冷冻干燥标本溶酶体酶稳定性的研究

目的为了解决溶酶体贮积症酶学诊断的标本在常温邮寄又不因外界条件的影响而导致酶的失活这一难题，探讨冷干技术处理标本后溶酶体酶的稳定性。方法建立正常人白细胞、血浆（各４０人份）和３株成纤维细胞标本库。对上述３个标本库分别进行了２０种、１４种和７种酶酶活性测定。比较了冷干后３种不同条件模拟邮寄与常规处理标本共４组酶活性的情况。结果经Ｆ检验：白细胞和成纤维细胞库４组之间酶活性无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。血浆库４组之间酶活性有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）。经ｔ检验：白细胞和成纤维细胞库未冷干组与冷干后置室温３周组无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。血浆库未冷干组与３周组有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）。结论为溶酶体贮积症酶学诊断的白细胞和成纤维细胞标本经冷干技术处理可在常温３周保持酶的稳定性     

白细胞介素—8的抗休克作用及其抗休克机制探讨

本文报告了重组人内皮细胞衍生白细胞介素－８（ｒＥＤｈＩＬ－８）对大鼠失血性休克的作用，并对其抗休克机制作初步探讨。大鼠肌动脉快速放血至平衡动脉血压５．３２ｋＰａ，维持９０ｍｉｎ，复制晚期失血性休克模型。结果发现ｒＥＤｈＩＬ－８（２５０μｇ／ｋｇ，ｉ．ｖ．）能够明显提升晚期失血性休克大鼠的平均动脉血压，改善休克状态，提高存活率；休克晚期血浆内皮素（ＥＴ）浓度显著升高，给予ｒＥＤｈＩＬ－８后，在休克状     

白细胞介素－8的抗休克作用及其抗休克机制探讨

本文报告了重组人内皮细胞衍生白细胞介素－８（ｒＥＤｈＩＬ－８）对大鼠失血性休克的作用，并对其抗休克机制作初步探讨。大鼠股动脉快速放血至平均动脉血压５．３２ｋＰａ，维持９０ｍｉｎ，复制晚期失血性休克模型。结果发现ｒＥＤｈＩＬ－８（２５０μｇ／ｋｇ，ｉ．ｗ．）能够明显提升晚期失血性休克大鼠的平均动脉血压，改善休克状态，提高存活率，休克晚期血浆内皮素（ＥＴ）浓度显著升高，给予ｒＥＤｈＩＬ－８后，在休克状态改善的同时，血浆ＥＴ浓度也明显降低，并且显著低于休克对照组大鼠血浆ＥＴ浓度。结果表明ｒＥＤｈＩＬ－８具有很强的抗休克作用，并提示ｒＥＤｈＩＬ－８的抗休克作用与其抑制ＥＴ的产生和保护血管内皮有关。     

高血压大鼠视网膜溶酶体酶的电镜细胞化学研究

目的：探讨高血压大鼠视网膜溶体酶活性增强的原因及其在高血压大鼠视网膜病变中的作用。方法：应用电镜酶细胞化学方法对２０周龄正常京都种大鼠和同周龄的自发性高血压大鼠视网膜组织和胞嘧啶单核苷酸酶活性部位进行定位观察。结果：在正常大鼠视网膜组织中,胞嘧啶单核苷酸酶沉淀颗粒主要位于溶酶体内,色素上皮细胞含丰富的溶酶体,视细胞膜盘基部、外网层、内网层和节细胞中见到较多溶酶体,其它各层溶酶体较少,视细胞外节膜盘     

大鼠垂体前叶内分泌细胞溶酶体的电镜细胞化学研究

用溶酶体的标志酶──胞嘧啶单核苷酸酶（ＣＭＰ）细胞化学反应显示溶酶体的超微结构，并比较了各种细胞溶酶体的特点以及在高泌和低分泌状态下溶酶体的变化。结果表明，在垂体前叶内分泌细胞中，溶酶体数量丰富，结构多样，以分泌自噬的方式参与了垂体前叶激素分泌的调节。     

