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1.
背景瘢痕的形成涉及多种因素,其中之一是转化生长因子β1(TGFβ1)的高表达,为达到抑制TGFβ1过度表达的目的,尝试用反义TGFβ1抑制瘢痕形成的方法,将基因治疗技术运用于临床医学.目的探讨反义TGFβ1对Ⅲ度烫伤愈合中瘢痕生成的抑制作用.设计随机对照、重复测量设计.地点和对象在上海第二医科大学生物化学教研室完成.清洁级雄性SD大鼠105只,体质量(250±20)g,购于中科院上海实验动物中心.干预SD大鼠Ⅲ度烫伤后,分3组进行处理①反义TCFβ1脱氧寡核苷酸.②反义TGFβ1重组质粒.③空白对照.分别于烫伤后1,3,5,14
dRT-PCR、免疫组化检测TGFβ1mRNA和蛋白质的表达.烫伤后5,14,21,28,60 d原位杂交检测Ⅰ型胶原mRNA的表达变化,病理检测炎性细胞浸润反应和胶原分布状况.主要观察指标①烫伤后1,3,5,14
d RT-PCR,TGFβ1mRNA和蛋白质的表达.②烫伤后5,14,21,28,60 d Ⅰ型胶原mRNA的表达变化.③病理检测炎性细胞浸润反应和胶原分布状况.结果反义ODN组和反义重组质粒组在烫伤后第1天TGFβ1mRNA表达水平与对照组相比无降低,14
d分别为0.176±0.014和0.213±0.071,表达均减少.反义作用组TGFβ1蛋白质的表达在烫伤后3周内均为低表达.原位杂交显示对照组在14
dⅠ型胶原mRNA开始表达,28 d达到高峰,随后减少,反义作用组无此现象,一直保持低表达.病理染色显示反义作用组炎性细胞浸润少,炎性反应低,胶原合成减少.结论反义TGFβ1可抑制Ⅲ度烫伤愈合中瘢痕的形成. 相似文献
2.
结缔组织生长因子反义寡核苷酸对人增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子表达及胶原合成的作用 总被引:7,自引:0,他引:7
目的:观察结缔组织生长因子反义寡核苷酸对转化生长因子β1诱导的人增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子mRNA、蛋白的表达和胶原合成的影响。
方法:实验于2005—03/12在哈尔滨医科大学免疫教研室完成。选取哈尔滨医科大学附属第二医院整形美容中心手术标本,包括正常皮肤和增生性瘢痕。将手术中切下的正常皮肤、增生性瘢痕组织在无菌条件下去除表皮后采用组织块贴壁法培养于含体积分数为0.1的胎牛血清的RPM11640培养液中,置37℃,体积分数为0.05的CO2条件下原代培养。经2.5g/L胰蛋白酶消化传代,传代至3~5代时进行实验。实验分4组:①正常皮肤成纤维细胞组。②增生性瘢痕成纤维细胞组。③增生性瘢痕成纤维细胞+5,0mg/L转化生长因子β1组(简称转化生长因子β1组)。④增生性瘢痕成纤维细胞+5.0mg/L转化生长因子β1+结缔组织生长因子反义寡核苷酸组(简称反义寡核苷酸组)。用5.0mg/L转化生长因子β1刺激增生性瘢痕成纤维细胞后,以脂质体介导方法将结缔组织生长因子反义寡核苷酸转染增生性瘢痕成纤维细胞中,用反转录一聚合酶链反应方法和Western Blot方法检测细胞中结缔组织生长因子mRNA和蛋白质的表达;采用^3H-脯氨酸掺入法检测细胞的胶原合成量。
结果:①反转录-聚合酶链反应结果:结缔组织生长因子mRNA在正常皮肤成纤维细胞中无表达,在增生性瘢痕成纤维细胞中表达增强,转化生长因子β1刺激后表达量0.64&;#177;0.32明显高于增生性瘢痕成纤维细胞0.31&;#177;0.14,差异显著(P〈0.01);反义寡核苷酸组可以大部分抑制结缔组织生长因子mRNA的表达,表达量0.12&;#177;0.62明显低于增生性瘢痕成纤维细胞组和转化生长因子β1组,差异显著(P〈0.01)。②Western印迹结果:蛋白水平趋势与mRNA水平相一致。结缔组织生长因子蛋白在正常皮肤成纤维细胞中无表达,在增生性瘢痕成纤维细胞中表达增强84.63&;#177;11.49,转化生长因子β1刺激后表达量102.89&;#177;14.35明显高于增生性瘢痕成纤维细胞组,差异显著(P〈0.01);反义寡核苷酸组可以大部分抑制转化生长因子β1的作用,结缔组织生长因子蛋白表达量41.75&;#177;10.56低于增生性瘢痕成纤维细胞组和转化生长因子β1组(P〈0.01)。③结缔组织生长因子反义寡核苷酸对增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的作用:增生性瘢痕成纤维细胞组、转化生长因子β1组、反义寡核苷酸组的^3H-脯氨酸掺入率分别为5381&;#177;185.8273&;#177;357.2475&;#177;859,转化生长因子β1可以显著增加成纤维细胞胶原的合成(P〈0.01);而结缔组织生长因子反义寡核苷酸对转化生长因子β1刺激后的成纤维细胞胶原合成有明显抑制作用,差异显著(P〈0.01)。
结论:结缔组织生长因子反义寡核苷酸能够抑制转化生长因子β1引起的结缔组织生长因子mRNA、蛋白质表达的增高和胶原合成的增多,表明阻断结缔组织生长因子可能是延缓瘢痕纤维化的有效手段。 相似文献
3.
