慢性应激抑郁模型大鼠强迫游泳后海马中c-fos的表达

目的 研究慢性应激对强迫游泳大鼠海马神经元c-fos表达的影响。方法 采用特异性抗体的免疫组织化学方法,在大鼠慢性应激抑郁模型基础上,观察急性强迫游泳应激后海马神经元c-fos的表达情况。结果 抑郁模型大鼠接受急性强迫游泳应激后,海马CA3区和齿状回(DG)内FOS蛋白的表达在各主要时点均比对照组降低,图像分析提示,上述两区域的FOS阳性神经元对应切面面积比明显降低(P<0.05),平均目标灰度值显著增加(P<0.05)。结论 慢性应激使大鼠在急性强迫游泳应激后海马CA3区和DG内c-fos的表达降低。     

慢性强迫游泳应激对大鼠海马神经元再生和p-CREB表达的影响

目的 研究慢性强迫游泳应激模型大鼠海马神经元再生和磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（p-CREB）的表达.方法 30只雄性SD大鼠随机分为3组：强迫游泳7 d组（S1组）、强迫游泳14 d组（S2组）和对照组.S1组和S2组分别连续强迫游泳7 d和14 d,每天5 min,水温（10±0.5）℃.采用免疫组化半定量测定大鼠海马5-溴脱氧尿苷（BrdU）和p-CREB阳性细胞表达情况.结果 免疫组化结果 显示,在整个海马结构中BrdU及p-CREB的阳性细胞主要集中于齿状回的颗粒细胞下层.与对照组比较,S1组、S2组大鼠海马齿状回BrdU和p-CREB阳性细胞数均明显减少（P＜0.01）;而与S1组比较,BrdU阳性细胞数无统计学差异（P＞0.05）,S2组p-CREB阳性细胞数进一步减少（P＜0.01）.结论 慢性强迫游泳应激可导致海马神经元再生功能障碍,其机制可能与p-CREB信号转导通路有关. 基金项目：     

阿尔茨海默病大鼠海马热休克蛋白70表达变化的研究

目的:双侧海马注射Aβ1-42建立大鼠阿尔茨海默病(AD)模型,研究其海马热休克蛋白70(HSP70)表达的变化并探讨与AD病理进程可能存在的联系。方法:48只SD大鼠随机分为模型组与生理盐水对照组,双侧海马分别注射Aβ1-42,分别于术后1天、7天、14天、21天在Y迷宫行为学测试后处死大鼠,采用RT-PCR和Western-blot方法,观察各组大鼠海马HSP70表达的变化。结果:术后14天、21天模型组学习记忆能力较对照组和术前明显减退(P<0.05)。术后模型组大鼠海马HSP70表达逐渐减少,术后7天(mRNA:0.34±0.05;蛋白:0.29±0.03)、14天(mRNA:0.32±0.06;蛋白:0.23±0.04)与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),至术后21天,模型组HSP70表达减少最为明显(mRNA:0.29±0.04;蛋白:0.11±0.03)(P<0.01)。结论:大鼠海马注射Aβ1-42导致HSP70表达减少,HSP70表达减少可能参与了AD的病理发展过程。     

慢性冷水游泳应激对大鼠海马、前脑皮层神经颗粒素含量的影响

目的探讨慢性应激对大鼠海马和前脑皮层神经颗粒素(NG)含量的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为应激组(予10℃冷水游泳应激,共2周)、装置对照组和正常对照组,每组10只。于应激前后测量三组大鼠的体质量变化情况,并记录每天应激过程中应激组和装置对照组的排便量以考察应激的强度,应激后以Westernblotting方法测定海马和前脑皮层中的NG含量(以NG含量与βActin含量的比值表示)。结果(1)应激前后,三组大鼠的体质量比较,差异均无统计学意义(P>0.05),但应激组的体质量增长相对缓慢;(2)应激第4—14天应激组的排便量多于装置对照组(P<0.01);(3)应激组和装置对照组海马的NG含量[分别为(0.66±0.13)和(0.94±0.26)]低于正常对照组[(1.93±0.53)],差异有统计学意义(P<0.01);(4)应激组前脑皮层的NG含量[(0.45±0.00)]低于装置对照组和正常对照组[分别为(2.76±1.74)和(2.87±1.63)],差异有统计学意义(P<0.01);(5)应激组海马NG含量高于前脑皮层(P<0.01);装置对照组海马NG含量低于前脑皮层(P<0.01);正常对照组海马与前脑皮层NG含量的差异无统计学意义。结论慢性应激导致海马和前脑皮层NG含量显著下降;对于时程长、程度严重、适应不良的冷水游泳应激,前脑皮层受损比海马更为严重;而对于时程长、程度微弱的装置应激,海马则比前脑皮层更为敏感。     

