秦皮乙素对肾透明细胞癌增殖、周期和凋亡的影响

目的:探讨秦皮乙素对肾透明细胞癌增殖、周期和凋亡的作用。方法:选取肾透明细胞癌786-O和SN12-PM6细胞,分别给予秦皮乙素(0、12.5、25、50、100、200、400、800μg/mL),培养24 h或48 h后,通过MTS和平板克隆形成实验检测秦皮乙素对786-O和SN12-PM6细胞增殖能力的影响,通过流式细胞技术检测秦皮乙素对786-O和SN12-PM6细胞周期、凋亡的影响,通过Western Blot检测周期、凋亡相关蛋白表达情况。结果:秦皮乙素能够抑制肾透明细胞癌786-O和SN12-PM6细胞的增殖(P0.05),且呈浓度和时间依赖性,与空白组(0μg/mL)相比,秦皮乙素处理组(100、200μg/mL)S期比例明显减少,G_0/G_1期和G_2/M期比例明显增加,凋亡率也明显增加(P0.05,P0.01),与空白组(0μg/mL)相比,秦皮乙素处理组(100、200μg/mL)Cyclin D1、CDK4、CDK6、c-Myc表达明显减少,Caspase 3表达无明显差异,Cleaved Caspase 3表达明显增多(P0.05,P0.01)。结论:秦皮乙素可有效抑制肾透明细胞癌786-O和SN12-PM6细胞增殖,并抑制细胞周期及诱导凋亡。     

CARD10在肾细胞癌中表达及其可能的作用机制

目的:CARD10被认为在多种肿瘤组织中存在过表达。本文主要探究CARD10蛋白在人肾细胞癌(RCC)中的表达及可能的作用机制。方法:采用免疫组织化学方法分析15例RCC病理标本,观察CARD10的表达情况。采用体外培养细胞的方法,设置对照组(正常人近端肾小管上皮细胞系HK-2)和RCC组(786-O、A498和ACHN)。采用Western Blot法检测细胞中CARD10、AKT和p-AKT的表达。采用shCARD10抑制CARD10的表达,观察对IGF-1/AKT信号通路的影响。结果:CARD10蛋白主要表达于RCC的细胞质内。与对照组相比,RCC组的CARD10表达均显著升高。另外,shCARD10显著降低786-O和A498细胞系中IGF-1和p-AKT/AKT的蛋白表达。结论:CARD10可能调节IGF-1/AKT信号通路,并且在RCC发生发展中发挥一定的作用。     

长链非编码RNA MALAT-1通过EZH2-β-catenin信号通路调控肾癌细胞的增殖、凋亡及侵袭

目的探究长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(LncRNA MALAT-1)在肾癌组织及肾细胞癌(RCC)细胞株中的表达情况及其在调控RCC细胞增殖、凋亡及侵袭过程中的作用机制。方法利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测正常和RCC组织以及HK-2、786-O、ACHN及Caki-1细胞中MALAT-1的表达情况;将786-O细胞随机分为3组,分别转染MALAT-1-siRNA沉默载体(si-MALAT-1组)及MALAT-1-siRNA阴性表达载体(si-NC组),空白对照组加入PBS(Blank组)。采用CCK-8法、流式细胞术法、Transwell法检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力;利用Western blot法检测Zeste基因同源物增强子2(EZH2)及β-catenin的蛋白表达水平。结果与正常组织及细胞株HK-2相比,肾癌组织及细胞株786-O、ACHN及Caki-1中MALAT-1的表达水平明显增加(P<0.05);与Blank组和si-NC组相比,si-MALAT-1组RCC细胞活性和侵袭能力明显降低、细胞凋亡率明显增加、EZH2及β-catenin的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论LncRNA MALAT-1在肾癌组织及RCC细胞中表达上调;抑制MALAT-1的表达能够抑制RCC细胞的增殖和侵袭,促进凋亡,其机制可能与下调EZH2-β-catenin信号通路的表达有关。     

