缬沙坦对心肌缺血坏死后心肌转化生长因子-β1及ⅠⅢ型胶原表达的影响

目的本研究通过观察缬沙坦对大鼠急性缺血坏死后的心肌转化生长因子-β1(TGF-β1)及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响,探讨缬沙坦对心肌缺血坏死后心室重构的作用.方法实验动物随机分为Val组(缺血加缬沙坦组)、MI组(心肌缺血组)和C组(对照组).14 d后将三组动物处死,心肌组织经HE染色作形态学观察,用免疫组化SP法检测心肌组织切片内的TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达.结果心肌组织HE染色:Val组和MI组可见心肌纤维溶解断裂、炎症细胞浸润等改变;免疫组化染色结果:Val组与MI组比较,TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量明显降低(P＜0.01).结论缬沙坦可明显降低心肌缺血坏死后心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1的表达,从而减轻了心室的重构.     

丹参酮ⅡA抑制心肌细胞的纤维化

背景：转化生长因子β-Smads信号通路是心肌纤维化的关键通路;丹参酮ⅡA具有抑制心肌纤维化作用.目的：验证丹参酮ⅡA对转化生长因子β1致心肌纤维化的作用并探讨其机制.方法：取出生24 h内的SD大鼠心脏,利用酶消化法结合差速贴壁体外培养心肌成纤维细胞.取上述第3代心肌成纤维细胞,用5μg/L转化生长因子β1培养15,30,60,120 min或6,12,24 h后收集细胞,用不同浓度（10-5 mol/L、10-4结果与结论：转化生长因子β1在一定范围内以时间依赖方式诱导结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原、磷酸化Smad3及Smad7的表达,刺激终末结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原mRNA的表达量明显上升（均P 〈0.01）;磷酸化Smad3及Smad7蛋白表达量在刺激后1 h达到峰值,表达量显著增加（均P 〈0.01）.高浓度丹参酮ⅡA预处理可显著下调磷酸化Smad3、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原表达（均P 〈0.01）.两种浓度的丹参酮ⅡA预处理均可上调Smad7蛋白表达（P 〈0.05,P 〈0.01）.提示丹参酮ⅡA对心肌纤维化有抑制作用,可能与其上调Smad7蛋白表达,抑制转化生长因子β1诱导的Smad3磷酸化,部分阻断转化生长因子β1-Smads信号通路有关. mol/L）丹参酮ⅡA预处理2 h后再加入5μg/L转化生长因子β1培养120 min或24 h后收集细胞,并设空白对照组.免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定,反转录聚合酶链反应检测结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达,Western Blot检测Smad7及磷酸化Smad3蛋白表达.免疫组织化学染色及免疫荧光法检测磷酸化Smad3、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原蛋白表达.     

心肌梗死大鼠TGF-β1与Ⅰ型胶原变化的研究

目的研究大鼠心肌梗死后心肌转化生长因子β1(TGF-β1)与Ⅰ型胶原表达,并测定大鼠血浆内TGF-β1的含量。方法结扎左冠状动脉建立大鼠心肌梗死模型,采用ELISA法测定心肌梗死不同时间内大鼠血浆内TGF-β1的含量;应用免疫荧光染色的方法,通过激光扫描共聚焦显微镜观察TGF-β1与Ⅰ型胶原表达的变化。结果大鼠心梗后1 d3、d5、d血浆内TGF-β1含量明显增加(P<0.01),呈时间依赖性。心梗后24 h心肌TGF-β1与Ⅰ型胶原表达与假手术组相比明显增强。结论心梗后心肌通过增加TGF-β1、Ⅰ型胶原的表达参与心室重构。     

心肌梗死大鼠TGF-β1与Ⅰ型胶原表达的研究

目的研究大鼠心肌梗死后转化生长因子β1(TGF-β1)与Ⅰ型胶原表达。方法结扎左冠状动脉建立大鼠心肌梗死模型,采用免疫荧光染色的方法,通过激光扫描共聚焦显微镜观察TGF-β1与Ⅰ型胶原表达的变化。结果心梗24h后心肌TGF-β1与Ⅰ型胶原表达与假手术组相比明显增强。结论心梗后心肌通过增加TGF-β1、Ⅰ型胶原的表达参与心室重构。     

