丹参酮ⅡA对脓毒症大鼠肺损伤及p38MAPK/ERK信号通路的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对脓毒症大鼠肺损伤及p38MAPK/ERK信号通路的影响。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、模型组和丹参酮ⅡA组各10只,模型组和丹参酮ⅡA组采用盲肠结扎穿孔手术法制作大鼠脓毒症模型。丹参酮ⅡA组于术后即刻腹腔注射20 mg/kg的丹参酮ⅡA注射液,连续治疗48 h。治疗后,HE染色观察肺组织的病理变化,测定肺组织湿/干质量(W/D)和内毒素(LPS)水平,采用ELISA法测定肺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-6、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)水平,Western blot检测p38MAPK/ERK信号通路的磷酸化水平。结果与对照组相比,模型组和丹参酮ⅡA组肺组织W/D显著升高(P 0. 05),SOD酶活性和GSH水平显著下降(P 0. 01),LPS、MDA、IL-6和TNF-α水平显著升高(P 0. 01),p-p38和p-ERK1/2蛋白的表达显著上调(P 0. 01);与模型组相比,丹参酮ⅡA组肺组织W/D显著下降(P 0. 05),SOD酶活性和GSH水平显著升高(P 0. 01),LPS、MDA、IL-6和TNF-α水平显著下降(P 0. 01),p-p38和p-ERK1/2蛋白的表达显著下调(P 0. 01); HE染色显示肺组织的病理变化明显减轻。结论丹参酮ⅡA可能通过抑制p38MAPK/ERK信号通路,降低脓毒症大鼠炎症因子和氧化应激水平,保护大鼠肺损伤。     

吡格列酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β-1的影响

目的观察吡格列酮(PIO)对高糖(HG)培养的肾小球系膜细胞(MCs)p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和转化生长因子β-1(TGF-β1)表达的影响,探讨PIO肾保护作用及机制。方法体外培养MCs,取对数生长期的细胞以2×105/孔的密度接种于6孔细胞培养板,同步化后随机分为正常对照(NG)组、HG组、p38MAPK抑制剂(S)组及PIO(P)组。Western blot测定磷酸化p38MAPK(p-p38)和总p38MAPK(t-p38)蛋白含量,半定量RT-PCR测定细胞TGF-β1 mRNA表达情况。结果与NG组比较,HG组细胞内p-p38MAPK含量和TGF-β1mRNA表达增强(P0.01);与HG组比较,p38MAPK抑制剂显著抑制HG刺激的细胞内p38MAPK活性和TGF-β1表达(P0.05);与HG组比较,P组细胞内上述变化亦明显降低(P0.05),与S组相似;p38MAPK活性和TGF-β1表达呈正相关(r=0.587,P0.01)。结论 PIO可抑制肾小球系膜p38MAPK通路,降低TGF-β1表达,该作用可能与其肾脏保护部分有关。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾小管间质P38MAPK表达的影响

【目的】探讨P38丝裂原活化的蛋白激酶（P38MAPK）与糖尿病肾病（DN）肾小管间质病变的关系,及氯沙坦对其的影响。【方法】雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组和模型组,后者经STZ诱导糖尿病模型成功后再随机分为糖尿病模型组和氯沙坦干预组。8周后检测各组大鼠24 h尿蛋白、血肌酐;留取肾组织行HE和MASSON染色,观察肾小管间质损伤指数、肾间质胶原面积;免疫组化检测肾小管间质磷酸化P38MAPK以及TGFβ1表达,并做半定量分析。【结果】①与对照组相比,糖尿病模型组大鼠尿蛋白排泄量、肾小管间质损伤指数和肾间质胶原面积明显增加（P〈0.01）;②糖尿病组大鼠肾小管间质磷酸化P38MAPK、TGFβ1表达均显著高于对照组（P〈0.01）;③氯沙坦组尿蛋白排泄量、肾小管间质损伤程度较糖尿病组减轻,肾小管间质磷酸化P38MAPK、TGFβ1表达较糖尿病组显著下调（P〈0.01）。【结论】糖尿病肾病小管间质病变的病理过程中存在P38MAPK的活化;氯沙坦可阻抑糖尿病大鼠肾小管间质P38MAPK活化,下调TGFβ1表达而发挥肾脏保护作用。     

