芒果甙诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡

本研究目的是探讨芒果甙对慢性髓系白血病细胞系K562细胞的作用及其作用机制。用噻唑蓝(MTT)法观察芒果甙时K562细胞生长的影响；应用细胞形态、DNA凝胶电泳和流式细胞术等观察芒果甙时K562细胞凋亡的诱导作用；用RT-PCR方法观察芒果甙作用K562细胞后ber／abl融合基因在转录水平的改变。结果发现。25—200μmol／L浓度的芒果甙均能显著抑制K562细胞的增殖，呈剂量和时间依赖性。并能诱导K562细胞凋亡。随着药物作用浓度的增加，ber/abl融合基因的转录下调。结论：芒果甙可抑制K562细胞的增殖。并可能通过抑制bcr／abl融合基因的表达诱导K562细胞凋亡。     

siRNA特异性抑制K562细胞Livin基因表达及其诱导凋亡作用

本研究探讨小分子RNA干扰技术抑制livin基因表达对白血病细胞系K562细胞凋亡的影响。设计合成livin特异性小干扰RNA(siRNA),核转染K562细胞,培养转染后的K562细胞,用RT-PCR检测livin mRNA的表达,Western blot检测Livin蛋白的表达。以未转染细胞作对照,同时转染带有增强型绿色荧光蛋白的载体作为阳性对照,用流式细胞术检测其细胞绿色荧光以确定转染效率。用膜联蛋白Ⅴ及碘化丙锭双染法检测细胞凋亡率。结果表明,电穿孔的转染效率可达50%。siRNA既可以抑制livin mRNA表达,也可以抑制livin蛋白表达。特异性siRNA转染细胞后48 h细胞凋亡率为(27.41±2.30)%,与对照组(9.63±0.89%)比较明显提高(P<0.05)。结论:SiRNA可以抑制livin基因的表达,并能抑制livin基因的抗凋亡作用。     

反义bcr／abl寡核苷酸诱导K562细胞凋亡的研究

反义ｂｃｒ／ａｂｌ寡核苷酸诱导Ｋ５６２细胞凋亡的研究戴木水罗绍凯戴丽君洪文德彭爱华慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）细胞表达ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因，其引起ＣＭＬ发病的机制可能是抑制髓系细胞的凋亡，因而如何抑制ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ的表达，诱导髓系细胞的凋亡是...     

ST1571诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡信号通路的研究

本研究应用基因芯片探讨酪氨酸激酶抑制剂（STI571）对K562细胞生长、增殖的影响，研究STI571诱导细胞凋亡过程中基因表达的变化及STI571诱导K562细胞凋亡的机制。用RD—PCR技术制备基因芯片探针，然后制成飚62细胞表达谱芯片；用相差显微镜观察K562细胞在STI571处理前后的形态变化；用MIT法检测K562细胞的凋亡，用制备的K562细胞表达谱芯片分析基因表达水平。结果表明，在体外培养条件下用1．0μmol／L的STI571处理K562细胞达到一定时间（24小时）后，K562细胞生长明显变缓，出现凋亡细胞的特征。用自制的l（562细胞基因表达谱芯片检测显示，STI571诱导K562细胞凋亡前后的基因表达有差异。杂交检测后发现，经STI571诱导后基因表达下调的基因有9个，表达上调的基因有4个。这些表达变化的基因主要包括细胞周期相关基因、细胞代谢通路相关基因、信号转导和转录调节相关基因及抗凋亡基因。结论：STI571能有效抑制K562细胞生长，诱导K562细胞凋亡；筛选获得的靶基因在K562细胞恶性转化过程中发挥了重要作用，这为药物靶基因的筛选提供了理论基础。     