快速眼动睡眠剥夺后大鼠皮质及海马 HSP70表达的研究

目的探讨不同时间的快速眼动(REM)睡眠剥夺对大鼠皮质及海马各区的热休克蛋白70(HSP70)表达的影响及意义。方法60只Wistar大鼠，随机分为睡眠剥夺组(SD)、环境对照组(TC)和空白对照组(CC)。其中SD组又分为1d、3d、5d、7d4个时点。用改良多平台睡眠剥夺法进行REM睡眠剥夺，运用免疫组织化学方法观察REM睡眠剥夺后大鼠额叶、顶叶皮质及海马各区HSP70表达的分布规律及时空变化；同时结合蛋白质免疫印记(Western Blot)实验对额叶皮质及全海马HSP70蛋白作了选择性的半定量分析。结果REM睡眠剥夺后1d脑内HSP70表达一过性增强。以后逐渐下降。Western Blot实验印证了这一结果。结论REM睡眠剥夺能够引起大鼠皮质及海马神经元内HSP70表达增强，可能是一种自身稳定调节的保护机制。     

慢性应激抑郁模型大鼠海马GSK-3β的表达

目的 研究慢性应激对大鼠海马糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)表达的影响.方法 实验组大鼠通过21d的应激刺激制作抑郁动物模型,此期间对照组大鼠正常饲养.Open-field法检测行为学改变,Western blot法测定大鼠海马GSK-3β的表达.结果 慢性应激后,实验组大鼠体重、水平穿越格数、直立次数和修饰次数均显著低于对照组(P<0.01);实验组大鼠海马GSK-3β表达的整合光密度值(28413.30±2501.31)高于对照组(23149.50±3107.25),差异有统计学意义(P<0.05).结论 慢性应激使大鼠海马GSK-3β的表达上调.     

慢性应激对大鼠海马FAS蛋白表达的影响及帕罗西汀的干预作用

目的探讨慢性轻度不可预见应激对大鼠海马神经元FAS蛋白表达的影响以及抗抑郁剂（帕罗西汀）的拮抗作用。方法将24只SD雄性大鼠随机均分为正常组、慢性应激模型组、氟西汀治疗组。选用慢性轻度不可预见性应激模型,运用OPEN-FILED（旷野试验）观察大鼠的行为学的变化,TUNEL染色和免疫组织化学技术研究大鼠海马各区的细胞凋亡及FAS蛋白的表达。结果慢性应激抑郁大鼠旷野实验中水平穿越格数、竖立次数、修饰次数有减少中央格停留时间有增加。氟西汀可改善大鼠行为学变。TUNEL染色和免疫组织化学技术结果显示模型组大鼠海马细胞内的细胞凋亡数及FAS蛋白的表达量明显高于对照组组（P〈0.05）;氟西汀组大鼠海马细胞内PKA和P-CREB胞凋亡数及FAS蛋白的表达量明显低于模型组（P〈0.05）。结论慢性轻度不可预见性应激可促进大鼠海马神经元内细胞凋亡和FAS蛋白表达水平升高,氟西汀具有一定的拮抗作用。     

慢性应激抑郁大鼠海马CA1神经元突触可塑性研究

目的 探讨慢性轻度不可预见应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)抑郁模型大鼠海马CA1区神经元的突触可塑性改变.方法 将20只雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠随机等分为CUMS组和对照组,前者连续28天每天随机接受不同的应激,对照组同样条件下饲养但不给应激,至第28天进行行为测评后处死,在日立(H7500)透射电镜下测量海马CA1神经元突触界面结构参数.结果 CUMS抑郁大鼠海马CA1神经元突触活性区长度(216.64±20.19 nm)及突触后致密物厚度(42.4±5.23 nm)显著小于对照组(321.58±12.27nm,69.6±4.77 nm),差异有统计学意义(P＜0.05),突触界面曲率及宽度与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 慢性应激性抑郁大鼠存在海马CA1区神经元突触可塑性的改变.这提示抑郁症的发病机制可能与海马神经元突触可塑性相关.     

