一种简便的淋球菌保存方法的实验研究

目的　为了经济、简便地贮藏淋球菌以利于对淋球菌进行研究 ,我们研制了一种主要成份为鲜奶的保存淋球菌的简便方法—鲜奶法。方法　用鲜奶法、普通奶粉法和冷冻真空干燥法三种方法同时保存 86株淋球菌。结果　冷冻真空干燥法一年和二年内复苏 ,复活率均为 10 0 % ;鲜奶法一年内复苏 ,复活率为 10 0 % ,二年内复苏 ,复活率为 97.7% ,上述两种方法明显高于普通奶粉法组 (9.3% ,1.2 % ) ,差异均具有显著性 (P <0 .0 1)。结论　鲜奶法保存淋球菌具有经济、简便实用、存活率高等优点 ,是一种较理想的贮存淋球菌的方法     

磁珠法对淋球菌DNA的检测分析

目的了解磁珠法提取淋球菌DNA的效率和敏感性。方法对2012年1月-2013年1月本院皮肤性病科送检的338例标本同时进行淋球菌培养和磁珠法提取淋球菌DNA。结果淋球菌培养阳性标本101例,培养阴性标本237例。结果表明,在101例淋球菌培养阳性标本中,淋球菌DNA检测全为阳性;在237例培养阴性标本中,淋球菌DNA检测共有201例为阴性,其中有36例为淋球菌DNA阳性。结论虽然淋球菌培养是金标准,但由于培养时间长,且淋球菌非常脆弱,培养阳性率较低,所以容易漏诊。磁珠法提取淋球菌DNA的效率快、敏感性较好,还在于细菌死亡后或早期使用抗生素产生淋球菌培养假阴性结果时,淋球菌DNA检测仍然为阳性,对这一部分患者能够做到早期诊断和鉴别诊断,对预防和治疗性病有重要作用。     

淋球菌保存方法的实验研究

目的为了经济、简便地贮藏淋球菌以利于对淋球菌进行研究,我们特对目前几种保存淋球菌的方法进行比较实验,以便找到最理想的贮存方法。方法用鲜奶法、脱纤维血法、普通奶粉法和冷冻真空干燥法四种方法同时保存85株淋球菌。结果冷冻真空干燥法一年和二年内复苏,复活率均为100%;鲜奶法一年内复苏,复活率为100%,二年内复苏,复活率为97.7%,脱纤维血法一年内复苏,复活率为100%,二年内复苏,复活率为82.3%,上述三种方法明显高于普通奶粉法组(9.4%,1.2%),差异均具有显著性(P<0.01)。结论鲜奶法保存淋球菌具有经济、简便实用、存活率高等优点,是一种较理想的贮存淋球菌的方法。短期(一年内)脱纤维血法也是一种较理想的贮存淋球菌的方法。     

直接涂片法、乳胶免疫层析法检测淋球菌效果比较

目的：比较直接涂片法、乳胶免疫层析检测淋球菌效果。方法：收集2017年8月-2022年8月本院就诊临床疑似淋球菌感染的患者216例标本,其中男性尿道分泌物标本115例、女性宫颈分泌物标本101例。以细菌培养法检测为金标准,比较直接涂片法和乳胶免疫层析法检测淋球菌效果。结果：细菌培养法显示,216例临床样本中,淋球菌阳性173例(80.1%)、阴性43例(19.9%),115例男性标本中淋球菌阳性96例(83.5%)、阴性19例(16.5%),101例女性标本中,淋球菌阳性77例(76.3%)、阴性24例(23.8%)。与金标准比较,直接涂片法216例样本检出淋球菌阳性154例(71.3%),115例男性样本中检出淋球菌阳性85例(82.6%),101例女性样本中检出淋球菌阳性59例(58.4%);乳胶免疫层析法216例样本中检出淋球菌阳性177例(81.9%),115例样本中检出淋球菌阳性96例(87.8%),101例女性样本中检出淋球菌阳性76例(75.3%)。乳胶免疫层析法对所有样本、男性样本、女性样本中检出淋球菌的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度均高于直接涂片法。直...     