黄芩素对IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应的影响

[目的]探讨黄芩素对白介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞炎症反应的影响.[方法]将软骨细胞分为正常组(加入不含任何刺激物的培养基),IL-1β组(10 ng/mL的IL-1β),黄芩素低、中、高剂量组(12.5,25,50 μmol/L 黄芩素+10 ng/mL的IL-1β).MTT法检测细胞活力,硝酸还原酶法测一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-γ(IFN-γ)及IL-6含量,western blot检测核因子-κB (NF-κB p65)及p38 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平.[结果]低、中、高剂量组黄芩素能显著提高软骨细胞活力(P<0.05).与正常组比较,IL-1β组中细胞活力降低(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量提高(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量上调(P<0.01);与IL-1β组比较,黄芩素低、中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与低剂量组比较,中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与中剂量组比较,高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量下调(P<0.01).[结论]黄芩素能通过阻断NF-κB及p38 MAPK信号通路进而抑制IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应,为临床OA的治疗提供理论依据.     

转化生长因子β1作用下绒毛膜癌JEG-3细胞c-myc mRNA表达

目的观察在转化生长因子β1(TGF-β1)、-β1受体Ⅰ抑制剂(LY364947)和p38MAPK抑制剂(SB203580)作用下,绒毛膜癌JEG-3细胞中c-myc mRNA的表达变化。方法用5 ng/ml的TGF-β1以及1μM、3μM TGF受体Ⅰ抑制剂(LY364947)和1μM、3μM p38MAPK抑制剂(SB203580)作用JEG-3细胞,用qRT-PCR技术检测各组细胞中c-myc mRNA的表达差异。结果与正常对照组比较,5 ng/ml TGF-β1组细胞中c-myc mRNA的表达水平升高(P0.05);p38 MAPK抑制剂(SB203580)和TGF-β受体Ⅰ抑制剂(LY364947)均抑制了c-myc mRNA的表达,且抑制作用与应用浓度呈正相关(P0.05)。结论 c-myc作为TGFβ1/Smads通路的下游靶基因,其调控有赖于TGFβ1与受体Ⅰ的结合,同时,在绒毛膜癌JEG-3细胞中,TGF-β1介导的Smad途径与p38 MAPK信号转导存在交互作用。     

丹参酮ⅡA抑制心肌细胞的纤维化

背景：转化生长因子β-Smads信号通路是心肌纤维化的关键通路;丹参酮ⅡA具有抑制心肌纤维化作用.目的：验证丹参酮ⅡA对转化生长因子β1致心肌纤维化的作用并探讨其机制.方法：取出生24 h内的SD大鼠心脏,利用酶消化法结合差速贴壁体外培养心肌成纤维细胞.取上述第3代心肌成纤维细胞,用5μg/L转化生长因子β1培养15,30,60,120 min或6,12,24 h后收集细胞,用不同浓度（10-5 mol/L、10-4结果与结论：转化生长因子β1在一定范围内以时间依赖方式诱导结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原、磷酸化Smad3及Smad7的表达,刺激终末结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原mRNA的表达量明显上升（均P 〈0.01）;磷酸化Smad3及Smad7蛋白表达量在刺激后1 h达到峰值,表达量显著增加（均P 〈0.01）.高浓度丹参酮ⅡA预处理可显著下调磷酸化Smad3、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原表达（均P 〈0.01）.两种浓度的丹参酮ⅡA预处理均可上调Smad7蛋白表达（P 〈0.05,P 〈0.01）.提示丹参酮ⅡA对心肌纤维化有抑制作用,可能与其上调Smad7蛋白表达,抑制转化生长因子β1诱导的Smad3磷酸化,部分阻断转化生长因子β1-Smads信号通路有关. mol/L）丹参酮ⅡA预处理2 h后再加入5μg/L转化生长因子β1培养120 min或24 h后收集细胞,并设空白对照组.免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定,反转录聚合酶链反应检测结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达,Western Blot检测Smad7及磷酸化Smad3蛋白表达.免疫组织化学染色及免疫荧光法检测磷酸化Smad3、结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原蛋白表达.     