心肌梗死大鼠TGF-βl与工型胶原变化的研究

目的 研究大鼠心肌梗死后心肌转化生长因子βl（TGF-βl）与I型胶原表达，并测定大鼠血浆内TGF-βl的含量。方法 结扎冠状动脉建立大鼠心肌梗死模型，采用ELISA法测定心肌梗死不同时间内大鼠血浆内TGF-βl的含量；应用免疫荧光染色的方法，通过激光扫描共聚焦显微镜观察TCF-β与I型胶原表达的变化。结果 大鼠心梗后1 d、3 d、,5 d血浆内TGF-βl含量明显增加（P〈O．01），呈时间依赖性。心梗后24h心肌TGF-βl与I型胶原表达与假手术组相比明显增强。结论 心梗后心肌通过增加TGF-βl、I型胶原的表达参与心室重构。     

小鼠心肌转化生长因子β1表达与依普利酮的影响

目的:观察高选择性醛固酮受体拮抗剂依普利酮对鸟苷酸环化酶偶联受体-A基因敲除小鼠心肌转化生长因子β1表达的影响,并对其逆转心室重构的分子机制进行探讨.方法:实验于2005-06/2006-04 在河北省人民医院心内科、日本奈良县立医科大学第一内科完成.①实验材料:鸟苷酸环化酶偶联受体-A基因敲除小鼠20只由日本国立循环器病中心岸本一郎教授馈赠,雄性,12周龄,基因背景为清洁级C57BL/6小鼠,随机数字表法分为空白对照组6只、依普利酮组7只、肼苯哒嗪组7只.另取同龄野生型小鼠7只作为野生组.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:依普利酮组每天通过饲料给予100 mg/kg依普利酮,肼苯哒嗪组每天通过饮用水给予10 mg/kg肼苯哒嗪,均给药4周.空白对照组与野生组不进行任何干预.③实验评估:每周检测小鼠尾动脉收缩压及体质量.各组小鼠于16周龄时采用腹主动脉抽血法处死,称取心脏重量,计算心脏重量与体质量的比值.心脏切片行Masson三色染色,并利用图像分析系统测量心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积和管腔面积之比.实时定量PCR法检测心室胶原纤维Ⅰ、胶原纤维Ⅲ、心肌转化生长因子β1 mRNA在心肌组织的表达.结果:①心室重构指标检测:与野生组比较,空白对照组收缩压、心脏重量/体质量、心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积/管腔面积均显著升高(P ＜ 0.01).与空白对照组比较,依普利酮组上述4项指标均显著下降(P ＜ 0.05或0.01);肼苯哒嗪组收缩压明显下降(P ＜ 0.01),心脏重量/体质量、心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积/管腔面积则明显升高(P ＜ 0.05).②心肌纤维化情况: 与空白对照组比较,依普利酮治疗4周后小鼠心肌纤维化得到改善,心脏重量/体质量、心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积/管腔面积3项量化指标均降低;肼苯哒嗪治疗4周后表现为心肌纤维化加重,3项量化指标相应增加.③心肌胶原纤维Ⅰ、胶原纤维Ⅲ及心肌转化生长因子β1 mRNA的表达:与空白对照组比较,依普利酮治疗4周后小鼠胶原纤维Ⅰ、胶原纤维Ⅲ及心肌转化生长因子β1的mRNA表达均下降;肼苯哒嗪治疗4周后三者mRNA的表达均升高.结论:依普利酮可独立于血压改善小鼠心肌纤维化和心室重构,其作用机制可能与抑制心室肌高表达的心肌转化生长因子β1有关.     

替米沙坦对自发性高血压大鼠颈动脉Ⅰ型、Ⅲ型胶原及转化生长因子β_1表达的影响

目的:研究自发性高血压大鼠(SHR)颈动脉Ⅰ型、Ⅲ型胶原及转化生长因子1β(TGF-1β)的表达,并探讨替米沙坦的干预作用。方法:30只雄性12周龄的SHR大鼠随机分为3组:高血压组(SHR)、替米沙坦低剂量组(T e lL)、替米沙坦高剂量组(T e lH),并设同周龄雄性的W KY大鼠为对照组(W KY,n=10),干预18周。观察各组大鼠收缩压(SBP)、免疫组化评估颈动脉Ⅰ型、Ⅲ型胶原及TGF-1β的表达。结果:(1)2周后T e lH组SBP明显低于SHR组(P<0.01),其降压作用持续至实验结束,而T e lL组SBP与SHR组差异无统计学意义(P>0.05);(2)SHR组颈动脉外膜Ⅰ型胶原的表达明显高于W KY组(P<0.01),T e lH、T e lL组颈动脉外膜Ⅰ型胶原的表达低于SHR组(P<0.05);(3)SHR组颈动脉外膜Ⅲ型胶原的表达明显低于W KY组(P<0.01),T e lH组颈动脉外膜Ⅲ型胶原的表达高于SHR组(P<0.01);(4)SHR组颈动脉中膜TGF-1β的IOD值明显低于W KY组(P<0.01),T e lH、T e lL组颈动脉中膜TGF-1β的IOD值高...     