抑郁模型大鼠中枢G蛋白的研究

目的 探讨抑郁模型人鼠中枢部分脑区Gαi蛋白的表达水平及其与部分抗抑郁剂作用机制的关系.方法 50只大鼠随机分为氨米帕明组、两酞普兰组、联合(碳酸锂加西酞普兰)干预组、生理盐水组、空白对照组,前4组接受慢件非顶见性应激制备为抑郁模型大鼠,并分别给予相应的干预措施;以强迫游泳试验评价药物疗效,利用免疫组织化学方法检测大鼠前额皮质、海马CA3、纹状体Gαi蛋白的表达.结果 实施干预4周后各组大鼠强迫游泳不动时间明硅延长,与末接受应激的空白对照组比较差异有统计学意义(F=2.61,P＜0.05),联合干预组强迫游泳不动时间于用药第1周恢复正常(F=4.58,P＜0.05),西肤普兰组于第2周恢复止常(F=4.33,P＜0.05),氯米帕明组于第3周恢复正常(F=2.86,P＜0.05);干预结束后,生理盐水组前额皮质、海马CA3区Gαi灰度值明显较空白对照组减少(F=2.75,P＜0.05;F=2.71,P＜0.05),药物干预后各组与空白对照组则无明显差异(P＞0.05);干预结束时,各组大鼠第4次强迫游泳小动时间和各脑区Gαi灰度值没有相关性(r=-0.28～0.495,P均大于O.05).结论 抑郁模型大鼠前额皮质、海马CA3 Gαi表达升高,恢复前额皮质、海马CA3的Gαi的表达可能是抗抑郁剂的作用靶点之一.     

替普瑞酮诱导AD模型大鼠海马HSP70表达及其神经保护作用的研究

目的 研究替普瑞酮（Geranylgeranylacetone，GGA）诱导阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）模型大鼠海马热休克蛋白70（heat shock protein70，HSP70）表达及其对AD大鼠的神经保护作用。方法 90只SD大鼠随机分为替普瑞酮组、模型组与生理盐水组，双侧海马注射Aβ1-42。建立阿尔茨海默病大鼠模型，替普瑞酮组给予替普瑞酮800mg·kg^-1·d^-1灌胃，余两组给予等量生理盐水灌胃；术后1d、7d、14d、21d并于Y迷宫行为学测试后处死大鼠；采用western-blot方法检测各组大鼠海马HSP70表达的变化，HE染色观察海马神经元形态学改变，TUNEL法检测海马神经元凋亡。结果术后14d、21d模型组大鼠学习记忆能力较生理盐水组明显减退（P〈0．05），替普瑞酮组较模型组明显改善（P〈0．05）；术后7d、14d、21d模型组大鼠海马HSP70表达较生理盐水组逐渐减少（P〈0．05），替普瑞酮组HSP70表达明显增加（P〈0．05）；术后21d模型组大鼠海马CA1区神经元结构紊乱，细胞减少，凋亡细胞较生理盐水组明显增加（P〈0．01），替普瑞酮组凋亡细胞较模型组显著减少（P〈0．05），细胞形态学改变减轻。结论替普瑞酮能够诱导AD模型大鼠海马HSP70表达，减少大鼠海马神经元凋亡而产生神经保护作用，改善大鼠的学习记忆能力。     

