腺病毒介导野生型p53基因对人白血病细胞系HL-60、K_(562)生长的抑制作用

目的探索肿瘤抑制基因ｐ５３对人白血病细胞系的生长抑制作用和促凋亡作用。方法选用含野生型ｐ５３基因的重组腺病毒载体,体外感染人白血病细胞系ＨＬ－６０、Ｋ５６２。通过细胞生长曲线,ＤＮＡ检测及流式细胞仪分析检测转染细胞的增殖受抑制和细胞凋亡的发生。结果ＰＣＲ检测转染后ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞ｐ５３ｃＤＮＡ表达。转染后Ａｄ／ｐ５３病毒对ＨＬ－６０细胞和Ｋ５６２细胞的生长有抑制作用。随着Ａｄ／ｐ５３病毒浓度加大,ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的ＯＤ值越低即生长抑制程度越大。经Ａｄ／ｐ５３病毒转染的ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞均有明显的细胞凋亡峰出现,对照细胞则无。细胞周期分析无明显异常发现。结论重组腺病毒载体介导的野生型ｐ５３基因在体外对人白血病细胞系ＨＬ－６０和Ｋ５６２的生长有抑制作用,能导致细胞凋亡的发生。     

腺病毒介导野生型p53基因对人白血病细胞系HL—60,K562生长的抑制作用

目的 探索肿瘤抑制基因Ｐ５２对人白血病细胞系的生长抑制作用和促凋亡作用。方法 选用含野生型ｐ５３基因的重组腺病毒载体，体外感染人白血病细胞系ＨＬ－６０，Ｋ５６２。通过细胞生长曲线，ＤＮＡ检测及流式细胞仪分析检测转染细胞的增殖受抑制和细胞凋亡的发生。结果 ＰＣＲ检测转染后ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞ｐ５３ ｃＤＮＡ表达。     

二乙酰二脱水卫矛醇在体内外的抗瘤作用及其机制

目的：观察二乙酰二脱水卫柔醇（ｄｉａｃｅｔｙｌｄｉａｎｈｙｄｒｏｇａｌａｃｔｉｔｏｌ,ＤＡＤＡＧ）在体内外的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡的关系。方法：建立小鼠脑内接种艾氏腹水癌模型,观察ＤＡＤＡＧ体内抗瘤作用;ＭＴＴ法观察ＤＡＤＡＧ对人早幼粒白血病细胞株ＨＬ－６０和人红白血病细胞株Ｋ５６２的生长抑制作用,ＤＮＡ电泳和流式细胞仪分析ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞凋亡的情况。结果：ＤＡＤＡＧ１０ｍｇ／ｋｇ ｉｐ,每天１次,连续给药７天,可显著延长小鼠中位生存时间;对ＨＬ－６０和Ｋ５６２均有生长抑制作用,药物作用７２ｈ的ＩＣ５０分别为３．７ｍｇ／Ｌ和２５．５ｍｇ／Ｌ;作用ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞后电泳显示有凋亡细胞特有的“梯状”条带,ＤＮＡ直方图出现亚Ｇ１峰。结论：ＤＡＤＡＧ抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡有关。     

IL-2活化脐血细胞抗白血病效应的实验研究

探讨ＩＬ┐２活化脐血细胞的抗白血病效应。方法利用ＩＬ┐２作用于脐血细胞，以使其活化，然后再与带有标志基因ＮｅｏＲ和ＬａｃＺ的ＨＬ┐６０及Ｋ５６２细胞共培养，应用Ｘ┐ｇａｌ组化染色法观察其对白血病细胞系的抑制和杀伤作用。结果活化脐血细胞在生长、集落形成方面与未活化脐血细胞无显著性差异（Ｐ＜０．０５）。在采用经ＩＬ┐２活化的脐血细胞与基因标记ＨＬ┐６０及Ｋ５６２培养体系中，经３天的共培养，携带基因标记的白血病细胞系明显受到抑制和杀伤作用，蓝染细胞率显著下降（ＨＬ┐６０培养前后分别为３４．６７±５．０１，１９．８３±３．３１，Ｋ５６２分别为３４．１７±３．７６，２０．５±３．７３）。结论ＩＬ┐２活化脐血细胞具有一定的抗白血病效应     

