应用VPA调节组蛋白乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase的影响

目的:探讨应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)调节染色体组蛋白低乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达及活性的影响,同时通过检测VPA与Caspase3、Caspase8、Caspase9特异性抑制剂协同作用后细胞凋亡的变化加以验证.方法:应用0.75~4.0 mmol/L VPA干预肝癌细胞HepG2、胃癌细胞BGC-823、乳腺癌细胞MCF-7 48小时后,流式细胞术分析细胞凋亡的变化;分光光度法检测Caspase3、Caspase8、Caspase9活性;流式细胞仪间接免疫荧光法定量分析Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达.结果:0.75~4.0 mmol/L VPA干预48小时后,FCM分析可见HepG2、BGC-823、MCF-7细胞凋亡率显著增加,与对照组比较差异有显著意义(P<0.001)并且呈剂量依赖趋势;HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达均被明显上调、活性升高,与对照组相比有显著差异(P<0.001);Caspase8活性及蛋白表达在HepG2、MCF-7细胞未见明显改变,BGC-823细胞仅轻度增加.VPA与Caspase3、9相应特异性抑制剂共同作用后,Caspase3、Caspase9活性被抑制,细胞凋亡率较VPA单独干预组显著降低(P<0.005);VPA与Caspase8特异性抑制剂共同作用组细胞凋亡率与VPA单独作用组比较无明显变化(P>0.05).结论:应用VPA干预组蛋白乙酰化修饰对HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达及活性可起明显的调控作用;对Caspase8的调控作用则随肿瘤细胞来源及表型的不同而有所差异,但总体趋势不明显.     

1α,25(OH)_2D_3通过阻滞细胞周期抑制胃癌细胞系增殖

目的研究1α,25(OH)2D3对胃癌细胞增殖和细胞周期的影响,并探讨其相关的作用机制。方法 BGC-823和SGC-7901胃癌细胞系分别给予终浓度为1×10-10～1×10-7mol/L的1α,25(OH)2D3处理72 h,用MTT法检测细胞抑制率;用流式细胞仪检测细胞周期;用RT-qPCR技术检测细胞周期相关基因P21、cyclin D1、cyclin E1和CDK6 mRNA表达。结果 1α,25(OH)2D3对胃癌细胞的增殖抑制率具有浓度依赖性,1α,25(OH)2D3干预导致BGC-823和SGC-7901细胞系G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低(P0.05);1α,25(OH)2D3干预后,BGC-823和SGC-7901胃癌细胞P21 mRNA表达升高(P0.01),而cyclin D1、cyclin E1和CDK6 mRNA表达降低(P0.01)。结论 1α,25(OH)2D3抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞,可能与上调P21,下调cyclin D1、cyclin E1和CDK6的表达有关。     

桂枝茯苓丸对荷瘤鼠Survivin、PCNA、P21~(waf/cip)的影响

目的 探讨桂枝茯苓丸抑瘤作用的分子机制,为桂枝茯苓丸(GFW)开发应用提供实验依据.方法 计算抑瘤率,免疫组化法测定PCNA、P21waf/cip蛋白表达,原位杂交法检测Survivin mRNA表达.结果 GFW抑瘤率为38.93%,GFW上调肿瘤细胞P21 表达,下调PCNA及Survivin表达.结论 GFW可抑制肿瘤细胞生长,其机制可能与上调P21waf/cip及下调PCNA及Survivin mRNA表达密切相关.     

