胰岛素对SHR大鼠血管平滑肌细胞体外增殖相关基因表达的影响

目的探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC) 增殖相关基因表达的影响.方法用贴块法分离培养VSMC,应用含448个与细胞增殖相关基因靶基因芯片分析大鼠血管平滑肌细胞在胰岛素干预后基因表达的差异,RT-PCR 检测胰岛素作用后VSMC中bFGF、TGFβ、PDGF、Matrix Gla和OPN各目的基因mRNA相对表达水平,采用免疫组织化学检测胰岛素作用后VSMC肌动蛋白(α-SM actin).结果胰岛素组VSMC的+3H-TdR掺入值(cpm)比对照组高54.6%(%P%<0.01);基因芯片分析发现与细胞增殖相关等36个基因的mRNA胰岛素干预前后培养的细胞表达差异(8.04%);RT-PCR检测Matrix Gla和OPN在培养的VSMC中mRNA的表达量,胰岛素组明显高于对照组(%P%<0.05),同时bFGF、TGFβ、PDGF的表达也是胰岛素组明显高于对照组(%P%<0.05);α-SM actin免疫组化结果显示对照组的α-SM actin比胰岛素组染色深.结论提示胰岛素介导大鼠血管平滑肌细胞增殖是多基因效应,胰岛素促进了VSMC的增殖与VSMC表型转换有关.     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c-fos和c-myc表达的影响

用＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷掺入实验及细胞计数法等观察了胰岛素对体外培养的人血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成，细胞增殖及原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响。结果发现，在培养基中加入不同浓度的胰岛素后，血管平滑肌细胞增殖，细胞ＤＮＡ合成增加，原癌基因ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ表达增加，上述三者均具有胰岛素剂量依赖性，呈现量－效关系，实验结果表明，高胰岛素血症可能促进平滑肌细胞增殖和原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ     

瘦素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨leptin对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖影响，并研究leptin b型受体在VSMC中的表达。方法 本文主要采用培养的自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMC），研究Leptin受体b(OB-Rb)的mRNA的表达，以及对平滑肌细胞增殖的影响。结果 OB－Rb的mRNA仅在SHR大鼠的平滑肌细胞表达，而没有在正常对照大鼠（WKY）的平滑肌细胞中表达。Leptin仅仅可以刺激SHR大鼠VSMC的DNA合成率的增加而对WKY大鼠的VSMC则无作用。同样，Leptin对VSMC细胞增殖的作用，也仅仅在SHR大鼠可以发现，而WKY大鼠则没有。结论 上述研究的结果显示；高血压时，Leptin是一种对血管平滑肌细胞的增殖因子，也许在高血压的发生，发展过程中起重要的作用。     

粉防己碱对血管平滑肌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的：研究粉防己碱（Tetrandrine,Tet)对内皮素 导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及相关基因表达的影响。方法：采用细胞计数及^3H－TDR掺入实验检测VSMC增殖状态；应用Northern杂交检测Tet对VSMC诱导型一氧化氮合酶（iNOS)基因和ET诱导的c-jun基因表达的影响。结果：Tet可明显抑制VSMC的增殖（P＜0．05），抑制ET对VSMC的促丝裂作用（P＜0．05）；抑制原癌基因c-jun的表达，促进iNOS转录，结论：Tet可能通过调节iNOS和细胞增殖相关基因的表达而报抑制VSMC的增殖。     

平肝潜阳法对SHR血管平滑肌细胞增殖及HSP27表达的影响

目的 探讨平肝潜阳法对体外培养的自发性高血压大鼠(SHRs)血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响,及与热休克蛋白27(HSP27)表达的关系.方法 采用改良的贴块法行SHR主动脉VSMC的分离培养,α-actin 单克隆抗体免疫组织化学染色鉴定培养细胞;以MTT法反映VSMC增殖情况;用RT-PCR和Western印迹方法检测HSP27基因和蛋白的表达水平.结果 对照组和治疗组均能抑制VSMC增殖,两组有显著差异(P＜0.01);RT-PCR和Western印迹分析显示,与正常组比较,模型组HSP27表达明显增强(P＜0.01);与模型组比较,对照组和治疗组HSP27表达明显减弱(P＜0.01).结论 平肝潜阳法通过抑制VSMC增殖可能与抑制HSP27表达有关,是改善高血压血管重构的重要作用分子机制之一.     

瘦素对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨leptin对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞的增殖影响,并研究leptin b型受体在VSMC中的表达.方法本文主要采用培养的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMC),研究Leptin受体b(OB-Rb)的mRNA的表达,以及对平滑肌细胞增殖的影响.结果 OB-Rb的mRNA仅在SHR大鼠的平滑肌细胞表达,而没有在正常对照大鼠(WKY)的平滑肌细胞中表达.Leptin仅仅可以刺激SHR大鼠VSMC的DNA合成率的增加,而对WKY大鼠的VSMC则无作用.同样,Leptin对VSMC细胞增殖的作用,也仅仅在SHR大鼠可以发现,而WKY大鼠则没有.结论上述研究的结果显示;高血压时,Leptin是一种对血管平滑肌细胞的增殖因子,也许在高血压的发生、发展过程中起重要的作用.     