高迁移率族蛋白B1通过TGF-β/Smad3信号通路降低缺氧/复氧诱导的心肌细胞纤维化的机制

摘要 目的：探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在缺氧/复氧诱导H9C2心肌细胞纤维化过程中的作用及机制。 方法：构建转染HMGB1-shRNA H9C2稳定细胞系沉默HMGB1的表达,行缺氧/复氧损伤处理,Western Blot检测纤维化相关蛋白的表达,同时检测TGF-β1、ERK及Smad3纤维化信号通路相关因子,明确下调HMGB1表达对心肌纤维化蛋白及纤维化信号通路蛋白表达的影响。使用TGF-β1抑制剂SB431542与H9C2心肌细胞共培养,行缺氧/复氧损伤处理,Western Blot 检测纤维化相关蛋白的表达,明确TGF-β1对心肌纤维化蛋白表达的影响。 结果：转染HMGB1-shRNA的H9C2细胞,行缺氧/复氧处理,HMGB1蛋白及纤维化相关蛋白TIMP2、MMP2、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ表达水平下调,与对照组相比差异具有显著性意义（P<0.05）;TGF-β1、p-Smad3蛋白表达下调,与对照组相比差异具有显著性意义（P<0.05）。使用TGF-β1抑制剂SB431542,行缺氧/复氧处理,纤维化相关蛋白TIMP2、MMP2、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ表达水平下调,与对照组相比,差异具有显著性意义（P<0.01）。 结论：HMGB1影响缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞纤维化,其作用机制可以通过下调TGFβ1/Smad3信号通路蛋白的表达降低心肌纤维化。     

心肌梗死大鼠心室重塑中醛固酮活性研究

目的研究急性心肌梗死（AMI）后醛固酮（Ald）激活对心室重塑的影响,评价西拉普利、安体舒通（SPI）对AMI后Ald激活及心室重塑的抑制作用,探讨Ald致心肌纤维化的可能机制。方法将AMI后24h存活的Wistar大鼠随机分配至梗死组（MI组）、西拉普利组（ACEI组）、安体舒通组（SPI组）、西拉普利＋SPI组（ACEI＋SPI组）,假手术组（SHAM）作为对照。两周后,放射免疫法测定血浆Ald含量,逆转录-聚合酶链（RT-PCR）方法测定心肌醛固酮合酶（P450Ald）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及AT1受体mRNA水平。结果MI组血浆Ald含量,心肌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、AT1受体mRNA表达均较SHAM组显著增加;ACEI组、SPI组、ACEI＋SPI组心肌Ⅰ型、Ⅲ型胶原以及AT1受体mRNA表达均显著低于MI组。结论AMI后循环和心肌Ald生成激活,促进MI后心室重塑,AT1受体可能参与该过程,西拉普利、安体舒通均可不同程度地抑制AMI后Ald激活及心室重塑。     