1α,25（OH）2D3通过阻滞细胞周期抑制胃癌细胞系增殖简

 目的 研究1α,25(OH) 2D3对胃癌细胞增殖和细胞周期的影响,并探讨其相关的作用机制。方法 BGC-823和SGC-7901胃癌细胞株分别给予终浓度为10-10~10-7mol/L的1α,25(OH) 2D3处理72h,用MTT法检测细胞抑制率;用流式细胞仪检测细胞周期;用RT-qPCR技术检测细胞周期相关基因P21、cyclinD1、cyclinE1和CDK6 mRNA表达。 结果1α,25(OH) 2D3对胃癌细胞的增殖抑制率具有浓度依赖性, 1α,25(OH) 2D3干预导致BGC-823和SGC-7901细胞株G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低 (P<0.05); 1α,25(OH) 2D3干预后,BGC-823和SGC-7901胃癌细胞P21 mRNA表达升高(P<0.01),而cyclinD1、cyclinE1和CDK6 mRNA表达降低(P<0.01)。结论 1α,25(OH) 2D3抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞,可能与上调P21,下调cyclinD1、cyclinE1和CDK6的表达有关。     

β拉帕醌联合PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235抑制BGC-823细胞增殖和迁移

目的研究β拉帕醌(β-lapachone)与磷脂酰肌醇3激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/m TOR)抑制剂NVP-BEZ235联合用药对人胃癌BGC-823细胞增殖与迁移的影响及机制。方法将BGC-823细胞分为空白对照组、1μmol/Lβ-lapachone处理组、50 nmol/L NVP-BEZ235处理组及1μmol/Lβ-lapachone联合50 nmol/L NVP-BEZ235处理组。采用MTT法和平板克隆形成实验检测BGC-823细胞的增殖能力;Western blot法检测细胞增殖相关蛋白磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)、磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白水平;划痕实验及TranswellTM迁移实验检测细胞迁移能力;Western blot法检测上皮-间质转化(EMT)相关标志物上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、锌指转录因子Snail及β联蛋白(β-catenin)的蛋白水平。结果与β-lapachone处理组或NVP-BEZ235处理组相比,β-lapachone联合NVP-BEZ235处理组能更显著地抑制细胞的增殖和克隆形成能力,p-AKT、p-NF-κB、p-ERK及cyclin D1的蛋白表达下调最明显;在联合处理组对细胞迁移的抑制更明显,EMT相关标志物E-cadherin表达上调,vimentin、Snail及β-catenin表达下调最明显。结论β-lapachone联合NVP-BEZ235可有效抑制BGC-823胃癌细胞增殖,可能与p-AKT、p-NF-κB、p-ERK和cyclin D1表达降低有关;并通过调控EMT进程,抑制BGC-823细胞的迁移。     

抑制cyclinD1表达对乳腺癌细胞增殖及cyclinE、CDK2和p21cip1转录的影响

目的　分析探讨人乳腺癌细胞中 cyclin D1的表达受到反义 RNA抑制后 ,细胞增殖能力的变化以及cyclin E,CDK2和 p2 1cip1 (cip1/ waf1/ sdi1)基因表达受到的影响。　方法　将表达 cyclin D1反义 RNA的重组质粒转入人乳腺癌细胞 ,由此抑制细胞中 cyclin D1的表达 ,然后分析细胞生长速率和各时相细胞分布比例的变化 ,并通过Northern blot分析有关基因的表达水平。　结果　 cyclin D1表达受到抑制的细胞与对照相比 ,细胞增殖速率明显下降 ,培养至第 6 d时 ,生长抑制率为 5 4%。细胞周期各时相的分布比例也有较大的变化 ,G1期细胞比例上升 ,而 S期及 G2 / M期细胞比例下降。cyclin E和 CDK2的 m RNA水平显示出有不同程度的下降 ,而 p2 1cip1的表达无明显变化。　结论　 cyclin D1表达的抑制可明显减弱人乳腺癌细胞的异常增殖 ,同时表明同为细胞周期调控基因的 cyclin E和CDK2的表达与 cyclin D1的表达密切相关 ,而 p2 1cip1的表达不受 cyclin D1的影响     