不同剂量文拉法辛对抑郁模型大鼠海马区pCREB和BDNF表达的影响

目的探讨不同剂量文拉法辛对慢性应激抑郁大鼠海马区磷酸化转录因子环磷腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法用慢性不可预见应激(CUS)方法建立大鼠抑郁模型,按处理措施不同实验大鼠共分8组各10只,即正常对照组(NC)、抑郁模型组注射生理盐水0 d组(MD0)、14d组(MD1)及28 d组(MD2)、小剂量(5 mg/kg)抗抑郁剂文拉法辛治疗14 d组(LV1)及28 d组(LV2)、大剂量(10mg/kg)文拉法辛治疗14 d组(HV1)及28 d组(HV2)。用免疫组织化学和Western Blot方法检测大鼠海马区pCREB和BDNF表达的情况。结果抑郁模型组(MD0、MD1、MD2)大鼠海马区pCREB和BDNF阳性细胞数目和积分光密度(IOD)均显著低于NC组(P均<0.05),5 mg/kg文拉法辛明显增加大鼠海马区pCREB和BDNF的表达(P<0.05),但10 mg/kg文拉法辛对海马区pCREB和BDNF表达的影响无统计学意义(P>0.05)。结论文拉法辛在5 mg/kg剂量时调节海马区的神经可塑性,pCREB和BDNF可能在抑郁症发生机制中发挥重要的作用。     

Cytoskeletal alterations in rat hippocampus following chronic unpredictable mild stress and re-exposure to acute and chronic unpredictable mild stress

The intrinsic dynamic instability of the cytoskeletal microtubular system is essential for neuronal development and organization. The modulation of microtubule dynamics depends on the phosphorylation of neuronal microtubule-associated proteins (MAPs). Chronic unpredicted mild stress (CUMS) affects hippocampal structure and function in the rat. The aim of the present work was to investigate the possible alteration of cytoskeleton in the hippocampus of rats exposed to CUMS and re-exposed to CUMS to mimic depression and the recurrence of depression of human. We investigated the effects of CUMS, fluoxetine and re-exposure to CUMS on α-tubulin isoforms associated with microtubule dynamics, MAP-2 and phospho-MAP-2 in the hippocampus of rats. Our results showed that rats submitted to CUMS once showed a significant reduction in locomotion and sucrose preference which indicate a state of anhedonia. These behavioral alterations were accompanied by specific alterations in hippocampal α-tubulin isoforms and phospho-MAP-2 expression, indicating less microtubule dynamics and the possible mechanism. Treatment of fluoxetine could reverse CUMS-induced impairment. Moreover, there were more dramatically changes in behaviors, α-tubulin isoforms and phospho-MAP-2 of rats re-exposed to CUMS compared to the rats exposed to CUMS once. These findings provide evidence that rats exposed to CUMS and re-exposed to CUMS showed impairment of microtubule dynamics accompanied with the decreased level of phospho-MAP-2, providing insight into the role of cytoskeleton in the depression and recurrent of depression.     

慢性应激对大鼠学习记忆功能和海马神经细胞粘附分子表达的影响

目的观察慢性应激对大鼠学习记忆功能和海马神经细胞粘附分子（NCAM）表达的影响,探讨海马NCAM表达在慢性应激影响学习记忆机制的作用。方法20只SD大鼠随机被分为对照组（10只）和慢性应激组（10只）,后者以束缚浸水应激方式连续应激21天,三周后行水迷宫实验,并用免疫组化法测定大鼠的脑海马区NCAM的表达。结果应激组在水迷宫测试中寻找水中隐藏平台的潜伏期为（7．1±8．9）秒,对照组为（12．3±4．2）秒,差异有统计学意义;穿越平台次数：应激组为（8．4±1．1）次,对照组为（12．5±1．9）次,差异有统计学意义。应激组海马CA3区NCAM的表达：25．2％±3．6％,对照组为37．9％±5．1％,差异有统计学意义。结论慢性应激对大鼠的学习记忆功能有抑制作用。其机制可能与应激抑制海马CA3区NCAM表达有关。     

Effect of chronic stress on cholinergic transmission in rat hippocampus

We previously demonstrated that chronic stress impaired prefrontal cortex-sensitive working memory, but not reference memory. Since the hippocampal cholinergic system is also involved in these memories, we examined the effects of chronic stress on cholinergic transmission in the rat hippocampus. A microdialysis study revealed that the stress did not affect the basal acetylcholine release, but enhanced the KCl-evoked response. These results suggest that cholinergic transmission in the chronically stressed hippocampus does not contribute to working memory impairment, but it may be involved in maintenance of reference memory.     