目的:在细胞及动物体内证实前期已合成,并证实其活性的、针对Ⅰ型和Ⅲ型前胶原基因的核酶的有效性。
方法:实验于2004—01/08在中山大学附属第一医院烧伤科、中山大学附属第一医院外科实验室、广州市红十字会医院创伤研究所、中山大学医学院动物实验中心完成。选取80只SPF级4~6周龄裸鼠。体质量15-25g。随机分为注射Ⅰ型前胶原核酶A组、注射Ⅰ型前胶原核酶B组、注射Ⅲ型前胶原核酶C组、注射Ⅲ型前胶原核酶D组、注射Ⅲ型前胶原核酶E组、注射Ⅲ型前胶原核酶F组、对照组G组和空白对照组H组,每组10只。注射Ⅰ型及Ⅲ型前胶原核酶A—F组,7d。对照组G组注射生理盐水7d。应用苦味酸一天狼猩红染色偏振光法,观察分析各组胶原相对含量及分布的改变。同期选取增生性瘢痕来自烧伤愈后、瘢痕增生半年之患者手术切除标本。分为甲、乙、丙、丁、戊、己六种浓度组及空白对照组庚组。脂质体包裹核酶转染实验组培养细胞,测定培养上清羟脯氨酸含量、反转录多聚链反应法测量细胞内Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA含量。
结果:①细胞上清羟脯氨酸含量:甲-已组明显低于庚组(2.33&;#177;0.04。2.32&;#177;0.04,2.42&;#177;0.04,2.41&;#177;0.05。2.20&;#177;0.03。2.12&;#177;0.04。2.85&;#177;0.07)μg/L。P〈0.01。②Ⅰ型胶原mRNA表达甲-已组明显低于庚组:(0.796&;#177;0.034。0.834&;#177;0.017。0.860&;#177;0.026,0.838&;#177;0.023。0.842&;#177;0.031。0.858&;#177;0.037.0.940&;#177;0.037)μg/L,P〈0.05。③Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达:甲-已组明显低于庚组:(1.496&;#177;0.039,1.668&;#177;0.052。1.154&;#177;0.093。1.078&;#177;0.093。1.270&;#177;0.060,1.182&;#177;0.111,2.001&;#177;0.099)μg/L。④应用核酶前后瘢痕体积变化:A组、G组、H组实验前明显高于实验后[(28.31&;#177;2.10,25.60&;#177;1.20)(33.65&;#177;1.76。32.71&;#177;3.92)(29.53&;#177;2.50。28.80&;#177;2.71)mm^3]。
结论:所合成及扩增、转染的核酶可抑制人瘢痕成纤维细胞合成胶原,并能有效减少人增生性瘢痕裸鼠动物模型中瘢痕的胶原含量。 相似文献
4.
转化生长因子-β3对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用 总被引:2,自引:0,他引:2
背景:哺乳类动物有3种TGF-β异构体即TGF-β1,β2,β3,这3种异构体各自具有独特而不同的生物学作用,TGF-β1是明显的促瘢痕形成因子,而TGF-β3可减少TGF-β1,β2的产生,从而减少细胞外基质(ECM)合成,因此,TGF-β3有可能是人体内天然的抗瘢痕形成因子。目的:通过外源性TGF-β3对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)生长增殖及Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达的影响,了解其生物学行为,为临床治疗提供理论依据。设计:随机对照实验研究。地点和对象:汕头大学医学院第二附属医院整形烧伤外科完成,对象为新鲜无菌增生性瘢痕组织,来源于本科收治及门诊手术的增生性瘢痕患者6例,男3例,女3例;年龄5~45岁。干预:6例增生性瘢痕成纤维细胞体外培养,分为4组,实验组又分为5,10,50mg/L组分别加TGF-β3 5,10及50mg/L,对照组加入FBM 1.5mL,采用MTT比色法测定TGF-β3对HSFB增殖活性的影响,^3H-脯氨酸掺入法测定其胶原合成,免疫组化检测Ⅰ,Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达情况。主要观察指标:TGF-β3,对HSFB体外增殖,HSFB I,Ⅲ型胶原及TGF-β1蛋白表达的影响,TGF-β3作用后HSFB胶原合成情况。结果:转化生长因子胁可抑制HSFB细胞增殖,作用120h后实验组细胞密度分别为(6.34&;#177;0.51),(6.01&;#177;0.38),(5.24&;#177;0.65)&;#215;10^5/瓶,明显低于对照组(10.69&;#177;0.76)&;#215;10^5/瓶(F=102.432~163.024.P&;lt;0.01);转化生长因子β3可抑制胶原蛋白合成,实验组(10,50mg/L组)脯氨酸含量分别为(164.01&;#177;70.27),(151.02&;#177;49.85)min^-1明显低于对照组9231.56&;#177;67.83)min^-1(q=32.124,31.021,P&;lt;0.01);下调TGFβ1蛋白及Ⅰ型胶原蛋白表达;而对Ⅲ型胶原影响较小。结论:TGF-β1可抑制HSFB细胞增殖,下调TGF-β1蛋白表达,减少胶原合成,显示其具有抗组织纤维化的作用,具有临床应用价值。 相似文献