小分子化合物P-275抑制胃癌细胞增殖及机制研究

目的研究小分子化合物P-275对人胃癌细胞BGC823、SGC7901、MKN-45增殖的抑制作用及其机制。方法分别用不同浓度的化合物P-275处理人胃癌细胞BGC823、SGC7901和MKN-45,MTT法检测化合物对细胞增殖的影响,流式细胞术检测化合物对细胞周期的影响,Western Blot检测化合物对周期调控蛋白Cyclin D1、CDK4表达的影响。结果化合物P-275能够以剂量依赖的方式抑制人胃癌细胞BGC823、SGC7901及MKN-45的增殖,同时能够抑制上述细胞G1期向S期的转化。Western Blot结果显示P-275能够以剂量依赖的方式下调胃癌细胞SGC7901中周期调控蛋白Cyclin D1、CDK4的表达。结论化合物P-275能够通过下调胃癌细胞中周期调控蛋白Cyclin D1、CDK4的表达,从而抑制胃癌细胞G1期向S期的转化,进而抑制胃癌细胞的增殖。     

桂枝茯苓丸诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制研究

目的：探讨桂枝茯苓丸诱导肿瘤细胞凋亡的机制,为桂枝茯苓丸（GFW）开发应用提供实验依据。方法：计算抑瘤率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,免疫组化法测定p21waf/cip蛋白表达,原位杂交法检测Survivin mRNA表达,电镜观察肿瘤细胞超微结构。结果：GFW抑瘤率为38.93%,流式细胞仪检测GFW组凋亡率17.79%,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。GFW上调肿瘤细胞p21waf/cip蛋白表达,下调Survivin mRNA表达。GFW组镜下可见瘤细胞以凋亡变化为主。内膜结构完好,核膜清晰,细胞核固缩,染色质团块状散布核内或边集核膜下,并可见凋亡小体。结论：GFW诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与上调p21及下调Survivin mRNA表达密切相关。     

姜黄素诱导胃癌BGC细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探讨姜黄素促人胃癌BGC-823细胞凋亡的生物学作用及其调控机制。方法:常规体外培养对数生长期胃癌BGC-823细胞,细胞分为对照组,低、中、高姜黄素处理组四组,姜黄素浓度分别为0 mg/L,5 mg/L,10 mg/L,20mg/L。姜黄素处理24 h后,采用甲基噻唑(MTT)比色法及流式细胞仪测定细胞增殖水平及细胞凋亡率;采用免疫组化法测定细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达;采用PCR检测Caspase-3的mRNA表达水平。结果:MTT检测显示姜黄素能抑制人胃癌BGC-823细胞増殖,呈现浓度依赖性;流式细胞仪显示姜黄素能有效诱导细胞的凋亡,呈现浓度依赖性,其中20 mg/L姜黄素处理24 h后细胞凋亡率为48.3%;免疫组化试验表明姜黄素处理使人胃癌BGC-823细胞中Bax表达水平上调,同时Bcl-2蛋白表达水平下调;且细胞中Caspase-3的mRNA表达水平受姜黄素诱导而增高。结论:姜黄素对人胃癌BGC-823细胞的增殖具有明显抑制作用,呈浓度依赖性促进细胞凋亡,这种生物学效应可能与激活Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达而活化Caspase-3的信号通路有关。该研究为深入探讨姜黄素诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的机制提供了重要依据。     

姜黄素调控Wnt信号通路抑制胃癌细胞上皮间质转化的研究

目的探讨姜黄素对人胃癌细胞株BGC-823上皮间质转化(EMT)的影响机制。方法将细胞分为姜黄素干预组、TGF-β组、BGC-823细胞对照组、GES-1细胞对照组。采用姜黄素(10μmol/L)干预人胃癌细胞株BGC-823,通过MTT试验检测胃癌细胞增殖能力;通过Transwell小室试验检测胃癌细胞侵袭功能改变;通过Western blot检测各组细胞E-cadherin、Vimentin蛋白及Wnt信号通路相关蛋白表达。结果 TGF-β诱导能够促进人胃癌细胞株BGC-823增殖(P 0.05),胃癌细胞表现出更高的侵袭能力(P 0.01),而姜黄素干预后胃癌细胞的增殖及侵袭能力均明显受抑制。Western blot检测表明,TGF-β诱导干预后,BGC-823细胞E-cadherin、Vimentin蛋白水平升高,与此同时GSK3β、β-catenin及c-Myc的表达明显上调(P 0.01);姜黄素干预能有效抑制胃癌细胞EMT作用,Wnt信号通路蛋白水平显著下调(P 0.05)。结论姜黄素可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT作用,从而抑制肿瘤细胞的侵袭、转移,实现抗肿瘤作用。     

