传统细菌培养法与荧光PCR法分离公共场所嗜肺军团菌结果比较

目的：对公共场所环境样本（水、土壤、气溶胶）进行嗜肺军团菌监测,掌握南京市公共场所中军团菌的污染情况和菌型分布。方法：对12家商场、医院中央空调系统采集水样（冷却水、景观水、淋浴水、自来水）,土壤类样品（背景土、花卉土、风管积尘、景观土）,采用传统细菌培养法及荧光PCR法进行嗜肺军团菌的分离鉴定。结果：12家单位共采样234份（水样88份、土壤146份）,传统细菌培养法检出嗜肺军团菌9份（主要类型为Lp1型）,检出率为3.85%;而实时荧光PCR法检出47份阳性（主要类型为Lp1型）,检出率为20.08%。两者检出阳性率比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：南京市公共场所存在嗜肺军团菌污染,荧光PCR法总检出率明显高于传统细菌培养法,荧光PCR方法较培养法灵敏性较好。     

空气中嗜肺军团菌的巢式PCR和荧光定量PCR测定方法比较

目的评价巢式PCR和荧光定量PCR方法在嗜肺军团菌气溶胶检测中的应用。方法于2012年8—10月在北京、南京、苏州和深圳四城市选取38家公共场所,使用带有虚拟浓缩器的Bio-sampler生物冲击式采样器采集气溶胶样品,分别应用巢式PCR和荧光定量PCR法检测样品中的嗜肺军团菌。结果共采集气溶胶样品165份。巢式PCR法测定嗜肺军团菌的阳性率为8.5%(14/165),荧光定量PCR法测定嗜肺军团菌的阳性率为26.1%(43/165),后者高于前者,差异有统计学意义(P0.05)。结论采用荧光定量PCR法测定空气中嗜肺军团菌的灵敏度优于巢式PCR法。     

嗜肺军团菌荧光定量PCR检测

目的 建立特异、快速、敏感的TaqMan探针荧光定量PCR方法,用于检测嗜肺军团菌mip基因。方法 嗜肺军团菌及其他军团菌DNA模板来自中国疾病预防控制中心呼吸道室,嗜肺军团菌地方株及其他对照株由本中心菌种室供给。利用嗜肺军团菌mip基因保守序列设计引物和TaqMan探针,对其进行筛选,同时对荧光定量PCR反应条件和反应体系进行优化,并对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性等。结果 该方法在检测多株嗜肺军团菌时,均出现阳性信号,而对非嗜肺军团菌和其他细菌则未有阳性扩增结果出现。检测灵敏度达10个拷贝/反应,从菌株核酸的提取至检测完成仅需2 h左右,可减少常规PCR操作的污染机会。结论 TaqMan荧光定量PCR方法可定量检测嗜肺军团菌,具有特异性高、快速、敏感等特点,适于外环境污染源状况的调查及应急事件的快速定量检测。     

嗜肺军团菌荧光定量PCR检测方法的建立

目的：建立嗜肺军团菌mip基因荧光定量PCR检测方法。方法：利用Primer Express软件设计特异性引物和探针,对质粒标准品、嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他菌株进行检测,验证方法的特异性、敏感性和重复性,最后采集环境样本进行检测。结果：该方法特异性好,嗜肺军团菌呈现阳性结果,而非嗜肺军团菌及其他菌株均为阴性结果。检测灵敏度达293copies／μl;重复性较好,Ct值变异系数较小;检测的12份环境样本中5份阳性。结论：该方法快速且具有较好的特异性、敏感性、重复性,适于外环境嗜肺军团菌污染调查及应急事件的快速检测。     