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背景:转化生长因子β是一族多功能的蛋白多肽,在骨折愈合过程中起作用的主要为转化生长因子β1。不同的内固定材料对骨折愈合的影响不同,其影响程度如何是判定内固定材料优劣的一个重要评定指标。目的:通过不同内固定材料固定后骨折愈合不同阶段转化生长因子β1mRNA的表达,了解转化生长因子β1mRNA的细胞内定位,借此探讨不同内固定材料对骨折愈合过程中骨折局部转化生长因子β1mRNA的表达的影响。设计:随机对照观察。单位:解放军第二军医大学长海医院骨科、病理科。材料:实验于2000-03/2001-07在第二军医大学实验动物中心和骨科实验室完成。选用新西兰兔42只,所有动物均随机抽取,雌雄不限,按内固定物分成两组:矩形髓内钉组;不锈钢接骨板组,每组动物21只。方法:以矩形髓内钉与不锈钢接骨板固定兔胫骨制作骨折内固定模型,骨折内固定部位为兔左胫腓骨交界下2mm处。手术前后用市售动物颗粒饲料分笼喂养,饮用自来水,自由活动,不用外固定。每组动物于内固定手术后1.3.7,14,21,28d分别处死3只,取骨折端骨痂及周围组织标本,进行组织切片和原位杂交处理。主要观察指标:观测并记录组织切片中不同细胞内的转化生长因子β1mRNA染色阳性强度和阳性面积比,显示兔骨折愈合过程中骨痂中转化生长因子β1mRNA的分布和含量。结果:共用实验动物42只,腹泻死亡3只,伤口局部感染骨外露3只,共6只未纳入结果分析,矩形髓内钉组和不锈钢接骨板组各3只,进入结果分析动物数36只。①在骨折早期,矩形髓内钉组和不锈钢接骨板组局部的细胞和间质中转化生长因子β1mRNA均无表达;7d后间充质细胞、成骨细胞、成软骨细胞中有转化生长因子β1mRNA阳性表达。②矩形髓内钉组和不锈钢接骨板组转化生长因子β1mRNA阳性染色强度、阳性面积比及阳性指数术后14d最高(12.36&;#177;0.58,0.19&;#177;0.05,2.35&;#177;0.20:10.24&;#177;0.65,0.13&;#177;0.03,1.33&;#177;0.10),28d最低(4.24&;#177;0.57,0.06&;#177;0.02,0.25&;#177;0.08:3.31&;#177;0.27,0.03&;#177;0.01,010&;#177;0.02),同期比较除术后7d阳性面积比外,其余矩形髓内钉组均高于不锈钢接骨板组,组问差异显著(P〈0.05,P〈0.01)。结论:矩形髓内钉较不锈钢接骨板更能促进细胞分泌转化生长因子β1,有利于骨折愈合。 相似文献
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背景:异种骨移植免疫排斥反应是影响预后的主要问题。然而,对异种骨移植中免疫因子表达和调节的认识尚少。白细胞介素1,白细胞介素6和肿瘤坏死因子α是重要的免疫因子.与移植后排斥反应密切相关。目的:观察异种骨移植局部白细胞介素1、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白质的表达,并探索转化生长因子β对这些免疫因子的调节作用。设计:随机对照实验。单位:解放军第四军医大学西京医院骨科研究所。对象:雄性βαlb/c小鼠72只,体质量20~25g,随机分为3组,复合松质骨载体组,单纯松质骨载体组和空白对照组,每组24只。方法:实验于2003—06/2004—06在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所完成。复合松质骨载体组小鼠左侧股部肌间隙植入复合转化生长因子β的松质骨载体;单纯松质骨载体组植入单纯松质骨载体;空白对照组仅行手术,不植入材料。术后4,7,14和21d观察各组小鼠植骨或手术区周围组织中增殖细胞记数;应用原位杂交和免疫组化技术检测植骨局部多种免疫因子的表达。主要观察指标:各组小鼠移植骨局部组织学观察及细胞密度测定;移植骨局部白细胞介素1α,白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白质的表达。结果:①各组小鼠移植骨局部组织学观察及细胞密度测定:7d时,复合松质骨骨粒组较单纯牛松质骨骨粒组增殖组织中细胞密度明显高[(470.63&;#177;132.89),(311.46&;#177;93.69)个/视野,P<0.01];但14,21d时两组间则无明显差异。②各组小鼠移植骨局部白细胞介素1α,白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白质的表达:异种骨移植后的7,14d,复合了转化生长因子β的异种骨移植局部白细胞介素1α和白细胞介素6蛋白质表达分别较单纯异种骨低(7d白细胞介素1α:42.55&;#177;9.65比67.95&;#177;17.82,白细胞介素6:48.26&;#177;11.17比77.21&;#177;15.16;14d白细胞介素1αmRNA:84.77&;#177;7.42比112.94&;#177;7.02,白细胞介素6:78.10&;#177;17.22比121.18&;#177;15.44,P〈0.01),但对肿瘤坏死因子α而言,则无明显差异(P〉0.05)。结论:在异种骨移植局部,多种细胞可以表达白细胞介素1α,白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA和蛋白质,且这种表达受到转化生长因子β的调节。提示了转化生长因子β调节异种骨移植免疫的一种方式。 相似文献
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活血化瘀汤对大鼠骨折愈合中转化生长因子β1 mRNA与蛋白表达及软骨内成骨的作用 总被引:5,自引:0,他引:5
目的:观察活血化瘀汤对实验性大鼠骨折愈合过程中转化生长因子β1表达的影响。方法:实验于2005—04/12在福建中医学院骨伤研究所实验室完成。选择健康3个月龄雄性SD大鼠60只,建立闭合骨折髓内固定动物模型后随机数字表法分为活血化瘀汤组(n=30)、生理盐水组(n=30)。每组叉分为骨折后3,5,7,14,21d5个时相点,每个时相点6只。在大鼠麻醉苏醒后开始灌服活血化瘀汤(由蒲黄9g,姜黄4.5g,当归9g,泽兰6g.茜草9g,三七6g,红花1.5g,莪术6g,生地9g,赤芍9g,紫苏9g,甘草3g等组成,由福建中医学院屏山制药厂协作制备)15mL/(kg&;#183;d)(按10倍成人剂量换算),分两次,生理盐水组在相同条件下灌服等体积生理盐水,分别于骨折后3,5,7,14,21d取骨折区组织,通过反转录-聚合酶链反应,酶联免疫吸附法进行分析转化生长因子B1的表达。结果:纳入大鼠60只,均进入结果分析。①转化生长因子β1的表达在骨折后第3天有一个初期峰值;在第7天会出现一个低谷;而在骨折后第2周,转化生长因子β1的表达会再次升高,达到第2个峰值,也是最高表达期;其后的表达逐渐降低。