降血压肽对人脐静脉内皮细胞eNOS、iNOS、ET-1mRNA表达的影响

目的和方法:采用RT-PCR技术分析降血压肽(ACEIP)对人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮素-1(ET-1)mRNA表达水平的影响,从而探讨降血压肽降血压的部分作用机制。结果:与对照组比较,不同剂量的降血压肽可降低ET-1、iNOSmRNA的表达;升高eNOSmRNA的表达,均以ACEIP中剂量组效果最明显(P<0.01)。结论:降血压肽降低血压的机制可能与其降低人脐静脉内皮细胞ET-1、iNOS的基因表达;诱导eNOS基因表达有关。     

降血压肽对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究降血压肽ACEIP对脐静脉内皮细胞释放内皮素(ET)、一氧化氮(NO)的影响。方法按150，300，600μg／ml不同剂量的降血压肽作用于脐静脉内皮细胞，进行细胞生长试验及细胞培养液中NO、ET含量的检测。结果与空白对照组比较，不同剂量的降血压肽可升高培养液中NO含量。降低ET含量；去甲肾上腺素的促进脐静脉内皮细胞的生长以及其促进脐静脉内皮细胞分泌ET、降低培养液中NO含量的作用可被降血压肽拮抗。结论降血压肽对血管内皮细胞功能具有保护作用。     

镁对人脐静脉内皮细胞DNA氧化损伤的影响

目的 :　观察 Mg2 + 对 H2 O2 诱导的人脐静脉内皮细胞 DNA氧化损伤的影响。方法 :　取新生儿脐带内皮细胞进行细胞培养。实验分四组 :1 .阴性对照。 2 .阳性对照 ,培养液中加H2 O2 。 3 .补镁组 ,培养液中加不同浓度的 Mg SO4 。 4.补 H2 O2 与镁组 :培养液中加 H2 O2 与镁。用单细胞凝胶电泳技术检测各组拖尾细胞率与拖尾细胞长。结果 :　与 H2 O2 组相比 ,H2 O2 +Mg2 + 各剂量组拖尾细胞率下降、拖尾细胞尾长减小。结论 :　 Mg2 + 对 H2 O2 诱导的 DNA氧化损伤有明显的拮抗作用。     

硒对氟诱导人脐静脉血管内皮细胞iNOS和eNOS表达的影响

目的研究一定浓度的硒对氟诱导人脐静脉血管内皮细胞(ECV-304)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞株,加氟组培养液中分别加入400、1 000、2 000μmol/L的氟化钠;加氟加硒组培养液中分别加入400、1 000、2 000μmol/L的氟化钠,同时加入100 nmol/L的亚硒酸钠;对照组细胞在无血清培养液中培养;连续培养24 h,检测培养液中的iNOS、eNOS的活力;采用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)测定iNOS mRNA和eNOS mRNA的表达。结果与对照组比较,400、1 000、2 000μmol/L加氟组iNOS活力和iNOS mRNA的表达增强(P<0.01);而400、1 000、2 000μmol/L加氟组eNOS的活力和1 000、2 000μmol/L加氟组eNOSmRNA的表达降低(P<0.05,P<0.01);与相应剂量的加氟组(400、1 000μmol/L)比较,加硒加氟组iNOS活力和iNOS mRNA的表达降低(P<0.05),而eNOS的活力和eNOS mRNA的表达升高(P<0.05);而加硒加氟组(氟剂量:2 000μmol/L、硒剂量:100 nmol/L)的iNOS与eNOS的表达与相应剂量的加氟组(2 000μmol/L)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论硒对氟诱导人脐静脉血管内皮细胞iNOS和eNOS表达产生影响,但是对高剂量氟组作用不强。     

镁对入脐静脉内皮细胞DNA氧化损伤的影响

目的观察Mg2+对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞DNA氧化损伤的影响.方法取新生儿脐带内皮细胞进行细胞培养.实验分四组1.阴性对照.2.阳性对照,培养液中加H2O2.3.补镁组,培养液中加不同浓度的MgSO4.4.补H2O2与镁组培养液中加H2O2与镁.用单细胞凝胶电泳技术检测各组拖尾细胞率与拖尾细胞长.结果与H2O2组相比,H2O2+Mg2+各剂量组拖尾细胞率下降、拖尾细胞尾长减小.结论Mg2+对H2O2诱导的DNA氧化损伤有明显的拮抗作用.     