公共场所相关土壤样品中嗜肺军团菌的调查

目的采用巢式PCR和荧光定量PCR方法检测公共场所相关土壤样品中嗜肺军团菌的污染状况。方法于2012年8—10月,在我国南北方2个城市共选取3种类型的公共场所16家,采集空调风管积尘、场所内花卉土和场所周边景观土;同时选取3个居民区,采集小区内的浅层地面土作为环境背景土;分别应用巢式PCR和荧光定量PCR方法检测样品中的嗜肺军团菌。结果公共场所空调积尘、场所内花卉土和周边景观土嗜肺军团菌巢式PCR的阳性检出率分别为45.8%(11/24),34.5%(10/29)和44.4%(4/9),荧光定量PCR测定嗜肺军团菌的浓度水平为1.1×103~8.1×105 copies/g。结论通过本次调查,公共场所空调积尘、场所内花卉土和周边景观土存在嗜肺军团菌污染。     

淋浴热水军团菌传统培养与实时荧光PCR技术的应用

目的利用传统的检验方法与实时荧光PCR技术相结合检测军团菌。方法按照卫生部《公共场所集中空调通风系统卫生规范附录A》(2006)的要求,于2010年10月—2011年12月,对深圳市6家宾馆酒店86件淋浴热水进行军团菌检测。采用传统细菌分离培养法进行分离鉴定,采用实时荧光PCR法加以验证。结果在86件淋浴热水中,20件检出嗜肺军团菌,嗜肺军团菌阳性率为23.3%,其中,Lp1、Lp3、Lp6血清型分别占65%,10%,25%;实时荧光PCR法鉴定出1件淋浴热水为非嗜肺的军团菌属。结论深圳市宾馆酒店淋浴热水存在军团菌的污染;传统的检验方法与荧光PCR技术的检测结果具有较高的一致性。     

快速检测空调冷却水中Lp1型嗜肺军团菌实时荧光定量PCR方法的建立

目的建立嗜肺军团菌Lp1型实时荧光定量PCR检测方法,以实现对中央空调冷却水中嗜肺军团菌Lp1型的快速检测。方法基于Lp1型嗜肺军团菌基因组ORF11区域设计特异性的引物和探针,建立体系,验证方法的灵敏度、特异性和重复性,并对模拟的中央空调冷却水水样进行检测。结果该方法的检测灵敏度达3.8×10 cfu/ml,具有良好的特异性,仅嗜肺军团菌Lp1型菌株呈阳性结果,重复检测平均Ct值变异系数。对模拟的水样进行检测,与方法的灵敏度相一致,且具有良好的重复性。结论该方法可实现对嗜肺军团菌Lp1型的快速检测。     

花卉培育土中嗜肺军团菌污染状况初步调查

目的 调查花卉培育土中嗜肺军团菌的污染状况.方法 于2009年7-9月采集公共场所室内盆栽花盆中的花卉培育土、市售袋装花卉培育土和有机肥花卉培育土.以巢式PCR方法 扩增嗜肺军团菌种Mip基因,以琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物.同时以荧光定量PCR进行检测.结果 花卉培育土中嗜肺军团菌巢式PCR检测阳性率为51.9%(27...     

中央空调系统军团菌污染状况的实验研究

[目的]了解安徽省马鞍山市商场、宾馆、办公楼、医院4类场所中央空调系统军团菌污染状况。[方法]随机采集冷却塔水、管道水、冷凝水、涂抹样并进行细菌培养和鉴定,再以PCR方法加以验证。[结果]135份样品中分离出75株军团菌,49株为嗜肺军团菌血清1型Lp1,26株为嗜肺军团菌血清10型Lp10。[结论]安徽省马鞍山市中央空调系统军团菌污染情况较为严重,需要引起重视以防军团菌病的暴发流行。     

土壤中的军团菌和嗜肺军团菌PCR检测研究

目的调查土壤中军团菌的污染状况并探讨土壤中军团菌的污染来源。方法于2009年7—9月,在江苏省南京市冷却塔水军团菌培养法阳性的公共场所集中空调冷却塔0～2m处及距离冷却塔2km的居民区分别采集20件和10件土壤样品。普通聚合酶链反应(PCR)方法扩增军团菌属5SrRNA基因,巢式PCR方法扩增嗜肺军团菌种Mip基因,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。结果冷却塔旁土壤和居民区土壤中军团菌阳性率分别是80%(16/20)和70%(7/10);嗜肺军团菌阳性率分别是55%(11/20)和0。冷却塔旁土壤中军团菌的阳性率与居民区土壤比较,差异无统计学意义(χ2=0.373,P=0.542)。结论环境土壤中存在军团菌,受集中空调冷却塔水污染的土壤中可检出嗜肺军团菌。     