②骨折后3,5,7,14,21d活血化瘀汤组转化生长因子β1mRNA的表达高于生理盐水组(分别为0.437&;#177;0.073,0.292&;#177;0.103;0.368&;#177;0.099,0.245&;#177;0.052;0.360&;#177;0.082,0.281&;#177;0.076;0.783&;#177;0.289,0.461&;#177;0.163;0.526&;#177;0.12,0.453&;#177;0.085,P〈0.01)。③骨折后3,5,7,14,21d活血化瘀汤组转化生长因子β1蛋白的表达高于生理盐水组(分别为36,033&;#177;2.244,32.879&;#177;3.423;34.442&;#177;2,197,32.691&;#177;1.243;33.383&;#177;1,688,32.073&;#177;1.109;40.918&;#177;4.102,38,287&;#177;2.694;34.688&;#177;3,746,33.381&;#177;0.499,P〈0.01)。绪论:活血化瘀汤使转化生长因子β1的表达增强,促进了骨折愈合。 相似文献
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背景:目前认为转化生长因子β与瘢痕形成关系最密切,是关键的活性分子,可影响瘢痕形成的各个阶段。抑制转化生长因子β的生物学作用.在理论上可减少瘢痕的形成。
目的:探讨反义转化生长因子β1脱氧寡核苷酸对增生性瘢痕动物模型伤口愈合中瘢痕生成的抑制作用,观察使用反义转化生长因子β1的有效给药途径。
设计:自身对照.动物实验。
单位:解放军兰州军区总医院安宁分院整形科。
材料:实验于2002—09/2003—07在兰州医学院解剖实验室完成。选择日本大耳白兔20只。
方法:在每只兔耳腹侧面沿长轴避开可见血管,作两个1.0cm&;#215;2.5cm的长方形全层皮肤缺损创面,创面间隔1.5cm,深达软骨表面,共80个,建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型。待兔耳创面上皮化后(平均20d),在每只白兔左耳每个创面的上皮下用微量注射器局部封闭注射反义转化生长因子β1脱氧寡核苷酸5μL(1g/L),为转化生长因子β1组;右耳每个创面下注射生理盐水5μL,为生理盐水对照组。注药后3,7,11,20.30d5个时相点切取瘢痕组织,每个时相点4只。采用苏木精-伊红染色、Masson染色及转化生长因子β1mRNA、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的原位杂交组织化学染色。
主要观察指标:苏木精-伊红染色、Masson染色和原位杂交组织化学染色结果。
结果:纳入动物20只,均进入结果分析。①苏木精-伊红染色显示各组中的右耳增生性瘢痕内均可见有炎性细胞浸润并有明显的白细胞浸润带,而左耳的增生性瘢痕经反义转化生长因子β1干预后虽也有炎性细胞浸润,但未见白细胞浸润带。②Masson染色见右侧耳的增生性瘢痕从伤后3周起均可见蓝染较深的胶原纤维,至第7周时仍可见蓝染的胶原纤维,外形粗大(宽度约为8~10μm),排列杂乱无章。而左耳经反义转化生长因子β1干预的兔耳增生性瘢痕在伤后3周时,虽然亦可见蓝染的胶原纤维,但到第6,7周时胶原纤维蓝染变浅并且纤细(宽度为3~5μm),排列整齐有序。③原位杂交显示转化生长因子β1mRNA、Ⅰ型胶原mRNA、Ⅲ型胶原mRNA阳性细胞表达率明显降低。
结论:反义转化生长因子β1能抑制兔耳增生性瘢痕的增殖过程,使瘢痕组织纤维化程度明显减轻。局部注射裸DNA治疗瘢痕的给药途径是可行的。 相似文献
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鹿角方逆转压力负荷增加大鼠左心室重构的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
背景:鹿角方由鹿角、补骨脂、淫羊藿、山萸肉、女贞子、沉香等纯中药组成。此方具有正性肌力、扩张血管和利尿等作用。
目的:探讨鹿角方逆转压力负荷增加对大鼠左心室重构的作用。
设计:随机对照实验。
单位:解放军南京军区南京总医院中西医结合科,上海中医药大学附属曙光医院,河北医科大学博士后流动站。
材料:实验于1998—01/12在上海中医药大学实验室完成。选取Wistar雄性大鼠153只。共做5次试验,只有第4次试验选择9只大鼠。其余均选取36只大鼠。方法:将每次试验所选取的36只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组,模型组和鹿角方组。将所有大鼠建成压力负荷增加的左室重构模型。模型组造模4周后,双蒸水灌胃15mL/kg,1次/d,共4周;假手术组只分离腹主动脉。不用银夹狭窄。4周后同模型组;鹿角方组造模4同后,以鹿角方灌胃15mL/kg,1次/d,共4周。观察左心室质量指数,采用免疫组织化学染色法观察心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变,采用RT-PCR方法观察心肌Ⅰ型胶原mRNA的表达,并采用放射免疫分析方法检测血浆和心肌血管紧张素Ⅱ和血清醛固酮水平。主要观察指标:观察左心室质量指数,心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变、心肌Ⅰ型胶原mRNA的表达。检测血浆和心肌血管紧张索Ⅱ和血清醛固酮水平。
