人参总皂甙诱导L—细胞产生造血调节因子的实验研究

为探讨中药人参的重要有效成分人参总皂甙（TotalSaponinsofPanaxGinseng，TSPG）调节造血的可能机制，在体外祖细胞培养中以TSPG诱导（LCCMTSPG）或未经诱导（LSCM）的L—细胞条件培养液替代祖细胞生长因子，观察集落产率的变化，并与TSPG和LcCM共同作用（LcLM＋TSPG）后的集落产率作比较。结果如下：LcCMTSPG作用后的CFU－GM（位—单系祖细胞）、BFU－E（早期红系祖细胞）、CFU－E（晚期红系祖细胞）的集落产率分别为24．8±9．01、61．73±11．26、145．93±17．22，与LcCM组（51．85±10．08、33．95±825、108．66±13．56）相比分别为下降（P＜0．05）、提高（P＜0．01）、提高（P＜0．01）。提示TSPG可诱导L—细胞产生选择性作用于粒—单系的造血抑制因子和作用于红系的生长因子。LCCM＋TSPG作用后CFU－GM、BFU－E、CFU－E集落产率分别为74．25±10．67、42．5±9．32、98±10．81，与LcCM组相比分别为提高（P＜0．05）、提高（P＜0.05）、无变化，提示TSPG可能与LcCM中促进CFU－E、BFU—E生长的因子协同作用。该研究表明TSPG可经影响基质细胞产生造血调节因子或与造血调节因子共同调节血细胞发生。     

人参总皂甙对小鼠红系造血的影响

人参为中医临床补气要药。人参总皂甙（TSPG）为人参主要有效成份。本应用造血细胞体外培养技术，研究其对小鼠红系血发生的影响，结果提示：TSPG能明显刺激小鼠BFU－E和CFU－E的增殖和分化。根据本实验室工作和其它学的工作，我们推测：人参“补气生血”机理可能系直接和／或间接地通过作用于多能造血干细胞、造血祖细胞、造血微环境和内分泌系统，调控造血活动。     

人参总皂甙对造血生长因子产生的影响

本文应用造血祖细胞体外培养术和白细胞介素（ＩＬ）生物活性检测术，观察经人参总皂甙（ＴＳＰＧ）刺激的小鼠脾细胞、腹腔巨噬细胞和成纤维细胞培养上清液的集落刺激因子（ＣＳＦ）、ＩＬ－２和ＩＬ－６生物活性。结果表明：ＴＳＰＧ刺激组的ＣＳＦ和ＩＬ－６活性均显著高于对照组，ＴＳＰＧ刺激的脾细胞培养上清液的ＩＬ－２活性明显高于对照组，而ＴＳＰＧ刺激的巨噬细胞和成纤维细胞培养上清液的ＩＬ－２活性与对照组无显著性差     

人参总皂甙对骨髓巨噬细胞的影响及与造血调控的关系

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对骨髓巨噬细胞(BMMφ)生物学活性的影响及其与造血调控关系。方法：采用骨髓造血祖细胞体外培养,造血生长因子生物活性检测,免疫细胞化学,核酸探针原位杂交等技术。结果：经TSPG诱导制备的BMMφ的培养上清可提高髓系造血祖细胞的集落产率;经TSPG诱导后,BMMφ表达EPO,IL-3,IL-6,GM-CSF的蛋白水平有不同程度提高;EPO mRNA,GM-CSF mRNA的表达水平和强度明显提高。结论：TBPG可以刺激造血诱导微环境中的巨噬细胞,从基因水平和蛋白水平2级层次上促进造血调控因子的合成和分泌,进而促进CFU-Mix,CFU-E,CFU-GM的增殖分化。     

人参总皂甙诱导淋巴细胞表达GM-CSF的实验研究

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人淋巴细胞表达GM-CSF的影响，及其与人粒细胞．巨噬细胞系血细胞发生调控的关系。方法：采用造血祖细胞、胸腺细胞和脾细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。结果：TSPG能显著刺激粒细胞，巨噬细胞系造血祖细胞(CFU-GM)增殖；经TSPG诱导制备的胸腺细胞和脾细胞条件培养液富含GM-CSF样活性；TSPG能显著促进胸腺细胞和脾细胞的GM-CSF蛋白和，mRNA表达。结论TSPG可能通过直接和／或间接途径促进淋巴细胞合成和分泌GM-CSF，进而促进CFU-GM的增殖分化。     

