动脉粥样硬化与巨噬细胞和血管平滑肌细胞相关因素研究述评

在动脉粥样硬化（AS）的形成过程中，由内皮细胞、巨噬细胞、血管平滑肌细胞及其相关细胞因子构成的复杂的网络中，单核细胞摄入脂质形成泡沫细胞是AS的始动因素，而血管平滑肌细胞增生是动脉粥样硬化的关键。在此，就这两个系统与动脉粥样硬化的关系作一综述。     

小鼠血管损伤后巨噬细胞与平滑肌细胞的相互作用

目的 研究血管损伤后病变形成过程中的巨噬细胞与平滑肌细胞的相互作用.方法 C57BL/6(6～8周龄)小鼠24只,右侧股动脉植入透明塑料微导管,制作小鼠血管损伤模型,术后给予特异性抗体AFS98及APB5,分别阻断巨噬细胞和平滑肌细胞增殖的信息传导通路.给药2周后采集股动脉组织,用免疫组织化学的方法对血管病变进行分析.结果 小鼠股动脉血管损伤2周后,病变部位聚集了大量的巨噬细胞、平滑肌细胞.给予阻断巨噬细胞增殖的信息传导通路的特异性抗体AFS98后,病变部位的巨噬细胞数量显著减少,平滑肌细胞数量反而增多.相反,给予抑制平滑肌细胞增殖的抗体APB5后,病变局部平滑肌细胞数量减少,而巨噬细胞数量急剧增加.结论 小鼠股动脉血管损伤后,构成病变的细胞主要为巨噬细胞与平滑肌细胞.这两种细胞在分化成终末成熟细胞的过程中,存在着相互拮抗的作用.     

动脉粥样硬化与巨噬细胞和血管平滑肌细胞相关因素研究述评

在动脉粥样硬化(AS)的形成过程中,由内皮细胞、巨噬细胞、血管平滑肌细胞及其相关细胞因子构成的复杂的网络中,单核细胞摄入脂质形成泡沫细胞是AS的始动因素,而血管平滑肌细胞增生是动脉粥样硬化的关键。在此,就这两个系统与动脉粥样硬化的关系作一综述。     

血管平滑肌细胞的增殖与细胞因子

血管平滑肌细胞(Vascular smooth musdle cell．VSMC)的增殖是动脉粥样硬化(AS)形成．高血压和血管再狭窄共同的细胞病理基础之一．心血管疾病的危险因素损伤血管内皮功能导致一些细胞因子．特别是生长因子的表达．这些因子组成的复杂的网络．共同作用于VSMC膜受体．并激活细胞内信号传导通路，最终导致核内基因的表达．从而调控     

血府逐瘀汤对大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响

目的观察血府逐瘀汤含药血清对大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移以及其生成一氧化氮(NO)的影响。方法用MTT法观察VSMCs的增殖,Transwell小室法观察VSMCs的迁移,并检测培养上清液一氧化氮(NO)的含量。结果与空白对照组比较,血府逐瘀汤高剂量组和中剂量组能显著抑制VSMCs的增殖和迁移(P0.05);与空白对照组比较,培养48 h的培养上清液中,血府逐瘀汤3个剂量组的NO水平有显著升高(P0.01)。结论血府逐瘀汤含药血清有抗VSMCs增殖和迁移的作用,其作用与升高NO水平有关。     

缺氧对大鼠血管平滑肌细胞表达巨噬细胞游走抑制因子的影响

目的 观察缺氧对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表达巨噬细胞游走抑制因子(MIF)的影响,探讨缺氧在动脉粥样硬化等血管增生性疾病中引起动脉壁损伤的可能机制. 方法 将大鼠 VSMCs细胞株A7r5细胞分别在缺氧(37 ℃、5% CO2、1% O2)及常氧(37 ℃、5% CO2、20% O2)条件下培养不同的时间(2 h、4 h、12 h、24 h、48 h),在相应时间点收集细胞总RNA及培养上清液.用半定量RT-PCR及ELISA方法 分别检测MIF mRNA的表达及VSMCs MIF的蛋白水平变化. 结果 与常氧培养的对照组相比,缺氧不同时间的大鼠VSMCs的MIF mRNA表达均显著增加(P<0.05),并且合成MIF蛋白的水平也明显增加(P<0.05).结论 缺氧能诱导VSMCs MIF的表达,MIF的表达增加可能是缺氧参与动脉粥样硬化等血管增生性疾病发生的机制之一.     

葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,对原癌基因c-fos和bc l-2蛋白质以及凝血酶受体(TR)mRNA表达的作用。方法以细胞计数法,流式细胞仪测定DNA含量,细胞周期分析法观察凝血酶及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。在凝血酶及葛根素作用24 h后,用W estern印迹法检测c-fos和bc l-2蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TR mRNA的表达。结果凝血酶对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在24 h末达峰值(细胞计数凝血酶组8.64×104/m l±0.12×104/m l,对照组4.20×104/m l±0.11×104/m l,P<0.05),且凝血酶浓度在0.1~1.0 U/L之间呈剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的细胞增殖、DNA合成以及VSMC c-fos和bc l-2蛋白的表达(葛根素浓度为1.5×10-3mol/L时,抑制率分别为42.6%±5.2%、58.2%±7.9%、44.5%±7.5%和39.6%±6.4%,均P<0.05);高浓度(1.5×10-3mol/L)的葛根素可显著抑制凝血酶诱导的TR mRNA上调(抑制率为17.6%±1.7%,P<0.05)。结论葛根素能抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,这可能与其抑制c-fos和bc l-2蛋白有关,并部分与其抑制TR mRNA表达有关。     

他汀类药物对血管平滑肌细胞的影响及机制

心血管疾病尤其是冠状动脉硬化性心脏病具有很高的死亡率和发病率,对这些冠脉疾病的病因分析,认为动脉粥样硬化是主要原因。动脉壁脂质沉积和血管平滑肌细胞的异常迁移与增殖是动脉粥样硬化形成的两个关键步骤。目前抗动脉粥样硬化以调脂药物如三羟基三甲基戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶抑制剂（即他汀类药物）为主,临床实验和基础研究表明：他汀类药物不仅具有调控血浆胆固醇的主要作用,而且还涉及其非调脂的抗动脉粥样硬化作用,如抗炎症反应、抑制血小板聚集、抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移、促进血管平滑肌细胞凋亡和改善内皮功能等。本文主要就他汀类药物对血管平滑肌细胞增殖、迁移、凋亡的影响及其机制做如下综述。     

大蒜素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 观察大蒜素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法 采用培养的兔血管平滑肌细胞，应用^3H～TdR掺入法，观察在血管紧张素Ⅱ促进VSMC增殖过程中，大蒜素对血管平滑肌细胞DNA合成的影响及其时间效应。结果 血管紧张素Ⅱ可促进处于静止状态的兔血管平滑肌细胞DNA的合成，36h时细胞DNA的合成达到高峰。大蒜素对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用，并呈现出明显的浓度依赖关系，随着大蒜素表度的升高其对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用也逐渐增加，在24h时，10．00g／L的大蒜素对血管平滑肌细胞增殖的抑制率为13．46％。结论 大蒜素可抑制血管紧张素Ⅱ诱导兔血管平滑肌细胞的增殖，并存在一定的量效依赖关系及时间反应性。     

巨噬细胞分泌FIZZ1刺激血管平滑肌细胞增殖

目的 探讨IL-4对巨噬细胞 FIZZ1分泌及其FIZZ1对血管平滑肌细胞增殖的影响.方法 用不同剂量的重组IL-4刺激培养的巨噬细胞,RT-PCR检测巨噬细胞内FIZZ1 mRNA表达,荧光免疫组化激光共聚焦显微镜检测巨噬细胞FIZZ1蛋白表达;用终浓度分别为3×10-6mmol/L, 9×10-6mmol/L, 2.7×10-5mmol/L的FIZZ1刺激培养的平滑肌细胞,MTT法测定FIZZ1对平滑肌细胞增殖的影响.结果 Th2型细胞因子IL-4刺激巨噬细胞,FIZZ1 mRNA及其蛋白明显表达;浓度为3×10-6mmol/L, 9×10-6mmol/L, 2.7×10-5mmol/L的FIZZ1明显促进平滑肌细胞增殖(与对照组比较P＜0.05),且随着FIZZ1剂量的增加,促增殖作用增强.结论 Th2型细胞因子IL-4能刺激巨噬细胞表达FIZZ1 mRNA及其蛋白,FIZZ1能促进体外培养的血管平滑肌细胞增殖.     