酚苄明对淋巴液抗休克作用的影响

目的 探讨肠淋巴液对失血性休克作用与肾上腺素能α受体的关系。方法 ４５只失血性休克大鼠分为三组;酚苄明（ＰＯＢ）组,单纯淋巴液治疗组及生理盐水对照组。ＰＯＢ组放血后以ＰＯＢ阻断α－肾上腺素能受体。     

地塞米松予治疗对失血性休克犬过氧化脂质、SOD影响及对肺的保护作用

杂种犬10只,随机分为失血性休克组(HS)和失血性休克地塞米松予治疗组(HSD)。放血至血压降至并维持于40—50mmHg。结果表明,ASD组血清过氧化脂质含量逐渐降低,失血后4.5小时测定值显著地低于HS组(P<0.05);SOD活力,HSD组逐渐增高,失血后2小时HSD组酶活力高于HS组(P<0.05)。HSD组SOD活力与血清过氧化脂质含量呈明显负相关(r=-0.795,P<0.01),HS组无相关。肺过氧化脂质含量HSD组低于HS组(P<0.05)。PaO_2,HSD组高于HS组(P<0.05)。HS组失血后3小时呈浅而快呼吸,光镜观察发现弥漫性肺不张,HSD组显著地较HS组轻。     

山莨菪碱对百草枯致大鼠急性肺损伤的治疗作用

大鼠腹腔注射百草枯（５０ｍｇ／ｋｇ）后２４ｈ，血浆和肺组织匀浆内丙二醛（ＭＤＡ）含量、血浆和支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）酸性磷酸酶（ＡＣＰ）和β－葡萄糖醛酸苷酶（β－Ｇ）活性均显著升高，肺湿／干重比、肺含血量和肺血管外水量（ＥＶＬＷ）也明显增加。组织学检查发现肺有充血、出血、局灶性肺不张和间质水肿。注射百草枯后５ｍｉｎ、６ｈ及１２ｈ腹腔内注射山莨菪碱（５０ｍｇ／ｋｇ），可明显减轻百草枯引起的肺损伤，抑制百草枯引起的ＭＤＡ含量和ＡＣＰ、β－Ｇ活性的升高。肺组织匀浆ＭＤＡ含量与ＢＡＬＦ内β－Ｇ活性之间，ＢＡＬＦ内β－Ｇ活性与ＥＴＬＷ之间均呈显著正相关。上述结果提示，脂质过氧化和溶酶体酶释放在百草枯致肺损伤中起重要作用；山莨菪碱可减轻百草枯引起的脂质过氧化反应和溶酶体酶释放，对百草枯性肺损伤有一定治疗作用。     

肠道内局部应用山莨菪碱对失血性休克的有益效应

山莨菪碱(654-2)在局部循环已阻断的小肠腔内保留30分钟,使随后复制的失血性休克过程明显减轻,同时血浆溶酶体水解酶(组织蛋白酶D)的积聚明显减少。失血性休克时血浆组织蛋白酶D主要来自肝脏和小肠,故上述结果说明654-2对小肠腔面的局部作用即可对小肠粘膜细胞起保护作用,减少溶酶体酶的释放。其作用机制很可能是稳定缺血细胞的溶酶体。     

川芎嗪注射液对家兔失血性休克的作用

为了检查川芎嗪注射液对失血性休克的作用,失血性休克家免于输回血后分别静脉输入不同剂量的川芎嗪注射液。结果表明,休克状态下和对照组相较,输入0.1ml/kg的川芎嗪注射液可改善外周血流但不降低血压,减少血管内液外移;输入0.2ml/kg的川芎嗪注射液虽使外周血流有所改善,但使血压降低。     