人参总皂甙体外诱导CD34+造血干/祖细胞增殖的作用

目的：探讨人参总皂甙(TSPG)协同造血生长因子体外诱导CD34~ 造血干/祖细胞(HSC/HPC)增殖的作用。方法：收集人脐血细胞,采用Stemsep TM干细胞分选系统分离纯化CD34~ HSC/HPC,经不同剂量TSPG加入不同造血生长因子组合进行培养,检测细胞总数、CD34~ 细胞及集落形成细胞总数(CFCs)的变化。结果：TSPG 10、20、50和70μg/ml均可不同程度地提高细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞扩增倍数,TSPG 50μg/ml是最佳刺激浓度,可使细胞总数、CFCs和CD34~ 细胞分别增至(2470．50±79．96)倍、(53．96±4．29)倍和(21．86士3．09)倍。结论：合适剂量的TSPG能够促进CD34~ 造血干/祖细胞体外增殖。     

人参总皂甙对人淋巴细胞表达早期造血生长因子的影响

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人淋巴细胞表达早期造血生长因子的影响,探讨人参“补气生血”的现代分子生物学机理。方法：采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物活性检测、免疫细胞化学、核酸分子原位杂交技术,研究TSPG对胎儿胸腺细胞、脾细胞表达早期造血生长因子的影响及其机理。结果：经TSPG诱导制备的胎儿胸腺细胞条件培养液(HTCM)、脾细胞条件培养液(HSCM)对人髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)的增殖分化有明显促进作用;经TSPG诱导后胎儿胸腺细胞、脾细胞内IL-3的蛋白及mRNA表达显著提高。结论：TSPG可能诱导人淋巴细胞表达早期造血生长因子,从而促进人早期血细胞增殖分化。     

人参总皂甙诱导人造血基质细胞表达IL-3的实验研究

目的 研究人参总皂甙(TSPG)对人早期血细胞发生的影响及其机理,进一步探讨人参“补气生血”的现代分子生物学机理。方法 采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子(HGF)生物活性检测、免疫细胞化学、核酸分子原位杂交技术,研究TSPG对造血基质细胞表达白细胞介素-3(IL-3)的影响及其机理。结果 TSPG体外作用能明显促进人早期髓系多向性造血祖细胞(CFu-Mix)的集落形成;经TSPG诱导制备的人骨髓基质细胞(BMSG)、脐静脉内皮细胞株(EcV304)、单核细胞株(THP)条件培养液对CFU-Mix的增殖分化有明显促进作用;经TSPG诱导后BMSC、EcV304、THP细胞内IL-3的蛋白及mRNA表达显著提高。结论 TSPG能促进人早期血细胞的增殖分化,其机理可能与TSPG诱导人造血基质细胞表达IL-3有密切关系。     

人参总皂甙对造血生长因子活性及其mRNA表达的影响

目的　探讨人参“补气生血”的现代生物学机理。　方法　采用核酸分子原位杂交和造血生长因子生物活性检测等技术,研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对造血生长因子活性及其ｍ ＲＮＡ表达的影响。　结果　ＴＳＰＧ能显著促进小鼠骨髓基质细胞（ＢＭＳＣ）、腹腔巨噬细胞（ＰＭ）和脾细胞（ＳＰＣ）的粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白细胞介素－６（ＩＬ－６）ｍ ＲＮＡ的表达,经ＴＳＰＧ诱导制备的ＢＭＳＣ、ＰＭ和ＳＰＣ条件培养上清液含有较高的爆式红系集落刺激活性（ＢＰＡ）、粒－巨噬细胞集落刺激活性（ＧＭ－ＣＳＡ）和巨核细胞集落刺激活性（ＭＫ－ＣＳＡ）。　结论　ＴＳＰＧ促进血细胞生成的机理与其诱导造血生长因子的基因表达有密切关系。     

人参皂甙诱导骨髓巨噬细胞表达造血生长因子的研究

目的 探讨人参皂甙对巨噬细胞表达造血生长因子的影响。方法 采用造血祖细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学与核酸原位杂交等技术，研究人参总皂甙(TSPG)对大鼠骨髓巨噬细胞(rBMMφ)和人单核细胞株(THP-1)表达造血生长因子的影响。结果 经TSPG(10～50mg／L)诱导制备的rBMMφ和THP-1的培养上清液可显著提高大鼠和人的CF/U-Mix、CFU-GM和CFU-E的集落产率；经PSPG诱导后rBMMφ和THP-1表达EPO、GM-CSF、IL-3、IL-6的蛋白水平有不同程度提高；经TSPG诱导后rBMMφ和THP-1表达EPO、GM—CSF和IL-3的mRNA水平和强度显著提高。结论 TSPG可通过直接和／或间接途径刺激造血诱导微环境的巨噬细胞，从蛋白水平和基因转录水平两级层次上促进造血调控因子(如EPO、GM-CSF、IL-3和IL-6等)的合成和分泌，进而促进造血干／祖细胞的增殖分化，这或许足人参调节血细胞生成的可能途径之一。     