1995～2006年许昌市556株淋球菌的耐药性分析

目的：通过对556株淋球菌的药物敏感试验,了解本地淋球菌的耐药情况.方法：按常规鉴定方法分离鉴定出淋球菌556株.采用纸片琼脂扩散法做药物敏感试验.结果：1995年以来淋球菌对头孢三嗪、壮观霉素、丁胺卡那、氟哌酸、青霉素、氨苄青霉素、红霉素的耐药率分别为2.5%、17.5%、27.5%、40.0%、57.5%、57.5%、82.5%到2006年的52.2%、69.6%、78.3%、82.6%、91.3%、91.3%、95.7%.结论：淋球菌对7种抗菌素的耐药率呈上升趋势,应引起临床医生的注意.     

玻片酶联免疫吸附法鉴定淋球菌

将分离培养的淋球菌涂片，加淋球菌抗血清，直接在载玻片上进行间接酶联免疫吸附法检测。结果，仅淋球菌出现阳性反应，其他１２株对照菌均为阴性，反应特异性为１００％。６４株临床标本分离株经传统方法鉴定为淋球菌，经本法检测反应均为阳性，两种方法鉴定淋球菌的符合率为１００％。该法简便，经济，省时，适应淋球菌快速鉴定。     

新型淋球菌培养基分离培养淋球菌的研究

[目的]比较自制新型淋球菌培养基与进口 Thayer-Martin(T-M)淋球菌选择培养基分离培养淋球菌的性能,并观察其保存期长短. [方法]鉴定淋球菌,接种两种淋球菌培养基分离培养,比较各自阳性率;接种不同保存时间段的新型淋球菌培养基,比较培养性能. [结果]两种培养基对淋球菌的分离阳性率一致,差异无统计学意义.不同时间段新型淋球菌培养基对淋球菌的培养性能一致,差异无统计学意义. [结论]新型淋球菌培养基具有经济、培养性能高等优点,可以替代进口T-M培养基.     

衡阳地区淋球菌流行株对抗生素耐药性监测

目的了解衡阳地区淋球菌流行株对抗生素的耐药性及产青霉素酶淋球菌(PPNG)和高水平耐四环素淋球菌(TRNG)的流行状况.方法采用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)以及用改良碘法检测β-内酰胺酶.结果101株淋球菌共检出PPNG 32株(31.7%)、TRNG 20株(19.8%),对四环素、环丙沙星、青霉素及大观霉素的耐药率分别为94.1%、91.1%、89.1%和2.0%,未发现耐头孢曲松钠的菌株.淋球菌交叉耐药情况较为严重,79.2%菌株对青霉素和环丙沙星呈现交叉耐药,84.2%菌株对四环素和环丙沙星呈现交叉耐药.结论头孢曲松钠和大观霉素仍可作为衡阳地区淋病治疗的首选药物,但大观霉素已出现耐药株,应引起临床医师的高度警惕;持续监测淋球菌的耐药性十分重要.     

2009-2011年深圳市头孢曲松低敏淋病奈瑟菌的流行特征

目的 调查2009-2011年深圳市头孢曲松低敏淋病奈瑟菌(淋球菌)流行的基因型和特征.方法 收集2009至201 1年深圳市淋球菌296株,采用琼脂稀释法筛选出头孢曲松低敏株(最小抑菌浓度为0.06 ～0.50 μg/ml),用logistic回归分析方法,分析与头孢曲松低敏淋球菌感染相关的因素;根据1∶1抽样原则抽取出高敏菌株,与低敏菌株一起进行淋病奈瑟菌抗原序列分析(NG-MAST)基因分型和邻接法(neighbor-joining,NJ)进化树分析.结果 在296株淋球菌中,未发现头孢曲松耐药菌株,头孢曲松低敏菌株53株(17.9％).近2个月的抗生素使用史与头孢曲松低敏淋球菌感染相关(OR=3.080,95％ CI:1.376 ～6.894).53株低敏株的NG-MAST共得到48个ST型,由5个成簇的ST(ST1768、ST3927、ST641、ST7076、ST7078各包含了2株淋球菌)和43个单一的ST构成,其中26个ST型中国香港等地曾有报道.NJ进化树未观察到低敏株单独成簇的情况.结论 深圳市2009-2011年分离到的296株淋球菌中头孢曲松低敏株的比例较高;深圳市头孢曲松低敏淋球菌菌株的流行可能有其独特的特点.     