榄香烯抗癌作用与诱发肿瘤细胞凋亡

榄香烯是从中药莪术中提取的抗癌有效成分，实验药理学和临床试验都证实该制剂对肿瘤有确切疗效。作者应用ＭＴＴ方法，分析了榄香烯对白血病细胞生长的影响。结果显示：榄香烯明显抑制白血病ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的生长，对ＨＬ－６０细胞的半数生长的抑制剂量（ＩＣ５０）为２７．５μｇ／ｍｌ，对Ｋ５６２细胞的ＩＣ５０为８１μｇ／ｍｌ，而对正常人外周血白细胞（ＰＢＬ）的ＩＣ５０为２５４．３μｇ／ｍｌ。流式细胞术证实，榄香烯能阻滞肿瘤细胞从Ｓ期进入Ｇ２Ｍ期，并诱发其细胞凋亡。ＤＮＡ凝胶电泳及透射电镜超微结构观察都发现了榄香烯诱发肿瘤细胞凋亡所导致的生化与形态变化。结果表明，榄香烯诱导肿瘤细胞凋亡是其抗肿瘤作用机制的重要方面之一。     

外源性野生型p53基因抑制裸小鼠体内人白血病细胞的生长

目的探讨野生型ｐ５３基因对体内生长的白血病细胞的抑制作用。方法采用直接注射法向裸小鼠体内ＨＬ６０－ｎ和Ｋ５６２－ｎ细胞移植瘤注射编码人野生型ｐ５３的重组逆转录病毒，使其在这两种细胞中表达，并导致其编程性细胞死亡。结果裸小鼠在接种ＨＬ６０－ｎ或Ｋ５６２－ｎ细胞后２４ｈ，于接种部位连续７天注射编码野生型ｐ５３的逆转录病毒，移植瘤发生的潜伏期较对照组明显延长。结论直接注射转移野生型ｐ５３基因能有效地抑制裸小鼠体内人白血病细胞的生长。     

联合应用bcr-abl融合基因反义寡核苷酸与c-myb基因反义寡核苷酸对K562细胞作用的研究

目的：研究联合应用ｂｃｒ－ａｂｌ融合基因硫代磷酸反义寡核苷酸（Ａｓｐｏ）及ｃ－ｍｙｂ基因Ａｓｐｏ对Ｋ５２细胞作用效果。方法：Ａｓｐｏ与Ｋ５６２细胞共培养后,台盼蓝拒染法计死活细胞数;甲基纤维素半固体培养法培养ＣＦＵ－Ｋ５６２;流式细胞仪测定细胞Ｐ２１０蛋白表达及细胞凋亡率;ＲＴ－ＰＣＲ半定量检测细胞ｂｃｒ－ａｂｌｍＲＮＡ;电镜观察凋亡细胞形态学改变。结果：例置显微镜下观察到联合应用两种Ａｓｐｏ时,浓度各为５ｕｍｏｌ／Ｌ组Ｋ５６２细胞仍呈克隆状态生长,作用２４ｈ细胞Ｐ２１０蛋白表达明显受抑制,表达率〈２％;作用１２０ｈ细胞生长抑制率为６１．７％,Ｐ２１０恢复为２５．７％,凋亡率为２２．５％。两种浓度各为１０ｕｍｏｌ／Ｌ组Ｋ５６２细胞生长疏散,作用１２０ｈ细胞生长抑制率达９２．２％,Ｐ２１０仍未恢复,凋亡率为２２．     

基因工程IFNα2b对肿瘤细胞生长的抑制作用

目的：为了比较研究不同品牌基因工程α－干扰素（ＩＦＮα２ｂ）的抗肿瘤效应。方法：采用α－干扰素抑制多种肿瘤细胞生长的ＭＴＴ法。结果：两种不同品牌的１００００ＩＵ／ｍｌ,１０００ＩＵ／ｍｌ和１００ＩＵ／ｍｌ的ＩＦＮα２ｂ（干扰能和安达芬）对人脑胶质瘤细胞（ＳＨＧ－４４）,人骨肉瘤细胞（ＨＯＳ－８６０３）,人白血病细胞（ＨＬ－６０）,红白血病细胞（Ｋ５６２）和淋巴瘤细胞（Ｒａｊｉ）的生长均有不同程度的     