小鼠心肌转化生长因子β1表达与依普利酮的影响

目的：观察高选择性醛固酮受体拮抗剂依普利酮对鸟苷酸环化酶偶联受体-A基因敲除小鼠心肌转化生长因子β1表达的影响，并对其逆转心室重构的分子机制进行探讨。 方法：实验于2005-06／2006-04在河北省人民医院心内科、日本奈良县立医科大学第一内科完成。①实验材料：鸟苷酸环化酶偶联受体-A基因敲除小鼠20只由日本国立循环器病中心岸本一郎教授馈赠，雄性，12周龄，基因背景为清洁级C57BL／6小鼠，随机数字表法分为空白对照组6只、依普利酮组7只、肼苯哒嗪组7只。另取同龄野生型小鼠7只作为野生组。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：依普利酮组每天通过饲料给予100mg／kg依普利酮，肼苯哒嗪组每天通过饮用水给予10mg／kg肼苯哒嗪，均给药4周。空白对照组与野生组不进行任何干预。③实验评估：每周检测小鼠尾动脉收缩压及体质量。各组小鼠于16周龄时采用腹主动脉抽血法处死，称取心脏重量，计算心脏重量与体质量的比值。心脏切片行Masson三色染色，并利用图像分析系统测量心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积和管腔面积之比。实时定量PCR法检测心室胶原纤维Ⅰ、胶原纤维Ⅲ、心肌转化生长因子β1 mRNA在心肌组织的表达。 结果：①心室重构指标检测：与野生组比较，空白对照组收缩压、心脏重量，体质量、心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积，管腔面积均显著升高（P〈0．01）。与空白对照组比较，依普利酮组上述4项指标均显著下降（P〈0．05或0．01）；肼苯哒嗪组收缩压明显下降（P〈0．01），心脏重量，体质量、心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积，管腔面积则明显升高（P〈0.05）。②心肌纤维化情况：与空白对照组比较，依普利酮治疗4周后小鼠心肌纤维化得到改善，?     

增生性瘢痕和正常皮肤组织中TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的比较

目的 观察人增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达差异,探讨其意义.方法 收集2012年2月至2013年2月南昌大学第一附属医院烧伤整形科住院患者10例,取其行手术切除的增生性瘢痕组织及其邻近的正常皮肤组织.采用免疫组织化学法(SP法)检测各组织中TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达.结果 增生性瘢痕组织中TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达均显著高于正常皮肤组织.结论 TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原在人增生性瘢痕组织中呈高表达,提示其在增生性瘢痕的形成和演化过程中可能发挥着靶点的作用.     

大蒜素对硝苯地平致药物性牙龈增生的干预作用

目的 探讨大蒜素对硝苯地平致牙龈增生（DGO）患者牙龈成纤维细胞（HGFs）I型胶原分泌和转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白表达的影响.方法 对不同牙龈增生（GO）指数患者行龈切术,收集增生牙龈组织.组织块培养法分离培养DGO-HGFs,在培养液中加入不同浓度（0μg/ml、3μg/ml、6μg/ml、9μg/ml）大蒜素,作用72h后取细胞上清液,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定Ⅰ型胶原及TGF-β1的含量.结果 不同浓度大蒜素可使不同增生程度DGO-HGFs细胞上清液中I型胶原（P〈0.05）和TGF-β1含量降低（P〈0.05）,且大蒜素作用浓度越高、牙龈增生程度越重,两者含量降低越显著.结论 大蒜素可抑制DGO-HGFs I型胶原分泌,此抑制作用与牙龈增生程度、药物浓度相关,其作用机制可能与下调TGF-β1表达有关.     

依普利酮对慢性心力衰竭患者血浆转化生长因子β1水平的影响

目的 观察依普利酮对慢性心力衰竭患者血浆转化生长因子β1（TGF-β1）水平的影响,探讨其治疗心力衰竭的可能机制.方法 将85例慢性心力衰竭患者随机分为依普利酮组（n=43）和常规治疗组（n=42）,常规治疗组为基础治疗,依普利酮组在常规治疗基础上加服依普利酮25 mg/d,持续1个月后,无明显不良反应者增至50 mg/d,治疗1年后复查心脏超声,ELISA法测外周血脑钠肽（BNP）、TGF-β1水平,比较两组治疗前后各指标变化,分析TGF-β1水平与BNP及心功能的相关性.结果 依普利酮治疗1年后,患者左心室射血分数（LVEF）及6 min步行距离增加,左心室后壁厚度（LVP）、左心室舒张末期内径（LVEDD）、室间隔厚度（IVS）、TGF-β1水平、BNP水平均减少,血压降低,且各项指标改善均优于常规治疗组,差异有统计学意义（P〈0.05）;TGF-β1水平与BNP呈正相关,与LVEF呈负相关（P〈0.05）.结论 在常规抗心力衰竭治疗基础上,加用依普利酮能降低心力衰竭患者血浆TGF-β1水平,逆转心肌重构,改善心功能.     