细胞因子诱导的杀伤细胞可诱导bcr-abl阳性的K562细胞凋亡

表达bcr-abl的K562细胞能抵抗不同化疗药和诱导的细胞凋亡，为了观察细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞能否诱导表达bcr-abl的K562细胞凋亡，应用流式细胞术DNA亚G1期分析法比较CIK和化疗药物（喜树碱和VP－16）诱导K562及CEM细胞发生凋亡的情况，结果表明，RT－PCR检测显示K562细胞表达bcr-abl融合基因mRNA，单独K562细胞对照组，K562／喜树碱组及K562／VP－16组均未见亚G1期峰，K562／CIK组亚G1期峰值为38．1％，单儿CEM细胞对照组未见亚G1期峰，CEM／喜树碱组亚G1期峰值为23．5％，CEM／VP－16组亚G1期峰值为32．3％，CEM／CIK组亚G1期峰值为45．4％。结论：喜树碱和VP－16不能诱导表达bcr-abl的K562细胞凋亡，而CIK细胞能诱导K562细胞凋亡，提示过继细胞免疫治疗可能在CML病人异基因髓移植及移植后淋巴细胞输注中起重要作用。     

孤啡肽诱导白血病细胞K562凋亡

本研究探讨孤啡肽对白血病细胞K562增殖的影响及诱导凋亡的作用，采用MTT（四唑氮蓝）法检测不同浓度的孤啡肽对K562细胞生长的影响，应用瑞氏染色、电子显微镜观察药物作用后K562细胞形态的改变，流式细胞术检测孤啡肽对K562细胞细胞凋亡作用，DNA琼脂糖凝胶电泳观察孤啡肽作用后K562细胞内DNA的损伤程度。结果表明：10^-6～-10^-13mol／L孤啡肽明显抑制K562细胞的生长，且存在时间依赖性，而剂量依赖性不明显；10^-6-10^-7、10^-9、10^-12mol／L孤啡肽作用72小时后显示明显的细胞毒作用。与对照组相比，10^-9mol／L孤啡肽作用72小时后K562细胞出现典型凋亡特征；流式细胞术检测发现：0、10^-7、10^-8、10^-9mol／L孤啡肽作用72小时后出现凋亡峰，凋亡率分别为0％、22．8％、23．8％、26．5％；DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯状条带。结论：孤啡肽能够抑制K562细胞增殖，诱导其凋亡。     

靶向血管内皮生长因子siRNA对K562细胞凋亡及survivin表达的影响

目的 应用腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF) siRNA沉默K562细胞中VEGF的表达,观察其对K562细胞凋亡及凋亡抑制基因survivin表达的影响.方法 应用成功构建的携带特异性VEGF siRNA的重组腺病毒(Ad5-VEGF siRNA)感染K562细胞,实验分为3组:实验组(K562/Ad5-VEGF siRNA组)、空载体组(K562/Ad5组)、对照组(K562组).通过RT-PCR法检测细胞内VEGF及survivin mRNA的表达,ELISA法检测细胞培养上清中VEGF蛋白表达,Western blot法检测细胞survivin蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 实验组细胞VEGF及survivin mRNA表达水平较对照组均有明显降低(P＜0.01),且细胞培养上清中VEGF蛋白表达水平[(1121±15)pg/ml]低于空载体组[(1290±28)pg/ml]和对照组[(1303±28)pg/ml](P＜0.01).Western blot法检测结果显示,实验组survivin蛋白表达水平(0.26 ± 0.11)较对照组(0.74±0.10)也显著降低(P＜0.01).实验组细胞凋亡率与对照组比较明显增加(P＜0.01).结论 应用RNA干扰沉默K562细胞中VEGF基因表达后,survivin的表达也随之降低,同时细胞凋亡率相应增加.VEGF可诱导K562细胞中survivin基因表达,可能是survivin基因表达的上游调控因子.     

