多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖支架材料复合成骨细胞的异位成骨

目的评价多孔纳米羟基磷灰石/壳聚糖﹙nHA/CS﹚支架与成骨细胞复合植入大鼠股部肌袋模型内的异位成骨能力。方法采用共沉淀和粒子沥滤法制备多孔nHA/CS。分离培养培养SD大鼠成骨细胞,并将其与多孔nHA/CS共同培养来构建组织工程骨。将所构建的组织工程骨和空白nHA/CS支架材料分别植入SD大鼠股部肌袋模型内。分别在植入2、4、6、8周后,将植入的支架材料取出行苏木精-伊红染色观察新骨形成情况,并应用JEDA-801D形态学图象分析系统来计算新骨生成率。用SPSS13.0软件包对测定结果进行单因素方差分析。结果在各观察时间段内成骨细胞复合多孔nHA/CS组新骨生成量均多于nHA/CS。结论多孔nHA/CS复合成骨细胞支架材料具有异位成骨能力。     

数字化珊瑚羟基磷灰石人工骨的致敏实验

背景：前期实验成功制备了数字化珊瑚羟基磷灰石人工骨支架材料,并已通过实验证实其具有骨组织工程支架材料必需的理化性能。 目的：评价数字化珊瑚羟基磷灰石人工骨的致敏性。 方法：将32只白化豚鼠随机分为4组,每组8只：实验组分别采用质量比为3∶1或4∶1原料制备的数字化珊瑚羟基磷灰石人工骨支架浸提液,阳性对照组采用体积分数为5%甲醛溶液,阴性对照组采用生理盐水。根据《GB-T 16886.10-2005 医疗器械生物学评价第10部分刺激与迟发型超敏反应试验》最大剂量致敏试验步骤进行皮内诱导、局部诱导和激发。激发阶段去除贴附物后24,48 h豚鼠皮肤反应按Magnusson和Kligman等级进行分级。激发阶段去除贴附物后48 h后对皮肤进行活检,行苏木精-伊红染色和光镜下观察。 结果与结论：阴性对照组和质量比为3∶1或4∶1原料制备的数字化珊瑚羟基磷灰石人工骨支架浸提液组激发阶段去除贴附物后24,48 h皮肤无致敏反应,而阳性对照组在这任一时间点均有中度以上红斑。活检皮肤光镜下实验组未见皮肤水肿,皮肤棘细胞层水肿,血管周围、弥漫的真皮和表皮单核细胞浸润,见散在少量的嗜碱性细胞。说明质量比为3∶1或4∶1原料制备的数字化珊瑚羟基磷灰石人工骨支架在致敏方面具有生物安全性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

壳聚糖/纳米羟基磷灰石分层复合支架的生物相容性研究

制备壳聚糖/纳米羟基磷灰石(CS/nHA)分层复合支架,对其进行细胞毒性评价.分离培养大鼠软骨细胞接种于支架,相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附及生长情况.动物皮下埋植试验观察其组织相容性.实验结果证实壳聚糖/纳米羟基磷灰石分层复合支架具有良好的生物相容性,有望成为较好的骨软骨组织工程支架.     

氧化钇-羟基磷灰石骨修复材料的研究

羟基磷灰石在临床上广泛应用于骨缺损的修复，为提高其骨结合性和阻射性，本研究在合成羟基磷灰石的过程中，将活性高、阻射性强的氧化钇按不同比例加入进行化学合成，得到一种生物。相容性好、阻射性强、价格便宜的生物材料。     

数字化珊瑚羟基磷灰石人工骨支架的体外降解性能

BACKGROUND: We have successfully prepared the digital coralline hydroxyapatite artificial bone scaffold in previous experiments, and it has good physicochemical properties and biocompatibility. OBJECTIVE: To evaluate the in vitro degradation performance of the digital coralline hydroxyapatite artificial bone. METHODS: We used the mixtures of coralline hydroxyapatite and L-polylactic acid at the mass ratio of 3:1 and 4:1 as raw materials to prepare the digital coralline hydroxyapatite artificial bone scafflold specimens, and then they were immersed in the 50 mL stimulated body fluid with the initial pH value of 7.4 in an incubator at 37 ℃ for degradation. After 16 weeks of degradation, the pH value, calcium and phosphate ion concentration, degradation rate, compressive strength and changes of microstructure were dynamically observed. RESULTS AND CONCLUSION: At the 16th weeks of degradation, the pH values in the two kinds of digital artificial bone groups maintained at 7.34-7.36, which were higher than that in the L-polylactic acid group (P < 0.01), and lower than that in the coralline hydroxyapatite group (P < 0.01). The calcium ion concentrations in the two kinds of digital artificial bone groups were higher than that in the coralline hydroxyapatite group (P < 0.01), and the phosphorus ion concentrations were lower than that in the coralline hydroxyapatite group (P < 0.01). The degradation rates in the two kinds of digital artificial bone groups were lower than that in the coralline hydroxyapatite group (P < 0.01), and higher than that in the L-polylactic acid group (P < 0.01). The order of the compressive strength was as follows: coralline hydroxyapatite group > 3:1 digital artificial bone group > L-polylactic acid group > 4:1 digital artificial bone group. The cellular structure, porosity and pore size in the two kinds of digital artificial bone groups were all increased. These results show that the prepared digital coralline hydroxyapatite artificial bone scaffold has good degradation propertyies.      

纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸支架材料对人成骨细胞早期附着影响的实验研究

目的以人成骨细胞（MG-63细胞）复合纳米羟基磷灰石／胶原／聚乳酸[nano-hydroxyapatite/collagen/poly（L-lactic）acid，nHAC／PLA]支架材料进行体外培养，观察其早期附着生长情况。方法将MG-63细胞在nHAC／PLA支架材料上培养，通过倒置显微镜观察、HE染色、ALP染色、细胞增殖指数测定等方法对细胞在nHAC／PLA支架材料上的早期附着情况进行研究。结果细胞在nHAC／PLA上生长良好；ALP染色阳性度高，细胞增殖指数比空白对照组有显著提高。结论nHAC／PLA支架有利于MG-63细胞的早期黏附、生长，可以用作骨组织工程的支架材料。     

复合活性羟基磷灰石陶瓷的研制及其生物相容性研究

对自行研制出的复合活性羟基磷灰石陶瓷粉，经过体外实验、动物实验、并结合电镜观察，。表明该材料是一种无毒、无溶血性、对皮肤及肌肉无刺激作用、不含热原物质的生物医用材料，在动物体内不引起排异反应，在骨创面可诱导新骨形成。说明该材料具有良好的生?相容性，可应用于临床。     

新型羟基磷灰石多孔支架的制备与性状

背景：目前几种钙羟磷灰石作为骨的替代品已经在临床上使用,但是由于缺少内部交互的连通孔,使得骨形成过程中经常发生病理性的骨折。 目的：采用改良的技术制备互联多孔羟磷灰石陶瓷支架材料,并对其物理化学特征进行检测。 方法：将羟基磷灰石(质量分数60%)与聚乙烯亚胺质量分数40%混合,采用改良的泡沫凝胶技术技术(聚氧乙烯十二烷基醚质量分数1%)制备多孔羟磷灰石陶瓷。扫面电镜检测材料内部结构,将制备的材料移植动物体骨缺损区观察成骨情况。 结果与结论：多孔羟磷灰石陶瓷具有三维结构,内部充满大小较均一的球形孔隙,直径平均为150 μm,孔隙率75%,孔隙上充满窗孔样相互交通的小洞,平均40 μm, 具有足够的抗压度(10~12 MPa)。动物实验表明,多孔羟磷灰石陶瓷表现出较好的成骨诱导性,可见孔隙里形成了新生骨。结果提示改良的羟基磷灰石支架能够在骨组织工程上应用,有望成为新型的改良品。     

大鼠成骨细胞与壳聚糖/羟基磷灰石复合支架降解产物的生物相容性

背景：人们对壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架在体内的降解过程并非十分清楚,而且有关其降解产物对成骨细胞的影响研究也较少。 目的：分析大鼠成骨细胞与壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架降解产物的生物相容性。 方法：将培养的第2代大鼠成骨细胞分别在壳聚糖/羟基磷灰石复合支架降解产物浸提液和含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液中培养,培养第2,4,6,8,10天分别对两组细胞做MTT细胞计数,采用联合会推荐法测定细胞碱性磷酸酶活性,采用BCA蛋白定量法测定总蛋白。 结果与结论：在壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架降解产物浸提液中培养的大鼠成骨细胞增殖速度、细胞碱性磷酸酶活性、细胞总蛋白合成及碱性磷酸酶与总蛋白的比值明显高于在体积分数为10%胎牛血清DMEM培养液中培养的细胞(P < 0.05)。表明壳聚糖/羟基磷灰石复合多孔生物支架的降解产物不仅可促进大鼠成骨细胞的黏附、生长和增殖,还可增强其骨化功能,具有较好的生物相容性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程全文链接：     