某市空调清洗从业人员嗜肺军团菌抗体水平调查

目的了解集中空调清洗从业人员嗜肺军团菌的抗体水平。方法随机抽取本市2家集中空调清洗公司空调清洗从业人员44人血清,采用胶体金法对血清样本进行嗜肺军团菌抗体检测;采用微量凝集试验对嗜肺军团菌抗体阳性血清样本进行感染菌型检测。结果 44份血清样本中嗜肺军团菌阳性4份,抗体阳性率为9.1%(4/44)。4份阳性样本中,检出LP6型抗体阳性率为75.0%(3/4),LP3型抗体阳性率为25.0%(1/4)。嗜肺军团菌LP6型抗体的阳性率在年龄组、工作岗位组、工作年限组间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论本市空调清洗公司空调清洗从业人员中曾有人受嗜肺军团菌感染,空调清洗工作仍存在感染风险,应加强集中空调卫生管理和空调清洗从业人员的职业防护。     

泰州市116份公共场所集中空调冷却水嗜肺军团菌监测结果

目的 为了解泰州市公共场所集中空调冷却水中嗜肺军团菌污染状况,为军团病的防控提供数据。方法 于2013-2015年采集了泰州市公共场所集中空调冷却水116份,进行了嗜肺军团菌分离培养,同时进行嗜肺军团菌核酸检测。结果 116份冷却水样本中26份分离培养出嗜肺军团菌,检出率为22.4%,荧光PCR法嗜肺军团菌核酸检测结果31份核酸阳性,检出率为26.7%。宾馆(饭店)、商场(超市)冷却水样中分离培养检出率分别为19.7%、27.5%,荧光PCR法嗜肺军团菌核酸阳性检出率分别为22.3%、35.0%。结论 泰州公共场所的集中空调冷却水嗜肺军团菌污染情况严重,已对长期在此环境下工作人群健康构成潜在威胁。     

公共场所人群嗜肺军团菌抗体水平分析

目的了解中国上海、江苏常州地区集中空调公共场所从业人员嗜肺军团菌（Lp）的感染状况。方法于2008—2009年对7家集中空调冷却塔水嗜肺军团菌阳性的公共场所从业人员和不使用集中空调的14家公共场所从业人员进行问卷调查和血清Lp1~7 IgG检测。结果集中空调公共场所从业人员Lp 1~7 IgG 抗体活性值的中位数为10.66（6.36~17.95）U/mL,不使用集中空调的公共场所从业人员为9.50（4.98~16.35）U/mL,2者间差异有统计学意义（P<0.05）;多元逐步回归分析结果显示,在对性别、年龄、吸烟、饮酒、慢性病史等因素进行控制后,工作场所是否使用集中空调为嗜肺军团菌感染的影响因素（β’=0.075,P=0.038）。结论集中空调冷却塔水污染是导致从业人员嗜肺军团菌感染的危险因素之一,可能对该人群的健康构成潜在威胁。     

2006年-2010年广州市公共场所军团菌污染状况分析

目的:掌握广州市公共场所中嗜肺军团菌的污染情况和菌型分布,为预防空气传播疾病提供科学依据。方法:于2006年-2010年对广州市部分公共场所进行连续性监测调查,检测集中空调冷却塔水、冷凝水、洗浴用水等样品中嗜肺军团菌,对结果进行分析。结果:连续5年监测的1193件样品,在185份阳性中分离出202株嗜肺军团菌,检出率为15.51%。其中以血清型LP1型为主(45.05%),共检出LP7(20.29%)和LP14(17.32%)等10个血清型。同一份水样同时检出两种不同血清型嗜肺军团菌的占样品量的9.18%。公共交通的集中空调冷却塔水检出率(21.38%)和夏季的检出率(20.43%)最高。结论:广州存在多菌型嗜肺军团菌污染,需加强卫生监督和采取综合措施以保障公共卫生安全。     

