四对结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统基因功能的初步研究

目的探讨结核分枝杆菌毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,TA)系统中的4对基因的功能,为研究结核分枝杆菌的传播机制提供基础科学数据。方法选取结核分枝杆菌TA系统VapBC家族中4对基因,包括VapC 4个毒素基因(Rv1720c、Rv2103c、Rv2494和Rv3408)和VapB4个抗毒素基因(Rv1721c、Rv2104c、Rv2493、Rv3407),在大肠杆菌和耻垢分枝杆菌中分别构建严谨型阿拉伯糖诱导质粒体系及乙酰胺诱导穿梭质粒体系观察VapC对细菌生长的抑制作用,及其对应的VapB解除抑制作用。结果在大肠杆菌和耻垢分枝杆菌的实验结果一致,Rv2103c具有一定抑制作用和Rv2104c具有消除抑制作用,其余3对毒素-抗毒素基因未见到明显的对细菌生长的抑制和消除抑制的作用。结论成功构建了VapBC家族在大肠杆菌及耻垢分枝杆菌中的表达体系,并发现了一对TA系统基因对细菌生长的抑制和消除抑制的作用。     

qRT-PCR检测结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统mazE F的表达

目的探讨结核分枝杆菌毒素基因mazF3,6,9及抗毒素基因mazE3,6,9的表达差异。方法运用实时定量PCR检测结核分枝杆菌单耐药株20株,耐多药株20株和标准株H37Rv毒素基因mazF3,6,9及抗毒素基因mazE3,6,9的表达水平;组间基因表达水平的差异用one-way ANOVA进行统计分析。结果与对照株相比较,毒素基因mazF6,9在单耐药组(11.151 9±22.317 21;8.430 6±17.978 97)及耐多药组(4.601 6±1.290 18;6.962 7±6.929 48)表达均上调且差异有统计学意义(P0.01),mazF3基因在单耐药组及耐多药组差异无统计学意义(P0.05),抗毒素基因mazE3在单耐药(0.360 6±0.125 27)及耐多药组(0.201 6±0.165 42)中表达均下调,差异有统计学意义(P0.01),mazE6均无统计学意义,mazE9只有在耐多药组(0.398 9±0.376 79)中表达下调,差异有统计学意义,(P0.01)。结论毒素基因mazF6,9抗毒素基因mazE3,9可能参与了结核分枝杆菌的耐药形成,具体机制尚待进一步的研究。     

北京和非北京基因型结核分枝杆菌生长曲线及mazEF系统的研究

目的 研究北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达有无差异方法 测绘上述菌株及其mazEF3,6,9基因缺失和过表达菌株在标准、低氧和营养饥饿培养条件下的生长曲线。使用qRT-PCR技术检测各菌株的mazEF3, 6, 9、mazF3, 6,9和mazE3, 6,9基因mRNA表达水平;利用Western Blot技术检测MazF9 蛋白表达水平结果 在标准和低氧条件下培养的第4、6、8、10 d,营养饥饿条件下培养的第2、4、6、8 d,北京基因型菌株的OD值(细菌数量)均高于非北京基因型菌株,差异有统计学意义(P<0.05);在上述3种培养条件下,北京和非北京基因型mazEF3,6,9缺失突变株和过表达株菌数均低于其亲本株。在mRNA、蛋白水平上,与非北京基因型菌株相比,北京基因型菌株mazEF3高表达9.55倍、mazF3高表达4.86倍、mazF6高表达2.64倍、mazF9高表达5.27倍和mazE9低表达0.16倍;mazF9蛋白高表达1.62倍,差异均具有统计学意义(P<0.05)结论 北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达存在差异,mazEF系统与北京基因型菌株流行相关。     

结核分枝杆菌双组分系统MprAB的研究进展

双组分系统(two component system,TCS)是结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis,MTB)感应环境因素刺激,并作出相应反应,以适应环境变化的一种跨膜信号转导系统。MprAB作为MTB目前发现的11个完整的TCS之一,与MTB的持留性及调节应激反应等方面密切相关,本文就MTB MprAB TCS的研究进展进行了综述。     

结核分枝杆菌抗原及其在结核病诊断中的研究进展

结核病仍是当今影响人类健康、流行性最广、病死率最高的感染性疾病之一。由于细菌学检查应用有限、卡介苗(BCG)接种在我国的广泛使用,分子生物学诊断技术不但存在假阳性干扰,与细菌学检查一样也受检验标本的约束等问题,使得基于特异性抗原的结核病血清学实验室诊断成为今后的主要研究方向。本文就近年发现一些新的结核分枝杆菌菌属抗原和特异性抗原,特别是BCG删除区内抗原的生物学特性及其在结核病诊断中的研究进展进行综述。     