SPA协同凝集法在快速筛查淋病患者中的应用

本文介绍了利用 SPA 淋球菌诊断试剂盒,对58例淋球菌感染(GI)可疑者进行检测,并以涂片染色和分离培养法进行对照,证实协同凝集法检测淋球菌具有快速、简便、灵敏度高、特异性好等特点,对大批量标本进行快速筛选尤为适用。     

淋球菌膜蛋白疫苗的研究

目的设计淋球菌膜蛋白疫苗并构建原核表达系统,测定表达蛋白的免疫活性.方法PCR扩增淋球菌膜蛋白(PIA)基因片段,构建重组质粒,重组质粒宿主菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE分析PIA的表达情况.淋球菌标准株免疫BALB/c小鼠,体外凝集检测动物血清的免疫效果及ELISA法检测PIA的免疫活性.结果成功构建表达PIA蛋白的重组质粒,SDS-PAGE电泳图上显示1条相对分子量(Mr)约为40KDa的新生条带,能与免疫血清发生特异性结合反应.结论淋球菌膜蛋白疫苗原核表达系统的设计和构建正确,表达蛋白PIA具有免疫活性,为淋病疫苗的开发奠定了基础.     

淋病双球菌直接涂片检查体会

近年来,我国淋病发病率较高,有逐年上升的趋势,淋病在性传播疾病中约占80%左右.淋病的检查方法较多,有直接涂片法、细菌培养法、试纸条快速检测法、免疫血清法等多种.笔认为虽WHO强调人工培养法,但目前我国许多基层医院因条件所限开展此项工作仍有困难,加之淋球菌在人工培养基上不易生长,且费时费事.试纸条快检法虽简单易行,但阳性率偏低,易造成假阳性误诊.免疫血清法试剂昂贵,不易被患接受.因此,现就我科近年来直接涂片检查淋球菌的体会简述如下.     

深圳市宝安区淋球菌对19种抗生素耐药现状

[目的]了解淋球菌流行株的耐药现状及耐药水平。[方法]利用K-B法和琼脂稀释法测MIC确定淋球菌流行株对抗生素的敏感性。[结果]22株淋球菌对头孢三嗪等抗生素敏感性较高,对环丙沙星等氟喹诺酮类抗生素的耐药性较高。[结论]两种方法证明我地淋球菌流行株的普遍耐药,且菌株多重耐药严重,急需加强社区医疗用药监测。     

淋球菌的实验室检验体会

淋球菌是性传播性疾病淋病的病原体。淋球菌的实验室检验是临床上筛查和诊断淋病的主要手段之一。目前国内实验室的主要检验方法有:直接涂片法、CO_2培养法、SPA协同凝集试验以及聚合酶连(PCR)技术等。基层县级医疗单位由于客观条件的限制,淋球菌的实验室检验一般多采用直接涂片和CO_2培养法。笔者根据自己的体会和临床医生的验证,试对淋球菌的实验室检验方法和结果进行一次初浅的探讨。     

淋病奈瑟氏菌对环丙沙星耐药性与喹诺酮类耐药决定区突变的关系

目的了解上海地区淋球菌流行株对喹诺酮类抗生素的敏感性,探讨淋球菌耐药株gyrA与parC基因突变与淋球菌耐氟喹诺酮类药物之间的关系.方法采用琼脂扩散法对淋球菌临床分离株对行喹诺酮类抗生素敏感性测定,同时运用PCR技术扩增gyrA基因和parC基因的喹诺酮类耐药决定区,并对典型株的PCR产物直接进行测序分析.结果所分离的80株菌株对环丙沙星MIC为敏感、中介、耐药分别为1株、3株和76株;产物测序结果显示淋球菌敏感株只检出了gyrA基因在Asp95处的单位点突变;中介及耐药株在gyrA基因均检出有Ser-91→Phe突变并伴有Asp95或者Ala92位突变;6株检出有parC基因的86、87、91位点突变及其他位置的一些无义突变.结论gyrA基因突变是淋球菌耐喹诺酮类抗生素的重要机制,其中Ser-91→Phe更是引起对喹诺酮类耐药非常关键的突变,而parC基因的突变只会伴随gyrA基因突变同时出现,可能会对淋球菌耐喹诺酮类抗生素起促进作用.     