多重PCR快速检测空调冷却塔水中军团菌

目的 传统的方法分离培养军团菌，时间长，价格贵，培养较困难，本文建立多重PCR方法，快速检测空调冷却塔水中军团菌属和嗜肺军团菌种。方法 利用军团菌属保守基因片段16SrRNA和嗜肺军团型菌巨噬细胞感染增强因子（mip）基因序列的特异性引物，对空调冷却塔水样中分离的疑似军团菌株进行特异性扩增，并且为了增强敏感性，运用递减温度PCR扩增。结果：PCR扩增的阳性结果与生化培养和血清学鉴定为军团菌的菌株结果—致。结论：与传统的分离培养方法相比，多重PCR方法检测军团菌，快速敏感，成本低，具有较好的特异性。     

环境水中嗜肺军团菌的分离培养法和巢式PCR法比较

目的应用传统分离培养法和巢式PCR法检测环境水中嗜肺军团菌污染状况,并比较两种方法的检测效果。方法于2012年7-10月,采集北京市丰台区商场和超市、宾馆和饭店、综合性医院三类场所的中央空调冷却水、自来水、淋浴水、景观水,分别使用培养法及巢式PCR法检测嗜肺军团菌。结果共检测187件水样,传统分离培养法对嗜肺军团菌的检出率为2.67%(5/187),低于巢式PCR法[19.79%(37/187)],差异有统计学意义(χ~2=27.465,P0.01)。结论北京丰台区多种环境水体存在嗜肺军团菌污染;巢式PCR法对环境水中嗜肺军团菌的灵敏度优于传统分离培养法。     

温州市部分酒店集中空调通风系统卫生监测与分析

目的:调查分析温州市部分酒店集中空调通风系统的卫生状况,为卫生管理提供依据,预防和控制由空调细菌污染所带来的呼吸道传染病的传播和流行。方法:选取20家有集中空调通风系统的单位,分别对风管表面的积尘量、真菌总数、细菌总数、β-溶血性链球菌,送风中PM10、细菌和真菌总数,以及冷凝水和冷却水中的嗜肺军团菌进行检测和评价。结果:送风空气PM10合格率为40%(8/20),细菌总数的合格率为100%(20/20),真菌总数合格率为95%(19/20),β-溶血性链球菌等致病菌均未检出;风管表面积尘量合格率为30%(6/20),细菌总数合格率为95%(19/20),真菌总数合格率为50%(10/20),空调冷凝水嗜肺军团菌污染率为5%(1/20),空调冷却水嗜肺军团菌的污染率高达45%(9/20)。结论:温州部分酒店集中空调通风系统存在一定的污染,冷却水中嗜肺军团菌污染情况较为严重,应加强集中空调系统的清洗消毒和卫生监督管理。     

大连市集中空调场所军团菌污染及人群健康状况影响调查

目的调查大连市集中空调场所冷却塔水军团菌污染状况及暴露人群中军团菌隐性感染状况,研究军团菌对人群健康的影响因素。方法2005年8～9月,随机采集大连市使用集中空调的32所公共场所集中空调冷却塔水,采用分离病原培养法进行军团菌检测;随机抽取使用集中空调场所的工作人员血样,采用微量凝集试验法,进行血清军团菌抗体检测。结果大连市公共场所集中空调冷却塔水军团菌检测的场所阳性率为53.13%,军团菌血清型分别为嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,Lp)Lp7、Lp8、Lp9和Lp10型。其中,Lp9型28株,占总菌株的77.78%,为优势菌株。人群血清学抗体检测显示,使用集中空调的公共场所人群Lp10感染率较高。结论大连市使用集中空调的场所存在军团菌污染,人群中存在军团菌隐性感染。