华蟾素抑制肾癌细胞786-O增殖及促凋亡作用研究

目的研究华蟾素(cinobufotalin)对人肾癌细胞786-O增殖的抑制作用及凋亡的促进作用,并对其作用机制进行探讨。方法将体外培养的肾癌细胞786-O分为对照组、1 mg/mL华蟾素组、10 mg/mL华蟾素组、100 mg/mL华蟾素组,分别给予正常培养液、1 mg/mL华蟾素、10 mg/mL华蟾素、100 mg/mL华蟾素处理,观察并计算细胞增殖抑制率,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,采用Hoechst-PI核染色法观察细胞核凋亡情况,采用Western blot法检测Survivin蛋白表达。结果华蟾素对肾癌细胞786-O增殖率的抑制作用随浓度的升高逐渐增强,且呈时间依赖性;流式细胞术及Hoechst-PI核染色法的检测结果表明,随着华蟾素作用浓度的递增,肾癌细胞786-O凋亡率呈剂量依赖性递增;Western blot结果显示,华蟾素抑制肾癌细胞786-O中Survivin蛋白的表达。结论华蟾素可通过降低肾癌细胞786-O中Survivin蛋白的表达,起到抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用。     

PRC1在肾细胞癌中的表达及临床意义研究

目的通过检测肾细胞癌(RCC)组织和配对癌旁组织中细胞质分裂调控蛋白1(PRC1)的表达, 分析其表达水平与患者临床特征之间的关系, 从而为PRC1的后续功能研究奠定基础。方法收集2010年1月至2016年12月深圳市第二人民医院的40例手术切除的RCC组织和癌旁组织标本, 同时培养ACHN、786-O和HK-2细胞系, 提取组织和细胞中的总RNA并逆转录合成cDNA, 通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测PRC1的表达, 统计分析其表达水平与患者临床病理特征之间的关系。结果 ACHN、786-O细胞中的PRC1表达均高于HK-2细胞(均P<0.05)。RCC组织中PRC1的表达较癌旁组织明显升高(P<0.05)。PRC1的表达与患者的性别、年龄、肿瘤临床病理(TNM)分期、美国癌症联合会(AJCC)分期及Fuhrman分级均无相关性(均P>0.05)。结论 PRC1在RCC组织及细胞中的表达水平升高, 提示其与RCC发生机制有一定关系。     

shRNA靶向抑制CD74基因对人肾透明细胞癌细胞786-O生物学行为的影响

目的探讨抑制人CD74基因后对肾透明细胞癌786-O细胞生长和侵袭能力的影响。方法通过慢病毒lentivirus-CD74转染肾透明细胞癌786-O细胞后,MTT法检测786-O细胞活力的变化,利用流式细胞学检测肿瘤细胞的凋亡变化情况,Transwell小室实验检测786-O细胞侵袭能力改变情况,采用Westernblot方法检测转染前后786-O细胞CD74及相关蛋白的变化情况。结果慢病毒转染786-O细胞后细胞中CD74蛋白水平表达明显低于对照组(P0.05),抑制CD74蛋白表达水平后786-O细胞生长明显受到抑制,细胞活力降低,凋亡增加,细胞侵袭能力降低,且Survivin、MMP-2、MM-9蛋白也随之下降,其与对照组结果对比差异具有统计学差异(P0.05)。结论利用慢病毒转染技术抑制CD74的表达可以抑制肾透明细胞癌786-O细胞的增值和侵袭能力,CD74基因可能作为癌基因在肾透明细胞癌中起作用。     