室间隔缺损儿童心房肌Ⅰ以及Ⅲ型胶原蛋白的变化

背景：心脏间质主要由Ⅰ，Ⅲ型胶原组成，对心肌细胞起支持、保护和制约的作用，是维持心脏正常的形态和功能不可缺少的成分。目的：观察室间隔缺损儿童心房Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达的变化，探讨其对心功能的影响。设计：病例分析。单位：新乡医学院细胞生物学教研室。对象：选择2003—01／08新乡医学院第一附属医院儿科6例事故死亡的儿童．家属知情同意．男4例，女2例；年龄1-15岁，大体解剖证明无先天性心脏病，取右心房组织。同期选择新乡医学院第一附属医院心胸外科21例室间隔缺损患儿，男12例，女9例；年龄1～17岁。方法：从右心房手术切缘处取少许新鲜组织。采用过氧化物酶标记的链霉卵白素免疫组化观察心脏胶原Ⅰ型和Ⅲ型蛋白表达，用数字图像分析方法测量心脏胶原Ⅰ型和Ⅲ型蛋白面积构成比（代表胶原蛋白表达的相对面积含量），面积百分比（代表胶原蛋白表达的百分含量）。主要观察指标：心房肌细胞Ⅰ，Ⅲ型胶原蛋白表达。结果：6例死亡儿童和21例室间隔缺损患儿的心房组织均进入结果分析。①正常心房Ⅰ型胶原为粗、细不等的条状纤维，彼此连接成网；Ⅲ型胶原纤维呈散在的斑片状分布。②室间隔缺损心房Ⅰ和Ⅲ型胶原表达，大多区域属于正常。仅部分区域发生极度重排，即Ⅰ型胶原呈现大斑块状增加、断裂或消失，Ⅲ型胶原呈条束状增加。③Ⅰ型和Ⅲ型胶原面积百分比和面积构成比：正常心肌Ⅰ型胶原含量较Ⅲ型胶原多[面积百分比：（48．82&;#177;12．35）％，（40．02&;#177;13．53）％，t=2．173,P〈0．05；面积构成比（15．87&;#177;6．03）μm^2，（13．62&;#177;6．94）μm^2，t=2．221，P〈0．05]。室间隔缺损儿童心肌Ⅰ型胶原含量较Ⅲ型胶原多[面积百分比：（55．37&;#177;10．42）％，（50．27&;#177;14．36）％，t=2．173，P〈0．05；面积构成比（24．93&;#177;9．62）μm^2，（19．22&;#177;12．03）μm^2，t=2．221，P〈0．05]。室间隔缺损儿童心肌Ⅰ型，Ⅲ型胶原含量较正常心肌明显增多（t=2．153-2．234，P〈0．05）。结论：室间隔缺损儿童心房部分区域Ⅰ和Ⅲ型胶原纤维形态上出现重构，含量增加，可能是室间隔缺损儿童心功能异常出现的心脏间质代偿。     

皮下植入生肌玉红胶原后的血管新生与瘢痕抑制

背景：前期研究显示生肌玉红胶原促进血管新生与组织愈合的疗效显著好于生肌玉红膏及单纯胶原或明胶。目的：探察兔皮下植入生肌玉红胶原促进血管新生与修复的疗效与机制。方法：在新西兰兔背部两侧对称制作皮下口袋模型,并对称植入生肌玉红胶原（实验组）与胶原（对照组）,于术后3,7,14,28,56d取植入标本及标本周围组织,制作病理切片观察标本周围组织修复状况,测定胶原内血红蛋白水平,免疫荧光与CD34染色标记法观察周围组织微血管新生情况,WesternBlot法检测血管内皮生长因子、血管生成素1的表达,免疫组织化学法观察周围组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌及两者的比例。结果与结论：实验组标本周围皮下血管增多,胶原周围组织随着时间推移炎性渗出减少,肉芽组织增生,到28d时已形成成熟的纤维结缔组织,并且促进微血管新生作用及血红蛋白水平高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,术后3,7d血管内皮生长因子、血管生成素1表达高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）;实验组Ⅰ型胶原分泌与对照组相当,但术后28,56dⅢ型胶原的分泌高于对照组（P〈0.05）,且术后28,56dⅠ、Ⅲ型胶原的比例低于对照组（P〈0.01）。表明生肌玉红胶原可显著促进周围组织微血管新生,提高血管内皮生长因子与血管生成素1的表达,同时协同调节胶原形成及Ⅰ、Ⅲ型胶原的比例达到减少瘢痕愈合的作用。     