PhoPR双组份系统在结核分枝杆菌致病机制中的研究进展

双组份信号转导系统(Two-component signal transduction system, TCS)广泛存在于原核生物细胞内,对细胞生长、分化、代谢、毒力、持留性、致病性等方面的调控发挥着重要作用。PhoPR TCS作为双组份系统中最基本、最重要的感应外界环境变化,并作出相应反应的调控系统,能够调控结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis, MTB)更好的适应宿主微环境变化。因此PhoPR TCS作为MTB适应环境变化的重要调控系统已愈来愈受关注,关于PhoPR TCS在MTB的致病机制调控方面的研究正在成为新的热点。     

泛素样蛋白-蛋白酶体系统与结核分枝杆菌致病性的相关性研究进展

结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis, MTB)中的泛素样蛋白-蛋白酶体系统(prokaryotic ubiquitin-like protein-proteasome system, PPS),主要介导和调控MTB体内蛋白质的降解。在特定环境下,MTB中泛素样蛋白(prokaryotic ubiquitin-like protein, Pup)选择性标记特定的蛋白质,并在辅助因子的帮助下将靶蛋白送入蛋白酶体内降解,对MTB在宿主体内的生长、繁殖及致病性发挥重要调控作用。本文首先简单介绍了MTB中Pup、蛋白酶体的结构特点、作用及PPS降解靶蛋白的主要过程,接着重点介绍了PPS对MTB致病性的调控机制,及如何通过改变PPS作用来降低MTB致病性等一些最新进展,希望能够为寻找新型抗结核药物提供方向。     

非结核分枝杆菌肺病的研究进展

近年来,全球非结核分枝杆菌肺病的患病率呈上升趋势,已成为常见病,且对人类健康造成了威胁.非结核分枝杆菌(NTM)主要累及肺脏,NTM肺病缺乏特异性临床表现和体征,与其他疾病鉴别困难.很多临床医师常忽略NTM肺病的存在,常出现误诊或者漏诊.该文从NTM肺病的定义、流行病学特征及危险因素、发病机制及病理变化、诊治及预防等方...     

结核分枝杆菌中的泛素样蛋白-蛋白酶体系统研究进展

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis, Mtb）是引起结核病这一严重威胁全球人类健康的灾难性传染病的病原体。它具有很强的生存能力,可在巨噬细胞中以一种潜伏的状态长期存在;并且其细胞壁厚,抗菌药物难以透过,加之其生长缓慢,抗结核治疗不当易使其产生耐药菌株。近年来由耐药Mtb引起的耐多药结核病（multidrug-resistant TB,MDR-TB）、广泛耐药结核病（extensively drug-resistant TB,XDR-TB）,以及全耐药结核病（totally drug-resistant TB,TDR-TB）的出现,加之Mtb与艾滋病病毒双重感染疫情的上升,使得全球结核病防治工作当前面临的形势依然十分严峻。与普通的结核病的治疗相比,对这些类型的耐药结核病的治疗更加昂贵和困难,并且其治疗失败率和死亡率也明显增加。因此,寻找新的更有效的抗结核药物作用靶点对于结核病尤其是耐药结核病的治疗已刻不容缓。     

结核分枝杆菌γ-干扰素酶联免疫斑点试验在菌阴肺结核中的诊断价值

目的通过检测结核分枝杆菌γ-干扰素酶联免疫斑点试验的结果,探讨其在菌阴肺结核诊断及鉴别诊断中的意义。方法将研究对象分为菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺部肿瘤、肺炎4组。所有患者分别进行结核分枝杆菌γ-干扰素酶联免疫斑点试验、结核抗体三项测定及结核菌素试验。结果菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺部肿瘤、肺炎4组患者PPD试验阳性率为84.8%、83.3%、28.6%、33.3%;结核抗体试验的阳性率为84.8%、66.6%、28.6%、33.3%;ELISPOT试验阳性率为93.9%、93.3%、7.1%、3.3%。结论结核杆菌感染T细胞酶联免疫斑点试验在肺结核诊断,可能优于结核菌素试验及结核抗体测定,对于菌阴肺结核的诊断与鉴别诊断具有临床意义。     

