ 220 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组:对照组(C组,n=8)、力竭运动组(ES组,n=24)和山莨菪碱组(AD组,n=16).采用游泳力竭法建立过度训练致大鼠急性心肌损伤模型.AD组于力竭运动前20 min腹腔注射山莨菪碱10 mg/kg.ES组于力竭后即刻、6、24 h时,AD组于力竭后6、24 h时分别随机取8只大鼠,采集下腔静脉血样,采用ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnl)浓度,随后处死大鼠取心肌组织,采用免疫组化法检测caspase-1及IL-18的表达水平,光镜下观察病理学结果.结果 与C组比较,ES组各时点血清cTnI浓度升高,心肌组织caspase-1和IL-18表达上调(P＜0.05);与ES组比较,AD组各时点血清cTnI浓度降低,心肌组织caspase-1和IL-18表达下调(P＜0.05).AD组心肌病理学损伤程度轻于ES组.结论 山莨菪碱可减轻过度训练致大鼠急性心肌损伤,其机制与下调心肌组织caspase-1及IL-18表达有关.     

山莨菪碱对过度训练大鼠肾小管上皮细胞Toll样受体4表达的影响

目的 评价山莨菪碱对过度训练大鼠肾小管上皮细胞Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法 雄性SD大鼠48只,体重200～220 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组:正常对照组(C组,n=8)、力竭运动组(E组,n=24)和山莨菪碱组(A组,n=16).采用大鼠游泳至力竭建立过度训练模型,A组于力竭运动前20 min腹腔注射山莨菪碱10 mg/kg后进行力竭运动.检测肾组织细胞凋亡和肾小管上皮细胞TLR4蛋白、TLR4 mRNA的表达水平.结果 与C组比较,E组和A组细胞凋亡率升高,肾小管上皮细胞TLR4蛋白和TLR4 mRNA表达上调(P＜0.05);与E组比较,A组细胞凋亡率降低,肾小管上皮细胞TLR4蛋白和TLR4 mRNA表达下调(P＜0.05).结论 山莨菪碱可通过下调过度训练大鼠肾小管上皮细胞TLR4表达,抑制肾脏细胞凋亡.     

脊髓损伤后凋亡调控基因Bcl-2、Bax的表达及意义

目的：观察探讨大白鼠脊髓损伤后细胞凋亡及调控基因Bcl-2、Bax的表达及意义。方法：28只SD大鼠随机分为7组，Allen’s法致伤脊髓，于术后4、8、24、48、72、168h采集脊髓标本，1组作为对照组，分别行HE染色、TUNEL染色和免疫组化技术检测Bcl-2、Bax的表达。结果：TUNEL染色显示有神经元和胶质细胞凋亡。Bcl-2在术后4h开始出现阳性表达，24h达高峰。Bax术后4h出现阳性表达，8h时达高峰。结论：脊髓损伤后存在神经元和胶质细胞的凋亡，Bcl-2、Bax基因对调控细胞凋亡可能具有重要作用。     

山莨菪碱对过度训练大鼠心肌细胞凋亡及炎性反应的影响

目的 评价山莨菪碱对过度训练大鼠心肌细胞凋亡及炎性反应的影响.方法 雄性Wistar大鼠24只,体重200～220 g,按随机数字表法分为3组(n=8):对照组(C组)、过度训练组(E组)和山莨菪碱组(A组).采用游泳至力竭法建立过度训练致大鼠心肌损伤模型.A组于过度训练前20 min腹腔注射山莨菪碱10 m∥ks.于过度训练后6 h时采集下腔静脉血后处死,取心肌组织,应用全自动生化仪检测血清CK-MB活性,免疫组化法检测心肌组织TNF-α含量及NF-κB活性,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率.结果 与C组比较,E组和A组过度训练后6 h时血清CK-MB活性、心肌细胞凋亡率、心肌组织TNF-α含量及NF-κB活性升高(P＜0.05);与E组比较,A组过度训练后6 h时血清CK-MB活性、心肌细胞凋亡率、心肌组织TNF-α含量及NF-κB活性降低(P＜0.05).结论 山莨菪碱可抑制过度训练大鼠心肌细胞凋亡,其机制与减轻心肌组织炎性反应有关.

