不同固定方法对细胞免疫荧光染色结果的影响

目的 比较不同的固定方法对细胞内胞浆蛋白Vigilin和核蛋白CTCF的免疫荧光染色结果的影响.方法 在免疫染色前,分别采用四种方法对HepG2细胞进行固定及通透：①纯甲醇-20℃处理8min后,再用80％丙酮—20℃处理1min.②甲醇;丙酮的1∶1混合溶剂-20℃处理10min.③在方案2的基础上,再用0.1％ Triton-X-100冰上通透10min.④4％多聚甲醛室温固定10min后,用0.1％％Triton-X-100冰上通透10min.结果 采用方案①、②、③、④得到的胞浆蛋白vigilin在细胞内的大致分布无明显差异,但用方案④处理后,染色效果更为清晰而能更好地观察到细胞的细微结构;另外,采用方案①和方案②处理细胞后,对核蛋白CTCF进行免疫染色,可见CTCF分布于胞浆;方案③中,在纯甲醇固定后,若用0.1 ％Triton-X-100通透,则CTCF显示主要分布于细胞核内,胞质内亦有阳性染色;方案④的通透条件下,CTCF特异性分布于细胞核,胞质内几乎无阳性染色.结论 不同的固定及通透方法对免疫染色的结果影响很大,应针对抗原特点,采用适宜的固定方法,以得到正确的实验结果.     

不同固定液固定豚鼠视网膜效果的比较

<正>近视是常见的眼科疾病^[1],高度近视眼底病变是致盲的主要原因,随着近视屈光度的增加和眼轴的增长,眼底病发生率升高,如后巩膜葡萄肿、黄斑劈裂、黄斑出血、豹纹状眼底等^[2]。因此近视防控是社会关注的焦点,也是研究的热点。而豚鼠是建立近视模型中最常用的实验动物,其视网膜组织的病理切片在实验中有着重要作用,但因视网膜结构复杂,在制作视网膜组织病理切片时,易出现视网膜断裂折叠、细胞固缩、胞核不清等问题,影响实验研究。     

不同固定液对胃癌细胞骨架及连接蛋白荧光染色标记效果的比较

目的 通过激光共聚焦技术,观察SGC-7901胃癌细胞系在不同固定液作用下的细胞骨架及连接蛋白荧光染色.方法 接种SGC-7901细胞24 h后,分别用4％多聚甲醛、2.5％戊二醛及95％乙醇室温固定20 min,5％ BSA(含0.2％ Triton X-100)封闭透膜1h,直标荧光一抗避光37℃孵育1h,DAPI室温染核15 min,激光共聚焦扫描显微镜扫描.结果 4％多聚甲醛对细胞骨架微丝结构及连接蛋白Zo-1细胞膜定位均有较好的固定作用,2.5％戊二醛对微丝结构基本起到固定作用,而95％乙醇对于微丝的固定效果略差.后两种固定液固定细胞均出现连接蛋白胞质表达的非特异染色现象.结论 4％多聚甲醛对细胞骨架及细胞间连接蛋白的固定效果较优,荧光染色标记结果为后续研究提供依据.     

不同固定剂对鼻息肉上皮细胞免疫荧光染色的影响

目的 通过激光共聚焦技术,观察鼻息肉体外培养上皮细胞在3种不同固定剂作用下的免疫荧光染色效果,探讨不同固定剂对免疫荧光染色结果的影响,从而选择最佳固定方法。方法 用酶消化法分离培养鼻息肉上皮细胞,接种培养7 d后,分别用4%（质量分数）多聚甲醛（paraformaldehyde,PFA）、等体积甲醇丙酮混合液及甲醇室温固定,1%（体积分数）Triton X-100透膜,山羊血清封闭,滴加一抗4 ℃过夜,滴加相应荧光二抗,含DAPI封片剂封片,激光共聚焦显微镜观察。结果 等量甲醇丙酮混合液及甲醇对标记的4个标记蛋白均有较好的固定作用;4%（质量分数）PFA对跨膜蛋白16A（transmembrane protein 16A,TMEM16A）固定效果差,对紧密连接蛋白（zonular occludens-1,ZO-1）的固定效果不理想。结论 甲醇丙酮混合液及甲醇对标记的4个标记蛋白的固定作用均较好,为体外培养细胞免疫荧光染色最佳固定剂的选择提供参考。     