鹿角方逆转压力负荷增加大鼠左心室重构的作用

背景：鹿角方由鹿角、补骨脂、淫羊藿、山萸肉、女贞子、沉香等纯中药组成。此方具有正性肌力、扩张血管和利尿等作用。 目的：探讨鹿角方逆转压力负荷增加对大鼠左心室重构的作用。 设计：随机对照实验。 单位：解放军南京军区南京总医院中西医结合科，上海中医药大学附属曙光医院，河北医科大学博士后流动站。 材料：实验于1998—01／12在上海中医药大学实验室完成。选取Wistar雄性大鼠153只。共做5次试验，只有第4次试验选择9只大鼠。其余均选取36只大鼠。方法：将每次试验所选取的36只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组，模型组和鹿角方组。将所有大鼠建成压力负荷增加的左室重构模型。模型组造模4周后，双蒸水灌胃15mL／kg，1次／d，共4周；假手术组只分离腹主动脉。不用银夹狭窄。4周后同模型组；鹿角方组造模4同后，以鹿角方灌胃15mL／kg，1次／d，共4周。观察左心室质量指数，采用免疫组织化学染色法观察心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变，采用RT-PCR方法观察心肌Ⅰ型胶原mRNA的表达，并采用放射免疫分析方法检测血浆和心肌血管紧张素Ⅱ和血清醛固酮水平。主要观察指标：观察左心室质量指数，心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变、心肌Ⅰ型胶原mRNA的表达。检测血浆和心肌血管紧张索Ⅱ和血清醛固酮水平。 结果：153只大鼠均进入结果分析。在检测Ⅰ型胶原的积分吸光度试验中假手术组和鹿角方组各死亡3只，模型组死亡1只．最终纳入29只大鼠。在检测Ⅲ型胶原的积分吸光度的实验中，假手术组和鹿角方组均死亡3只，模型组又死亡6只，最终纳入26只大鼠。①左心室质量指数比较：假手术组和鹿角方组明显低于模型组[（2．24&;#177;0．12）／1000，（2．60&;#177;0．44）／1000．（3．15&;#177;0.47）／1000，t=2．959-6．499,P〈0．05]。②Ⅰ型胶原积分吸光度的改变：鹿角方组和假手术组明显低于模型组[（0．56&;#177;0．23，0．57&;#177;0．19，2．79&;#177;2．00），t=0．661-3．964，P〈0．01]。③Ⅲ型胶原积分吸光度的改变：假手术组和鹿角方组明显低于模型组[（0．48&;#177;0．10，0．55&;#177;0．09，0．84&;#177;0．27）,t=2．898-3．560，P〈0．01]。④Ⅰ型胶原mRNA表达：鹿角方组和假手术组明显低于模型组[（58．0&;#177;36．0）％，（79．1&;#177;18．6）％，（139．0&;#177;29．2）％，t=3．027，P〈0．05]。⑤心肌血管紧张素Ⅱ改变：鹿角方组和假手术组明显低于模型组[（2．49&;#177;0．57，2．64&;#177;0．57，3．96&;#177;0．77）pg／ml。t=4．773-5．315，P〈0。001]。⑥血清醛固酮改变：鹿角方组和假手术组明显低于模型组[（501．6&;#177;94．6，476．6&;#177;85．7，647．8&;#177;72．2）ng／mL，t=4．256-5．292。P〈0.001]。 结论：Ⅰ型和Ⅲ型胶原的积分吸光度、Ⅰ型胶原mRNA的表达、心肌血管紧张素Ⅱ及血清醛固酮这些指标，均与左心室质量指数的改变一致。补肾为主的中药复方鹿角方具有逆转充血性心力衰竭心肌纤维化的作用及逆转左心室重构的作用。     