自噬对血管平滑肌细胞增殖的影响

血管平滑肌细胞异常增殖是血管增殖性疾病的病理基础,自噬是真核生物维持细胞内环境稳态的一种自我保护机制。近年来的研究发现,自噬参与多种细胞因子、血管活性物质、剪切应力、ncRNA等诱导的血管平滑肌细胞增殖,一些抗血管增生性疾病的药物往往通过调节自噬通量和自噬活性发挥抗血管平滑肌细胞增殖作用。本文综述了自噬对血管平滑肌细胞增殖的影响,为探索血管增生性疾病的病理生理机制提供新的思路。     

KCa3.1通道对增殖表型大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨KCa3.1通道对增殖表型大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响。方法组织贴壁法培养大鼠血管平滑肌细胞,采用光学显微镜、电镜和免疫细胞化学染色法观察初代和9代平滑肌细胞形态学特征。RT-PCR和免疫细胞化学染色法检测初代和9代平滑肌细胞KCa3.1通道mRNA和蛋白表达。MTT和Transwell法观察KCa3.1通道对平滑肌细胞增殖和迁移的影响。结果初代和9代平滑肌细胞分别表现出收缩表型和增殖表型特征,9代平滑肌细胞KCa3.1通道mRNA、蛋白表达水平、增殖和迁移能力显著高于初代细胞(P<0.01),KCa3.1通道阻断剂TRAM-34可显著抑制9代细胞的增殖和迁移(P<0.01),对初代细胞无明显影响。结论增殖表型血管平滑肌细胞KCa3.1通道表达增加可能促进了细胞的增殖和迁移。     

ＰＰＡＲ-γ激动剂对瘦素刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)激动剂对瘦素刺激的血管平滑肌细胞(VSMCa)增殖效应的影响.方法:采用原代细胞培养方法建立大鼠VSMCs细胞模型;以四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察不同浓度的瘦素及PPAR-γ激动剂吡格列酮对VSMCs增殖的影响.结果:瘦素能显著促进VSMCs增殖.促增殖效应在72 h末达峰值且瘦素浓度在0-100ng/ml之间呈剂量依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05);而PPAR-γ激动剂吡格列酮能抑制瘦素诱导的VSMCs的增殖效应,最佳浓度在100 umol/L时(P<0.01).结论:瘦素能刺激VSMCs增殖,而PPAR-γ激动剂能够抑制瘦素的促增殖作用,有望用于干预动脉粥样硬化的发生发展,上述实验结果可能与纠正瘦素抵抗的机制有关.     

藁本内酯调控MAPK信号通路的血管平滑肌细胞增生

目的从细胞信号通路方面研究藁本内酯抑制体外培养的鼠血管平滑肌细胞增生的机制。方法采用MTT法测定细胞生长状况;荧光探针法、Western印迹法检测细胞内活性氧（ROS）变化、ERK和P38基因的表达活性。结果藁本内酯在40μg/mL质量浓度下作用2 d抑制率达50%;胞内ROS下降;ERK、P38表达活性下降。结论藁本内酯能有效抑制鼠平滑肌细胞增生,通过抑制ROS生成、下调P38、ERK表达从而使细胞滞留在G0/G1期。     

Geminin基因过表达对VSMCs表型转化的影响

目的探讨Geminin基因过表达对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化的影响。方法构建真核表达载体pEGFP-N1-Geminin,脂质体2000介导转染不同表型(去分化型和分化型)的大鼠VSMCs株,设置阳性组、阴性组和空白组(n=3),检测转染效果、VSMCs主要表型标志物(α-actin、OPN)和肌动蛋白相关蛋白1(actinrelated protein,ARP1)的变化情况。结果 Geminin基因成功过表达VSMCs株。与2个对照组(阴性组和空白组)比较,分化型VSMCs中表型标志物(α-actin和OPN)及ARP1含量变化不大;去分化型VSMCs中,OPN在阳性组中表达下调,与2个对照组(阴性组和空白组)比较差异具有统计学意义(P<0.05),α-actin和ARP1在阳性组中表达上调,与2个对照组(阴性组和空白组)比较差异具有统计学意义(P<0.05),免疫共沉淀实验结果提示经protein G plus-Agarose沉淀ARP1相互作用蛋白复合物后,用Geminin抗体进行Western blot检测,可以检测到Geminin的表达。结论 Geminin基因过表达有助于VSMCs由去分化型向分化型转化;免疫共沉淀结果提示Geminin和ARP1之间存在相互作用,ARP1可能参与了上述VSMCs表型转化过程。     