胰岛素对猪主动脉平滑肌细胞的增殖和前列环素合成的影响

以体外培养的猪主动脉平滑肌细胞为实验模型，研究了不同浓度胰岛素对其细胞增殖、前列环素合成的影响。结果显示胰岛素抑制平滑肌细胞的前列环素合成、促进细胞增殖都呈现剂量依赖性，提示高胰岛素血症可能是致动脉粥样样硬化的重要因素之一。     

内皮素促进细胞增殖相关基因的表达和血管平滑肌细胞增殖

通过３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验和ＲＮＡ印迹分析，观察了内皮素－１对大鼠血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成及细胞增殖相关基因表达的影响。结果表明，内皮素－１作用于血管平滑肌细胞１２ｈ，３Ｈ－ＴｄＲ掺入开始增加，２４ｈ达到峰值。在内皮素－１作用下，原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ进行快速瞬间表达，其表达活性在３０ｍｉｎ达到峰值，３ｈ后恢复到原来水平；Ｐ３４＾激酶基因在内皮素－１刺激１２ｈ后表达活性开始增加，至２４ｈ仍维     

酸枣仁皂甙A对血管平滑肌细胞增殖及sis基因表达的影响

目的 :进一步明确酸枣仁皂甙A抗动脉粥样硬化机制。方法 :运用体外培养兔血管平滑肌细胞的方法 ,研究酸枣仁皂甙A对细胞增殖及sis基因表达的影响。结果 :发现酸枣仁皂甙A(180mg·L- 1 ～ 5 80mg·L- 1 )具有抑制巨噬细胞条件培养液 ,促进血管平滑肌细胞增殖、RNA合成及sis基因表达的作用。结论 :酸枣仁皂甙A抗动脉粥样硬化作用可能与其抑制血管平滑肌细胞过度增殖有关     

吡格列酮对胰岛素诱导血管平滑肌细胞增殖核抗原表达的影响

目的观察吡格列酮（Pio）对胰岛素（Ins）刺激的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的干预作用,及对增殖核抗原（PCNA）基因和蛋白表达水平的影响。方法（1）以四甲基偶氮唑盐比色法观察不同浓度、不同时间的Ins对VSMc增殖的影响,以及Pio和Ins共孵育对VSMC增殖的作用。（2）用半定量逆转录聚合酶链反应测定PCNAmRNA的表达。（3）用Westernblot法检测PCNA蛋白的表达。结果Ins促进VSMC增殖,促增殖效应在72h末达峰值,差异有统计学意义（P〈0．01）;而Pio能抑制Ins诱导的VSMC增殖及PCNAmRNA和蛋白表达水平,最佳浓度100μmol／L（P〈0．01）。结论 吡格列酮抑制胰岛素的促VSMC增殖作用,通过降低PCNA的表达影响VSMC表型转换,有望用于治疗动脉粥样硬化。     

血管内皮细胞对平滑肌细胞表型转化的影响

目的分析共培养时大鼠血管内皮细胞(VECs)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的影响。方法 VSMCs直接种植于培养板表面,VECs则种植于与VSMCs相对的浮胶底面。免疫荧光方法观察和鉴定VECs和VSMCs,RT-PCR和共聚焦显微镜分析表型相关基因的表达。结果原代培养的大鼠VECs呈铺路石样形态,vWF染色阳性。原代培养的大鼠VSMCs免疫荧光染色α-SMA呈阳性。RT-PCR检测结果表明,48h共培养组VSMCs的合成表型相关基因CRBP-1、Smemb的表达水平显著高于单独培养组,分别为1.4倍、1.5倍;72h达到峰值,分别为1.7倍、2.1倍,96h开始下降;共培养组中收缩表型标记物Smoothelin-B和SM-MHC的基因表达水平在48h、72h显著低于单独培养组,96hSmoothelin-B却高于单独培养组。单独培养组上述各基因的变化趋势不变或保持稳定。免疫荧光结果显示SM-MHC蛋白表达在共培养组中96h后从下降转为升高(P<0.05)。结论在共培养体系中,血管内皮细胞对血管平滑肌细胞表型转化的作用表现为先促进向合成型转化,96h后促进向收缩型转化。     

血管平滑肌细胞凋亡机制的研究进展

血管平滑肌细胞凋亡与很多心血管疾病的发生、发展密切相关,目前已经成为心血管疾病防治研究的热点。现对血管平滑肌细胞凋亡机制的研究现状进行了较为深入的探讨,从其诱导因素以及基因调控机制等角度综述了近年来国内外在这方面的研究进展。     

