恶性疟原虫FCC-1/HN株裂殖子表面抗原2基因在M.smegmatis mc2155中的表达

目的研究裂殖子表面抗原2(merozoitesurfaceantigen2,MSA2)基因重组BCG疫苗的保护作用.方法采用电穿孔转化法将重组质粒pBCG/MSA2导入耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)mc2155中,通过卡那霉素抗性筛选并经PCR鉴定的重组M.smegmatismc2155培养于middlebrook7H9broth(M7H9)培养基,并添加10%M7H9enrichmentADC和0.05%Tween80,48～72?h后于45℃进行30?min的诱导表达,表达产物进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Westernblot分析.结果SDS-PAGE及Westernblot分析结果均显示在相对分子质量(Mr)约31×103的位置上可见明显的蛋白条带,并与MSA2基因编码序列推断的Mr相符.结论恶性疟原虫裂殖子表面抗原2可在M.smegmatis中表达,这些结果将为恶性疟原虫多价BCG疫苗的研制提供有用的资料.     

恶性疟原虫复制蛋白PfRPA2的原核表达及多抗制备

目的克隆表达恶性疟原虫复制蛋白PfRPA2亚基,制备多抗,为该蛋白的功能研究奠定基础。方法PCR扩增目的基因片段,克隆到表达载体pGEX．KG中,构建PjRPA2／pGEX-KG原核表达载体,IPTG诱导表达,SDS—PAGE电泳分析表达产物．谷胱甘肽柱纯化蛋白,Western blot检测其抗原性,以纯化的GST-PfRPA2免疫小鼠,制备抗tyRPA2的多抗．间接ELISA法检测鼠血清效价,Western blot鉴定多抗特异性。结果成功构建了重组踯PA2／pGEX．KG原核表达质粒,并在大肠杆菌中以可济眭形式高效表达,纯化表达产物,制备抗邸PA2的鼠多抗,效价为10-7,Western blot证实此抗体可识别恶性疟原虫内与PJRPA2蛋白位置对应的特异性条带。结论恶性疟原虫复制蛋白PfRPA2亚基在大肠杆菌中获得可溶性高效表达,纯化表达产物能诱导小鼠生产能识别天然蛋白的特异性抗体。     

弓形虫ROP2基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的 :构建弓形虫棒状体蛋白 (ROP2 )基因重组质粒并在大肠杆菌中表达 ,用于筛选弓形虫新的诊断抗原和疫苗分子。方法 :根据ROP2基因已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出ROP2基因片段 ,再克隆到pGEX 4T 1质粒 ,重组质粒经酶切及PCR鉴定 ,而后进行测序 ;重组质粒在大肠杆菌BL2 1 (DE3)中进行ITPG诱导表达 ,表达产物经SDS PAGE及WesternBlot分析。结果 :ROP2基因PCR产物大小与预期相符 ,约 1 0 4 3bp ,重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合 ;SDS PAGE及免疫印迹显示ROP2融合蛋白表观分子量约为 5 5kDa ,表达产物约占菌体总蛋白1 7% ,具有一定的免疫反应性。结论 :克隆并表达了弓形虫ROP2基因 ,为下一步弓形虫诊断及疫苗研究奠定了基础     

幽门螺杆菌全长hpaA基因克隆和在大肠杆菌中高效表达

为了构建幽门螺杆菌（H.pylori)全长hpaA基因表达质粒,在大肠杆菌中表达重组HpaA(reHpaA)蛋白,我们用PCR扩增全长hpaA基因,经适当的酶切－连接反应将其连入原核表达质粒pTrc99A,反应产物转化大肠杆菌JM105,用Amp( )培养基筛选,提取重组菌质粒,PCR和酶切鉴定,筛选阳性克隆,并用重组菌质粒进行hpaA基因测序。阳性克隆经IPTG诱导培养,用SDS－PAGE电泳和Western blot进行reHpaA表达分析和鉴定,用薄层扫描分析reHpaA含量。结果显示,重组质粒pTrc99A-hpaA经PCR和酶切后均产生783bp hpaA基因。重组菌能表达约30kD reHpaA蛋白,含量占全菌体蛋白量的51．99％,Western blot证实其有免疫反应性。重组H.pylori HpaA表达质粒的成功构建及在大肠杆菌中高效表达的实现,为探索制备H.pylori疫苗奠定了一定基础。     