Abstract：

Objective To evaluate the effects of anisodamine on apoptosis in cardiomyocytes and inflammatory response in overtrained rats. Methods Twenty-four male Wistar rats, weighing 200-220 g, were randomly divided into 3 groups ( n = 8 each) : control group (group C) , overtraining group (group O) , anisodamine group (group A) . The model of overtraining-induced acute heart injury was established by exhausting swimming. Anisodamine 10 mg/kg was given intraperitoneally 20 min before overtraining in group A. Blood samples were taken at 6 h after overtraining for measurement of serum CK-MB activity. The rats were then sacrificed and myocardial tissues taken for determination of TNF-α content and NF-κB activity (by immunohistochemistry) . The apoptosis rate was detected by flow cytometry. Results The CK-MB activity, apoptosis rate, TNF-α content and NF-κB activity were significantly higher at 6 h after overtraining in groups O and A than in group C, while lower at 6 h after overtraining in group A than in group O ( P < 0.05) . Conclusion Anisodamine can inhibit apoptosis in cardiomyocytes by reducing inflammatory response in overtrained rats.     

Bcl-2过度表达对大鼠成骨细胞Bax、Caspase-3表达的影响

目的：探讨凋亡相关基因Bcl-2过表达对大鼠成骨细胞Bax蛋白以及活性Caspase-3表达的影响。方法：将含有Bcl-2cDNA的逆转录病毒表达载体pDOR-SB质粒转染大鼠成骨细胞使之过表达，用免疫组化ABC法检测Bax、Caspase-3活性蛋白表达变化。结果：转染筛选后的阳性克隆细胞表现为Bcl-2表达显著增强。同时Bax蛋白表达下降接近显著性差异，活性Caspase-3表达无明显变化。结论：Bcl-2过度表达对活性Caspase-3表达无影响，但对Bax蛋白表达起下调作用，提示Bcl-2家族成员之间可以相互影响。     

人白细胞介素-10和Bcl-2基因重组腺病毒经冠状动脉转染大鼠心肌的可行性

目的研究人白细胞介素-10(IL-10)、Bcl-2基因重组腺病毒经冠状动脉转染大鼠心肌的可行性。方法以细胞内同源重组法构建复制缺陷型重组腺病毒Ad-EGFP、Ad-hIL-10、Ad-hBcl-2,在293细胞内分别扩增,应用氯化铯密度梯度离心法纯化病毒。105只雄性SD大鼠,随机分为5组: Ad-EGFP组(Ⅰ组,n=5)、PBS对照组(Ⅱ组,n=25)、Ad-hBcl-2组(Ⅲ组,n=25)、Ad．hIL-10组(Ⅳ组,n =25)、Ad-hIL-10+Ad-hBcl-2组(Ⅴ组,n=25)。采用左心室腔注射,同时阻断主动脉、肺动脉10 s的方法来实施冠状动脉转染。Ⅰ组于转染后3 d处死大鼠,取心、肝、肺、肾、脑,作快速冰冻切片,光镜下观察绿色荧光蛋白(EGFP)表达情况。其余各组于转染后1、3、7、14、28 d各随机处死5只大鼠,用ELISA法测定静脉血浆及心肌组织IL-10、Bcl-2表达水平;取心、肝、肺、肾组织,光镜下观察炎性反应;测定血常规、肝功能指标、肾功能指标及心肌酶。结果Ad-EGFP、Ad-hIL-10、Ad-hBcl-2经氯化铯纯化滴度分别为1．99×109、2．10×1010、1．70×1010 pfu／ml。Ⅰ组于转染后3 d心肌组织可见大量EGFP表达,其它器官未检测到EGFP的表达。Ⅲ组-Ⅴ组心肌组织目的基因蛋白含量于转染后3 d达高峰,并持续至转染后14 d,Ⅲ组、Ⅴ组心肌组织Bcl-2峰含量分别为(71．6±17．9)×104、(95．5±25．7)×104 pg/g,Ⅳ组、Ⅴ组心肌组织IL-10峰含量分别为(16．8±3．7)×104、(19．3±3．3)×104 Pg／g,Ⅲ组-Ⅴ组转染后1-14 d心肌组织目的基因蛋白含量均高于Ⅱ组,Ⅴ组转染后3d心肌组织目的基因蛋白含量高于Ⅲ组、Ⅳ组(P<0．05)。Ⅲ组-Ⅴ组血浆IL-10、Bcl-2浓度与Ⅱ组比较差异无统计学意义。光镜下各组心、肝、肺、肾组织未见明显炎症反应。与Ⅱ组比较,Ⅲ组-Ⅴ组血常规、肝功能指标、肾功能指标、心肌酶差异无统计学意义。结论重组腺病毒介导人IL-10、Bcl-2基因经冠状动脉转染大鼠后,心肌能够高效地表达目的基因蛋白,且局限在心肌内,没有产生炎性反应和免疫反应。     