Zeste增强子同源物2对乳腺癌细胞增殖和转移能力的影响

目的探讨Zeste增强子同源物2(EZH2)对乳腺癌细胞增殖和转移能力的影响。方法选取2022年1月至2023年5月河南省人民医院收治切除的203例乳腺癌组织和癌旁组织作为研究对象, 采用免疫组织化学分析肿瘤组织EZH2表达水平。采用对照短发卡RNA(shRNA)和EZH2 shRNA慢病毒感染MDA-MB-231细胞, 建立对照组和EZH2 KD组细胞, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色和体外移植瘤实验分析两组细胞的增殖能力;采用Transwell和蛋白质免疫印迹分析两组细胞的迁移和上皮-间充质转化能力;荧光定量分析EZH2下游基因表达情况。组间计量数据比较采用t检验。结果癌旁组织EZH2蛋白表达阳性率[(30.17±7.84)%]明显低于乳腺癌组织表达阳性率[(75.08±11.16)%], 差异有统计学意义(t=33.080, P<0.05)。对照组细胞CCK-8吸光度(A)值(2.01±0.09)明显高于EZH2 KD组(1.44±0.19), 差异有统计学意义(t=6.754, P<0.05)。对照组细胞EdU阳性率[(7...     

环状RNA0001495/微小RNA-527/Robo1轴对膀胱癌细胞增殖和转移的影响

目的探讨环状RNA(circRNA)₀001495/微小RNA(miR)-527/Robo1轴对膀胱癌细胞增殖和转移的影响。方法人膀胱癌细胞系T24培养至对数生长期, 分为circRNA对照组和circRNA₀001495 KD组, 采用对照circRNA短发卡RNA(shRNA)和circRNA₀001495 shRNA慢病毒感染T24细胞, 建立稳转细胞系。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞增殖能力;采用划痕实验和Transwell实验分析两组细胞迁移和侵袭能力。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析circRNA₀001495的靶基因;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析circRNA₀001495靶基因miR-527表达水平;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-527的靶蛋白。组间计量数据比较采用t检验。结果对照组细胞circRNA₀001495表达水平(1.02±0.0...     

银杏双黄酮通过调控细胞周期对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制

目的探讨银杏双黄酮通过调控细胞周期对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人胃癌MKN-45细胞;银杏双黄酮溶于二甲基亚砜(DMSO)中, 使用MKN-45专用培养基配制系列浓度的银杏双黄酮溶液, 分为0 μm(含1‰浓度的DMSO)组、12.5 μm组、25.0 μm组、50.0 μm组、100.0 μm组, 分别处理胃癌MKN-45细胞48 h, 使用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证细胞的增殖能力, 并确定半数抑制浓度, 以供后续实验使用;在培养的胃癌细胞MKN-45中分别加入1‰DMSO、浓度50.0 μm的银杏双黄酮及c-myc抑制剂处理48 h, 分为空白对照(NC)组、银杏双黄酮组及银杏双黄酮+c-myc抑制剂组, 使用流式细胞术验证银杏双黄酮对胃癌细胞的凋亡及细胞周期的影响, 蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路下游关键基因c-myc、凋亡相关指标B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)及细胞周期相关指标周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白...     

CDK4/6抑制剂在泌尿系肿瘤中的研究进展

细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)属于丝氨酸/苏氨酸激酶保守家族,其与相应配体细胞周期蛋白D(CyclinD)是驱动所有真核细胞周期进程的关键调节因子.细胞周期调控异常,细胞脱离正常的生长周期,是导致多种肿瘤发生的原因.本文就周期蛋白依赖性激酶4和6(CDK4/6)在泌尿系肿瘤发病过程中的作用及其抑制剂治疗进展做一综述.     