Patterns of p21waf1/cip1 expression in non-papillomatous nasal mucosa, endophytic sinonasal papillomas, and associated carcinomas

AIMS: To clarify p21(waf1/cip1) expression in sinonasal lesions. METHODS: Archived surgical specimens from 38 patients were investigated by means of immunohistochemistry. p21(waf1/cip1) staining was evaluated in the different layers of the epithelium. In addition, human papillomavirus (HPV) infection and p53 protein overexpression were assessed and correlated with p21(waf1/cip1) expression. RESULTS: p21(waf1/cip1) staining was negative in non-papillomatous nasal mucosa. HPV infection and p53 protein overexpression were not seen. Sixteen of 20 inverted papillomas showed p21(waf1/cip1) expression. HPV infection was found in 16 cases and p53 protein overexpression was present in 13 specimens. Expression of p21(waf1/cip1) was restricted to surface cells in five cases, but involved basal/parabasal cells in 11 specimens. Immunoreactivity for p21(waf1/cip1) in basal/parabasal cells colocalised with p53 protein overexpression. Enhanced expression rates for p21(waf1/cip1) were seen in transitional and squamous epithelium compared with columnar epithelium. p21(waf1/cip1) expression involved only surface cells in cylindrical cell papillomas. HPV infection and p53 protein overexpression were detected in all specimens. One of five squamous cell carcinomas showed p21(waf1/cip1) expression. HPV infection was seen in two cases, and all carcinomas showed p53 protein overexpression. CONCLUSIONS: Expression of p21(waf1/cip1) is associated with terminal differentiation in surface cells in inverted papillomas and cylindrical cell papillomas, but not in non-papillomatous nasal mucosa. Overexpression of p53 protein colocalises with p21(waf1/cip1) expression in basal/parabasal cells in inverted papillomas but not in cylindrical cell papillomas. Expression of p21(waf1/cip1) in squamous cell carcinomas involves a subset of tumours with p53 protein overexpression.     

TLR3激动剂poly(I:C)对胃癌BGC-823细胞生物学特征的影响

目的:poly(I:C)是双链RNA(dsRNA)的结构类似物,可被模式识别受体TLR3、RLRs识别,具有抗肿瘤作用。本文旨在研究poly(I:C)对胃癌BGC-823细胞生物学特征的影响并进行机制探讨。方法:以胃腺癌细胞系BGC-823细胞为模型,采用半定量RT-PCR检测TLR1-TLR10 mRNA基础表达水平,然后用MTT法、CCK-8法、EdU掺入法检测poly(I:C)对BGC-823细胞的增殖能力的影响;MTT法、CFSE-7-AAD法评价NK细胞对poly(I:C)处理后的BGC-823细胞杀伤能力的影响;实时定量PCR法检测细胞因子mRNA水平的变化;流式细胞术分析BGC-823细胞中TLR3、Cyclin D1表达水平以及NKL细胞中CD107a、Perforin和TNF-α的表达水平。结果:TLR3在BGC-823细胞有明显表达。poly(I:C)可抑制BGC-823细胞的增殖,这一过程的主要分子特征是DNA合成减弱、Cyclin D1的表达水平降低、炎症因子的mRNA表达水平下降;同时NK细胞对于poly(I:C)处理后的BGC-823细胞的杀伤功能增强,NK细胞表达CD107a、Perforin、TNF-α的能力提高。结论:poly(I:C)可直接抑制肿瘤的生长并提高BGC-823细胞对NK细胞杀伤的敏感性,为设计和利用基于TLR的抗肿瘤治疗药物提供有益的启示。     