耐药结核分枝杆菌PhoPR双组分系统基因表达的研究

目的比较结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）原始耐药菌株与经过含不同浓度培养基培养后的菌株中PhoPR双组分系统基因表达水平的差异,研究MTB PhoPR双组分系统与MTB耐药的相关性。方法分别在原始状态下和用低浓度含药培养基及高浓度含药培养基培养单纯耐异烟肼MTB临床分离株（INH-MTB）、单纯耐利福平的MTB临床分离株（RFP-MTB）、单纯耐链霉素MTB临床分离株（SM-MTB）、单纯耐乙胺丁醇的MTB临床分离株（EB-MTB）、耐多药MTB临床分离株（MDR）养至对数期,提取各组MTB总RNA,并进行纯度鉴定;运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR,检测各组MTB的PhoP基因和PhoR基因的表达,比较不同耐药的MTB临床分离株PhoP基因和PhoR基因表达水平的差异。结果在低浓度抗结核药物条件下培养的INH-MTB、RFP-MTB、SM-MTB和MDR组MTB与原始状态下MTB相比,PhoP基因表达分别上调2.19、2.04、1.72、2.73倍,PhoR基因分别上调1.57、2.57、1.56和2.83倍,差异有统计学意义（P〈0.05）;在高浓度抗结核药物条件下培养,INH-MTB、RFP-MTB、SMMTB、EB-MTB和MDR组MTB中的PhoP基因表达分别上调1.79、1.44、2.10、1.27和1.97倍,PhoR基因在INHMTB、RFP-MTB、SM-MTB和MDR组MTB分别上调1.05、1.91、1.76和2.13倍,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 PhoP和PhoR基因的差异表达与MTB的耐药性相关,提示PhoPR双组分系统与MTB耐药具有相关性。     

CRISPR-Cas系统在结核分枝杆菌研究中的应用进展

成簇的规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)和他们相关的蛋白(Cas)组成了一个新的分布于结核分枝杆菌(MTB)的获得性免疫防御系统。此外,CRISPR-Cas系统与MTB的毒力、耐药以及定向基因编辑方面可能存在重要的关系。笔者主要通过对CRISPR-Cas系统在MTB的免疫作用及其相关研究进展进行综述,以期为进一步研究MTB致病性和抗结核治疗提供一种新思路。     

结核分枝杆菌细胞外RNA的研究现状

结核分枝杆菌引起的结核病,已成为全球十大死因之一。对于结核病,我们迫切需要更早期的诊断和更有效的治疗方法。细胞外RNA(extracellular RNA,exRNA)在作为多种疾病生物标志物和治疗手段上,表现出巨大的潜力。为了后续探讨结核分枝杆菌exRNA在结核病诊断及治疗方面的应用,作者总结了目前结核分枝杆菌exRNA的研究现状,并讨论了结核分枝杆菌exRNA的产生机制,希望对结核分枝杆菌exRNA的探究提供有利的帮助。     

PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌持留性的调控机制研究

目的 本研究通过诱导结核分枝杆菌在低氧环境中进入持留状态,来比较分析不同时间不同低氧环境下结核分枝杆菌中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异,探讨研究PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌持留性的调控机制。方法 首先对结核分枝杆菌国际标准无毒株(H37Ra)和结核分枝杆菌国际标准强毒株(H37Rv)在不同低氧环境下进行培养,提取每个样本菌株的总RNA,并进行完整性鉴定;运用SYBR Green I实时荧光定量PCR检测每个样本菌株中PhoP基因和PhoR基因的表达水平;比较分析不同时间不同低氧环境下的结核分枝杆菌菌株PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异。结果 在不同时间点对低氧环境的结核分枝杆菌PhoP基因和PhoR基因的表达水平进行检测,结果显示:与第10 d相比,培养至第15 d时H37Rv菌株和H37Ra菌株中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平均显著上调,差异有统计学意义(P＜0.05);并且培养至第25 d时,H37Rv菌株中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平比H37Ra菌株表达均上调2.34倍,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 在不同时间点相同毒力的结核分枝杆菌的PhoPR双组分信号转导系统中PhoP基因和PhoR基因在不同低氧环境下的表达存在差异,而且在相同时间点不同毒力结核分枝杆菌的PhoPR双组分信号转导系统中PhoP基因和PhoR基因在不同低氧环境下的表达也存在差异,表明PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌的持留性具有调控作用。     