铅诱导人脐静脉内皮细胞损伤及机制研究

目的探讨铅诱导人脐静脉内皮细胞损伤效应及机制。方法用不同浓度的铅染毒人脐静脉内皮细胞,观察细胞形态和活性,通过检测细胞上清液丙二醛(MDA)、非对称性二甲基精氨酸(ADMA)、一氧化氮(NO)的含量和一氧化氮合酶(NOS)的活性等指标,观察铅对人脐静脉内皮细胞损伤的量-效关系(终浓度分别为1、2、4、8mg/L的铅处理细胞24h)和时-效关系(终浓度为4mg/L的铅分别于处理0、3、6、12、24、48h后观察检测指标)。实验分为正常对照组(加入与处理组等体积的D-Hank’s液,铅浓度为0mg/L)、铅处理组(加终浓度分别为1、2、4、8mg/L的铅)、铅VitC组(铅终浓度为4mg/L,VitC终浓度为100mg/L)和阳性对照组(加终浓度为500μg/L的过氧化氢)。结果 2～8mg/L的铅能显著改变细胞形态、降低细胞活性;能显著性诱导内皮细胞MDA升高。2～8mg/L的铅还能显著性诱导内皮细胞NO含量降低,具有显著的时间依赖性,各处理组间两两比较差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。4mg/L铅处理时细胞ADMA含量最高,且分别在处理后24h到达最高峰。结论 2～8mg/L铅能显著诱导人脐静脉内皮细胞损伤;ADMA在铅诱导人脐静脉内皮细胞损伤中有着重要作用。     

川芎嗪对缺氧内皮细胞分泌PGI_2 ET NO的影响

目的:观察川芎嗪对缺氧人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌血管活性物质——内皮素(ET)、前列环素(PGI2)、一氧化氮(NO)的影响。方法:将HUVEC分成2组:缺氧组和川芎嗪组,检测细胞上清液ET、PGI2、NO。结果:川芎嗪显著促进PGI2的合成和分泌(P<0.05),且能促进NO的分泌,同时减少ET的合成和分泌(P<0.1)。结论:川芎嗪对内皮源性血管活性物质有整体调节作用。     

脂氧素A4对子痫前期患者脐静脉内皮细胞分泌内皮素-1的影响

目的:研究脂氧素A4(lipoxinA4,LXA4)对子痫前期患者脐静脉内皮细胞分泌内皮素-1(endothelin-1,ET-1)的影响。方法:取子痫前期患者和正常孕妇组脐带及脐静脉血清,分离并培养脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cell,HUVEC),分为正常细胞对照组、子痫前期细胞组和LXA4药物干预组(1 nmol/L,10 nmol/L,100 nmol/L)。RT-PCR检测各组细胞ET-1mRNA水平;酶联免疫吸附试验检测各组细胞上清液中ET-1的分泌水平。结果:LXA4降低子痫前期患者HUVEC内ET-1mRNA基因表达水平(P<0.05),而对正常细胞组无影响(P>0.05);LXA4明显抑制子痫前期脐静脉内皮细胞分泌ET-1(P<0.01),对正常细胞亦无影响(P>0.05)。结论:LXA4抑制子痫前期脐静脉内皮细胞ET-1 mRNA表达及分泌,为临床应用LXA4治疗妊娠期高血压疾病提供重要的实验依据。     

芍药苷对过氧化氢损伤的人脐静脉内皮细胞的 保护作用

摘要:目的　探讨芍药苷对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用。方法　体外培养HUVEC,以200 μmol/L H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤建立模型,同时以100、200、400 μmol/L的芍药苷分别干预,显微镜下观察细胞形态,用噻唑蓝（MTT）法检测HUVEC活力,微板法检测上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性及一氧化氮（NO）的含量,酶联免疫吸附法（ELISA）法检测内皮素-1（ET-1）、组织型纤溶酶原激活物（tPA）、纤溶酶原激活物抑制因子（PAI-1）的含量。结果　与模型组比较,芍药苷中、高剂量组细胞活力显著升高,LDH活性显著减低、ET-1和PAI-1含量显著减少,NO和tPA显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。结论　芍药苷对H2O2诱导的HUVEC损伤具有明显的保护作用。     

缺氧对脐静脉内皮细胞损伤及可溶性血管内皮生长因子受体-1 mRNA表达的影响

目的:探讨二氯化钴(CoCl2)诱发化学缺氧对培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells)损伤和血管内皮生长因子受体-1(soluble vascular endothelial growth factor receptor-1)mRNA表达的影响。方法:采用MTT检测缺氧时人脐静脉内皮细胞的增殖情况,检测上清中LDH量反映脐静脉内皮细胞损伤程度,RT-PCR检测sFlt-1 mRNA表达水平,观察缺氧时间与三者之间的相关关系。结果:CoCl2可诱导脐静脉细胞中sFlt-1 mRNA的表达,导致细胞损伤,降低细胞活性,三者与缺氧时间呈依赖性。结论:缺氧损伤的脐静脉内皮细胞,细胞增殖能力下降,sFlt-1 mRNA表达增加,可能促进妊娠期高血压疾病的发病。     