结果:153只大鼠均进入结果分析。在检测Ⅰ型胶原的积分吸光度试验中假手术组和鹿角方组各死亡3只,模型组死亡1只.最终纳入29只大鼠。在检测Ⅲ型胶原的积分吸光度的实验中,假手术组和鹿角方组均死亡3只,模型组又死亡6只,最终纳入26只大鼠。①左心室质量指数比较:假手术组和鹿角方组明显低于模型组[(2.24&;#177;0.12)/1000,(2.60&;#177;0.44)/1000.(3.15&;#177;0.47)/1000,t=2.959-6.499,P〈0.05]。②Ⅰ型胶原积分吸光度的改变:鹿角方组和假手术组明显低于模型组[(0.56&;#177;0.23,0.57&;#177;0.19,2.79&;#177;2.00),t=0.661-3.964,P〈0.01]。③Ⅲ型胶原积分吸光度的改变:假手术组和鹿角方组明显低于模型组[(0.48&;#177;0.10,0.55&;#177;0.09,0.84&;#177;0.27),t=2.898-3.560,P〈0.01]。④Ⅰ型胶原mRNA表达:鹿角方组和假手术组明显低于模型组[(58.0&;#177;36.0)%,(79.1&;#177;18.6)%,(139.0&;#177;29.2)%,t=3.027,P〈0.05]。⑤心肌血管紧张素Ⅱ改变:鹿角方组和假手术组明显低于模型组[(2.49&;#177;0.57,2.64&;#177;0.57,3.96&;#177;0.77)pg/ml。t=4.773-5.315,P〈0。001]。⑥血清醛固酮改变:鹿角方组和假手术组明显低于模型组[(501.6&;#177;94.6,476.6&;#177;85.7,647.8&;#177;72.2)ng/mL,t=4.256-5.292。P〈0.001]。
结论:Ⅰ型和Ⅲ型胶原的积分吸光度、Ⅰ型胶原mRNA的表达、心肌血管紧张素Ⅱ及血清醛固酮这些指标,均与左心室质量指数的改变一致。补肾为主的中药复方鹿角方具有逆转充血性心力衰竭心肌纤维化的作用及逆转左心室重构的作用。 相似文献
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心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑中基质金属蛋白酶的作用及氯沙坦干预的效果 总被引:2,自引:3,他引:2
背景:细胞外基质中的纤维性胶原过度沉积是心肌肥厚发展过程中的重要特征。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及其生理性抑制剂(tissue inhibitor of meralloproteinases,TIMPs)是调节细胞外基质的重要酶类,转化生长因子β1(transforming growth factor-β1)能促进组织纤维化。目的:探讨MMP-9及其生理性抑制剂TIMP-l和TGF-β1在心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑中的作用及氯沙坦干预的效果。设计:随机对照实验研究。地点、材料和干预:南京医科大学动物实验中心雄性SD大鼠随机用随机数字表法分为3组:对照组、去甲肾上腺素组[1.06mg/(kg&;#183;d)&;#215;15d]、去甲肾上腺素+氯沙坦组[10mg/(kg.d)&;#215;15d]。去甲肾上腺素腹腔注射,2次/d。连续15d,建立心肌肥厚的模型。氯沙坦灌胃给药。主要观察指标:腹腔注射生理盐水、去甲肾上腺素、氯沙坦灌胃给药大鼠超声心动图检查,病理检查,心肌胶原蛋白表达,MMP-9,TIMP-1和TGF-β1mRNA和蛋白表达情况的对比结果。结果:大鼠腹腔注射去甲肾上腺素后发生左心室肥厚及纤维化,胶原的含量及MMP-9(82.9&;#177;18.3),TIMP-1(43.8&;#177;7.3)和TGF-β1(49.4&;#177;7.9),mRNA的表达显著高于健康对照组。氯沙坦能降低室间隔的厚度,减少左室心肌中总体胶原、I型、Ⅲ型胶原的合成及MMP-9,TGF-β1的表达。结论:MMP-9,TIMP-1和TGF-β1与去甲肾上腺素诱导的心肌细胞外基质重塑有关。氯沙坦能有效的防治心肌肥厚及细胞外基质重塑,这一效应与其降低心肌中高表达的MMP-9和TGF-β1有关。 相似文献
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目的 观察激素对瘢痕组织胶原合成的改变。探讨其对瘢痕增生的抑制作用。方法 将临床12例患者的增生性瘢痕分别移植到12只裸鼠的皮下,其中6只接受激素治疗,其他6只用生理盐水对照,移植物内注射^3H-脯氨酸并于l0,15,20d后取标本。结果 治疗组的胶原合成部分的脉冲数在第l0,15,20天为(10306&;#177;l013),(8106&;#177;2010)。(7716&;#177;l836)c/(min&;#183;g),均明显低于对照组。而且治疗组胶原合成的脉冲数在第l0,15,20天为(4073&;#177;398),(3174&;#177;319),(2681&;#177;306)c/(min&;#183;g)。结论 激素能够减少瘢痕组织的胶原合成,从而可以有效地抑制瘢痕增生。 相似文献
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人重组骨形态发生蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子在诱导成骨中的调节作用及其机制 总被引:2,自引:1,他引:2
目的:采用原位杂交的方法检测Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA的变化及其变化规律,对骨组织中的碱性磷酸酶(ALP)活性进行测定,以分析人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在诱导成骨中的调节作用及其调节机制。方法:BALB/c小鼠110只采用掷硬币方法随机分为2组,每组55只,设立rhBMP-2/bFGF为实验组,rhBMP-2为对照组,分别于术后3~21d共8个时间点取材,采用原位杂交方法对新生骨组织中的Ⅰ,Ⅱ型胶原mRNA进行检测;对ALP活性进行定量分析,观察2组在诱导成骨中Ⅰ,Ⅱ型胶原mRNA及ALP的表达情况。结果:①Ⅱ-型胶原mRNA的出现是和成软骨、软骨细胞的出现相伴随的。②作为成骨细胞成熟标志物的Ⅰ型胶原mRNA、ALP在软骨形成期即有表达,但是随着成骨细胞的出现,骨组织的形成Ⅰ型胶原mRNA仍表现为高表达,而ALP的表达则呈下降趋势。③实验组Ⅰ,Ⅱ型胶原mRNA及ALP的表达早于对照组,在术后7,14,21d,实验组ALP分别为(63.85&;#177;6.87),(27.12&;#177;4.23),(8.93&;#177;1,49)IU/g;对照组ALP分另U为(27.26&;#177;4.13),(70.65&;#177;5.92),(39.46&;#177;4.72)IU/g(t=12.40,20.85,17.52,P&;lt;0.01)。结论:bFGF增强了rhBMP-2诱导成骨中Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA及ALP的表达。 相似文献