Survivin siRNA诱导人腺样囊性癌SACC-83细胞凋亡的实验研究

目的 应用RNA干扰技术靶向阻断Survivin基因表达,探讨其对人腺样囊性癌SACC-83细胞的诱导凋亡作用.方法 实验设空白对照组,RNA干扰阴性对照组和RNA干扰组.将RNA干扰载体通过Lipofection介导转染腺样囊性癌细胞.采用倒置显微镜观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测细胞凋亡峰;透射电镜观察细胞凋亡超微结构.结果 转染细胞48 h后RNA干扰组细胞形态学发生改变,呈典型的细胞凋亡形态.流式细胞仪检测在细胞周期G1/G0期前出现亚二倍体凋亡峰,电镜超微结构可见凋亡小体.空白对照组,RNA干扰阴性对照组无此变化.结论 Survivin siRNA干扰能诱导体外培养的人腺样囊性癌SACC-83细胞发生凋亡,以Survivin 为靶点有望成为肿瘤基因治疗的可行性.     

高三尖杉酯碱诱导K562细胞凋亡的实验研究

高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）是从三尖杉属植物中分离出来的一种生物碱，临床上广泛地用于急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病等的治疗。我们以Ｋ５６２细胞为材料，观察ＨＨＴ对白血病细胞的杀伤模式及其引发的细胞死亡形式，以进一步研究ＨＨＴ对白血病细胞损伤的机制。材...     

毒胡萝卜素诱导K562细胞凋亡及其机制的实验研究

本研究旨在探讨毒胡萝卜素对K562细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化，annexin V—FITC／PI双染法FCM检测凋亡率的变化，Ca^2＋荧光指示剂Fura-2／AM法荧光分光光度计测定细胞内Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）的改变，Rh123单染法FCM检测线粒体△ψm的变化，Western blot检测caspase-3，-7，-9，-12、细胞色素C和GRP78蛋白的改变。结果显示：4μmol／L毒胡萝卜素作用K562细胞48小时后，荧光显微镜观察到细胞呈典型的凋亡形态变化，早期凋亡细胞核染色质呈固缩状、圆珠状或斑块状；晚期凋亡细胞核染色质呈固缩状或斑块状。1、2、4、8μmol／L毒胡萝卜素作用K562细胞24和48小时后细胞凋亡率分别为7．51％、11．65％、23，22％、30．56％和12．85％、20.27％、31．5l％、44．16％，在一定范围内呈剂量和时间依赖性，与对照组比较，均有统计学意义（P〈0．05）。毒胡萝卜素诱导K562细胞[Ca^2＋]i升高以及线粒体△ψm下降，并均呈一定的浓度依赖性，与对照组比较，均有统计学意义（P〈0．05）。Western blot检测显示，毒胡萝卜素诱导K562细胞caspase-3，-7，-9，-12剪切活化、细胞色素C释放、GRP78表达上调。结论：毒胡萝卜素可诱导K562细胞发生内质网应激反应性凋亡，内质网是细胞内诱导凋亡的一个重要新场所；caspase-3，-7，-9，-12剪切和活化、线粒体△ψm破坏和细胞色素C释放是毒胡萝卜素诱导K562细胞凋亡的重要机制之一，线粒体参与内质网应激反应性凋亡途径并发挥重要作用。     

靶向siRNA沉默mdr1基因表达及对白血病耐药细胞系K562/ADM的耐药逆转作用

目的 研究小干扰RNA（siRNA）对白血病多药耐药细胞系K562／ADM细胞mdr1基因表达的沉默作用和凋亡抑制的逆转效应。方法 K562／ADM为靶细胞，设计、筛选和合成2对针对mdr1基因mRNA的siRNA（mdr1 siRNA-1和mdr1siRNA-2），用脂质体介导转染K562／ADM细胞；实时荧光定量PCR（real—time PCR）法检测mdr1 mRNA的表达；流式细胞术测定P-糖蛋白（P—gP）水平和caspase-3活性；细胞形态学和FITC标记的膜联蛋白V／碘化丙锭（Annexin V—FITC／PI）双染色法检测细胞的凋亡。结果 筛选出的mdr1 siRNA-1和mdr1 siRNA-2显著抑制K562／ADM细胞mdr1的表达，mdr1 mRNA的表达分别降低91．2％和82．0％，P-gp水平下降74．1％和84．4％；增强caspase-3活性，活化caspase-3增加约40％；K562／ADM耐药细胞对阿霉素诱导凋亡的敏感性增强，Annexin V—FITC／PI染色检测细胞凋亡率提高约60％。结论 siRNA通过沉默mdr1 ／P—gp表达而逆转K562／ADM多药耐药细胞的凋亡抑制现象。     