创伤患者p38MAPK信号通路的变化及其临床意义

目的 探讨不同创伤程度患者体内p38MAPK信号通路的变化及意义.方法不同创伤程度住院患者150例,根据创伤度评分(ISS)分为三组:ISS≤15分(L-ISS)组、ISS 16～25分(M-ISS组)、ISS≥25分(H-ISS)组,每组50例,同时选取30名健康献血者作为对照组.不同创伤程度患者在创伤后6 h内和第1、3、5、7天分别采集外周血,对照组采集外周血一次,采用实时定量PCR(RQ-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测白细胞中p38MAPK的基因表达、蛋白表达及活化(磷酸化)水平变化.结果创伤6 h内不同创伤程度患者血液中p38MAPK的基因表达与正常人比较均显著增加(P＜0.05),在创伤后第1天达到高峰(P＜0.01),并持续高表达至第7天(P＜0.05);在创伤后第1天不同创伤程度患者体内的p38MAPK蛋白表达和活化(磷酸化)水平也显著增强(P＜0.05);进一步的试验发现,p38MAPK的基因表达、蛋白表达和活化(磷酸化)程度都随创伤级别的增加而升高(P＜0.05).结论创伤患者体内的p38MAPK信号通路被激活,且创伤程度与p38MAPK的表达和活化呈正相关,表明p38MAPK信号通路在创伤的病理机制中发挥重要作用.     

丹参酮ⅡA对高血压肥厚心肌细胞游离钙离子及一氧化氮合酶基因表达的影响

目的 通过研究丹参酮ⅡA对腹主动脉缩窄的高血压大鼠肥厚心肌血管紧张肽Ⅱ受体(ATR)基因表达及细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)的影响,探讨丹参酮ⅡA逆转高血压左心室肥厚的分子生物学机制.方法 SD大鼠行腹主动脉缩窄术建立高血压左室心肌肥厚模型,术后4周将手术大鼠随机分为假手术组(A组)、手术组(B组)、丹参酮低剂量组(C组,10 mg·kg-1·d-1腹腔注射)、丹参酮高剂量组(D组,20 mg·kg-1·d-1腹腔注射)及缬沙坦组(E组,10mg·kg-1·d-1灌胃).用药8周后检测各组尾动脉压,取左心室组织检测左心室质量指数(LCMI)、病理切片HE染色测量心肌纤维直径(MFD);采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)分别检测AT1受体mRNA和蛋白的表达水平.利用激光共聚焦显微镜测定心肌细胞内游离Ca2 浓度的变化.结果 ①c、D组的血压[(188±11、187±14)mm Hg]显著高于A、E组[Vs(117±8、136±15)EtlIn Hg,P＜0.01],C、D组与B组[(186±13)mm Hg]之间差异无统计学意义(P＞0.05).②C、D组和E组的LVMI、MFD均高于A组(P＜0.05),显著低于B组(P＜0.01).③B组的ATlR mRNA和蛋白的表达显著高于其他各组(P＜0.01);C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05),但均高于E组(P＜0.05);C、D、E组的AT1R基因表达均未降至A组水平(P＜0.05).④B组细胞内[ca2 ]i明显高于其他各组(P＜0.01);D组与A组之间差异无统计学意义(P＞0.05);E组和C组仍高于A、D组(P＜0.05).结论 丹参酮ⅡA可通过下调心肌细胞AT1基因表达、阻止心肌细胞的钙离子内流发挥逆转心肌肥厚的作用,该作用是非血压依从性的.     