咪喹莫特对哮喘小鼠TGF—β1及Smads蛋白的影响

目的 观察咪喹莫特对哮喘小鼠肺组织转化生长因子β1（TGF-β1）及其信号转导分子Smads表达的影响。方法 40只小鼠按随机数字表法分成4组，每组10只。正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）、布地奈德治疗组（C组）和咪喹莫特治疗组（D组）。小鼠于第0、14天以卵白蛋白（OVA）致敏，第24天开始雾化吸入1％OVA激发并持续28d，建立哮喘气道重塑模型，C组和D组在吸入OVA前2h分别雾化吸入布地奈德或咪喹莫特30min。于最后1次雾化结束后24h，对肺组织切片行苏木精-伊红（HE）染色观察病理学改变、过碘酸雪夫（AB—PAS）染色定量杯状细胞百分比及黏液分泌、Masson染色测定胶原沉积；用免疫组化方法检测肺组织TGF-β1的蛋白表达水平；用逆转录-聚合酶链反应半定量检测肺组织TGF-β1 mRNA以及Smad2、Smad7 mRNA表达水平。结果 B组杯状细胞增生明显，伴黏液高分泌，气管壁胶原过度沉积，与A组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；D组杯状细胞轻度增生，黏液分泌减少，气管壁胶原沉积减轻，与B组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；B组TGF-β1蛋白和mRNA、Smad2mRNA的表达较A组增加，差异有统计学意义（P〈0．05），C、D组TGF-β1蛋白和mRNA、Smad2mRNA的表达下降，与B组比较差异均有统计学意义（P〈0．05），D组可显著上调Smad7mRNA的表达，与B组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 雾化吸入咪喹莫特通过抑制慢性哮喘小鼠肺组织TGF-β1，蛋白和mRNA、Smad2mRNA的过度表达，上调Smad7mRNA的表达，从而阻断TGF-β1的胞内信号转导，可在一定程度上减轻哮喘小鼠的气道重塑。     

人血管内皮生长因子165基因联合间充质干细胞治疗对扩张型心肌病胶原重塑的影响

目的：探讨人血管内皮生长因子165基因（hVEGF165）联合间充质干细胞（mesenchyma1stemce11s,MSCs）治疗对扩张型心肌病胶原重塑的影响。方法：将40只扩张型心肌病（DCM）大鼠模型随机分为4组：PBS组、MSCs心肌移植联合基因治疗组（MSCs—GENE组）、MSCs心肌移植组（MSCs组）以及基因治疗组（GENE组）。心肌局部注射所构建MLC-2v／pIRES2-EG-FP-hVEGF165与MSCs,采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测I型、Ⅲ型胶原和转化生长因子-β（TGF-β）基因表达,蛋白免疫印迹（Westrenb1ot）检测hVEGF165蛋白表达。结果：PBS组、MSCs＋GENE组、MSCs组以及GENE组的I型胶原PCR产物灰度比分别为（0．359±0．010）、（0．240±0．012）、（0．313±0．058）、（0．230±0．011）;而Ⅲ型胶原分别为（0．831±0．011）、（0．842±0．015）、（0．917±0．058）、（0．688±0．015）;TGF-β1分别为（0．548±0．067）、（0．370±0．012）、（0．561±0．014）、（0．369±0．098）;MSCs＋GENE组TGF-81与GENE组比较差异无统计学意义,但两者显著低于PBS组和MSCs组,提示TGF-β1表达下调;I型／III型胶原灰度比分别为（0．436±0．072）、（0．290±0．023）、（0．337±0．021）、（0．333±0．011）,其中MSCs组与GENE组比较差异无统计学意义;MSCs组与GENE组的I型／III型胶原灰度比减低,2组比较差异无统计学意义,但MSCs—GENE组进-步使I型／III型胶原灰度比减低;TGF-β1表达分析结果显示,hVEGF165基因治疗较MSCs移植使TGF-β1表达下调的作用更显著。结论：MSCs移植与hVEGF165基因治疗有可能通过下调TGF－β1表达,降低I型／III胶原比值,增加心肌顺应性,减轻心肌胶原网络重塑而改善心功能。     