重组人骨形成蛋白-2对细胞成骨分化的作用

目的 进一步探讨rhBMP-2的促细胞成骨分化作用，以期找到合适的成骨分化标志作为rhBMP-2的定量活性测定指标。方法 首先表达制备rhBMP-2，用小鼠股部肌袋包埋法进行诱骨活性实验，然后检测rhBMP-2作用后的骨髓基质细胞（MSC）、NIH3T3和C2C12等3种细胞的碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OC）、细胞总蛋白合成量以及细胞增殖的变化。结果 rhBMP-2具有良好的诱导骨形成的活性，可增加3种细胞的OC含量和蛋白合成量，对MSC的ALP活性变化影响明显，且可促进MSC的增殖，抑制NIH3T3细胞的生长。结论 rhBMP-2具有促进上述细胞向成骨细胞分化的作用；在一定剂量范围内，rhBMP-2的作用与细胞骨钙素合成量的增加呈线性正相关，故定量测定OC的含量基本可反映rhBMP-2的活性。     

骨髓间充质干细胞在鸡蛋膜为支架材料上复合培养的实验研究

目的探讨鸡蛋膜作为组织工程支架材料同大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells．BMSCs）复合培养的可行性。方法利用材料试验机对鸡蛋膜进行力学性能评价；用浓度0．1mol／L HCl预制鸡蛋膜支架材料且复合Ⅰ型胶原后，采用梯度离心法分离大鼠骨髓间充质干细胞；将第2代的BMSCs同鸡蛋膜支架材料复合培养，连续培养7、14d后分别用扫描电镜观察。结果鸡蛋膜具有一定的力学强度；细胞同鸡蛋膜复合培养后容易贴附生长，7d后鸡蛋膜表面有大量的细胞生长，14d后细胞连接成片且鸡蛋膜网状孔隙中有大量的细胞生长。结论鸡蛋膜具有良好的力学特性，同时又具有空间网状结构，适合细胞生长、增殖，是作为组织工程的理想支架材料之一。     

骨组织工程支架材料的研究进展

支架材料作为骨组织工程学的关键环节，成为近年来研究的热点。就骨组织工程学不同支架材料的优缺点、研究现状及前景进行综述，希望能为今后的研究提供参考。     

锶磷灰石多孔陶瓷复合成骨细胞的体内异位成骨研究

目的比较不同孔隙率的锶磷灰石（含5%锶的羟磷灰石,Sr-HA）陶瓷复合成骨细胞后体内异位成骨能力。方法实验试样分复合成骨细胞的不同孔隙率组和未复合成骨细胞的不同孔隙率组。先抽取健康兔的骨髓组织,体外培养,诱导分化为成骨细胞,分别与孔径约为450～700μm、孔隙率分别为50%、60%、70%的Sr-HA及孔隙率为70%的纯羟磷灰石陶瓷体复合,自体回植到兔左侧背脊肌内;未复合成骨细胞的不同孔隙率组试样则种植在兔右侧背脊肌内作为阴性对照。植入后4、12、24周取材,行大体观察、组织学检查。结果复合成骨细胞的各组陶瓷在植入兔背脊肌内4周后均有类骨质形成,随着植入时间的延长,骨组织的数量不断增加;孔隙率为70%的Sr-HA陶瓷和HA陶瓷的成骨性能明显优于50%、60%孔隙率的Sr-HA陶瓷。未复合细胞的陶瓷材料在组织学检查中未见有类骨质形成。结论Sr-HA多孔陶瓷是较理想的骨组织工程支架材料,成骨细胞复合Sr-HA陶瓷用于骨缺损的修复,具有广阔的临床应用前景。     

Enhancement of ectopic bone formation in mice with a deficit in Fas-mediated apoptosis

Bone tormation is under the control of cytokines as well as growth factors such as bone morphogenetlc protelns (BMP). This suggests the possibillity that osteogenesls might be modulated by factors which atso modulate the Immune system. To test whether Immune disorders In the host may influence bone formation, we studied BMP-Induced bone formation In a C3H/HeJ strain of mice benring a mutant gene, the lymphoproliteration Qene ( lpr ) or the genemlbed lym-phoprolifarative diseaee gene (gld), both of which are known to be a Fas delaion mutant and a Fas ligand mutant, respectively, and to Induce Immune disorders vla a deficit In Fas-mediated apoptoak Crude BMP derived from bovine bone were injscted into the muscular tlasue In the femur of adult C3H/HaJ mice or C3H/HeJ mice bearing an lpr or gld gene. Quantltathre analysis of the resulting ectopic bone formation by X-ray photography 2 weeks after infection revealed that the presence of either the Ipr or gld gene caused a bone mess dgnlficantly larger In dimension than that seen in the wiid type mice. Histologlcal examlnatlon also revealed the dmerent Influence between these mutant genes on the level of bone fofmatlon exhibited by hyallne cartilage and bone imbeculae. Based on these results, we discussed the possible mechanisms of the enhanced ectopic bone fotmation under the deficit In Fas-medlated apoptosls.     