洛伐他汀对糖尿病大鼠肾功能及肾脏组织p38丝裂原激活蛋白激酶表达的影响

目的 探讨洛伐他汀对糖尿病(DM)大鼠肾小球结构、功能及肾组织p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及其下游转录因子cAMP反应元件结合蛋白(cREB)表达的影响。方法 18只雄性Wistar大鼠行右肾切除术2周后,随机分为3组:右肾切除对照组、DM组和洛伐他汀治疗组每组6只。DM组和洛伐他汀组腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65 mg／kg)诱发DM模型,洛伐他汀组制模后1 d每日给予洛伐他汀20 mg／kg灌胃。分别于注射STZ后4周收集大鼠尿液,测定尿蛋白(Upro)、尿肌酐(UCr);股动脉放血分离血清,测定血糖(Glu)、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、胆固醇(CHO)和甘油三酯(TG),并计算肌酐清除率(CCr)。免疫组化检测肾皮质磷酸化p38 MAPK(P-p38 MAPK)及磷酸化CREB(P-CREB)的表达特征,并检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维粘连蛋白(FN)及层粘连蛋白(LN)的表达,应用图像分析系统进行定量分析。流式细胞术检测P-p38 MAPK和P-CREB蛋白的表达,Western印迹法检测肾皮质P-p38 MAPK和P-CREB活性的变化。结果 与对照组相比,4周时DM组P-p38 MAPK、P-CREB、TGF-β1、FN及LN表达均明显升高(P均<0.01);而与DM组相比,洛伐他汀组各指标的表达有不同程度的降低(P均<0.01)。结论 洛伐他汀对DM大鼠肾脏结构和功能具有保护作用,可能通过调节p38 MAPK和CREB蛋白的表达     

N-乙酰半胱氨酸对高氧肺损伤保护机制与p38丝裂素活化蛋白激酶途径的相关性研究

目的 观察p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号途径在高氧肺损伤中的表达,探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)在高氧肺损伤中的保护作用及机制.方法 将30只幼年Wistar大鼠按随机数字表法分为空气对照组(A组)、高氧暴露组(B组)、高氧+NAC干预组(C组)、高氧+p38MAPK特异性抑制剂(SB203580)干预组(D组)、高氧+NAC+SB203580联合干预组(E组),每组6只.实验7 d后,光镜下观察肺组织病理改变,并行肺损伤评分;测定肺湿/干重(W/D)比值、支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白(TP)含量、肺通透系数;采用免疫组化法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)在肺组织中的分布;用蛋白质免疫印迹法检测p-p38MAPK蛋白含量.结果 与A组比较,高氧各组均有不同程度的肺损伤,但药物干预各组(C、D、E组)肺损伤均较B组有所减轻.免疫组化显示,高氧各组p-p38MAPK阳性表达较A组明显增强,尤高表达在炎性浸润细胞;药物干预后(C、D、E组)p-p38MAPK阳性细胞较B组明显减少.蛋白质免疫印迹法显示,B组p-p38MAPK蛋白含量明显高于A组(0.20±0.03比0.11±0.01,P<0.05);干预后C、D、E组p-p38MAPK蛋白含量低于B组(0.16±0.02、0.15±0.01、0.14±0.02比0.20±0.03,均P<0.05),但仍高于A组(均P<0.05),而C、D、E组间则无明显差异.各组肺W/D比值、BALF中TP含量、肺通透系数改变与p-p38MAPK蛋白含量变化趋势一致.结论 高氧应激可激活损伤肺组织p38MAPK活性;NAC抗氧化肺保护作用机制可能是通过下调高氧诱导p38MAPK的激活而对肺损伤起保护作用.     