异丙酚对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤时Bcl-2蛋白表达和细胞凋亡的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡的影响及与Bcl-2蛋白表达的关系。方法 Wistar大鼠36只,随机分为对照组(C组)和异丙酚处理组(P组)。每组再分为缺血前、缺血30 min和再灌注30 min 3个亚组。分别用DNA原位末端缺口标记技术(TUNEL法)测定凋亡细胞和用免疫组化法测定Bcl-2蛋白的表达。结果 与缺血前相比,缺血30 min及再灌注30min亚组的凋亡指数(AI)显著增加(P<0.01),Bcl-2蛋白的光密度值显著减少(P<0.01);与C组相比,P酚组缺血30 min及再灌注30 min亚组的AI显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白的光密度值显著增加(P<0.01)。结论 异丙酚通过调控Bcl-2表达而减少心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡的发生。     

凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-Xl和BaX Mrna在大鼠缺血预处理脑组织中的表达

目的 检测脑缺血预处理大鼠脑组织中凋亡调控基因Ｂｃ１－２、Ｂｃ１－ｘ１和Ｂａｘ的表达。方法 假手术对照组、预处理对照组、预处理缺血组和缺血组Ｗｉｓｔａｒ大鼠分别再灌２４ｈ，４８ｈ和７２ｈ，采用半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和原位分子杂交（ＩＳＨ）方法对脑组织Ｂｃ１－２、Ｂｃ１－ｘ１和Ｂａｘ ｍＲＮＡ的表达进行检测。结果 半定量ＲＴ－ＰＣＲ显示：与假手术对照组相比，预处理对照组大鼠再灌２４     

外源性白介素-10对急性出血坏死性胰腺炎大鼠肝脏Bcl-2、Bax表达和肝细胞凋亡的影响

目的　探讨IL 10对急性坏死性胰腺炎 (ANP)肝损害大鼠肝细胞凋亡、Bcl 2、Bax表达的影响。方法　采用 5 %牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射建立大鼠ANP肝损害模型 ,随机分成 3组 :30只大鼠作为正常对照组 ,IL 10静脉注射治疗组 30只 ,急性坏死性胰腺炎组 30只 ,观察肝细胞凋亡、Bcl 2、Bax表达变化 ,肝、胰腺组织病理改变。结果　建立ANP模型后 6h、12h、2 4h ,Bcl 2表达下降 ,Bax表达增高 ,伴有肝细胞凋亡数增高 ,IL 10治疗后 ,IL 10组Bcl 2表达增强 ,Bax表达降低 ,伴有肝细胞凋亡减少 ,肝、胰腺组织损害也相应减轻。结论　肝细胞凋亡、Bcl 2、Bax表达参与ANP发病机制 ,在急性坏死性胰腺炎早期给予IL 10对减轻肝脏、胰腺病变程度 ,改善预后可能是有益的。     

脓毒症患者外周血CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞的凋亡及Bcl-2蛋白表达

目的探讨脓毒症患者外周血淋巴细胞凋亡及其与Bcl-2蛋白表达的关系。方法采集44例脓毒症患者（脓毒症组，年龄19～86岁）和25例健康体检者（正常对照组，年龄29～80岁）的外周静脉血5ml，采用流式细胞仪分别检测CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞凋亡率和Bcl-2蛋白表达。分析细胞凋亡率与Bcl-2蛋白表达的相关性。脓毒症诊断标准参考1991年美国胸科医师协会和美国危重病医学会联席会议制定的诊断标准。结果与正常对照组比较，脓毒症组患者CD3^＋、CD4^＋T淋巴细胞凋亡率升高，Bcl-2蛋白表达下降（P〈0．05），CD8^＋T淋巴细胞凋亡率及其Bcl-2蛋白表达差异均无统计学意义（P〉0．05），CD3^＋、CD4^＋T淋巴细胞凋亡率分别与其Bcl-2蛋白表达呈负相关（r=-0．389，P〈0．05；r=-0．689，P〈0．05）。结论脓毒症患者细胞免疫功能异常可能与Bcl-2蛋白表达下调导致淋巴细胞凋亡增加有关。