Ad-14-3-3σ对不同辐射抗拒的鼻咽癌细胞微小RNA表达的影响

目的： 在明确Ad-14-3-3σ对不同辐射抗拒鼻咽癌（nasopharygycarcinoma, NPC）细胞CNE-1和CNE-2治疗作用的基础上，检测Ad-14-3-3σ对CNE-1和CNE-2细胞中差异表达的微小RNA(microRNA, miRNA)的影响，探索CNE-1和CNE-2细胞中miRNA差异表达与NPC放射敏感性差异的关系。方法: 用Ad-14-3-3σ转染CNE-1和CNE-2细胞；采用Paraflo microfluidic microRNA芯片检测，用激光扫描器收集杂交的图像，经LOWESS滤器规范信号后分析数据差异，根据Targetscan3.1数据库资料（http://www.targetscan.org）探索Ad-14-3-3σ对CNE-1和CNE-2中的miRNA差异表达的影响，预测其差异表达与NPC放射敏感性差异的关系。结果: Ad-14-3-3σ处理细胞以后，CNE-1与CNE-2相比较，有37个microRNA有明显差异，CNE-1中有17个上调，20个下调。其中倍数变化在3倍以上且2者检测量数量差异达到1 000以上的有6个:hsa-miR-152、hsa-miR-205、 hsa-miR-203、 hsa-miR-7、hsa-miR-636和hsa-miR-100。结论: Ad-14-3-3σ能够改变微小RNA(microRNA, miRNA)在CNE-1和CNE-2中的表达模式，缩小CNE-1和CNE-2之间miRNA的表达差异，而这些miRNA可能跟肿瘤的发生和放疗敏感性有关。     

RNA干扰技术抑制EMMPRIN表达对人绒癌细胞JEG-3侵袭性的实验研究

目的研究RNA干扰技术抑制人绒癌JEG-3细胞EMMPRIN的表达，探讨EMMPRIN在滋养细胞侵袭行为中的作用。方法设计、体外化学合成靶向EMMPRIN的短发夹状双链RNA（shRNA），分别与脂质体LipofectamineTM2000结合后转染体外培养的人绒癌细胞系JEG-3。分为A实验组：每组中加入1μg重组质粒和5μl阳离子脂质体Metafectene；B阴性对照组：只加5山脂质体转染试剂；C无关对照组（无关dsRNA对照组，载体试剂盒自带）。三组细胞孵育48h后，Western blot和RT—PCR技术检测EMMPRIN蛋白和mRNA的表达，明胶酶谱测定MMP2，9的表达。结果RNA干扰技术可以显著的靶向抑制EMMPRIN基因在人绒癌细胞中的表达，与B组和C组相比，A组细胞EMMPRIN蛋白和EMMPRINmRNA表达分别减少了75．2％和62，3％（P〈0．01）；B、C组EMMPRIN蛋白和EMMPRINmRNA表达分别减少了3．3％、2．4％和3．2％、1.8％（P〉0．05）；A组细胞在转染后的12.24，36.48小时MMP2的分泌分别下降了13．5％，29．6％。58.3％和66.6％；MMP9的分泌分别下降了10.7％，33．8％，47.5％和62．6％，相邻组间比较差异显著（P〈0.05）。结论EMMPRIN与滋养细胞的侵袭功能密切相关，抑制滋养细胞中EMMPRIN的表达可以抑制滋养细胞的侵袭。     

5-氮-2''-脱氧胞苷对人卵巢癌细胞SKOV3增殖凋亡及hMLH1和hMSH2表达的影响

目的 探讨5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'deoxycytidine,5-Aza-CdR)对人卵巢癌细胞系SKOV3增殖、凋亡及错配修复基因HMLH1和HMSH2表达的影响.方法 用0.5、5和50μmol/L特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理SKOV3细胞3 d,继续常规培养7 d后,采用四唑盐(MTT)比色法检测生长活性,流式细胞术分析细胞的凋亡,半定量RT-PCR检测细胞HMLH1和HMSH2 mRNA的表达水平.结果 人卵巢癌细胞系SKOV3经0.5、5和50 μmol/L5-Aza-CdR处理后,均能明显抑制肿瘤细胞生长.各组细胞的凋亡率分别为10.59%±1.57%、17.52%±1.72%、34.10%±1.45%,显著高于对照组的5.35%±0.86%(P＜0.01);且凋亡率与5-Aza-CdR剂量成正相关(F=227.6,P＜0.01).在SKOV3中HMLH1和HMSH2呈弱表达,经5-Aza-CdR处理后mRNA表达量有不同程度的增加,且与药物存在剂量依赖性.结论 5-Aza-CdR可逆转卵巢癌细胞系中存在的HMLH1和HMSH2甲基化,DNA错配修复基因甲基化与卵巢癌的发生、发展有关.