脉冲电磁场对椎间盘退行性病变大鼠A2A腺苷受体及p38 MAPK信号通路的影响

目的 观察脉冲电磁场（PEMF）对椎间盘退行性病变（IDD）大鼠A2A腺苷受体（A2AR）及p38 MAPK信号通路的影响。 方法 采用随机数字表法将40只SD大鼠分为对照组、IDD模型组（简称模型组）、PEMF组和PEMF联合CGS-21680治疗组（简称观察组）。将模型组、PEMF组及观察组大鼠制成IDD动物模型，PEMF组于制模后给予PEMF干预，观察组则给予PEMF干预并注射A2AR激动剂CGS-21680。于造模8周后采用番红O-快绿染色评估各组大鼠椎间盘病理改变，同时检测各组大鼠椎间盘A2AR、环磷酸腺苷（cAMP）、蛋白激酶A(PKA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）、Ⅱ型胶原（Col-Ⅱ）、基质金属蛋白酶-3（MMP3）表达水平。 结果 模型组大鼠髓核组织皱缩，纤维成分及软骨细胞增多，观察组大鼠髓核形态基本趋于正常，纤维环完整无破裂。模型组椎间盘组织A2AR蛋白表达及mRNA水平均高于对照组，观察组A2AR蛋白表达及mRNA水平均显著高于其他各组（P<0.05）。PEMF组和观察组椎间盘cAMP含量及PKA mRNA表达均较模型组增高，且观察组与模型组间差异具有统计学意义（P<0.05）。模型组大鼠椎间盘p38 MAPK、p-p38 MAPK含量及p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均显著高于对照组（P<0.05），PEMF组和观察组p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白含量及p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均有不同程度降低，且观察组上述指标数值均显著低于模型组（P<0.05），p-p38 MAPK蛋白含量及p-p38 MAPK/p38 MAPK比值亦显著低于PEMF组（P<0.05）。模型组大鼠Caspase-3蛋白含量及mRNA表达均显著高于对照组，PEMF组及观察组上述指标含量均较模型组明显降低（P<0.05）。模型组大鼠MMP3含量较对照组显著升高，Col-Ⅱ含量则明显下降；PEMF组、观察组MMP3含量均较模型组降低，Col-Ⅱ表达均较模型组增高，并且观察组上述指标含量与模型组间差异均具有统计学意义（P<0.05）。 结论 炎性因子刺激能活化p38 MAPK信号通路并诱导细胞凋亡，这也是促进IDD大鼠病变的重要原因之一。PEMF联合A2AR激动剂干预能激活A2AR/cAMP/PKA信号通路，进而抑制p38 MAPK磷酸化，减少髓核细胞凋亡，缓解IDD损伤。     

转化生长因子 β1 作用下绒毛膜癌JEG - 3 细胞 c - myc mRNA 表达简

目的 观察在转化生长因子β1（TGF-β1）、-β1受体Ⅰ抑制剂（LY364947）和p38MAPK抑制剂（SB203580）作用下,绒毛膜癌JEG- 3细胞中c-myc mRNA的表达变化.方法 用5 ng/ml的TGF-β1以及1 μM 、3 μM TGF受体Ⅰ抑制剂（LY364947）和1 μM 、3 μM p38MAPK抑制剂（SB203580）作用JEG- 3细胞,用qRT-PCR技术检测各组细胞中c-myc mRNA的表达差异.结果 与正常对照组比较,5 ng/ml TGF-β1组细胞中c-myc mRNA的表达水平升高（P〈0.05）;p38 MAPK抑制剂（SB203580）和TGF-β受体Ⅰ抑制剂（LY364947）均抑制了c-myc mRNA的表达,且抑制作用与应用浓度呈正相关（P〈0.05）.结论 c-myc作为TGFβ1/Smads通路的下游靶基因,其调控有赖于TGFβ1与受体Ⅰ的结合,同时,在绒毛膜癌JEG-3细胞中,TGF-β1介导的Smad途径与 p38 MAPK信号转导存在交互作用.     