二氢青蒿素对胃癌细胞株SGC7901增殖的影响

目的 观察二氢青蒿素(DHA)对胃癌细胞株SGC7901增殖的影响及作用机制.方法 SGC7901细胞分为DHA组和对照组,DHA组分别加入浓度为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 μmol/LDHA的培养基,对照组加入等体积含0.1％ DMSO的培养基.不同浓度DHA处理SGC7901细胞24、48和72 h后,MTT法检测细胞的增殖情况.不同浓度DHA处理SGC7901细胞24h后,流式细胞仪测定细胞周期的分布;100 μmol/L DHA处理细胞24h后,采用Western blot法测定细胞周期蛋白A(Cyclin A)、Cyclin D1、Cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和P16蛋白的表达水平;免疫共沉淀检查CDK4与Cyclin D1和P16之间的相互作用.采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析.结果 6.25、12.50、25.00、50.00、100.00 μmol/L DHA分别处理SGC7901细胞24、48和72 h,均明显抑制细胞增殖(F =78.66,235.37,93.75,P＜0.05);与对照组比较,不同浓度DHA组G0/G1期细胞比例均明显上升(F=18.42,P＜0.05);100.00 μmol/L DHA处理细胞24h,Cyclin D1和CDK4蛋白的相对表达量分别为0.17±0.05、0.24±0.06,较对照组的0.67±0.15、0.64 ±0.18明显下降(t=7.746,5.164,P＜0.05);DHA组Cyclin E蛋白的相对表达量为0.35 ±0.06,较对照组的0.42±0.06也有下降,但差异无统计学意义(t=2.021,P＞0.05);DHA组和对照组Cyclin A蛋白的相对表达量分别为0.38 ± 0.08和0.35 ±0.09,两组比较,差异无统计学意义(t=1.266,P＞0.05);与对照组P16蛋白相对表达量(0.29±0.07)比较,DHA组P16蛋白相对表达量(0.54±0.12)显著升高(t=4.408,P＜0.05).免疫共沉淀结果示DHA处理SGC7901细胞后,CDK4与Cyclin D1结合减少,与P16结合增加.结论 DHA将SGC7901细胞周期阻滞于G0/G1期,其主要机制可能与下调Cyclin D1和CDK4表达、上调P16表达,抑制Cyclin D1与CDK4的结合,促进P16与CDK4的结合有关.     

IGFBP3对人肾细胞癌786-O细胞系及裸鼠移植瘤的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子结合蛋白3(insulin-like growth factor binding 3,IGFBP3)对人肾细胞癌786-O细胞系及裸鼠移植瘤的影响及分子机制。方法:慢病毒携带阴性对照Scr和shRNA IGFBP3-711分别感染786-O细胞,嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞系,Western Blot检测IGFBP3表达情况。XTT检测抑制IGFBP3表达后786-O细胞体外增殖情况。分别将携带阴性对照Scr和抑制IGFBP3表达的786-O细胞1×10~7个注入裸鼠两侧皮下,成瘤8周后处死裸鼠,取出皮下肿瘤组织并称重,对比对照组及实验组裸鼠移植瘤生长情况。结果:shRNA IGFBP3-711能够有效抑制IGFBP3的表达;抑制IGFBP3的表达对786-O细胞体外增殖没有影响;但抑制IGFBP3表达后裸鼠移植瘤成瘤能力明显大于对照,差异有统计学意义(P0.01)。结论:IGFBP3对于肾细胞癌细胞系786-O体外增殖没有影响,但对裸鼠移植瘤有明显生长抑制作用。     