不同的固定及渗透方法对小鼠卵母细胞免疫荧光染色的影响

目的探索有效的染色前固定及渗透卵母细胞的方法,以提高小鼠卵母细胞免疫荧光染色的效率。方法采用4种不同的固定及渗透方法处理小鼠卵母细胞:①方案A:先用4%多聚甲醛(PFA)固定1 h,再用0.5%Triton X-100穿透10 min;②方案B:先用0.5%Triton X-100穿透10 min,再用4%PFA固定1 h;③方案C:用1%PFA 0.5%Triton X-100同时固定与穿透1 h;④方案D:用-20℃预冷甲醇固定15 min。分析10种核蛋白(TFⅡA、TFⅡB、TAF1、TAF4、polⅡ、BRF1、MeCP2、MBD2ab、HP1α及HP1β)在小鼠卵母细胞中的免疫荧光染色效果。结果只有方案C能够完全检测出这10种蛋白质。结论用1%PFA 0.5%Triton X-100同时固定与穿透1 h,可以在小鼠卵母细胞形态保持良好的同时检测出更多的蛋白质。     

不同的固定及渗透方法对小鼠卵母细胞免疫荧光染色的影响

目的 探索有效的染色前固定及渗透卵母细胞的方法,以提高小鼠卵母细胞免疫荧光染色的效率.方法 采用4种不同的固定及渗透方法处理小鼠卵母细胞:①方案A:先用4%多聚甲醛(PFA)固定1 h,再用0,5%Triton X-100穿透10 min;②方案B:先用0.5% Triton X-100穿透10 min,再用4%PFA固定1 h;③方案C:用1%PFA+0.5%Triton X-100同时固定与穿透1 h;④方案D:用-20℃预冷甲醇固定15 min.分析10种核蛋白(TFⅡA、TFⅡB、TAF1、TAF4、polⅡ、BRF1、MeCP2、MBD2ab、HP1α及HP1β)在小鼠卵母细胞中的免疫荧光染色效果.结果 只有方案C能够完全检测出这10种蛋白质.结论 用1%PFA+0.5%Triton X-100同时固定与穿透1 h,可以在小鼠卵母细胞形态保持良好的同时检测出更多的蛋白质.     

固定液种类和固定时间对免疫组化染色的石蜡切片中抗原检测…

采用３种不同的固定液及固定时间，分别对３种含有不同抗原的组织进行固定，应用石蜡切片免疫组化染色比较他们的结果。发现：固定时间以６－１２ｈ最佳。而检测不同抗原应选择不同的固定液，检测Ｂ淋巴细胞Ｌ２６抗原，应首选Ｂ－５固定液，检测Ｖｉｍｅｎｔｉｎ及ＥＨＦＶ抗原以１０％ＮＢＦ最佳。     

不同固定液对冰冻切片质量的影响

目的 探讨不同固定液对冰冻切片质量的影响以指导临床应用.方法 冰冻切片采用五种不同固定液固定,HE染色,与同组织常规石蜡切片依照石蜡切片质量标准评判对照.结果 五种固定液都可用于冰冻切片,制片技术操作未发现问题,但不同固定液的冰冻切片镜下组织细胞形态有一定差别.结论 乙醚-无水乙醇固定液最佳,含有冰醋酸成分的固定液建议谨慎使用.     

环保型无醛固定液与甲醛固定液对免疫组化染色的效果比较

目的观察环保型无醛固定液对不同组织免疫组化染色的效果,探讨其取代甲醛固定液的可行性。方法25例新鲜手术标本分别用环保无醛固定液(无醛组)和甲醛固定液(甲醛组)固定1、3、7、14、30、60、120 d,免疫组化检测两组组织的抗原表达情况。结果固定时间在1、3、7和14d时两组免疫组化表达结果差异无统计学意义(均>0.05);甲醛组固定60 d和120 d时两组免疫组化表达结果差异有统计学意义(均<0.05);无醛组固定1 d的免疫组化结果与固定120 d差异无统计学意义(>0.05),甲醛组固定60 d的免疫组化结果与固定1 d差异有统计学意义(<0.05)。结论环保型无醛固定液组织固定效果好,安全环保,可以取代甲醛固定液作为病理工作中的组织固定液。     