丹参酮ⅡA对中波紫外线照射HaCaT细胞中GADD45α和激活蛋白-1及信号通路分子磷酸化水平的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对中波紫外线照射的HaCaT细胞中生长阻滞与DNA损伤基因45α(growth arrest and DNA damage-induced 45α,GADD45α)、激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)表达和信号通路分子磷酸化水平的影响。方法 HaCaT细胞采用中波紫外线照射后分为对照组和1mg/L丹参酮组、2mg/L丹参酮组、4mg/L丹参酮组,对照组加入等体积培养液,1mg/L丹参酮组、2mg/L丹参酮组、4mg/L丹参酮组分别加入1、2、4mg/L丹参酮处理48h。采用实时荧光定量PCR法检测4组细胞GADD45α、AP-1 mRNA表达情况,采用Western blot法检测4组细胞GADD45α、AP-1、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、c-Jun氨基末端激酶(Jun N-terminal kinase,JNK)、丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)蛋白表达情况。结果处理48h后,1mg/L丹参酮组、2mg/L丹参酮组和4mg/L丹参酮组AP-1mRNA(0.828±0.026、0.733±0.035、0.600±0.042)和GADD45αmRNA(0.791±0.041、0.708±0.039、0.569±0.006)表达均低于对照组(1.001±0.052、1.002±0.087)(P0.05),4mg/L丹参酮组低于1mg/L丹参酮组和2mg/L丹参酮组,2mg/L丹参酮组低于1mg/L丹参酮组(P0.05);1mg/L丹参酮组、2mg/L丹参酮组和4mg/L丹参酮组AP-1蛋白(0.889±0.149、0.599±0.044、0.435±0.078)、GADD45α蛋白(0.634±0.052、0.431±0.072、0.264±0.062)、ERK蛋白(0.457±0.068、0.380±0.041、0.306±0.025)、JNK蛋白(0.506±0.042、0.387±0.058、0.367±0.040)、p38 MAPK蛋白(0.697±0.083、0.493±0.047、0.371±0.012)和Akt蛋白(0.935±0.158、0.730±0.100、0.487±0.012)表达均低于对照组(1.019±0.158、0.706±0.039、0.662±0.063、0.589±0.051、0.704±0.052、1.086±0.100),4mg/L丹参酮组低于1 mg/L丹参酮组和2 mg/L丹参酮组,2 mg/L丹参酮组低于1 mg/L丹参酮组(P0.05)。结论丹参酮ⅡA可抑制中波紫外线照射的HaCaT细胞表达GADD45α、AP-1和信号通路分子磷酸化水平。     

siRNA靶向抑制CXCR4基因表达对鼻咽癌细胞增殖及侵袭的影响及机制研究

目的探讨抑制鼻咽癌细胞趋化因子受体-4(CXCR4)基因表达对癌细胞增殖、侵袭的影响及机制。方法回顾性收集鼻咽癌42例临床资料及相应的癌旁组织。RT-PCR和Western bloting分别检测鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达;人鼻咽癌细胞系CNE-2Z分为空白组(细胞未做任何处理)、NC-siRNA组(细胞转染无义siRNA序列)和CXCR4-siRNA组(细胞中转染CXCR4的靶向siRNA序列)。转染48 h后Western bloting检测各组细胞中CXCR4、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;CCK8实验和Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力。结果鼻咽癌中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P0.01);转染CXCR4-siRNA组后CXCR4的蛋白表达显著降低;NC-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与空白组差异无统计学意义(P0.05);CXCR4-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达均显著低于空白组(P0.01)。结论抑制鼻咽癌细胞CXCR4基因表达可显著降低癌细胞的增殖与侵袭能力,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

肿瘤自分泌相关因子TGFβRⅡ对MKN-45人胃癌调控作用的体外及体内研究

目的从肿瘤自分泌相关因子TGFβRⅡ探讨消痰散结方对MKN-45人胃癌调控作用。方法采用体外细胞培养和体内动物实验的方法,Weston blot法检测不同组别TGFβRⅡ的蛋白含量;real-time PCR法检测不同组别TGFβRⅡ的基因表达。结果体外实验中TGFβRⅡ的蛋白含量分别为空白对照组0.342±0.032、空白药物血清组0.359±0.043、消痰散结方血清组0.825±0.143、替加氟血清组0.969±0.077,四组间比较差异有统计学意义(P<0.01),消痰散结方组与空白对照组、空白药物血清组比较差异均有统计学意义(P<0.01);real-time PCR法检测体外实验中不同组别TGFβRⅡ的基因表达:空白药物血清组6.17±0.77、消痰散结方血清组6.64±0.97、替加氟血清组9.13±2.12,虽组间比较差异无统计学意义(P>0.05),但替加氟组与消痰散结方组均有上调其表达的趋势,替加氟的上调趋势更明显。体内实验中各组TGFβRⅡ的蛋白含量分别为空白对照组0.597±0.04、生理盐水组0.692±0.091、消痰散结方组0.639±0.099、替加氟化疗组0.465±0.064,四组间表达差异有统计学意义(P=0.035),进一步两两比较,替加氟组与生理盐水比较差异有统计学意义(P=0.042)。表明替加氟组不能上调体内实验瘤中TGFβRⅡ的蛋白表达,消痰散结方组与空白对照组比较虽然差异未见统计学意义,但有上调趋势。体内实验各组TGFβRⅡ的基因表达分别为空白模型组1.56±0.39、消痰散结方组3.30±1.17、替加氟化疗组6.44±3.50,不同组别TGFβRⅡ的基因表达差异有统计学意义(P<0.01),替加氟组表达高于模型组及消痰散结方组(P<0.05),消痰散结方组与模型组虽然表达差异无统计学意义,但有明显的上调趋势。结论消痰散结方对TGFβRⅡ蛋白和基因表达均有不同程度的上调作用,表明消痰散结方的治疗胃癌的作用可能是通过上调胃癌自分泌因子TGFβRⅡ发挥作用。     