恶性疟原虫FCCl／HN株MSAl全基因编码区的体外扩增

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSA1)是抗疟疫苗的候选抗原之一。据已知的MSAl基因序列，自行设计合成了四对引物。应用PCR技术，分四段从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组DNA中扩增出垒基因编码区序列。扩增产物经1．2％琼脂塘凝腔电泳鉴定．表明获得了正确的MSA1基因扩增片段。     

BCG/恶性疟MSP-2、CSP多价疫苗免疫小鼠应答类型研究

目的：探讨恶性疟原虫FCC－1／HN株裂殖子表面蛋白－2（MSP－2）和环子孢子蛋白（CSP）与BCG多价疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答的特性及抗感染的保护性免疫机制。方法：将重组pBCG／MSP－2和pBCG／CSP多价疫苗经皮下注射BALB／c小鼠，小鼠经多价疫苗免疫8周后，用流式细胞仪分析脾脏T淋巴细胞的分化，并体外培养脾脏细胞，用夹心ELISA法测定IFN－γ和IL－2的产生；用血清学方法测定免疫鼠IgG抗体的动态变化，在体外测定抗体介导的抑制实验。结果：与对照组相比，疫苗组CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞有显著性的增高，体外培养的脾脏细胞IFN－γ有高浓度的分泌。同时，免疫鼠血清对疟原虫抗原都表现了较高水平的IgG类抗体反应，抗体对原虫的增殖明显抑制。结论：恶性疟原虫FCC－1／HNpBCG/MSP-2和pBCG/CSP多价疫苗诱导了以TH1为主的免疫应答类型。     

表达幽门螺杆菌hpaA重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建和鉴定

目的：构建表达幽门螺杆菌（H.pylori)hpaA的重组减毒鼠伤寒沙门低 疫苗菌。方法：用基因工程的方法将hpaA基因克隆入原核表达质粒pTrc99A,并进行了基因测序。重组质粒经鉴定后再导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261,提取重组疫苗菌质粒,PCR和酶切鉴定,筛选阳性克隆。用SDS－PAGE电泳和Western blot进行HpaA表达和鉴定。结果：经PCR和酶切证实,构建了含hpaA的重组原核表达质粒pTrc99A-hpaA,并将后者成功转化了减毒鼠伤寒沙门氏菌。HpaA能在疫苗菌中以二聚体形式表达,HpaA量约占全菌体蛋白量的17％,Westem blot证实其有免疫原性。结论：构建了表达H.pylori hpaA的重组减毒鼠伤寒沙门氏疫苗菌,为探索制备H.pylori口服活疫苗尊定了基础。     

恶性疟原虫AMA1不同类型疫苗组合免疫接种研究

目的 探索应用恶性疟原虫DNA疫苗、重组痘苗病毒疫苗和重组蛋白疫苗进行组合免疫接种，诱导针对恶性疟原虫红内期抗原AMA1的保护性抗体。方法PCR扩增云南株恶性疟原虫AMA1编码基因，构建和制备DNA免疫质粒VR1020/E（疫苗D）、重组改良安卡拉痘苗病毒rMVME（疫苗V）和重组原核表达AMAl胞外域蛋白E（疫苗P）。用疫苗D单独或与小鼠GM-CSF表达质粒共同对小鼠进行初始免疫，用疫苗V和疫苗P进行单次或先后各一次追加强化。采用疫苗D-V组合方案免疫新西兰白兔。ELISA测定小鼠血清IgG及其亚类IgG1和IgG2a的水平，用免疫动物血清进行疟原虫裂殖子体外入侵抑制实验。结果在疫苗D初始免疫的基础上，采用疫苗V或疫苗P进行强化免疫可显著提高小鼠针对AMA1的抗体应答，小鼠血清特异性IgG平均增加15至137倍，GM-CSF表达质粒对疫苗D-V组合免疫小鼠的抗体应答有显著促进作用。采用疫苗D-V组合免疫在家兔可诱导明显的抗体应答。小鼠和家兔免疫血清在体外可显著抑制疟原虫裂殖子对RBC的入侵。结论将DNA疫苗、重组改良安卡拉痘苗病毒疫苗和重组蛋白疫苗进行组合免疫接种是诱导疟疾红内期保护性抗体的有效方法。     