不同固定液对延迟处理标本的HE制片的影响

目的：观察比较10%甲醛、10%甲醛冰醋酸1：1的混合液及丙酮三种固定液对延迟固定标本的固定效果,为临床病理做出更好的延迟固定标本切片提供实验基础。方法：取术中送检标本80例,分别延迟24、48、72h后,相同延迟固定时间标本分别用三种固定液固定,然后做HE染色,观察各自的组织结构及染色情况。结果：同一延迟固定时间,甲醛固定的组织结构自溶现象最显著,染色黯淡;混合固定液自溶现象相对较轻,染色效果优于甲醛;丙酮固定的组织结构自溶现象最轻,染色效果最好。且延迟固定时间越久,变化越显著。结论：三种固定液都可用于固定延迟固定标本,但丙酮效果最好。     

固定液及抗原修复液pH值对免疫组化染色的影响

目的 :研究固定液pH值和抗原修复液pH值对免疫组化染色结果的影响。方法 :取正常皮肤、胃粘膜、子宫肌瘤、乳腺癌组织 ,分别用 pH值 3.0 ,5 .0 ,7.0 ,8.0 ,10 .0的缓冲福尔马林固定液固定。选用EMA、SMA、ER、CK(AE1/AE3 )为一抗 ,Evinsion二步法免疫组化染色。染色时分别用 pH值 6 .0 ,7.0 ,8.0的抗原修复液或用市售pH值 8.0的EDTA作微波抗原修复。结果 :不同条件可造成阳性细胞数量及染色强度变化 ,本实验得知CK (AE1/AE3 )、ER是以阳性细胞数目改变为主 ,SMA、EMA是以染色强度改变为主。结论 :(1)使用 10 %中性或微碱性缓冲福尔马林固定液 ,固定效果最佳。 (2 )本实验所用的 4种组织 ,抗原修复液选择pH值 7.0、8.0均优于 pH值6 .0 ,皮肤组织选择EDTA(pH值 8.0 ) ,雌激素受体选择 pH值 8.0时染色效果最佳。 (3)固定液pH值 >8.0容易造成背景染色 ,修复液 >8.0影响切片附着 ,造成脱片     

不同固定液对细胞骨架荧光染色标记效果的影响

目的 比较不同固定液对细胞骨架荧光染色的差异,选择最佳固定方法.方法 分别采用4%甲醛、2%戊二醛、95%乙醇和4%多聚甲醛/MES 4种固定液,对人肺腺癌细胞H1299进行固定,对其微管和微丝荧光标记后,在共聚焦显微镜下观察其形态结构.结果 4%多聚甲醛/MES对细胞的微管和微丝都有很好的固定作用.4%甲醛、2%戊二醛、95%乙醇对细胞的微丝基本能起到固定作用,而4%甲醛对微管的固定效果略差,2%戊二醛、95%乙醇固定的细胞看不到微管的具体形态结构.结论 细胞骨架的固定中需加入骨架稳定剂,且根据实验目的,选择适当的固定液获得最佳标记效果.     

不同固定液对冷冻切片HE染色影响的比较

冷冻切片的质量直接影响术中病理诊断的快速性和准确性 ,因此制备高质量的冷冻切片具有重要意义 ,然而其受多种因素影响 ,其中固定液的选择至关重要。目前文献中有关报道结果不一 [1 ,2 ] 。笔者选用组织学技术常用、容易配制的几种固定液 [3]进行比较 ,观察 HE的染色效果 ,以期获得对冷冻切片染色效果最好的固定液。1　材料与方法1.1　材料　标本 :临床手术切除的新鲜标本 ,主要有乳腺、甲状腺等器官组织。固定液如下 :A　中性福尔马林溶液B　 95 %乙醇C　 AF(4 0 %福尔马林 10 ml,95 %乙醇 90 ml)D　 Carnoy(纯乙醇 60 ml,氯仿 3 0 ml…     

不同固定液固定淋巴结对切片质量的影响

随着对淋巴瘤认识的提高,临床对每例淋巴瘤都要求进行准确诊断和分型。欲对淋巴组织做出准确的病理诊断和分型,高质量的切片是必不可少的,要想制出好的切片,固定液的选择至关重要。本文采用三种常用固定液对淋巴组织进行固定,将分别所制出的HE切片进行比较,从而找出适合淋巴组织的固定液,以提高切片质量及诊断的准确性。     