rhBMP-2／无定形磷酸钙纳米缓释微粒成骨活性的实验研究

目的探讨无定形磷酸钙（ACP）对rhBMP-2的缓释作用，检测rhBMP-2／ACP纳米缓释微粒的成骨活性。方法用扫描电镜观察已制备rhBMP-2／ACP缓释微粒的大小、形态：测定rhBMP-2的体外释放情况并描绘曲线；用MTT法检测缓释微粒对兔骨髓间充质干细胞（MSC）增殖情况的影响：用碱性磷酸酶（ALP）试剂盒检测细胞ALP活性以反映缓释微粒对其分化的影响．并与ACP的作用进行比较；将缓释微粒植入大鼠股部肌袋．通过X线、组织形态学观察评价缓释微粒的异位成骨能力。结果缓释微粒大小为100nm左右．具有典型的无定形球形面貌。开始时为快速释放期．随后呈缓慢持续释放。缓释微粒能显著促进MSC的增殖和分化，植入大鼠股部肌袋12周．材料大部分降解．有明显的骨形成。结论ACP可作为rhBMP-2合适的缓释载体材料．生成的纳米缓释微粒具有良好的降解性能和成骨活性。     

高压蒸气灭菌同种异体骨移植的实验研究

目的：观察高压蒸气灭菌同种异体骨在骨移植中的作用，探索简便、经济的骨移植方法。方法：用家用压力锅，对同种异体鼠骨高压蒸气灭菌３０ｍｉｎ后，将其植入２５只成年大白鼠双侧胫骨（新生鼠骨植入右侧１２例，成年鼠骨植入左侧２５例）前上部一个长１０ｍｍ，深２ｍｍ的缺损中，于术后３、６、９、１２周取材，制片，在普通、荧光光镜和透射电镜下进行观察。结果：发现经高压蒸气灭菌后的同种异体骨有较好的生物相容性，可以引导骨生长。结论：高压蒸气灭菌处理同种异体骨，是一种简便、经济的骨移植方法，易于在农村和基层开展     

异种松质骨支架体内移植免疫的实验研究

观察异种松质骨支架植入后宿主动态免疫应答,为进一步改进材料和临床应用提供实验依据。采用物理化学方法对异种(猪)松质骨进行处理得到猪松质骨支架,对猪松质骨进行蛋白提取,考马斯亮蓝法测定蛋白浓度,用提取的蛋白作抗原包被ELISA条板备用。将异种(猪)松质骨支架植入兔背部近头侧皮下,分别于移植后1周、2周、4周、8周、12周五个时间点作支架周围组织的组织学检查(HE)及外周血清抗体检测(ELISA)。结果:异种(猪)松质骨及松质骨支架的蛋白质浓度分别为(1.242±0.26)mg/ml和(0.024±0.004)mg/ml。异种(猪)松质骨蛋白抗原液经聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离后可清楚显示十条不同相对分子质量大小的蛋白条带(从15000到180000),异种(猪)松质骨支架蛋白抗原液经SDS-PAGE电泳分离后10000 Mr以上的蛋白条带消失,说明松质骨支架不含有效激发免疫反应的抗原蛋白成分。外周血中特异抗体水平在移植术后1周达最高,与处理前有明显差异(P<0.05),2~4周时逐渐降低,8~12周时维持在较低水平,与移植前无显著差异(P>0.05)。植术后1周,植入物周围组织光学显微镜下可见大量炎症细胞浸润,以淋巴细胞和单核细胞为主,2周以后炎症细胞浸润逐渐减轻,4周时未见明显炎性细胞浸润,术后12周,组织内炎性细胞罕见。异种(猪)松质骨支架不含有效激发免疫反应的抗原蛋白成分,植入后表现为一过性轻度的炎性细胞反应。     

组织工程化旋转生物反应器研究进展

概述了组织工程化水平旋转生物反应器的工作原理、培养环境、应用现状和发展趋势。水平旋转生物反应器为体外培养动物细胞保持其正常形态、结构、功能和遗传特性提供了一种新手段，得天独厚的微重力、高效物质传递和低剪应力环境、多孔立体网状支架材料、在线监测和控制细胞三维生长等优势，为离体细胞重建组织、实现人工构建组织和器官有望成为现实。     

组织工程化旋转生物反应器研究进展

概述了组织工程化水平旋转生物反应器的工作原理、培养环境、应用现状和发展趋势。水平旋转生物反应器为体外培养动物细胞保持其正常形态、结构、功能和遗传特性提供了一种新手段,得天独厚的微重力、高效物质传递和低剪应力环境、多孔立体网状支架材料、在线监测和控制细胞三维生长等优势,为离体细胞重建组织、实现人工构建组织和器官有望成为现实。