多巴胺D3受体对胰岛素受体介导的促血管平滑肌细胞增殖作用的影响

目的研究多巴胺D3受体对胰岛素受体介导的促血管平滑肌细胞增殖作用的影响。方法以胚胎大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞株(A10)为研究对象,观察在D3受体激动剂作用下,胰岛素受体促血管平滑肌细胞增殖作用的变化。利用[3H]-TdR细胞掺入实验观察细胞增殖状况,并利用免疫印迹法观察D3受体对胰岛素受体蛋白表达的影响,初步探讨D3受体影响胰岛素受体介导的促血管平滑肌细胞增殖作用的机制。结果D3受体激动剂(PD128907)本身对血管平滑肌细胞增殖没有影响,但可抑制胰岛素受体介导的促血管平滑肌细胞增殖作用。刺激D3受体可降低胰岛素受体的表达,提示D3受体可能通过影响胰岛素受体的表达,从而影响胰岛素受体促血管平滑肌细胞增殖的过程。结论D3受体对胰岛素受体介导的促血管平滑肌细胞增殖具有一定的抑制作用。     

促炎因子介导的体外培养人主动脉血管平滑肌细胞凋亡

目的 :探讨促炎因子对体外培养的人主动脉平滑肌细胞有无致凋亡作用。　　方法 :体外原代培养人主动脉平滑肌细胞 ,用免疫组化方法鉴定 ;肿瘤坏死因子 α (TNF α)和白细胞介素 1β (IL 1β)分别以浓度 2 0 μg/ml单独或二者共同与平滑肌细胞培养 3 6h ,实验分 4组 :TNF α组 (T组 )、IL 1β组 (I组 )、TNF α+IL 1β组 (TI组 )及对照组 ,采用流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期。　　结果 :①细胞凋亡分析显示 :TI组两种因子的联合作用诱导人平滑肌细胞凋亡与对照组比明显增加 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,而二者单独作用未能诱导人平滑肌细胞凋亡。②细胞周期分析发现TI组在TNF α +IL 1β刺激下 ,细胞增殖能力与其他组比有明显下降 ,有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,生长逐渐停滞 ,而二者单独作用对细胞增殖有轻微刺激作用 ,但与对照组无显著性差异。　　结论 :促炎因子TNF α和IL 1β的相互作用 ,可以诱导人平滑肌细胞凋亡。     

血小板衍生生长因子—BB对血管内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞增殖的影响

目的 观察血小板衍生生长因子—BB对培养的人血管内皮细胞、兔平滑肌细胞和人成纤维细胞增殖的影响。方法 采用培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞，应用^3H—TdR掺入方法，观察血小板衍生生长因子—BB对三种细胞DNA合成的影响。结果 血小板衍生生长因子—BB可促进处于静止状态的三种细胞DNA的合成，并呈现出明显的浓度依赖关系，在30ng／ml的浓度时成纤维细胞DNA的合成达到高峰，在40ng／ml的浓度时内皮细胞、平滑肌细胞DNA的合成达到高峰。成纤维细胞、平滑肌细胞分别在PDCF-BB作用24h和36h年到DNA合成的高峰，内皮细胞在48h时DNA合成量最高。结论 血小板衍生生长因子—BB可明显促进培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞的增殖。     

Hypertension Is Not Related to Suppressed Lymphocyte Proliferation but to Elevated NO Synthesis in Vascular Smooth Muscle Cells of Borderline Hypertensive Rat

Hypertensive individuals often exhibit immune abnormalities. We have previously reported that spontaneously hypertensive rats (SHR) had a severely depressed lymphocyte proliferation response caused by excessive nitric oxide (NO) from macrophages and vascular smooth muscle cells (VSMC). However, the development of hypertension was not correlated with the lymphocyte depression and elevated NO synthesis in macrophages. In this study, we investigated the effect of hypertension on lymphocytes and the NO synthesis system in borderline hypertensive rats (BHR). BHR became significantly hypertensive after receiving a high sodium diet. The proliferation response of lymphocytes in hypertensive BHR was similar to that of normotensive BHR fed a normal diet or of Wistar Kyoto rats (WKY). NO production in macrophages of hypertensive BHR was not different from that of normotensive BHR or WKY. However, NO production in VSMC was significantly elevated in hypertensive BHR. A positive correlation between blood pressure and VSMC NO production exists in hypertensive BHR. These results suggested that high blood pressure neither affected the lymphocyte function nor influenced the activation of NO synthesis in macrophages. Hypertension, however, may influence the activation of VSMC NO synthesis. In conclusion, hypertension is not causally associated with immune dysfunction as seen in SHR but is related to enhanced NO synthesis in VSMC.     

葛根素抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的　观察葛根素对T诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法　建立凝血酶(T)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖模型,以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定的方法观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。结果　T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在2 4小时末达峰,且T浓度在0 . 1U/L～1 . 0U/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖与DNA合成。结论　葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖。     

血管平滑肌细胞凋亡与动脉粥样硬化研究进展

血管平滑肌细胞是构成血管壁的重要组成成分,其凋亡参与了动脉粥样硬化及再狭窄的发生发展,现就最近研究对血管平滑肌细胞凋亡诱导因素、相关基因、及其在动脉粥样硬化发生发展作用作一综述。