靶向着丝粒蛋白A的小RNA干扰对肝癌细胞株HepG2细胞生物学行为的影响

目的 研究靶向着丝粒蛋白A(CENP-A)的siRNA对肝癌细胞株HepG2细胞生物学行为的影响.方法 设计并合成三对CENP-A编码基因的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,通过定向克隆至载体pSilencerTM 2.1-U6 neo,构建siRNA真核表达质粒,经稳定转染HepG2细胞后检测肝癌细胞中CENP-A基因mRNA及蛋白质表达的抑制情况;通过观察HepG2细胞生长、凋亡、细胞周期和平板克隆形成能力评价CENP-A基因干扰对细胞生物学行为的影响;通过检测bcl-2、Bax、p21waf1、mdm2、p53蛋白表达水平初步探讨CENP-A生物学作用的可能机制.结果 三对靶向CENP-A的siRNA干扰片段中有二对抑制效果明显.与未转染组及空载体组相比,转染CENP-A干扰片段的细胞生长减慢,平板克隆形成率下降.细胞周期检测显示,G1期阻滞(P＜0.01),S期细胞比例减少(P＜0.001).细胞凋亡比例增加(P=0.003),并伴随bcl-2蛋白表达明显下降(P=0.000),Bax蛋白表达明显增高(P=0.001).还可致p21waf1表达增高,mdm2表达下降,但对野生型p53表达未显示明显影响.结论 CENP-A通过参与细胞周期调控而密切相关于细胞恶性增殖和凋亡抑制,其机制可能涉及野生型p53非依赖性通路和凋亡相关基因bcl-2Bax的表达异常.     

An immunohistochemical analysis of cyclin D1, p53, and p21waf1/cip1 proteins in tumors originating from the follicular epithelium of the thyroid gland

This study aimed at clarifying the factors closely related to the tumor progression of thyroid neoplasms. We examined the immunoreactivity of cyclin D1, p53, and p21waf1/cip1 proteins in 179 thyroid tumors originating from the follicular epithelium using an immunohistochemical technique. Cyclin D1 positivity was frequent in well-differentiated thyroid carcinomas (39/122 cases), but it was rarely seen in follicular adenomas (1/33 cases), (p < 0.05). Positivity for p53 was more frequent in poorly differentiated carcinomas (7/19 cases) and undifferentiated carcinomas (4/5 cases) than in well-differentiated carcinomas (14/122 cases) (p < 0,05, respectively). P21waf1/cip1 positivity was more frequent in well-differentiated thyroid carcinomas (43/122 cases) than in follicular adenomas (4/33 cases) (p < 0.05). Regarding the relationships of these proteins, co-positivity for cyclin D1 and p53 was observed more often in poorly differentiated carcinomas (5/7 cases) than in well-differentiated carcinomas (7/39 cases) (p < 0.05). Most cases with cyclin D1 positivity did not show p21waf1/cip1 expression in poorly differentiated carcinomas (6/7 cases). Three cases examined showed co-positivity of p53 and p21waf1/cip1. Our results suggest that cyclin D1 is invoved in thyroid oncogenesis. Moreover, p53 might be closely related to the development of poorly differentiated carcinomas and undifferentiated carcinomas originating from well-differentiated carcinomas.     

An Immunohistochemical Analysis of Cyclin D1, p53, and p21 Proteins in Tumors Originating fromthe Follicular Epithelium of the Thyroid Gland*