丹参酮ⅡA对压力负荷增加大鼠心肌转化生长因子-β_1表达影响

目的探讨丹参酮ⅡA对大鼠心肌纤维化的保护作用。方法 SD大鼠60只采用腹主动脉缩窄术制备压力负荷增加心肌纤维化模型,术后存活中的24只大鼠随机分为3组,假手术组、模型组、丹参酮ⅡA组（20mg/（kg.d）,每组各8只。术后4周造模成功并开始给药,疗程为4周,8周后检测心肌质量指数、心肌组织病理学、心肌羟脯氨酸及心肌组织转化生长因子-β1蛋白水平。结果模型组大鼠心肌质量指数、心肌羟脯氨酸及心肌组织中转化生长因子-β1蛋白水平明显高于假手术组与丹参酮ⅡA组（P〈0.01）。结论丹参酮ⅡA可抑制心肌肥厚,减轻心肌纤维化,可能与下调心肌组织转化生长因子-β1表达有关。     

丹参酮ⅡA对自发性高血压大鼠左心室肥厚心肌细胞凋亡蛋白的作用

目的:观察丹参的脂溶性成分丹参酮ⅡA对自发性高血压大鼠左室肥厚心肌凋亡蛋白的作用。方法:实验于2005-03/2005-07在华中科技大学同济医学院急诊科实验室完成。①选用8周龄自发性高血压大鼠18只。随机将大鼠分为3组:对照组、丹参酮组、高血压组,每组6只。②对照组:饲养至第8周处死;丹参酮组:从饲养至第8周开始,丹参酮ⅡA(中国药品生物制品检定所,批号S02001300,1kg/包)以1mL/(kg·d)剂量腹腔注射,持续用药10周,第18周处死;高血压组:以相同容量蒸馏水替代丹参酮ⅡA腹腔注射,余同丹参酮组。③用药结束后用MRS2Ⅲ型大鼠电脑血压心率测量仪测量大鼠清醒状态下尾动脉收缩压。④处死后,迅速取出心脏,称量左心室(包括室间隔)的湿重,计算左室质量指数犤左室质量(mg)/体质量(g)犦。⑤采用免疫印迹法检测心肌细胞Bcl-2,Bax及p53蛋白表达。⑥计量资料差异比较采用单因素方差分析。结果:自发性高血压大鼠18只均进入结果分析。①高血压组大鼠左心室心肌组织Bcl-2蛋白表达明显低于对照组(t=2.405,P<0.05),而p53和Bax蛋白表达明显高于对照组(t=14.51,10.26,P<0.01)。丹参酮组Bcl-2表达明显高于高血压组(t=2.359,P<0.05),而p53和Bax蛋白表达明显少于高血压组(t=11.74,7.13,P<0.01)。②高血压组大鼠的收缩压和左室质量指数明显高于对照组(t=6.68,3.84,P<0.01),左室质量指数明显高于丹参酮组(t=2.80,P<0.05)。结论:长期应用丹参酮ⅡA治疗可预防自发性高血压大鼠左室肥厚的形成,其机制可能与丹参酮ⅡA上调心肌细胞凋亡蛋白Bcl-2、下调Bax蛋白及抑制p53蛋白的表达有关。     