小分子双链 RNAs 联合应用抑制膀胱癌细胞增殖的实验研究

目的在膀胱癌细胞系 T24和 EJ 细胞中转染两种不同的人工合成小分子双链 RNA (dsRNA),观察联合应用与分别单独应用两种 dsRNA 对膀胱癌细胞生长的影响.方法根据对膀胱癌细胞的处理不同分为：①阴性对照组(dsControl)、dsP21-322组、dsP21-555组和 dsP21-322＋dsP21-555组;②dsControl 组、dsP21-322组、dsP53-285组和 dsP21-322＋ dsP53-285组.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测各组细胞 p21 mRNA 及细胞周期依赖性激酶 CDK4、CDK6 mRNA 的表达;蛋白印迹法(Western blot)检测 P21蛋白和 CDK4、CDK6蛋白的表达;细胞增殖实验检测转染后细胞增殖能力;集落形成实验检测单个细胞克隆增殖能力.结果 qPCR 结果显示,与 dsControl 组相比,dsP21-322组、dsP2l-555组和 dsP53-285组均分别上调 T24和 EJ 细胞中p21 mRNA 的表达(P ＜0．01);而与单独转染 dsP21-322、dsP2l-555相比,同时转染 dsP21-322＋dsP21-555,差异无统计学意义(P ＞0．05).与 dsControl 组相比,dsP53-285能够上调 p53基因的表达(P ＜0．05);与单独转染 dsP53-285相比,p53 mRNA 表达在同时转染 dsP21-322和 dsP53-285组中差异无统计学意义(P ＞0．05).与单独转染 dsP21-322、dsP53-285相比,dsP21-322＋ dsP53-285能够显著增加 p21 mRNA 的表达(P ＜0．05).与 dsControl 相比,转染 dsP21-322、dsP53-285分别使 T24和 EJ 细胞中 CDK4、CDK6 mRNA 的表达下调(P ＜0．05);与单独转染 dsP21-322、dsP53-285相比,CDK4/6 mRNA 的表达在 dsP21-322＋dsP53-285组中明显被抑制(P ＜0．05).Western blot检测结果验证了组间 p21和 CDK4/6基因表达的差异.细胞增殖实验结果显示,同时转染 dsP21-322和 dsP53-285比单独转染抑制膀胱癌细胞增殖能力更明显.细胞集落形成实验中,dsP21-322＋dsP53-285组中形成的集落数量显著少于单独转染组.结论同时转染 dsP21-322和 dsP53-285能够显著抑制膀胱癌细胞的增殖.     

MicroRNA-126在肾透明细胞癌中的表达及对细胞株786-O生物学行为的影响

目的:研究MicroRNA-126(miRNA-126)在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达及其对细胞株786-O生物学行为的机制。方法:通过Real-time PCR的方法检测30例ccRCC及癌旁正常肾组织中miRNA-126-5p的表达情况。运用RT-qPCR的方法检测肾癌细胞株786-O和人肾小管上皮细胞株HK-2中miRNA-126-5p的表达;用Lipofectamine RNAiMAX将hsa-miRNA-126-5p转染786-O细胞株,用MTT、Transwell侵袭实验、Annexin V/PI双染法观察转染后细胞在增殖、侵袭力和凋亡方面的变化。结果:miRNA-126-5p在肾癌组织中的表达明显降低,在不同病理分级的样本中,miRNA-126-5p在高分化组中表达量为36.63±5.38,中、低分化组为19.96±7.28,差异无统计学意义(P0.05)。在不同临床分期的样本中,Ⅰ期miRNA-126-5p表达量为37.05±6.38,Ⅱ~Ⅲ期的表达量为24.03±6.15,不同分期之间差异无统计学意义(P0.05)。786-O细胞株转染后,检测miRNA-126-5p在实验组细胞的表达为42.86±7.01,显著高于阴性对照组27.46±8.43(P0.05)。MTT法检测786-O转染后48h增殖情况,实验组的细胞相对存活率为80.82±0.47,阴性对照组98.87±0.27,差异有统计学意义(P0.01)。Transwell侵袭实验显示,实验组miRNA-126-5p表达明显低于阴性对照组[(33.89±2.80)vs.(53.67±2.23),P0.05]。Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,实验组的细胞凋亡率明显高于阴性对照组[(22.56±1.13)vs.(7.20±0.26),P0.05]。结论:miRNA-126-5p在ccRCC组织中的表达量明显低于癌旁组织中的表达,其表达与肿瘤分级和临床分期无明显相关性。hsa-miRNA-126-5p转染细胞株786-O后,miRNA-126-5p的表达明显上调,并能够使786-O细胞增殖受到抑制,侵袭力降低,凋亡率增加。     