鼠疫耶尔森氏菌F1抗原在酿酒酵母中的表达及鉴定

目的：构建含鼠疫杆菌F1抗原结构基因caf1的重组载体，并在酿酒酵母中表达。方法：将鼠疫杆菌的F1抗原结构基因caf1插入到pHSS6-mTn-3xHA／locz质粒中，构建重组载体pHSS6-mTn-3xHA／locz—caf1。将重组载体经NotⅠ酶切后，以醋酸锂法转化酿酒酵母，将转化的酿酒酵母接种于SCUra平板上筛选阳性克隆，表达产物用SDS—PAGE和Western blot进行鉴定。结果：经SDS—PAGE鉴定和Western blot分析表明，转化的酿酒酵母可表达鼠疫杆菌F1表面抗原蛋白。结论：成功地构建了重组载体pHSS6-mTn-3xHA／lacZ—caf1，并在酿酒酵母中稳定表达鼠疫杆菌F1表面抗原，为制备可经消化道途径免疫的鼠疫杆菌基因疫苗奠定了基础。     

过表达连接子蛋白40(Cx40)通过引起细胞周期阻滞抑制H9c2大鼠心肌细胞增殖

目的 建立过表达连接子蛋白40(Cx40)的H9c2心肌细胞稳定株，初步探讨慢病毒载体介导的Cx40蛋白过表达对H9c2细胞增殖的影响及其相关机制。方法 采用实时定量PCR从H9c2细胞株扩增Cx40基因片段，与慢病毒载体质粒pLVX-IRES-Puro连接，获得重组pLVX-Flag-Cx40表达载体。通过与包装质粒共转染人胚肾HEK293T细胞，获得携带Flag-Cx40的重组慢病毒颗粒。感染的H9c2细胞经嘌呤霉素(puromycin)筛选出稳定表达株(H9c2-Flag-Cx40细胞)。采用Western blot法检测Cx40蛋白表达情况；通过CCK-8法检测Cx40对H9c2细胞增殖的影响；流式细胞术检测细胞周期的变化；实时定量PCR检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的mRNA表达；Western blot法检测cyclin D1蛋白表达；免疫共沉淀(Co-IP)实验检测H9c2细胞Cx40和Yes相关蛋白(YAP)的相互结合情况；分离胞质、胞核蛋白，利用Western blot法检测Cx40对YAP细胞定位的影响。结果 测序结果显示成功构建重组pLVX-Flag-...     

足背短肌的应用解剖

本文用手术显微镜及测微器在50侧(男30、女20)成人尸体的标本上对伸(足母)短肌和伸趾短肌的形态.血供和神经支配进行解剖与测量.伸(足母)短肌的长54.8±0.90mm,宽15.90±0.44mm厚3.46±0.18mm;伸趾短肌的长65.65±1.58mm,宽19,46±0.51mm,厚3.43±0.19mm.血供主要来自跗外侧动脉,其起点处的外径1.72±0.09mm,入肌处的外径0.82±0.06mm,可游离的长度24.85±1.41mm;肌肉由腓深神经分支支配.本文还讨论了该肌瓣的临床应用及作为供体时应注意的问题.     

EFFECTS OF GLUCOCORTICOIDS ON DIFFERENTIATION OF ZONA GLOMERULOSA OF FETAL ADRENAL CORTEX OF RATS

The tissue differentiation of the zona glomerulosa of the fetal adrenal cortex of rats was studied by giving experimental treatments to the fetus in vivo. A low-glucocorticoid-condition was given to the fetus by bilateral adrenalectomy of pregnant rats for removing exogenous glucocorticoids from the fetus, and by brain aspiration of the fetuses for removing the fetal pituitary gland (ACTH) and endogenous glucocorticoids. When the fetus was placed under a low-glucocorticoid-condition for the last couple of days of gestation, poor differentiation of the zona glomerulosa occurred speciflcally in the fetal adrenal cortex. The degree of the poor differentiation seemed to be proportional to the duration of the low-glucocorticoid-condition. Supplemental administration of glucocorticoids could prevent this poor differentiation of the zona glomerulosa. These results indicate that the tissue differentiation of the zona glomerulosa of the fetal adrenal cortex depends much on glucocorticoids.     