卡托普利对压力负荷增加大鼠左室重构的逆转作用

背景：压力负荷可以导致肾素血管紧张素醛固酮系统激活,进而导致左室重构,卡托普利对这种重构具有逆转作用.目的：观察卡托普利逆转压力负荷增加大鼠左室重构的作用及其机制.设计：随机对照实验.单位：南京军区南京总医院中西医结合科,上海中医药大学附属曙光医院,河北医科大学博士后流动站.材料：试验于1998-01/12在上海中医药大学实验室完成.选取Wistar雄性大鼠153只,共做5次试验,只有第4次试验是选择9只大鼠,其余试验均为36只大鼠.方法：将每次试验所选取的36只Wistar雄性大鼠随机分成假手术组、模型组、鹿角方组3组.模型组造模4周后,双蒸水灌胃15mL/kg,1次/d,连续4周.假手术组只分离腹主动脉,不用银夹狭窄,4周后,同模型组.卡托普利组造模4周后,以卡托普利100mg/kg,1次/d,用双蒸水15 mL/kg稀释后灌胃,连续4周.主要观察指标：卡托普利对大鼠左室质量指数、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA的表达,血浆和心肌血管紧张素Ⅱ含量、血浆心钠素和血清醛固酮含量的影响.结果：153只大鼠均进入结果分析.在检测Ⅰ型胶原积分吸光度试验中假手术组死亡和卡托普利组各3只,模型组死亡1只,最终纳入29只大鼠.在检测Ⅲ型胶原积分吸光度试验中,假手术组死亡3只,模型组死亡4只,卡托普利组死亡2只,最终纳入27只大鼠.均因动物手术损伤而脱失.①左室质量指数比较：假手术组和卡托普利组明显低于模型组[（2.24&;#177;0.12）/1 000,（2.67&;#177;0.40）/1 000,（3.15&;#177;0.47）/1 000,t=2.649,6.499,P＜0.001,0.05].②Ⅰ型胶原积分吸光度的改变：假手术组和卡托普利组明显低于模型组[（0.57&;#177;0.19,0.86&;#177;0.25,2.79&;#177;2.00）,t=3.661,3.170,P＜0.01,0.05].③Ⅲ型胶原积分吸光度的改变：假手术组和卡托普利组明显低于模型组[（0.48&;#177;0.10,0.52&;#177;0.29,0.84&;#177;0.27）,t=3.560,2.417,P＜0.01,0.05].④Ⅰ型胶原mRNA的表达：假手术组和卡托普利组明显低于模型组[（79.1&;#177;18.6）%,（51.7&;#177;16.0）%,（139.0&;#177;29.2）%,t=2.910,P＜0.05].⑤心肌血管紧张素Ⅱ比较：假手术组和卡托普利组明显低于模型组[（130.2&;#177;30.2）μg/g,（137.6&;#177;39.5）μg/g,（196.748.6）μg/g,t=4.026,P＜0.01].⑥血浆心钠素比较：假手术组和卡托普利组明显低于模型组[（170.6&;#177;51.6）μg/g,（202.564.2）μg/g,（339.3&;#177;115.4）μg/L,t=4.623,＜0.01].结论：①卡托普利降低压力负荷增加大鼠心肌Ⅰ和Ⅲ型胶原及其mRNA的表达,具有逆转左室重构的作用;②卡托普利逆转左室重构的作用可能与降低循环血浆和局部心肌血管紧张素Ⅱ,血浆心钠素,血清醛固酮水平,影响Ⅰ和Ⅲ型胶原mRNA表达有关.     

Smad4 siRNA对转化生长因子β诱导Ⅰ型胶原表达的作用

背景:近期研究表明,阻断smad传导通路可能成为一个阻断转化生长因子β引起的肝纤维化的新的靶点.目的:验证Smad4小分子干扰RNA(siRNA)对转化生长因子β诱导的Ⅰ型胶原的作用.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2008-10在哈尔滨医科大学药学院完成.材料:肝星状细胞HSC-T6体外培养,siRNA和荧光素酶报告基因采用Lipofectamine试剂转染,以含巨细胞病毒-β-半乳糖苷酶质粒作为转染阳性对照.方法:根据不同处理将细胞分为4组,空白对照组;Smad4 siRNA转染组;转化生长因子β处理组:Smad4 siRNA转染后转化生长因子β处理组,将Smad4 siRNA转染入肝星状细胞后行转化生长因子β刺激.各组分别于培养24 h后收集细胞.主要观察指标:利用荧光素酶报告基因法测定Smad结合转写因子(4XSBE)的活性;反转录-聚合酶链反应法检测Ⅰ型胶原mRNA表达的变化;Western印迹分析观察Smad4蛋白、Ⅰ型胶原蛋白的变化.结果:Smad4 siRNA有意义的抑制Smad4蛋白表达;Smad4 siRNA抑制转化生长因子β诱导的4XSBE转录报告基因的活性:Smad4 siRNA从mRNA和蛋白水平有效抑制转化生长因子β激活的Ⅰ型胶原的表达.结论:Smad4 siRNA能够有效地阻断转化生长因子β诱导的Ⅰ型胶原表达.