常德地区淋球菌流行株的药物敏感性检测

目的 了解淋球菌流行株对抗菌药物的敏感性,为淋病的防治提供实验依据.方法 改良碘量法检测β-内酰胺酶,纸片扩散法检测98株淋球菌对9种抗菌药物的敏感性.结果 质粒介导的产青霉素酶淋球菌(PPIVG)和质粒介导的高度耐四环素淋球菌(TRNa)分别为55株(56.12%)和20株(23.47%),在测定的9种抗菌药物中,淋球菌耐药性较高的依次为四环素、头孢美唑、青霉素、环丙沙星、氧氟沙星.耐药率分别为36.73%、50%、56.12%、74.45%、80.61%,而敏感性较高的4种抗菌药物依次为头孢呋辛、头孢三嗪、头孢呲肟、壮观霉素,敏感率分别为72.44%、79.60%、77.55%、91.84%.结论 青霉素、四环素以及氟喹诺酮类药物已不宜作为常德地区治疗淋病的常规药物,壮观霉素可作为治疗淋病的首选药物,但已出现耐药菌株,应当引起高度警惕.     

纸片法用于淋球菌对头孢曲松敏感性判定的可行性研究

目的了解纸片扩散法(K-B法)用于淋球菌对头孢曲松敏感性判定的可行性。方法将2014年12月至2016年1月临床分离的淋球菌株105株,用K-B法及琼脂稀释法进行头孢曲松敏感性试验,比较两种方法检测结果的一致性。结果 3次K-B法检测淋球菌对头孢曲松敏感菌株检出率分别为81.0%、78.1%和77.1%,平均检出率78.7%;琼脂稀释法对敏感株检出率为97.1%。K-B法和琼脂稀释法检测结果符合率为83.8%。结论 K-B法和琼脂稀释法检测淋球菌头对孢曲松敏感性试验结果存在差异,对K-B法结果为非敏感的菌株,应使用琼脂稀释法确证,结果以琼脂稀释法为准;K-B法检测为敏感的菌株结果可靠,无需再确证。     

实时荧光定量PCR检测女性淋球菌的评价

[目的]评价实时荧光定量PCR检测方法在诊断女性淋球菌(NGH)感染的效果和可行性,试图寻找一种快速而敏感的淋球菌检测方法。[方法]用革兰染色涂片法、培养法和FQ-PCR法检测女性疑诊淋病患者,其中FQ-PCR法采用宫颈拭子、阴道拭子和尿液3种取材方法进行对比。以培养法为“金标准”,分别计算其敏感性、特异性、阳性预期值和阴性预期值。并对部分患者治疗前后定量结果进行分析。[结果]培养法检测淋球菌的检出率为6.7%,涂片法的敏感性为60.00%,阳性预期值为54.55%。宫颈拭子FQ-PCR、阴道拭子FQ-PCR和尿液FQ-PCR法的敏感性分别为90%、95%和80%,3种FQ-PCR法特异性高达98%。[结论]FQ-PCR法检测女性淋球菌,具有快速、定量准确、较高敏感性和特异性等优点,可弥补涂片法较粗糙、培养法耗时长的缺点。是一种具有临床应用价值的淋球菌快速定量检测方法。     

淋病奈瑟菌对氟喹诺酮类药物的耐药性与gyrA和parC基因突变关系的研究

目的 探讨江苏省淋球菌对氟喹诺酮的耐药状况、耐药基因突变型的分布情况及二者之间的关系。方法 采用琼脂稀释法检测淋球菌氟喹诺酮类药物（环丙沙星、左氧氟沙星）的最小抑菌浓度（MIC），采用PCR法扩增含有喹诺酮耐药决定区的gyrA和parC基因片段，并进行测序分析。结果 根据所测MIC，本研究分离的95株淋球菌对环丙沙星100％的耐药；通过测序分析，在54株淋球菌中检测到gyrA和parC的18种突变形式，parC基因突变点越多，MIC相对也较高。结论 parC基因的突变导致淋球菌对喹诺酮类药物的高水平耐药。     

测定淋球菌对抗生素敏感性的方法学评价

淋病是我国目前性传播疾病 (ＳＴＤ)中发病率最高的病种。随着淋球菌耐药菌株的逐年增多 ,需加强耐药性的监测。监测淋球菌耐药性 ,常用的有纸片扩散法、琼脂稀释法及Ｅ试验法。本文用纸片扩散法和琼脂稀释法测定淋球菌对青霉素、四环素、壮观霉素、头孢三嗪和环丙沙星的敏感性 ,利用统计学处理比较这两种方法 ,并加以方法学评价 ,从而为药敏试验提供一种敏感、可靠及简便的方法。现报道如下。材料和方法　 (1)菌株来源 :从 1998～ 1999年本院附属医院、湛江市第二人民医院、湛江市农垦医院皮肤性病门诊病人中分离出 98株淋球菌。其中男性病…