艾司西酞普兰对慢性应激大鼠海马脑源性神经营养因子基因外显子表达及DNA甲基化的影响

目的 探讨艾司西酞普兰对成年慢性应激大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)基因不同外显子表达及DNA甲基化的影响.方法 以慢性不可预测温和应激(chronic unpredictablemild stress,CUMS)建立应激抑郁模型并予艾司西酞普兰干预.56只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为CUMS+水组、CUMS+药组、对照+水组及对照+药组,每组14只,以蔗糖水偏好试验评估大鼠抑郁样行为;模型建立第3周后分别检测上述各组大鼠海马BDNF基因第Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ外显子mRNA及BDNF总mRNA(第Ⅸ外显子)表达和第Ⅳ启动子区DNA甲基化水平.结果 (1)蔗糖水偏好试验:模型建立第2,3周,CUMS+水组[(34±21)％,(63±21)％]蔗糖水偏好均低于对照+水组[(67±15)％,(80±15)％],差异均有统计学意义(事后检验,P均＜0.05);而CUMS+药组[(58士19)％,(80±14)％]与对照+水组间的差异均无统计学意义(事后检验,P均＞0.05).(2)BDNF外显子表达:模型建立第3周,第Ⅳ外显子mRNA为BDNF总mRNA(第Ⅸ外显子)表达中的最主要者.CUMS+水组BDNF第Ⅳ及Ⅸ外显子mRNA水平[(4.64±0.65)×10-3,(5.73±0.79) ×10-3]均低于对照+水组[ (6.14±0.87)×10-3,(6.82±0.35)×10-3],差异均有统计学意义(事后检验,P均＜0.05);而CUMS+药组[(5.69±0.18)×10-3,(6.91±0.98)×10-3]与对照+水组间的差异均无统计学意义(事后检验,P均＞0.05).(3)DNA甲基化:各组大鼠海马BDNF第Ⅳ启动子区DNA均未发生甲基化.结论 艾司西酞普兰主要调节BDNF第Ⅳ外显子转录阻止CUMS成年大鼠海马的该基因表达下降,艾司西酞普兰第Ⅳ启动子区DNA甲基化无影响.     

文拉法辛对慢性应激抑郁大鼠海马区可塑性相关蛋白mRNA表达的影响

目的 观察文拉法辛对慢性应激抑郁大鼠海马区可塑性相关蛋白mRNA表达的影响.方法 用慢性不可预见应激(CUS)方法建立大鼠抑郁模型,给予2种剂量(5 mg/kg体质量和10 mg/kg体质量)的抗抑郁剂文拉法辛,用反转录-聚合酶链反应检测大鼠海马区脑源性神经营养因子(BDNF)、转录因子环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)及神经细胞黏附分子(NCAM)mRNA表达的变化.正常对照组、抑郁模型组、抑郁模型后注射生理盐水14 d组及28 d组各10只,抑郁模型后小剂量文拉法辛(5 mg/kg体质量)治疗14 d组及28 d组、抑郁模型后大剂量文拉法辛(10 mg/kg体质量)治疗14 d组及28 d组各11只.结果 抑郁模型大鼠体质量、蔗糖水消耗量及旷场实验结果均明显低于正常对照组,提示抑郁模型大鼠在第28天建立成功.慢性不可预见应激28 d后,抑郁模型大鼠海马区BDNF(0.18±0.09)、CREB(0.10±0.05)及NCAM(0.08±0.04)mRNA表达水平均明显低于正常组[吸光度比值分别为(0.41±0.12)、(0.26±0.05)及(0.24±0.08);P均＜0.05 ].5 mg/kg体质量文拉法辛明显增加海马区3种可塑性相关蛋白mRNA的表达;10 mg/kg文拉法辛轻度降低海马区3种可塑性相关蛋白mRNA的表达.结论 文拉法辛在一定剂量范围内调节海马区的神经可塑性,BDNF、CREB及NCAM在抑郁症的病因及治疗中发挥重要作用.