胆固醇合成抑制剂辛伐他汀对K562细胞增殖和凋亡的作用

目的 探讨慢性髓细胞白血病（CML）细胞抗凋亡机制和诱导CML细胞凋亡的有效方法。方法 采用CML细胞株K562体外培养、用^3H-TdR掺入法及DNA末端标记法观察胆固醇合成限速酶3－羟－3－甲基戊二酰辅酶A（HMG－CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀对K562细胞增殖及凋亡的作用,以及该制剂联合化疗药物对K562细胞凋亡的影响。结果 辛伐他汀明显抑制562细胞增殖并诱导其凋亡,并能增强K562细胞对化疗药物的敏感性。加入HMG－CoA下游产物甲羟戊酸可完全逆转这种作用。结论 辛伐他汀通过抑制甲羟戊酸代谢途径抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,表明HMG－CoA还原酶抑制剂作为治疗CML的药物具有潜在的应用价值。     

蟾蜍灵诱导K562细胞分化和凋亡过程中WT1表达的下调

目的：研究蟾蜍灵在诱导K562细胞分化和凋亡中对WT1基因的凋节作用。方法：采用锥虫蓝拒染法测定细胞增殖活力；采用形态学观察、流式细胞术分析和NBT还原试验检测细胞分化和细胞凋亡；采用Western blot和RT－PCR检测WT1蛋白和mRNA的表达。结果：（1）蟾蜍灵抑制K562细胞的增殖，24，48和72h的IC50分别为0．026，0．032和0．006μmol/L。（2）蟾蜍灵浓度在0．01－0．05μmol/L可明显诱导K562细胞向单核／巨噬细胞分化，大于0．260μmol/L 时可明显诱导细胞凋亡。（3）细胞分化早期和细胞凋亡发生前，蟾蜍灵明显下调K562细胞WT1 mRNA和蛋白的表达。结论：蟾蜍灵诱导K562细胞向单核／巨噬细胞分化和细胞凋亡可能与其对WT1的下调有关。     

吲哚美辛诱导慢性髓细胞白血病细胞凋亡的研究

目的　观察和确定吲哚美辛 (IN)对慢性髓细胞白血病 (CML)细胞凋亡的诱导作用 ,并部分揭示其分子机制 ,以期筛选一种新的抗白血病药物。方法　以CML细胞株K5 6 2及来自 6例初治Ph CML患者骨髓原代培养细胞为研究材料 ,在不同时间点 ,用不同浓度的IN进行干预 ,利用细胞形态学、流式细胞仪、DNA电泳、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)等技术 ,确定IN对CML细胞凋亡和增殖的影响。结果　①IN能诱导K5 6 2细胞和原代培养的CML细胞凋亡 ,并有抑制白血病细胞增殖的作用 ;②IN对足叶乙甙诱导K5 6 2细胞凋亡具有协同作用 ;③IN能下调K5 6 2细胞中bcl 2mRNA水平表达 ,对baxmRNA水平无明显影响。结论　IN能诱导CML细胞凋亡和抑制白血病细胞增殖 ,IN对足叶乙甙的抗白血病效应具有增敏作用。bcl 2基因表达下调可能为IN诱导CML细胞凋亡的重要机制之一。     