手工MGIT系统在基层结核病实验室中检测分枝杆菌的效果评价

目的对手工MGIT液体培养系统（manual mycobacteria growth indicator tube system, M-MGIT）检测分枝杆菌的效果进行评价。方法收集2012年1月至2013年2月北京市朝阳区疾病预防控制中心结核病门诊初诊患者526例,收集首次痰标本526份,分别对同份标本进行罗氏（Lowenstein-Jensen,L-J）固体培养、全自动BACTEC MGIT 960 系统培养（A-MGIT）和M-MGIT系统培养,统计学分析采用χ²检验和t检验,以P<0.05 为差异有统计学意义。结果526份标本中,3种分离培养方法共分离出261株分枝杆菌菌株,检出率为49.6%;M-MGIT法、A-MGIT法和L-J法阳性检出率分别为48.7%（256/526）、49.0%（258/526）和41.3%（217/526）。M-MGIT和A-MGIT培养法检出率均高于L-J培养法,差异有统计学意义（χ²值分别为5.84、6.45,P值均<0.05),但M-MGIT和A-MGIT培养法检出率差异无统计学意义（χ²=0.02,P>0.05）。M-MGIT法、A-MGIT法和L-J法阳性菌株平均报告时间分别为13d［（13±6）d］、12d［（12±6）d］和24d［（24±9）d］,M-MGIT和A-MGIT法阳性报告时间明显短于L-J法,差异有统计学意义（t值分别为15.84、18.32,P值均<0.05）,M-MGIT和A-MGIT之间的差异无统计学意义（t=1.89,P>0.05）。M-MGIT法、A-MGIT法和L-J法污染率分别为4.6%（24/526）、4.9%（26/526）和4.1%（43/1052）,差异无统计学意义（χ²=0.64,P>0.05）。结论M-MGIT液体培养系统能快速检测分枝杆菌,检出率高,阳性报告时间短,成本低廉,适合基层结核病实验室应用。     

Research progress of extracellular RNA of Mycobacterium tuberculosis

结核分枝杆菌引起的结核病,已成为全球十大死因之一。对于结核病,我们迫切需要更早期的诊断和更有效的治疗方法。细胞外RNA(extracellular RNA,exRNA)在作为多种疾病生物标志物和治疗手段上,表现出巨大的潜力。为了后续探讨结核分枝杆菌exRNA在结核病诊断及治疗方面的应用,作者总结了目前结核分枝杆菌exRNA的研究现状,并讨论了结核分枝杆菌exRNA的产生机制,希望对结核分枝杆菌exRNA的探究提供有利的帮助。     

结核分枝杆菌和牛分枝杆菌TaqMan荧光PCR检测的建立

目的对结核分枝杆菌和牛分枝杆菌分别建立荧光PCR快速检测方法。结核分枝杆菌荧光PCR对H37Rv标准菌株、结核分枝杆菌临床分离株的检测结果呈典型阳性反应，牛分枝杆菌荧光PCR对牛分枝杆菌标准菌株、BCG菌株的检测结果呈典型阳性反应，对其它分枝杆菌菌株以及常见微生物样品为阴性反应。两种荧光PCR对对应阳性重组质粒模板的检测灵敏度可达单个基因拷贝，对结核分枝杆菌或BCG标准菌株的检测灵敏度可达单个菌细胞。对临床样品的检测结果显示，荧光PCR对模拟感染奶样、血样的检测灵敏度可达单个菌细胞。所建立的方法，全过程包括血样、奶样、痰液等临床样品的前处理、核酸提取和荧光PCR检测，可在5～6h内完成。采用上述荧光PCR方法从临床采集的疑似病人痰液中检出多份结核分枝杆菌阳性样品。     

结核分枝杆菌总RNA提取方法的比较研究

目的探讨两种不同方法提取结核分枝杆菌总RNA,并在实验中对其进行优化。方法收集结核分枝杆菌培养物,分别用甲醇和玻璃粉裂解其细胞壁,然后加入Trizol提取结核分枝杆菌总RNA,用琼脂糖凝胶电泳检测其完整性,用Nano-drop2000检测其得率和纯度。结果玻璃粉裂解细胞壁法和甲醇裂解细胞壁法提取的结核分枝杆菌总RNA的获得率分别为6.124±1.144和13.437±1.767(P<0.01),纯度A260/A280的值分别为1.924±0.039和1.899±0.072(P>0.01)。结论玻璃粉裂解细胞壁法和甲醇裂解细胞壁法提取的结核分枝杆菌总RNA均未发生明显降解,其完整性均能满足后续实验的需要。用甲醇裂解法提取的结核分枝杆菌总RNA的获得率明显高于玻璃粉法。     

血清抗结核分支杆菌抗体对结核病的诊断价值

目的研究血清抗结核分支杆菌抗体在活动性结核病诊断和病情变化的意义。方法观察血清抗结核分支杆菌抗体在各类结核患者中的敏感性和特异性，与痰涂片及ＰＰＤ皮试的一致性，以及与疾病转归的关系。结果血清抗结核分支杆菌抗体诊断结核病的敏感性为７１．９％，特异性为９１．９％，与痰涂片阳性和ＰＰＤ皮肤试验阳性的一致率分别为８０．２％和６１．６％。抗结核分支杆菌抗体水平与病情变化有一定的相关性。结论血清抗结核分支杆菌抗体可用来诊断活动性结核病及评估结核病的转归。