大鼠角膜中央区SP样、CGRP样免疫阳性纤维的起源

向角膜中央区注射ＨＲＰ后，用抗ＳＰ和抗ＣＧＲＰ抗体对三叉神经节、颈上神经节和迷走神经节进行免疫组织化学处理。结果证明：双重阳性细胞出现于三叉神经节的内侧区且集中分布于背内侧部．ＣＧＲＰ样双重阳性细胞主要分布在节的背内侧部的周边区；ＳＰ样双重阳性细胞散在于节的背内侧部的深部。两者均为圆形或椭圆形。在颈上神经节和迷走神经节内未见双重阳性细胞。     

川楝素对家蝇生长发育的影响

本文通过实验室饲养研究了川楝素对家蝇(Musca     

卫氏并殖吸虫成虫和囊蚴抗原分析

本文报道了应用等电点聚焦电泳(IEF)、聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳(Dise-PAGE)和免疫电泳(IE)对卫氏并殖吸虫成虫和囊蚴抗原进行理化性质和免疫学性质分析的结果。成虫和囊蚴在理化性质方面存在许多相似组分和少数特征组分;成虫和囊蚴存在共同抗原和期特异抗原;期特异抗原大多数含糖脂蛋白,部分期特异抗原为主要血清学抗原。     

云南正常人角膜前曲率半径的测量

测定统计了云南正常人515例(1030)眼的角膜前曲率半径,结果如下:水平经线前曲率半径为7.728±0.301mm((?)±s);垂直经线前曲率半径为7.627±0.307mm.水平经线与垂直经线间以及男女性别间的测定值存在显著差异,而同性别中左右眼间无显著差异,随年龄增大,角膜前曲率半径值呈增大趋势.     

我国恶性疟原虫裂殖子表面蛋白MSP-2的抗原表位分析

根据我国恶性疟原虫株MSP-2基因序列,检索我国虫株MSP-2是否具有国外已鉴定的MSP-2抗原表位。结果显示,我国虫株MSP-2具有已鉴定的FC-27等位基因型可变区抗原表位STNS和DTPTATE。同时应用计算机辅助抗原表位分析技术对MSP-2进行抗原表位分析预测,并以合成肽技术鉴定了预测表位的免疫原性。抗原指数分析表明,MSP-2分子亲水性指数和侧链易曲性指数最高的区域分别位于aa153～166和aa65～72,而aa53～60可能是我国虫株特异的抗原表位。用4个合成肽进行免疫学鉴定,证实预测的表位可以诱导抗肽抗体反应,免疫血清可识别重组MSP-2和恶性疟原虫全抗原中MSP-2抗原区带,且合成肽可与我国流行区高度免疫人群免疫血清反应。由于这些表位存在于我国海南、云南、安徽株MSP-2序列中,可以作为研制我国恶性疟重组多价表位疫苗的候选抗原表位。     

几种实验啮齿动物精母细胞联会复合体的初步观察

本文对实验啮齿动物豚鼠、兔、大白鼠、小白鼠(津白Ⅰ号、津白Ⅱ号和昆明种)精母细胞联会复合体进行了观察。其联会复合体基本组成是相同的,如都包括2条侧体和两侧体间的空间中的一条中体,并有较细的横丝等,但在形态上,还存在一定差异。同源染色体和其间的联会复合体,吸附于核内膜上,核内膜加厚形成板状物,其中体明显到达核膜。性泡是X染色体和Y染色体在减数分裂期间配对。小鼠核仁密切联系性泡。性泡也可紧密贴于核膜,中体上存在有数目不等的小结节。