同型半胱氨酸诱导人血管平滑肌细胞增殖与凋亡

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响.方法:采用组织贴块法体外培养人VSMC,MTT法检测人VSMC增殖,流式细胞术检测人VSMC凋亡.结果:体外培养的人VSMC在终浓度为100,200,500和1000 μmol/L Hcy的培养液中孵育24 h后的A值均高于对照组(P<0.05),表明Hcy可诱导人VSMC增殖,而且呈浓度依赖性诱导人VSMC增殖(r=0.94,P<0.01).终浓度为200,500和1000 μmol/L Hcy时细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05),表明较高浓度的Hcy可以诱导人VSMC凋亡,而且这一效应呈浓度依赖性(r=0.85,P<0.05).结论:Hcy可以诱导VSMC增殖和凋亡.     

穹窿主体蛋白对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨穹窿主体蛋白(major vault protein,MVP)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响?方法:分离培养野生型小鼠VSMCs,用血小板源性生长因子(PDGF-BB)或15% 胎牛血清(FBS)刺激VSMCs增殖,Western blot检测VSMCs的MVP表达水平,同时检测特异性分化标记物α-SMA和SM22α表达水平?然后用PDGF-BB刺激人主动脉平滑肌细胞(HAoSMCs),检测MVP的表达差异?再分别分离培养野生型小鼠和MVP敲除型小鼠的VSMCs,通过CCK8细胞增殖实验检测两者的增殖能力;同时用siRNA干扰的方法,使HAoSMCs中MVP低表达,检测其增殖能力的变化?结果:用PDGF-BB或15% FBS刺激VSMCs后,MVP表达水平呈浓度和时间依赖性下降,α-SMA和SM22α表达水平也相应降低?MVP缺失或低表达情况下,VSMCs的增殖能力均下降?结论:MVP在VSMCs增殖中起了重要作用?     

H2型松弛素促进人血管平滑肌细胞迁移的作用及机制

目的：探讨H2型松弛素（Relaxin‐2）对血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移的作用及分子机制。方法采用划痕实验和Transwell实验检测Relaxin‐2对VSMCs的迁移作用;采用蛋白质印迹法检测其对细胞信号蛋白丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（Akt）、细胞外信号调节激酶（ERK）、核因子‐κB（NF‐κB） p65的影响。结果 Relaxin‐2可剂量依赖性促进VSMCs的迁移,应用NF‐κB抑制剂BAY 11‐7082可阻断Relaxin‐2诱导的基质金属蛋白酶‐9（MMP‐9）和基质金属蛋白酶‐2（MMP‐2）的表达,磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002和ERK抑制剂 U0126预处理可以降低Relaxin‐2引起的NF‐κB p65的激活。结论 Relaxin‐2可能通过活化PI3K／Akt和ERK信号通路激活NF‐κB p65,进而促进MMP‐9和MMP‐2的表达,从而诱导VSMCs迁移效应。     

ORC1在大鼠血管平滑肌细胞增殖过程中的表达

目的检测不同增殖状态大鼠血管平滑肌细胞(vascu lar smooth musc le cells,VSMCs)中起始识别复合物1(origin recogn ition comp lex 1,ORC1)的表达。方法采用组织块贴壁法培养大鼠胸主动脉原代培养VSMCs;提取细胞总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定不同增殖状态VSMCs中ORC1 mRNA表达;采用免疫荧光、激光共聚焦显微镜检测不同增殖状态VSMCs中ORC1蛋白表达。结果经光镜、免疫荧光鉴定证实分离培养的细胞为VSMCs;处于静止状态的VSMCs无ORC1 mRNA表达,血清刺激6 h后ORC1 mRNA表达量明显增加,12~24 h达到高峰,继后逐渐减少;处于静止期的VSMCs无ORC1蛋白表达,处于增殖状态的VSMCs中有大量ORC1蛋白表达。结论ORC1可能在VSMCs增殖过程中起重要作用。