江西建昌帮阴附片和阳附片对阳虚小鼠棕色脂肪组织的影响

目的:观察棕色脂肪组织(BAT),细胞,蛋白以及相应基因在大黄混悬液所致阳虚模型小鼠中的表达情况,探讨建昌帮特色附子炮制品的产热机制。方法:随机选取20只小鼠,雌雄各半,作为正常雌、雄组,其余80只小鼠灌服大黄混悬液(质量浓度0. 25 g·mL~(-1))建立阳虚模型,造模结束后随机分为模型雌、雄组,生附片雌、雄组,阴附片雌、雄组以及阳附片雌、雄组,每组10只。按照小鼠组别给予相应药液,灌胃2周(1. 54 g·kg~(-1)·d~(-1)),正常组和模型组给予等体积蒸馏水。灌胃结束后,采集小鼠肩胛处BAT,进行苏木素-伊红(HE)染色观察BAT细胞变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测解偶联蛋白1(UCP1)及其mRNA的表达。结果:与同性别正常组比较,模型组的BAT比重显著降低(P0. 01);雌性小鼠中生附片组和阴附片组的BAT比重较模型组显著增加(P0. 01),而雄性小鼠各给药组与模型组相比则无显著性差异。与同性别正常组比较,模型组小鼠BAT的细胞有许多散在分布的空泡,由于空泡较大,可观察到的细胞较少;与同性别模型组比较,生附片组小鼠BAT细胞可见细胞空泡减少,细胞较小并且排列紧密,阳附片组中BAT细胞的密度也明显增加,阴附片组BAT细胞中空泡相对减少,但细胞无显著增加。同性别小鼠之间比较,模型组与正常组的UCP1表达水平相比具有统计学意义(P0. 05,P0. 01);在雌性小鼠中,阳附片组较模型组的UCP1表达水平显著升高(P0. 05),雄性小鼠的各给药组较同性别模型组均有显著差异(P0. 05),其中阳附片的显著性最优。模型组较同性别正常组的UCP1 mRNA相对表达量显著下降(P0. 05,P0. 01);在雌性小鼠中,与模型组比较,阳附片组、生附片组和阴附片组的UCP1 mRNA相对表达量显著升高(P0. 05,P0. 01),与阳附片组比较,生附片组和阴附片组的UCP1 mRNA相对表达量有显著性差异(P0. 05);在雄性小鼠中,与模型组比较,阳附片组的UCP1 mRNA相对表达量显著升高(P0. 01),生附片组、阴附片组则无显著性差异,生附片组和阴附片组的UCP1 mRNA相对表达量与阳附片组比较有显著性差异(P0. 05)。结论:生附片、阴附片和阳附片对大黄所致的阳虚证均有明显改善作用,机制可能为促进UCP1蛋白及其mRNA的表达、增强BAT的活性,且阳附片效果最好。     

基于PI3K/Akt信号通路探讨“赤芍-附片”对肝细胞炎症损伤的影响

目的 基于磷脂酰激醇3激酶（phosphati-dylinositol 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB又称Akt)信号通路,探讨“赤芍-附片”对肝细胞炎症损伤的保护作用。方法 体外培育L02细胞株,设立正常组、模型组、空白血浆组、“赤芍-附片”组、Copanlisib(PI3K抑制剂)组,采用D-半乳糖联合脂多糖干预构建肝细胞炎症损伤模型。通过CCK-8法筛选含药血浆最佳干预浓度及时间;透射电镜观察细胞超微结构;ELISA法检测白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达水平;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-q PCR)、蛋白免疫印迹法（Western blot）测定PI3K/Akt通路m RNA及蛋白表达水平。结果 较之正常组,模型组受损细胞器及自噬体数量增加,IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著升高（P <0.01）,PI3K、...     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS、网络药理学和“双外标”一测多评法的复方车前片质量评价研究

复方车前片来源于《圣济总录》中车前子散,系由车前子与黄连组方配伍,经现代工艺制作而成的创新中药。为阐明复方车前片治疗糖尿病肾病的物质基础,该研究采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对复方车前片的化学成分进行表征分析,共鉴定出48个化学成分;以复方车前片中鉴定出的化学成分为研究对象,进行网络药理学分析并结合活性报道,选取了6个药效成分：毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、黄连碱、木兰花碱、巴马汀和小檗碱作为质量评价的指标成分;在此基础上,采用“双外标”一测多评法对复方车前片中6个药效成分进行含量测定,分别以毛蕊花糖苷为对照,计算异毛蕊花糖苷的相对校正因子为1.118;以黄连碱为对照,计算木兰花碱、巴马汀和小檗碱的相对校正因子分别为0.729、1.065和1.126,在不同条件下稳定性良好,“双外标”一测多评法所得结果与外标法接近。该研究成功采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术定性表征复方车前片中化学成分,并结合网络药理学筛选其治疗糖尿病肾病的主要药效物质基础,进一步采用“双外标”一测多评法对主要药效物质群进行定量分析,为阐明复方车前片药效物质基础和质量控制提供科学依据。