山莨菪碱对失血性休克大鼠肝脏溶酶体的保护作用

作者在大鼠的失血性休克模型上观察了肝脏及血浆溶酶体酶的变化以及山莨菪碱对这些变化的影响,结果如下:一、将21只大鼠(体重150～250克)分成三组,①失血组(颈动脉放血至85mmHg维持2小时),②失血 654-2组(1mg/100g体重)。③手术对照组。最初及最大放血量在组①和组②间无明显差别,但失血后的代偿时间在组②较组①明显延长(分别为115.00±9.26与85.00±32.62分,P<0.05)     

尿蛋白及晚期糖基化终产物对肾小管上皮细胞溶酶体的影响

目的:探讨慢性肾脏病(CKD)病程中所产生的病理产物尿蛋白及晚期糖基化终产物(AGE)对肾小管上皮细胞(tubular epithelial cells,TECs)溶酶体结构与功能的影响,为阻止或延缓CKD病情进展探索新思路。方法:临床上选取未经特殊治疗的微小病变肾病综合征(MCNS)患者(n=11)、糖尿病肾病(DN)患者(n=11)及活检基本正常(n=6)的肾组织标本,以溶酶体相关膜蛋白1(lysosomal-associated membrane protein 1,LAMP1)和组织蛋白酶B(cathepsin B,CB)行间接免疫荧光染色;体外以8 g/LJ尿蛋白或100 mg/L晚期糖基化终产物刺激人肾小管上皮细胞系(HK-2细胞),以LAMP1和CB行间接免疫荧光染色,检测CB及组织蛋白酶L(cathepsin L,CL)活性,并观察DQ-卵清蛋白降解情况。结果:MCNS及DN患者TECs存在溶酶体膜透化(lysosomal membrane permeabilization,LMP)现象。与正常对照组相比,尿蛋白及AGE-BSA均可致HK-2细胞LMP发生率上升,CB及CL活性降低,溶酶体对DQ-卵清蛋白的降解能力降低(P0.05)。结论:CKD病理产物尿蛋白和晚期糖基化终产物均可致TECs出现LMP现象,并使溶酶体消化功能下降,这可能是CKD肾小管间质纤维化进展的重要机制之一。     

几种寡糖对白细胞—内皮细胞粘附影响及抗休克作用探讨

我院自1995-2000年间共收治多发骨折合并休克病人43例,经过正确的早期诊断,早期治疗,均取得了优良效果。     

不同镉离子浓度诱导饲养对参环毛蚓体腔细胞溶酶体膜的影响

目的 观察不同浓度镉离子诱导饲养对参环毛蚓体腔细胞溶酶体膜的毒性效应.方法 选取健康参环毛蚓70只,按照饲养土壤镉离子浓度的不同随机分为7组,每组10只.各组土壤镉离子浓度分别为0.28(对照组)、3.28、6.28、12.28、18.28、24.28和30.28 mg/kg,采用不同浓度镉离子诱导参环毛蚓染毒并饲养14 d.诱导饲养7 d和14 d时观察参环毛蚓体腔细胞的形态变化,测定其体腔细胞溶酶体中性红保留时间.结果 高浓度镉离子诱导参环毛蚓体腔细胞溶酶体的损害明显.诱导饲养7 d,对照组、3.28、6.28、12.28、18.28、24.28和30.28 mg/kg镉离子浓度组参环毛蚓体腔细胞溶酶体中性红保留时间随着镉离子浓度的增加而逐渐缩短,分别为(71.3±2.4)、(60.5±1.6)、(55.1±2.9)、(51.9±3.6)、(46.0±2.5)、(38.8±1.8)、(34.2±2.0)min.与对照组比较,诱导饲养7 d、14d时各实验组参环毛蚓溶酶体中性红保留时间明显缩短(均P＜0.05).结论 体腔细胞溶酶体中性红保留时间可用于评价土壤中重金属镉对参环毛蚓的毒性效应.     