人参总皂甙对小鼠造血细胞增殖的影响

应用ＭＴＴ比色分析法证实,人参总皂甙在一定浓度内能促进小鼠骨髓造血细胞的增殖。应用流式细胞术的研究提示,人参总皂甙能促进骨髓造血细胞进入细胞增殖周期。造血祖细胞体外培养的研究表明,人参总皂甙能促进小鼠多种造血祖细胞的集落形成。综述上研究结果提示,人参总皂甙可能通过促进髓造血细胞进入细胞增殖周期以及促进造血祖细胞增殖等途径。刺激血细胞的生成,进而发挥其临床“补气生血”作用。     

三七总皂甙对红系祖细胞增殖调控机理的研究

采用造血祖细胞体外培养和造血生长因子检测等实验血液学技术，研究三七总皂甙对小鼠红系祖细胞调控的生物学机理。结果表明：三七总皂甙对正常或骨髓抑制一贫血模型小鼠的红系祖细胞增殖有明显促进作用。三七总皂甙亦可提高阿糖胞苷所致祖细胞的“自杀”率；经三七总皂甙诱导制备的脾细胞，Ｌ细胞培养上清液和红系祖细胞的直殖具有较高刺激活性。     

当归多糖诱导L－细胞产生造血生长因子的实验研究

用造血祖细胞体外培养、造血生长因子检测和流式细胞术等方法,研究当归多糖（ＡＰ）诱导Ｌ－细胞（成纤维细胞株）产生造血生长因子及其对血细胞发生的调节作用。结果表明,Ｌ－细胞条件培养液（ＬｃＣＭ）对造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｅ）的体外增殖呈双向调节作用;１０％ＬｃＣＭ能促进骨髓造血细胞进入增殖活跃的Ｓ＋Ｍ／Ｇ２期;经ＡＰ诱导制备的ＬｃＣＭ在有或无外源性造血生长因子（如Ｅｐｏ,ＢＰＡ,ＧＭ－ＣＳＦ）存在时均对造血祖细胞的克隆增殖显示较高刺激活性;ＡＰ或ＩＬ－１与造血生长因子间似无协同作用。本研究提示ＡＰ可能通过诱导造血微环境的成纤维细胞分泌某些造血生长因子,从而促进造血祖细胞增殖分化,这或许是当归＂补血＂的生物学机理之一。     

小鼠下颌下腺条件培养上清对造血祖细胞增殖的影响

目的　研究下颌下腺与血细胞发生的关系 ,探讨下颌下腺对造血功能的调节作用。　方法　采用造血祖细胞体外培养及造血生长因子 (HGF)活性检测法。　结果　正常雄性和雌性小鼠下颌下腺组织培养上清(SGCM)对粒单系祖细胞 (CFU - GM)、红系祖细胞 (BFU - E、CFU - E)和巨核系祖细胞 (CFU - Meg)的增殖有明显促进作用 ;正常雄性小鼠 SGCM对 CFU - E和 CFU - Meg的刺激活性明显高于正常雌性小鼠 SGCM。贫血模型雌、雄小鼠的 SGCM能提高 BFU - E、CFU - E的产率 ;雌性贫血模型小鼠的 SGCM亦能提高 CFU - Meg的产率。IL - 3能促进 SGCM对 BFU - E、CFU - E的增殖。　结论　小鼠下颌下腺可能通过分泌造血生长因子样物质促进造血祖细胞增生 ,从而发挥造血调控功能     

实验性铅中毒对大鼠海马神经生长因子基因表达的影响

目的观察实验性铅中毒对大鼠海马神经生长因子(NGF)基因表达的影响,探讨铅致学习记忆损害的分子毒理学机制。方法逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和原位杂交法。结果正常大鼠海马组织可表达NGF mRNA,铅染毒后海马NGF mRNA含量显著下降。海马组织中神经生长因子mRNA表达量与铅染毒时间呈负相关。结论铅可使海马组织神经生长因子基因表达下降。     

aFGF在高温致神经管畸形中作用的免疫组织化学研究

在已建立的高温致神经管畸形的动物模型上，用免疫组织化学方法，对高温处理后的孕鼠之不同发育阶段的胚胎进行酸性成纤维细胞生长因子免疫组织化学染以，观察其在各期胚胎的神经上皮及春周围间充质，内界膜和脊索中的分布和变化。