金荞麦提取物调控DDIT4对肾癌细胞凋亡的影响

目的:探讨金荞麦提取物Fr4对肾癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度Fr4处理肾癌细胞786-O,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测786-O细胞中Cyclin D1、P21、Bcl-2、Bax、DDIT4表达。建立过表达DDIT4细胞。在786-O细胞中转染si-DDIT4,并用400μg/ml Fr4处理,研究786-O细胞增殖、凋亡变化。结果:Fr4明显抑制786-O细胞活性(P0.05),并呈剂量和时间依赖性;不同浓度Fr4显著减少Cyclin D1蛋白表达量,提高P21蛋白水平(P0.05),并呈剂量依赖性。400μg/ml的Fr4明显增加细胞凋亡率和Bax、DDIT4蛋白表达量(P0.05),降低Bcl-2蛋白水平。过表达DDIT4显著抑制24 h、48 h、72 h的细胞活性及Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平,增加细胞凋亡率、P21和Bax蛋白表达量(P0.05)。抑制DDIT4逆转了Fr4对786-O细胞增殖、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达的抑制作用,和对细胞凋亡、DDIT4、P21和Bax蛋白表达的促进作用。结论:金荞麦提取物Fr4通过调控DDIT4表达抑制肾癌细胞增殖,并诱导其凋亡。     

FIG-ROS融合基因在肝内胆管细胞癌中表达及其意义

目的:探讨FIG-ROS融合基因在肝内胆管细胞癌(ICC)细胞中的表达,以及对其干预后ICC细胞的生物学行为的变化。方法:用Western blot法检测4份不同ICC组织样本及3种ICC细胞株(HUCCT1、REB、QBC939)中ROS蛋白的表达;选择ROS阳性ICC细胞,用一系列表达不同序列ROS-sh RNA与FIG-sh RNA的质粒分别转染该细胞后,用Western blot检测ROS和FIG蛋白表达;选择对ROS和FIG表达抑制作用最强的ROS-sh RNA与FIG-sh RNA序列分别或联合转染上述细胞后,观察细胞增殖、细胞周期、凋亡及集落形成情况。结果:2份ICC组织样本与1个细胞株(HUCCT1)呈ROS阳性表达;转染ROS1-6290 sh RNA和FIG-363 sh RNA对HUCCT1细胞ROS与FIG蛋白表达的抑制作用最强。与未转染的HUCCT1细胞比较,单独转染FIG-363 sh RNA对细胞增殖、凋亡及细胞周期无明显影响(均P0.05),但能明显减少细胞集落形成(P0.05);ROS1-6290 sh RNA单独或联合FIG-363 sh RNA转染均能明显抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡与细胞周期阻滞、减少细胞集落形成,且联合转染的效应更为明显(均P0.05)。结论:部分ICC存在FIG-ROS融合基因表达,对两种基因的联合抑制可能是靶向治疗该类ICC的有效途径。     

SiRNA联合介导Livin和Survivin基因沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的实验研究

目的:观察siRNA联合介导Livin和Survivin基因的沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的作用。方法:构建Livin和Suvivin联合靶向的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体shRNA,然后将目的载体转染于人肾癌细胞株786-O。应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot方法分别检测转染前细胞经顺铂、5-FU和丝裂霉素处理后的Livin和Survivin基因的mRNA与蛋白水平的变化。应用CCK-8试验检测转染前后细胞对顺铂、5-氟尿嘧啶(5-FU)和丝裂霉素的半数致死量(IC50)、细胞增殖的变化。结果:CCK-8结果显示,联合介导Livin和Survivin基因沉默组细胞较分别单独介导细胞组化疗的敏感性明显增强(P0.05),且转染前后细胞对顺铂、5-FU和丝裂霉素的IC50发生显著变化(P0.05)。结论:SiRNA联合介导Livin和Survivin基因表达下调,发挥协同增强的siRNA作用。     