大豆蛋白体外酶解物中血管紧张素转化酶抑制剂活性肽研究

目的:体外模仿部分胃肠道消化酶解过程,考察大豆蛋白酶解消化能否产生血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)活性肽及其活性状况,以揭示大豆蛋白体内消化酶解与ACEI的活性关系。方法:模拟人体胃肠道消化过程,以胃蛋白酶结合胰蛋白酶,相继酶解大豆分离蛋白(SPI),经色谱分离,动态检测不同阶段ACEI肽片段及其活性大小。结果:胃蛋白酶酶解过程前20min内,酶解液ACEI活性达到最高点,随后在胰蛋白酶酶解阶段其抑制活性下降。180min后的酶解产物,其半抑制活性浓度IC50值为0.28±0.06 mg/ml。同时,未经酶解的SPI液在0.73mg/ml时无ACEI活性。SPI酶解液经各种色谱分离后的组分,其IC50值从0.13±0.03到0.93±0.08 mg/ml。低分子量和伴有疏水性基团的肽类最具ACE抑制活性。结论:体外模仿胃肠消化过程使用胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解SPI可产生不同ACEI活性的肽片段,说明人体正常摄食消化大豆蛋白可产生血管紧张素转化酶抑制剂活性肽。     

茶多酚体外对人血管内皮细胞纤溶功能的保护

目的研究茶多酚(TP)对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)纤溶功能的保护作用。方法甲基噻唑基四唑(MTT)法筛选不影响细胞增殖的TP和Hcy浓度。实验分为同型半胱氨酸(Hcy)0.5mmol/L、TP10μg/ml、Hcy0.5mmol/L+TP10μg/ml与对照共4组,用酶结合免疫吸附测定(ELISA)法检测培养细胞上清液中纤溶酶原激活物(t-PA)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)含量,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察t-PA和PAI-1 mRNA水平。结果与对照组相比,Hcy0.5mmol/L可使PAI-1含量增高6.57%,mRNA水平增高45.7%,差异均有统计学意义(P<0.01);TP与Hcy共同作用后则可使PAI-1含量及mRNA水平较Hcy组分别降低8.8%和25.9%,均有统计学差异(P<0.01)。TP可逆转Hcy引起的t-PA mRNA水平下降,使其增高38.1%(P<0.01),但各组t-PA含量均未见改变;TP可保持PAI-1/t-PA比值接近正常水平。结论TP可通过调节mRNA水平来降低PAI-1含量,使PAI-1/t-PA接近正常水平,从而维持内皮细胞的正常纤溶功能。     

氟对体外培养血管内皮细胞影响及硒干预作用研究

目的研究不同浓度氟对体外培养血管内皮细胞的影响及硒的干预作用。方法人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)置于37℃,5%CO2,饱和湿度条件下培养。在培养液中加入氟化钠,氟浓度分别为0、100、400、700、1000、2000μmol/L,同时加入硒,浓度为100 nmol/L。连续培养48 h后,收集细胞培养液与细胞。应用瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态,吖啶橙荧光染色测定细胞凋亡,四唑氮蓝(MTT)比色法检测细胞活性;检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量;检测细胞培养液诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性、细胞iNOSmRNA、eNOSmRNA表达;检测细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)含量。结果在氟浓度100~700μmol/L加硒100 nmol/L,可明显减轻氟对细胞生长的抑制,恢复细胞形态的改变;使SOD、GSH-Px活性升高(P<0.05)、MDA含量下降(P<0.05);降低iNOS活性和iNOSmRNA表达(P<0.05),升高eNOS的活性和eNOSmRNA表达(P<0.05);减少CAM-1和VCAM-1含量(P<0.05,P<0.01)。结论氟可致血管内皮细胞形态改变、功能异常。适宜剂量硒补充可通过提高抗氧化功能,调整NO代谢,抑制粘附分子异常表达等途径拮抗高氟所致的血管内皮损伤。     

染料木黄酮对ox-LDL诱导人静脉平滑肌细胞MCP-1表达的影响

目的: 研究染料木黄酮(Gen)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉血管平滑肌细胞(hUVSMC)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA和蛋白表达的影响。方法: 以hUVSMC为对象,采用逆转录聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验观察不同浓度Gen(1.0×10-5、3.0×10-5、9.0×10-5 mol/L)对ox-LDL诱导的MCP-1 mRNA和蛋白表达的影响。结果:三种浓度的Gen均能明显降低ox-LDL诱导的hUVSMC MCP-1mRNA 和蛋白的表达,且高剂量与生理浓度的17b-雌二醇有相近的作用。结论:染料木黄酮能下调ox-LDL诱导的hUVSMC MCP-1mRNA和蛋白的表达,这可能是染料木黄酮抗动脉粥样硬化的重要机制之一。