This study aimed at clarifying the factors closely related to the tumor progression of thyroid neoplasms. We examined the immunoreactivity of cyclin D1, p53, and p21^waf1/cip1 proteins in 179 thyroid tumors originating from the follicular epithelium using an immunohistochemical technique. Cyclin D1 positivity was frequent in well-differentiated thyroid carcinomas (39/122 cases), but it was rarely seen in follicular adenomas (1/33 cases), (p < 0.05). Positivity for p53 was more frequent in poorly differentiated carcinomas (7/19 cases) and undifferentiated carcinomas (4/5 cases) than in well-differentiated carcinomas (14/122 cases) (p < 0,05, respectively). P21^wafl/cip1 positivity was more frequent in well-differentiated thyroid carcinomas (43/122 cases) than in follicular adenomas (4/33 cases) (p < 0.05). Regarding the relationships of these proteins, co-positivity for cyclin D1 and p53 was observed more often in poorly differentiated carcinomas (5/7 cases) than in well-differentiated carcinomas (7/39 cases) (p < 0.05). Most cases with cyclin D1 positivity did not show p21^waf1/cip1 expression in poorly differentiated carcinomas (6/7 cases). Three cases examined showed co-positivity of p53 and p21^waf1/cip1.Our results suggest that cyclin D1 is invoved in thyroid oncogenesis. Moreover, p53 might be closely related to the development of poorly differentiated carcinomas and undifferentiated carcinomas originating from well-differentiated carcinomas.     

P21和Cyclin D1mRNA在食管癌的表达及其意义

目的探讨p21和Cyclin D1mRNA在食管癌中的表达及其临床意义。方法应用RT-PCR检测45例食管癌组织及其对应的正常组织中p21和Cyclin D1mRNA的表达水平。结果p21 mRNA在肿瘤组织的表达显著低于正常组织（P〈0．05），p21mRNA表达减弱与食管癌的临床分期、肿瘤的分化程度相关（P〈0．05）；Cyclin D1mRNA在肿瘤组织的表达显著高于正常组织（P〈0．05），Cyclin D1mRNA表达增强与食管癌的临床分期、肿瘤的分化程度相关（P〈0．05）；在食管癌组织中，p21 mRNA表达与Cyclin D1mRNA呈负相关（r=-0．757，P〈0．05）。结论p21 mRNA的表达下调、Cyclin D1mRNA参与食管癌的发生、发展。     

KISS-1及MMP-9基因在胃癌侵袭转移中的作用及相关性

目的探讨肿瘤转移抑制基因KISS-1在胃癌侵袭、转移中的作用及其与MMP-9表达的关系。方法采用Lipofectamine脂质体介导将pcDNA3.1-KISS-1真核表达质粒转染胃癌BGC-823细胞,经G418筛选,建立稳定高表达KISS-1蛋白的细胞系,通过RT-PCR和Western blotting法证实转染成功,并检测细胞中MMP-9蛋白及mRNA的表达情况;采用Transwell体外侵袭实验,探讨KISS-1对胃癌细胞株侵袭能力的影响。结果 Western blotting和RT-PCR结果显示:转基因组BGC-823细胞中KISS-1蛋白及mRNA的表达与转空质粒组和对照组相比均明显增加(P均<0.05);转基因组BGC-823细胞中MMP-9蛋白及mR-NA的表达与转空质粒组和对照组相比均明显降低(P均<0.05);Transwell检测结果显示:转基因组BGC-823细胞的穿膜数与转空质粒和对照组相比均明显降低(P<0.05),侵袭力抑制率达到25%。结论 pcDNA3.1-KISS-1的有效转染可降低MMP-9的表达并对胃癌细胞BGC-823的侵袭能力具有抑制作用。KISS-1基因对胃癌侵袭转移的抑制作用可能是通过下调MMP-9的功能实现的。     

脱落酸抑制人肝癌细胞增殖

目的探讨脱落酸抑制SMMC-7721人肝癌细胞增殖作用的机制。方法免疫细胞化学检测P53、Ki-67、Cyclin D1蛋白表达;RT-PCR检测P53和端粒酶mRNA表达。结果经脱落酸(ABA)、环六亚甲基二乙酰胺(HMBA)和ABA HMBA作用后细胞内mtP53、Cyclin D1、Ki-67及细胞内mt P53、hTERT mRNA表达水平均明显降低(P<0.05)。结论ABA抑制SMMC-7721人肝癌细胞增殖,其作用机制可能是调控细胞周期,降低mtP53、Ki-67、Cyclin D1蛋白及mtP53,hTERT mRNA表达。