烧伤血清和痂下水肿液对内皮细胞凋亡和坏死的影响

目的 了解烧伤血清和痂下水肿液对内皮细胞凋亡和坏死的影响，探讨烧伤血甭在烧伤后内皮细胞损伤中的作用。方法 将烧伤血清痂水肿液与人脐静脉内皮细胞一同孵育12、24h后，采用Annexin-V-Fluos(A-V)和碘化丙啶（Propidium iodide,PI)标记内皮细胞，流式细胞仪检测其凋亡和坏死百分率。结果 烧伤血清和痂下水肿液与人脐静脉内皮细胞一同孵育12h后，即出现凋亡和坏死增多，24h后凋亡和坏死进一步增加。结论 烧伤血清和痂下水肿液均可导致内皮细胞凋亡和坏死，在烧伤后内皮细胞损伤中可能起重要作用。     

4种固定液对快速冷冻切片的制片效果的影响

目的通过研究固定液对冷冻切片质量的影响,筛选出理想的固定液,为寻找新型固定液提供新思路,从而提高快速冷冻切片成片质量。方法收集新鲜鸭肝组织30例,冷冻切片取材后用不同的固定液进行固定,然后进行HE染色,显微镜观察。结果经乙醚酒精固定的鸭肝组织和细胞结构清晰,核浆颜色对比度适宜,染色鲜艳。结论乙醚酒精最适宜用于快速冷冻切片的固定,进行HE染色。     

EP3受体各亚型对肝癌Huh-7细胞生长和侵袭的作用

目的:探讨在肝细胞肝癌Huh-7细胞中前列腺素E2 EP3各受体亚型对肿瘤细胞生长与侵袭的作用?方法:对常规培养的人肝细胞肝癌Huh-7细胞,瞬时转染EP3受体的4个亚型EP3-4R?EP3-5R?EP3-6R?EP3-7R,应用RT-PCR实验检测转染细胞EP3受体各亚型的mRNA表达水平;应用Western blot实验检测相关蛋白水平?对转染后的Huh-7细胞,分别给予不同浓度的EP3受体激动剂sulprostone作用24 h,用WST-8细胞增殖测定试剂检测细胞的增殖情况;应用划痕实验检测细胞的侵袭性;应用Western blot实验检测细胞内ERK蛋白磷酸化水平的变化?结果:RT-PCR及Western blot实验结果显示Huh-7细胞EP3受体表达水平明显增高?WST-8实验显示,经10 μmol/L sulprostone处理24 h后,过表达EP3-4R?EP3-5R和EP3-7R亚型的细胞增殖率分别达到126.7%?124.0%?123.8%?划痕实验结果显示,过表达细胞的侵袭性分别增加到135.8%?123.5%?128.7%?Western blot显示,EP3-4R?EP3-5R和EP3-7R转染细胞内ERK磷酸化水平分别上调了54.8%?33.4%?44.3%?而过表达EP3-6受体亚型细胞的增殖率?侵袭率和胞内ERK磷酸化水平改变不明显?结论:Huh-7肝癌细胞中,EP3-4R?EP3-5R及EP3-7R这3种受体亚型对细胞的生长及侵袭有显著促进作用,而EP3-6R亚型则无明显的促进作用?EP3受体促进肝癌细胞生长和侵袭的作用与ERK激活的现象一致?     

不同固定液对组织穿透力的比较

将组织浸入某些化学试剂 ,使细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置 ,这一过程称为“固定”。固定的时间与使用固定液的种类、组织块的大小、温度等有关。不同的固定液有不同的固定时间。良好组织学切片的要求非常严格 ,其基础取决于适当而完全的固定。那么 ,在一定的温度下 ,缩短固定时间 ,而又不影响固定效果 ,选择这样的固定液是比较理想的。我们就几种单纯固定液对组织的穿透深度进行了比较 ,观察所用固定液中哪一种固定时间比较短 ,用以指导我们配置较为合理的固定液。1　材料和方法1.1　材料　取质量、体积接近的大白鼠的…     

不同温度和固定液对冰冻切片质量的影响

临床病理检查中冰冻切片质量受多种因素的影响,其中固定液的选择和冰冻温度至关重要.本文作者以不同温度冰冻切片,并选用比较常用和容易配置的10%甲醛、甲醇和Bouin 3种固定液,比较不同温度及不同固定液处理的冰冻切片的质量.     

HTK液对大鼠主动脉内皮细胞的保护作用

本实验以大鼠放动脉内皮细胞为研究对象，观察ＨＴＫ液对其的保护作用实验分成５组，分别置于４℃，室温及３７℃下，保存２小时后作光镜和电镜检查，发现ＨＴＫ液对大鼠主动脉内皮细胞有明显的保护作用。