脑定注射β—内啡肽抗血清对失血性休克猫心血管功能的影响

给失血性休克猫侧脑室注射特异性β－内啡肽抗血清，除能引起与脑室注射纳洛酮相同的增强心肌收缩力作用外，还具有明显改善心肌舒张功能，进而促使静脉回流和增加心率，它显示了具有比纳洛酮更好的作用。     

高雪氏病的葡萄糖脑苷脂酶位点——一种溶酶体酶的分子研究

高雪氏病的葡萄糖脑苷脂酶基因及假基因定位于人染色体ｌｑ２１，结构基因为１１个外显子，长度为７．６ｋｂ，假基因位于下游１１ｋｂ，葡萄糖脂肪苷酶基因突变包括：错义突变，拼接位点突变，核苷酸插入，缺失，结构基因与假基因之间的交换。对于高雪氏病人应进行综合的分子分析，以确定其基因突变的类型。     

电镜观察培养脊髓神经元溶酶体的形态及影响因素

目的　探讨初代培养脊髓神经元中线状溶酶体 (NLY)与圆形溶酶体 (SLY)的超微结构及其影响因素。方法　应用电镜酸性磷酸酶 (ACPase)细胞化学方法和透射电镜观察初代培养脊髓神经元中NLY与SLY的超微结构。结果　培养脊髓神经元中存在ACPase阳性的NLY与SLY。诺考达唑处理后NLY明显减少 ,SLY明显增多 ,主要分布在核周。佛波醇酯 (PMA)处理后可见NLY明显增多 ,靠近质膜处比靠近核膜处多 ,在突起中NLY沿着长轴分布 ,SLY明显减少。结论　初代培养脊髓神经元中溶酶体的形态受微管解聚剂诺考达唑及微管聚合剂PMA的调控     

溶酶体相关膜蛋白2AshRNA对乳腺癌细胞株紫杉醇耐药的影响

目的制备针对人溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)的shRNA重组慢病毒,获得稳定低表达LAMP2A的MDA-MB-231乳腺癌细胞株,观察LAMP2A分子下调对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响。方法通过对LAMP2A的mRNA序列分析,设计了4条shRNA,通过基因重组技术构建pGLV-EGFP-shRNA慢病毒表达质粒,并测序鉴定。将构建的表达质粒和包装质粒共转染人胚肾HEK293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度。将构建的shRNA慢病毒表达载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株后,Western blot法检测LAMP2A表达,验证蛋白表达抑制效果。采用1 nmol/L、10 nmol/L、100nmol/L的紫杉醇处理LAMP2A低表达乳腺癌细胞株后,用MTT法观察LAMP2A低表达组和对照组之间增殖效率的差异。结果测序结果显示重组慢病毒质粒构建正确,病毒滴度达2×108TU/mL。乳腺癌稳定细胞株中LAMP2A蛋白表达量显著降低。在10 nmol/L、100 nmol/L紫杉醇处理后,LAMP2A低表达乳腺癌细胞株对紫杉醇耐药性明显降低(P0.05)。结论成功构建了人的LAMP2A基因shRNA慢病毒载体,获得了稳定低表达LAMP2A的乳腺癌细胞株,证实LAMP2A下调能够降低乳腺癌细胞株对紫杉醇的耐药性。     

山莨菪碱对失血性休克作用机制的研究

本工作研究肠道内给654-2(药物不进入全身循环)对失血性休克的发展过程及血浆溶酶体酶(组织蛋白酶)含量的影响。实验在成年雄猫(2.8-3.7kg)进行,全麻下在十二指肠中部和小肠下端各置一瘘管,并阻断肠系膜上动脉(SMA)下将含0.5mg/ml的654-2-生理盐水按25ml/kg从瘘管灌入小肠胜,30分钟后排出654-2并以50ml/mg生理盐水灌洗小肠腔以排降654-2。对照组不给药物,只给等量生理盐水。给药组使随