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目的:观察有一定促进浅Ⅱ度、深Ⅱ度创面愈合作用的解毒烧伤膏在烫伤创面愈合过程中对转化生长因子β、微血管生成和胶原合成的影响。探讨其可能的作用途径。
方法:实验于2004-09/2004-12在中山大学动物中心和中山大学附属第一医院外科实验室完成。取10只小香猪,制作深Ⅱ度烫伤创面模型,随机分为解毒烧伤膏观察组和空白对照组,记录创面愈合时间;分别在伤后第3、5、7、9天取材,采用免疫组织化学链菌素生物素一过氧化物酶标记物法法检测转化生长因子13的表达,在400倍光镜下随机选取5个视野,每个视野观察100个细胞,以胞浆或(和)胞核着棕色者为阳性染色,计数阳性细胞数。以CD34-抗免疫组织化学标记血管内皮细胞,先后在低倍镜(10&;#215;10)下全面观察切片,以确定组织血管密度最高处,再在高倍镜(10&;#215;40)下计数并记录5个视野的微血管数,取其平均值。记数微血管密度。羟脯氨酸法检测每克组织胶原含量。比较实验组与对照组创面愈合时间,转化生长因子β的阳性表达率,创面微血管密度计数及胶原含量测定。结果:纳入动物10其,全部进入结果分析,无脱失值。①观察组烫伤愈合时间明显早于对照组[(11.0&;#177;1.5),(14.0&;#177;2.5)d,t=4.08,P〈0.001]。②转化生长因子β表达主要在炎症细胞和毛囊上皮细胞,伤后第3、5天,观察组转化生长因子β的阳性表达率明显高于对照组[(25.0&;#177;7.5)%,(11.0&;#177;4.6)%;(45.7&;#177;8.3)%,(24.6&;#177;7.4)%,t=3.61,6.34,P〈0.01];观察组转化生长因子β表达的高峰早于且强于对.照组。④第5天微血管密度记数观察组显著高于对照组[(40.6&;#177;2.4),(32.6&;#177;2.4)个,t=2.69,P(0.05]。④观察组第7、9天胶原含量明显高于对照组[(24.5&;#177;0.72),(1.97&;#177;0.15)g/mg;(3.51&;#177;0.46),(2.85&;#177;0.13)g/mg;t=3.61,6.79,P〈0.01];
结论:解毒烧伤膏能促进烫伤刨面的愈合,可能与早期提高组织中转化生长因子β的表达、促进血管增生和后期胶原的合成有关。 相似文献
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目的:观察大鼠脊髓损伤后转化生长因子β1 mRNA表达的变化,及甲基强的松龙对其影响。方法:实验于2003-06/2004—03在上海市药物工业研究院与解放军第二军医大学长海医院病理实验室完成。选择雄性SD大鼠45只,随机分为空白对照组5只、损伤对照组(6,24h,3,7d)、甲基强的松龙组(6,24h,3,7d),每时间点5只。制作脊髓损伤模型后,损伤对照组及空白对照组给予等渗盐水,甲基强的松龙组给予甲基强的松龙(30mg/kg),分别于伤后6,24h,3,7d切取损伤及临近部位脊髓组织,运用原位杂交技术,二氨基联苯胺显色,苏木精轻度复染。采用光学显微镜进行观察,高倍镜下(200倍),随机选择5个高表达视野,记数每个高倍镜视野下阳性细胞的百分比(阳性细胞数/细胞总数)。细胞胞浆内呈棕黄色为转化生长因子β1 mRNA。观察甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤转化生长因子β1 mRNA表达的影响。结果:纳入动物45只,均进入结果分析。①脊髓损伤后甲基强的松龙组转化生长因子β1 mRNA的表达阳性细胞数与损伤对照组相比明显降低[损伤对照组伤后6,24h,3,7d分别为(8.91&;#177;0.82)%,(28.27&;#177;1.10)%,(42.09&;#177;0.93)%,(45.24&;#177;0.85)%,甲基强的松龙组伤后6,24h,3,7d分别为(7.93&;#177;0.40)%,(20.36&;#177;1.10)%,(31.34&;#177;0.62)%,(16.62&;#177;0.97)%]。②阴性对照未见转化生长因子β1 mRNA阳性表达。甲基强的松龙组和损伤对照组均有转化生长因子β1 mRNA阳性表达,甲基强的松龙组同损伤对照组相比,各时段转化生长因子β1 mRNA表达均有减少,且差异明显。结论:甲基强的松龙能抑制大鼠脊髓损伤后转化生长因子β1 mRNA的表达,说明甲基强的松龙对脊髓损伤的治疗作用不是通过转化生长因子β1来实现的。 相似文献
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神经肽Y2受体促进大鼠学习记忆的机制 总被引:1,自引:1,他引:1
目的:观察双侧海马插管注射神经肽Y2受体的反义寡核昔酸对大鼠海马c-fos基因mRNA和蛋白表达的影响,探讨Y2受体在学习记忆中可能的作用机制。方法:双侧海马插管注射Y2受体的反义、错义寡核苷酸或生理盐水,应用RT-PCR和免疫组化方法检测大鼠海马中c-fos基因在跳台法训练后的表达水平变化。结果:①反义组大鼠海马珊基因mRNA表达水c-fos平23.40&;#177;8.87明显低于生理盐水组60.38&;#177;15.52和错义组53.14&;#177;11.71,差异有显著性意义(F=22.54,P&;lt;0.001)。但错义组与生理盐水组之间大鼠海马c-fos基因的mRNA表达水平差异无显著性意义,(P&;gt;0.05)。②反义组大鼠海马c-fos蛋白阳性细胞数在海马CA1,CA3和齿状回分别为16.33&;#177;6.18,27.00&;#177;9.72和109.67&;#177;23.44,均低于生理盐水组和错义组,而错义组与生理盐水组之间。c-fos蛋白表达水平差异无显著性意义。结论:神经肽Y2受体可能是通过调节。如c-fos基因的表达参与大鼠的记忆形成过程。 相似文献