特异性抑制Aqp1基因对K562细胞生长的抑制作用

本研究探讨靶向aqp1(aquaporin 1)基因的siRNA对K562细胞生长的抑制作用。设计siRNA,转染K562细胞,在相差显微镜观察细胞形态变化;用MTT法观察aqp1-siRNA对K562细胞活力的影响;使用流式细胞仪、DNA片段化分析K562细胞凋亡;用RT-PCR半定量检测转染前后aqp1基因表达。结果表明:苏木素-伊红染色后,细胞呈现明显的凋亡形态;转染24小时后aqp1-siRNAs对K562细胞的活性有显著抑制作用;aqp1-siRNA转染K562细胞后可见明显的凋亡峰,24、48和72小时的细胞凋亡率持续上升,分别为24.2%、36.1%和42.9%;48小时后aqp1-siRNA组出现明显的DNA凋亡"梯形电泳带";aqp1基因的表达水平在aqp1-siRNA转染后24、48和72小时,分别减少了33%、46%和57%。结论:aqp1-siRNA能够抑制K562细胞的增殖,诱导其凋亡,可作为治疗恶性肿瘤的新靶点。     

As2S2与STI 571协同诱导K562细胞凋亡

目的　探索As2 S2 和STI 5 71联合使用对K5 6 2细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法　用细胞计数法研究As2 S2 对K5 6 2细胞的生长抑制作用 ;细胞凋亡的检测用流式细胞术、基因组DNA电泳、细胞形态学观察等方法 ;蛋白表达的检测采用Western blot法 ;基因表达的变化用半定量RT PCR法。结果　As2 S2 1～ 5 μmol/L作用 2 4～ 72h ,即可明显抑制K5 6 2细胞增殖 ,3～ 5 μmol/L作用 4 8～ 72h即可诱导K5 6 2细胞凋亡。 3μmol/LAs2 S2 作用 72h ,细胞凋亡率达 34.4 % ;5 μmol/LAs2 S2 作用 4 8,72h ,细胞凋亡率分别达 2 1.8%和 4 6 .0 %。 1μmol/LSTI 5 71作用 4 8h ,细胞凋亡率为 (18.4± 1.4 ) % ;5 μmol/LAs2 S2 作用 4 8h ,细胞凋亡率为 (15 .8± 1.2 ) % ;而两者合用细胞凋亡率上升为 (40 .6± 2 .0 ) %。对于U937细胞 ,单用 1μmol/LSTI5 71作用 4 8h ,细胞凋亡率为 (4.5± 1.1) % ;单用 5 μmol/LAs2 S2 作用 4 8h ,细胞凋亡率为 (6 .0± 1.2 ) % ;而两者合用 ,细胞凋亡率为 (7.3± 1.0 ) % ,无明显协同作用。As2 S2 能降低K5 6 2细胞中Bcr Abl蛋白水平 ,并抑制c Abl和Bcr AblPTK活性 ,但As2 S2 并不调变bcr abl基因表达水平。结论　As2 S2 联合STI 5 71可增强诱导K5 6 2细胞凋亡的作用 ,其机制可能     

酪氨酸激酶抑制剂 Herbimycin A 联合化疗药物对 K562 细胞凋亡的影响

目的：探讨慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）细胞抗凋亡机制和诱导ＣＭＬ细胞凋亡的有效方法。方法：采用Ｋ５６２细胞培养，观察酪氨酸激酶抑制剂ＨｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ（ＨＭＡ）联合化疗药物对ＣＭＬ细胞凋亡的影响，探讨ＨＭＡ对ＣＭＬ细胞的作用。结果：ＨＭＡ或化疗药物单独应用可抑制Ｋ５６２细胞增殖，但不能明显诱导其凋亡。ＨＭＡ能明显增强化疗药诱导Ｋ５６２细胞凋亡。加入外源性巯基化合物阻断ＨＭＡ与酪氨酸激酶的结合可完全取消这种作用。结论：ＨＭＡ通过抑制ＣＭＬ细胞内酪氨酸激酶活性促进细胞凋亡而增加对化疗药物的敏感性，表明酪氨酸激酶抑制剂作为治疗ＣＭＬ药物具有潜在的应用价值。     