过氧化物酶体增殖激活物受体γ配体诱导肾癌细胞的凋亡

目的 观察过氧化物酶体增殖激活物受体γ(PPARγ)配体对肾癌细胞凋亡的影响.方法 通过ELISA方法 观察0～100 μmol/L浓度的吡格列酮和曲格列酮(TZDs)对肾癌细胞786-0、A498及正常肾细胞HK-2、HMCC凋亡的影响,Heochst 33342荧光染色、DNA片段化分析检测70.00 μmol/L吡格列酮或80.00 μmol/L曲格列酮处理后肾癌细胞的凋亡,Western blot观察TZDs处理后肾癌细胞凋亡调控蛋白bcl-2/bax的表达变化及Caspase-3活性的改变.结果 超过50.00 μmol/L的TZDs可诱导肾癌细胞出现凋亡,LC_(50)值分别为65.11 μmol/L(曲格列酮/786-O)、67.73 μmol/L(吡格列酮J/786.0)、63.91 μmol/L(曲格列酮/A498)和78.12 μmol/L(吡格列酮/A498),但对正常肾细胞没有影响.荧光染色显示80.00 μmol/L的吡格列酮及70.00 μmol/L的曲格列酮处理后肾癌细胞明显凋亡,伴随bcl-2蛋白的表达水平降低和bax蛋白的增加,Caspase-3的活性明显增强,在48 h可达到基础值的3.5-4.5倍.结论 激活PPARγ可以诱导肾癌细胞的凋亡,PPARγ有可能成为肾细胞癌新的治疗靶点.     

干扰多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1促进人胶质母细胞瘤U251细胞株侵袭性的机制

目的 探讨干扰多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)基因表达促进人胶质母细胞瘤U251细胞株侵袭性的机制.方法 用携带U6启动子的LRIG1特异性短发夹RNA (shRNA)序列的质粒载体pGenesil2-LRIG1-shRNA (siRNA)及含非特异shRNA编码序列的对照质粒pGenesil2-negative shRNA(neg)转染U251细胞株,通过G418筛选,鉴定得到稳定转染细胞株.采用侵袭实验验证干扰LRIG1对U251侵袭性的影响,通过明胶酶谱实验检测基质金属蛋白激酶(MMP)-2、MMP-9的活性,Western blot法检测表皮生长因子(EGFR)及其下游丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B( P13K/AKT)信号通路蛋白的表达差异.结果 含U6启动子LRIG1 shRNA序列的质粒转染干扰组LRIG1 mRNA降低至对照组(35.3％～39.2％,P＜0.05).干扰LRIG1表达组U251细胞侵袭数[(159±15)～ (188±9)/视野],较空白对照组细胞侵袭数[(28±9)/视野]明显增多(P＜0.05);干扰LRIG1激活EGFR通路传导;干扰LRIG1后干扰组MMP-2较对照组活性增加(1.66±0.11～1.96±0.12,P＜0.01),MMP-9干扰组较对照组活性增加(4.82±0.27～4.47±0.29).结论 LRIG1表达下调后MMP-2、MMP-9活性增强,从而促进U251细胞的侵袭性,可能通过激活EGFR信号通路引起.     

Ciglitazone抑制人肝癌HepG2细胞增殖活性的实验研究

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂Ciglitazone对人肝癌细胞株HepG2体内、外生长的影响。并探讨其可能机制。方法 培养HepG2细胞,加入不同浓度的Ciglitazone,用生长曲线检测HepG2细胞体外生长情况,用流式细胞仪进行细胞周期分析;Western blot检测Ciglitazone对PPARγ蛋白表达的影响。建立裸鼠肝癌动物模型,随机将其分为两组:对照组(A组,10只),Ciglitazone注射组(B组,10只),B组隔天注射Ciglitazone 100 μl(100μmol/L)连续15次,对照组注射100μl生理盐水,1个月后,切除瘤灶、称瘤重、计算抑瘤率。标本用Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)、细胞周期素依赖性激酶抑制子p21蛋白的表达。结果 (1)Ciglitazone体外抑制HepG2细胞生长,并呈现明显时间和剂量依赖性。(2)经Ciglitazone处理后PPARγ蛋白表达增加。(3)经Ciglitazone治疗后,A组、B组的瘤重分别为(3.73±0.22)g、(2.60±0.35)g,抑瘤率达30％,A组的CyclinD1较B组明显增高,A组的p21蛋白表达水平较B组明显降低。结论 Ciglitazone能抑制肝癌HepG2细胞的恶性增殖(呈明显的时间及剂量依赖性),并诱导其分化,其机制与PPARγ干预细胞周期的调控有关。