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目的:观察Ⅰ,Ⅲ型前胶原核酶对裸鼠增生性瘢痕的作用效果。
方法:实验于2004-02/06在中山大学医学院实验动物中心、电子显微镜室及第一附属医院外科实验室进行。①建立裸鼠增生性瘢痕动物模型(80只)。②将裸鼠随机分为实验组Ⅰ型组20只,注射Ⅰ型前胶原核酶;Ⅲ型组20只.注射Ⅲ型前胶原核酶;Ⅰ型+Ⅲ型组20只,注射Ⅰ型及Ⅲ型前胶原核酶;各组又分为2.5μg/100μL及5.0μg/100μL两个剂量组,每个剂量组各10只裸鼠。对照组:生理盐水组10只,注射生理盐水;空白对照组10只。于建立模型的第4周开始,实验组与生理盐水组每天用微量注射器行瘢痕内多位点注射1次,共7d;第6周取材。③应用苦味酸-天狼猩红染色偏振光法,结合图像分析技术,观察分析各组胶原含量及分布的改变。④电子显微镜观察各组实验前后超微结构的改变。
结果:①各实验组瘢痕体积均缩小;Ⅰ型组、Ⅰ型+Ⅲ型组实验后与实验前比较体积明显缩小[Ⅰ型组2.5μg/100μL(25.6&;#177;1.2),(28.3&;#177;2.1)mm^3,5.0μg/100μL:(27.9&;#177;3.0),(30.4&;#177;1.7)mm3;Ⅰ型+Ⅲ型组2.5μg/100μL;(24.8&;#177;1.6).(29.5&;#177;3.3)mm^3,5.0μg/100μL:(24.6&;#177;1.7),(27.8&;#177;1.8)mm^3,t=1.981-2.025,〈0.051。②Ⅰ型组、Ⅰ型+Ⅲ型组与对照组相比Ⅰ型胶原纤维分布明显减少。③生理盐水、空白对照组具有典型的增生性瘢痕的特点,各实验组瘢痕形态改变不明显。④实验组及对照组的超微结构改变无明显差异。
结论:Ⅰ和Ⅲ型前胶原核酶均可有效地减少裸鼠增生性瘢痕中胶原的含量。 相似文献
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目的:模拟体内核心蛋白多糖和转化生长因子β1接触方式,研究核心蛋白多糖在固相抑制转化生长因子β1刺激正常皮肤成纤维细胞的作用。
方法:实验于2005-01/09在广州市创伤研究所完成。①实验成纤维细胞的组织来源:取材于广州市红十字会医院,患者自愿,正常皮肤为包皮。取新鲜包皮,修除表皮和皮下组织,加入含体积分数0.02的胎牛血清的DMEM培养,实验用第4-8代细胞。②采用醋酸法从鼠尾腱中提取Ⅰ型胶原,使用浓度为2g/L,网格胶原终浓度为1g/L,成纤维细胞密度为1&;#215;10^9L^-1将胶原细胞混悬液按2mL/皿均匀加入直径35min的培养皿内,37℃培养10min,混悬液便形成凝胶即成纤维细胞胶原网格,再加入相应的培养液。分为4组:对照组、核心蛋白多糖组、转化生长因子β1组、转化生长因子β1+心蛋白多糖组。③观察成纤维细胞胶原网格的收缩,Western blot法检测成纤维细胞胶原网格中成纤维细胞纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白的表达,反转录-聚合酶链反应检测其mRNA表达。
结果:①成纤维细胞胶原网格收缩的变化:对照组成纤维细胞胶原网格培养12h,收缩到起始面积的(81.2&;#177;4.9)%,12-24h收缩加剧,在24h收缩到起始面积的(47.4&;#177;4.7)%,以后收缩减慢,在48h收缩到起始面积的(37.3&;#177;3.6)%,72h收缩到起始面积的(29.6&;#177;3.6)%,96h收缩到起始面积的(28.7&;#177;2.8)%,以后不再收缩;核心蛋白多糖组成纤维细胞胶原网格收缩到起始面积的百分比在12,24,48,72,96h均高于对照组(P〈0.05):转化生长因子β1组成纤维细胞胶原网格收缩到起始面积的百分比在各时相点均低于对照组(P〈0.01);转化生长因子β1+心蛋白多糖组成纤维细胞胶原网格收缩到起始面积的百分比在各时相点均高于转化生长因子β1组(P〈0.05),与对照组比较无显著差异(P〉0.05)。
②成纤维细胞胶原网格中细胞表达纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白的变化:核心蛋白多糖组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达(1391.61&;#177;126.27,525.97&;#177;60.10),与对照组(1474.52&;#177;133.84,569.41&;#177;62.55)比较无显著差异(P〉0.05),转化生长因子β1组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达(2909.77&;#177;264.04,2725.46&;#177;150.54)显著高于对照组(P〈0.01),转化生长因子β1+核心蛋白多糖组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达(1775.25&;#177;161.09,926.34&;#177;51.16)显著低于转化生长因子β1组(P〈0.05),且与对照组比较无显著差异(P〉0.05)。③成纤维细胞胶原网格中细胞表达纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA的变化:核心蛋白多糖组纤溶酶原激活物抑制物1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达(0.19&;#177;0.05,0.07&;#177;0.02),与对照组(0.2l&;#177;0.06,0.08&;#177;0.03)比较无显著差异(P〉0.05),转化生长因子β1组纤溶酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达(0.86&;#177;0.15。0.36&;#177;0.10)显著高于对照组(P〈0.01),转化生长因子β1+核心蛋白多糖组纤渣酶原激活物抑制物-1、α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达(0.34&;#177;0.09,0.13&;#177;0.04)显著低于转化生长因子β1组(P〈0.05),且与对照组比较无显著差异(P〉0.05)。