深刺加电针对兔膝骨关节炎软骨的影响

目的观察深刺加电针对兔膝骨关节炎软骨组织的影响。方法新西兰兔40只随机分为正常组(A组)10只、造模组30只,后者以Hulth-Telhag法复制兔左膝骨关节炎模型,X线评价造模情况。造模成功后随机分为模型组(B组,n=10)、深刺加电针组(C组,n=10)和普通电针组(D组,n=10),造模后第6周开始对C组和D组进行治疗,共4周。治疗结束后检测关节液p H值,透射电镜下观察软骨细胞组织结构和病理学改变,检测软骨细胞凋亡指数,Western blotting检测软骨组织中酸离子敏感通道1(ASIC1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的磷酸化水平和p53蛋白表达,免疫组织化学法检测软骨组织中ASIC1分布。结果关节液中p H值从高到低依次为A组=C组D组B组(P0.01);A组、C组、D组膝关节软骨组织形态较B组完整,C组凋亡率低于B组和D组(P0.01),与A组无显著性差异(P0.05);软骨组织中ASIC1和p53表达由低到高均为A组=C组D组B组(P0.01);p38MAPK表达由低到高均为A组C组D组B组(P0.01)。结论深刺加电针可以降低软骨细胞中ASIC1蛋白表达和p38MAPK磷酸化水平,抑制凋亡因子p53表达,减少软骨细胞凋亡,减轻软骨细胞损伤。     

养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区超微结构及p38丝裂原活化蛋白激酶蛋白表达的影响

目的观察养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区超微结构及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白表达的影响。方法 180只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、血管性痴呆模型组(模型组)和养血清脑颗粒治疗组(治疗组),采用改良的Pulsinelli四血管阻断法制作血管性痴呆模型,分别在术后1、2、4、8周采用透射电镜观察大鼠海马CA1区超微结构变化,免疫组化法和Western blotting法检测海马CA1区p38MAPK水平。结果模型组海马CA1区神经元大量固缩,细胞核溶解,异染色质边集,线粒体肿胀。治疗组海马CA1区神经元核膜较完整,核染色质分布较均匀,胞质内线粒体及其他细胞器基本正常。与假手术组相比,模型组各时间点p38MAPK蛋白表达明显增多(P0.01),4周时达高峰;与模型组比较,治疗组各时间点p38MAPK蛋白表达明显减少(P0.01)。结论养血清脑颗粒可改善血管性痴呆模型大鼠海马CA1区损伤的神经元超微结构,可能与抑制p38MAPK蛋白的表达有关。     

糖尿病大鼠肾脏组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶的表达特征及意义

目的:探讨糖尿病(DM)大鼠肾组织p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及其下游转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的表达特征及与肾小球肥大、细胞外基质积聚的关系.方法:70只雄性Wistar2周后,随机分为两组:右肾切除对照组(CN)和DM组.DM组经腹腔注射链脲佐菌素(STZ,65 mg/kgDM.CN组注射等量枸橼酸缓冲液.两组分别于注射后第1、2、4、8和12周各取6只大鼠,收集24 h尿液,测定尿蛋白(Upro)、肌酐(UCr);股动脉放血分离血清,测血糖(Glu)、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN),并计算肌酐清除率(CCr);免疫组化法检测肾皮质磷酸化p38 MAPK (P-p38 MAPK)及?CREB(P-CREB)的表达特征,并检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维粘连蛋白(FN)及层粘连蛋白(LN)的表达,应用图像分析系统进行定量分析.流式细胞术检测P-p38 MAPK和P?CREB蛋白的表达.结果:与CN组比较,DM组P-p38 MAPK在1、2、4和8周升高(P均<0.01),第12周降至正常.DM组P-CREB在第2、4和8周增高(P均<0.01),在12周时降至正常.TGF-β1、FN、LN分别于第2、4周开始升高.结论:肾小球p38 MAPKCREB活性在早期糖尿病肾病大鼠肾组织中升高,p38 MAPK途径的激活有可能在糖尿病肾病;的早期肾小球肥大和细胞外基质积聚中发挥一定作用.