PLK1基因缄默在K562细胞凋亡中的作用

目的观察缄默PLK1基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对K562细胞内PLK1表达和细胞凋亡的影响,探讨PLK1在白血病发病中的作用,寻找更为有效的白血病治疗途径。方法设计合成针对PLK1基因1416~1436位点的shRNA片段,并将其克隆于绿色荧光蛋白的表达载体pEGFP-H1中,命名为pEGFP-H1/PLK1。通过电穿孔转染法将其导入K562细胞中,分为对照组、pEGFP-H1空载体转染组和pEGFP-H1/PLK1shRNA重组质粒转染组,转染后24,48h,分别通过RT-PCR和Western blot检测各组细胞PLK1基因和蛋白水平的变化,以MTT方法测各组细胞的增殖活性,比色法检测各组细胞的半胱天冬酶3(caspase-3)蛋白酶活性,并通过流式细胞仪检测各组细胞的凋亡和G2/M期转变情况。结果PLK1mRNA相对水平(与内参的灰度比值)对照组为1.25±0.07,空载体转染24,48h组分别为1.21±0.08和1.23±0.09,shRNA重组质粒转染24,48h组分别为0.52±0.04和0.25±0.02,shRNA重组质粒转染组较其他两组明显降低(P<0.01)。各组细胞PLK1的蛋白水平变化趋势与PLK1mRNA表达相似。相应地,对照组、空载体转染48h组、shRNA重组质粒转染24,48h组的凋亡率分别为(8.3±0.6)%、(8.7±0.7)%、(49.7±3.8)%和(82.3±6.9)%,后两者与前两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。此外,与对照组和空载体转染组相比,shRNA重组质粒转染组的细胞增殖能力明显下降(P<0.05),且位于G2/M期的细胞较对照组和空载体转染组显著增加。以上结果均于转染后48h时较明显(P<0.05)。结论构建的shRNA能明显抑制转染细胞PLK1的表达和增殖,并可促进转染细胞的凋亡,并使停留于G2/M期的细胞显著增加。     

RNA干扰沉默急性白血病细胞SUV39H1基因表达的实验研究

目的 应用小干扰RNA(siRNA)干扰人急性髓系白血病细胞株KG-1细胞SUV39H1(suppressor of variegation 3-9 homolog 1)基因的表达,研究SUV39H1基因沉默对KG-1细胞增殖、抑癌基因p15表达及组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响,探寻白血病基因治疗的新靶点.方法 用LipofectamineTM2000将体外合成针对SUV39H1基因的siRNA片段转染到KG-1细胞后,采用RT-PCR方法检测siRNA对SUV39H1 mRNA表达的抑制效果,用四唑氮化合物(MTS)法绘制细胞增殖抑制曲线,Western blot法检测目的 基因SUV39H1和抑癌基因p15的表达及对组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响.结果 SUV39H1 siRNA转染KG-1细胞可沉默该基因;沉默SUV39H1基因表达可抑制细胞增殖,30、60、120、240 nmol/L SUV39H1 siRNA转染48 h后,KG-1细胞的增殖抑制率分别为(23.57±1.98)%、(48.69±1.84)%、(62.69±1.61)%、(81.06±3.22)%,差异有统计学意义(P<0.05);沉默SUV39H1基因可上调p15基因的表达,下调组蛋白H3K9三甲基化,上调组蛋白H3K9、H3的乙酰化.30、60、120 nmol/L SUV39H1 siRNA处理KG-1细胞48 h后,组蛋白H3K9三甲基化水平较对照组分别减少25%、33%、49%;组蛋白H3K9乙酰化水平增强,分别为对照组的1.83、2.16、3.07倍;组蛋白H3乙酰化水平逐渐升高为对照组的1.35、1.87、2.37倍;p15表达水平呈递增趋势,分别为对照组的1.52、2.89、3.08倍;而组蛋白H4、H3K14、H3K27的乙酰化水平未见显著变化.结论 沉默SUV39H1基因表达可能通过改变抑癌基因启动子区域的组蛋白修饰,即上调组蛋白H3K9乙酰化及下调H3K9甲基化,使p15基因重新表达,从而抑制细胞增殖.