结论:重组核心蛋白多糖融入胶原凝胶,能显著抑制转化生长因子β1刺激正常皮肤成纤维细胞的作用,表明在体内核心蛋白多糖具有拮抗转化生长因子β1的作用。 相似文献
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血小板源生长因子受体在瘢痕疙瘩形成中的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察血小板源生长因子受体α和β在瘢痕疙瘩中的表达,并与正常皮肤比较。
方法:实验于2005-04/10在解放军第二军医大学长海医院中心实验室进行。切取12例瘢痕疙瘩和6例正常皮肤标本,先经原代培养为成纤维细胞,取3~6代细胞分别应用免疫细胞化学和实时定量聚合酶链反应技术,检测瘢痕疙瘩成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞中血小板源生长因子受体α和血小板源生长因子受体β的蛋白和mRNA表达。
结果:①免疫细胞化学结果:与正常皮肤相比,瘢痕疙瘩中的血小板源生长因子受体α和血小板源生长因子受体β的染色都增强,但血小板源生长因子受体α的染色增强尤其明显;图像分析定量统计显示瘢痕疙瘩中血小板源生长因子受体α的染色阳性指数显著高于正常皮肤(2.76&;#177;0.52,0.74&;#177;0.17,P〈0.01),而血小板源生长因子受体β的染色阳性指数与正常皮肤比较差异不显著(0.95&;#177;0.202,0.76&;#177;0.17,P=0.07)。②实时定量聚合酶链反应结果:瘢痕疙瘩成纤维细胞中血小板源生长因子受体α的每百万看家基因含量显著高于正常皮肤(21.73&;#177;6.51,14.41&;#177;3.37,P=0.02),而血小板源生长因子受体β的每百万看家基因含量与正常皮肤比较差异不显著(P=0.06)。
结论:在瘢痕疙瘩形成过程中,血小板源生长因子受体α的蛋白和mRNA表达都显著升高,可能是其病因机制之一。 相似文献
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目的:观察红参麦冬复方注射液对烫伤大鼠早期心肌损害的影响并探讨其机制。方法:实验于2005—07/12在遂宁市人民医院药剂科进行。选择健康Wistar大鼠45只,单纯随机分为正常对照组5只、烫伤对照组20只和参麦组20只,后2组动物背部92℃水浴18s,造成30%TBSAⅢ度烫伤模型。参麦组烫伤后立即腹腔注射10mL红参麦冬复方注射液1支(商品名参麦注射液,杭州正大青春宝药业有限公司产品,批号001015,10mL/支,含红参、麦冬各1.0g),烫伤对照组注射等量生理盐水。观察大鼠烫伤后6,12,24,48h后心肌组织病理变化,检测心肌组织丙二醛浓度、超氧化物歧化酶活性及血清肿瘤坏死因子α水平(ELISA法)、乳酸脱氢酶(分光光度法)、肌酸激酶(分光光度法)水平,免疫组化法检测心肌热休克蛋白70蛋白表达变化。正常对照大鼠不经任何处理,过量麻醉后取材检测作支持对照。结果:45只大鼠全部进入结果分析。①烫伤对照组心肌细胞出现了变性坏死,参麦组在各时相点心肌病理变化均较烫伤对照组轻。②心肌组织丙二醛浓度:烫伤对照组在烫伤后各时相点均高于正常对照组,参麦组大鼠烫伤后6,12,24,48h丙二醛浓度只有烫伤对照组的57.7%,47.1%,49.3%和45.4%。③心肌组织超氧化物歧化酶活性:烫伤对照组大鼠烫伤后各时相点均低于正常对照组(P〈0.01),参麦组则高于同时相点烫伤对照组(P〈0.01)。④心肌组织热休克蛋白70蛋白表达:参麦组在烫伤后6,12,24,48h表达均高于烫伤对照组(0.445&;#177;0.041,0.436&;#177;0.034;0.847&;#177;0.078.0.608&;#177;0.055;0.997&;#177;0.91,0.818&;#177;0.045;1.147&;#177;0.148,0.769&;#177;0.045,P〈0.01)。⑤血清血清肿瘤坏死因子α水平:参麦组在烫伤后6,12,24,48h均低于烫伤对照组[(3.14&;#177;0.31),(3.62&;#177;0.33)μg/L;(4.25&;#177;0.48),(5.67&;#177;0.51)μg/L;(4.57&;#177;0.53),(6.16&;#177;0.55)μg/L;(3.24&;#177;0.29),(4.47&;#177;0.45)μg/L;P〈0.01]。⑥参麦组血清乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性显著低于烫伤对照组(P〈0.01)。结论:红参麦冬复方注射液可减轻大鼠烫伤后早期心肌损害,可能与减轻大鼠烫伤后心肌组织脂质过氧化反应程度以及减轻炎性因子水平有关。 相似文献
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电针对坐骨神经损伤大鼠脊髓生长相关蛋白-43mRNA表达的影响 总被引:9,自引:4,他引:9
目的:探讨电针对坐骨神经损伤大鼠的脊髓中神经生长相关蛋白-43(GAP-43)mRNA表达的影响。方法:60只Wistar大鼠制成坐骨神经损伤模型,经电针穴位刺激治疗后,用原位杂交技术观察坐骨神经相应脊髓节段GAP-43mRNA的表达。结果:电针组第1天阳性细胞数增多(23.5&;#177;4.1)个/mm^2,3d达高峰(46.8&;#177;6.8)个/mm^2,14d后明显减少(9.7&;#177;3.6)个/mm^2,28d后基本未见阳性细胞存在(1.O&;#177;1.2)个/mm^2;模型组第1天(16.3&;#177;2.9)个/mm^2至第7天(20.1&;#177;2.5)个/mm^2持续阳性细胞数增多,14d略减少(19.1&;#177;3.2)个/mm^2,28d后仍可见阳性细胞存在(8.5&;#177;2.O)个/mm^2。与电针组比较差异有显著性意义(t=2.36~4.25,P&;lt;O.05)。结论:穴位电针能增强并缩短GAP-43mRNA表达时间,有利于突触重建。 相似文献