反义寡聚脱氧核苷酸对白血病K562细胞株生物特性的影响

目的：探讨反义核酸对白血病Ｋ５６２细胞株的影响。方法：用人工合成的ｂｃｒ３／ａｂ１２反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｂ）及无义寡聚脱氧核苷酸（Ｎ－ＯＤＮ）处理人急性红白血病细胞株Ｋ５６２细胞系，以观察Ｋ５６２细胞的生长及其ｂｃｒ３／ａｂ１２癌基因的表达。结果：ＡＳＯ－ｂ能抑制体外培养的Ｋ５６２细胞的生长（抑制率为５３．８３±１０．７８，Ｐ＜０．０５），集落形成（４０μＭ的ＡＳＯ－ｂ的抑制率为８８．９，Ｐ＜０．０５），ＤＮＡ及Ｐ２１０蛋白的合成（１２ｈ抑制率分别为７９．６８±１３．５３，６０．３３，Ｐ＜０．０５）；而对照组对Ｋ５６２细胞则无明显的影响。结论：提示ｂｃｒ３／ａｂ１２癌基因是维持Ｋ５６２细胞恶性生长表型的主要因素，也为慢性髓系白血病的治疗指出了新的方向。     

抗肿瘤抗生素云南霉素对细胞周期的作用及分子机理

目的：研究具有新型结构的胞嘧啶核苷二肽类抗生素云南霉素的抗肿瘤作用的同理。方法：应用细胞培养、流式细胞光度术、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析等方法研究云南霉素对肿瘤细胞周期的影响及分子机理。结果：云南霉素对多种肿瘤细胞（ＨＬ６０，ＫＢ，ＣＬＣ）有Ｃ２／Ｍ期阻滞、Ｓ期抑制作用，并伴有ｃｙｃｌｉｎＢ１蛋白、Ｐ３４＾ｅｄｅ２和Ｍｐｍ－２蛋白表达下降。结果：云南霉不导致ＨＬ－６０细胞Ｇ２／Ｍ期阻滞的分子机理     

IFN—α和IL—2联合激活的脐血对K562细胞的杀伤和净化作用研究

目的 探讨体外干扰素α（ＩＦＮ－α）联合白细胞介素２（ＩＬ－２）激活的脐血对慢性髓性白血病细胞株Ｋ５６２细胞的杀伤和净化作用。方法 采用细胞培养法和反转录聚合酶链反应法进行研究。结果 ＩＬ－２激活３ｄ的脐血对Ｋ５６２细胞具有显著的杀伤和净化作用,加用ＩＦＮ－α后这种作用得到明显增强。ＩＬ－２单用或与ＩＦＮ－α联合对脐血ＣＦＵ－ＧＭ未见明显抑制作用。结论 ＩＦＮ－α可增强ＩＬ－２激活脐血对Ｋ５６２的     

端粒酶活性与白血病细胞系的分化

为了探讨白血病细胞的分化和端粒酶活性改变的关系。方法采用ＰＣＲ－ＬＩＳＡ方法检测白血病细胞株Ｋ－５６２和ＨＬ－６０诱导分化前后的端粒酶活性。结论分化是细胞自身调控的过程,端粒酶活性的高低与细胞所处的分化状态密切相关。     

白血病细胞相关的TNFα抑制活性研究

研究了４４例急性白血病患者外周血白血病细胞培养物上清和白血病细胞株ＨＬ－６０、Ｋ＿（５６２）细胞培养物上清对正常人单个核细胞分泌肿瘤坏死困子α（ＴＮＦα）的作用。结果表明，６６．７％初发急性白血病患者白血病细胞培养上清和ＨＬ－６０细胞均可抑制正常人ＴＮＦα产生（白血病细胞相关的ＴＮＦα抑制活性阳性），这种抑制物的出现与疾病状态和预后密切相关。     

白血病细胞相关的TNFα抑制活性研究

研究了４４例急性白血病患者外周血白血病细胞培养物上清和白血病细胞株ＨＬ－６０、Ｋ５６２细胞培养物上清对正常人单个核细胞分泌肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）的作用。结果表明，６６．７％初发急性白血病患者白血病细胞培养上清和ＨＬ－６０细胞均可抑制下沉人ＴＮＦα产生（白血病细胞相关的ＴＮＦα抑制活性阳性），这种抑制物的出现与疾病状态和预后密切相关。     

Hu联合GM-CSF对K562细胞生长-凋亡相关基因表达的影响

探讨羟基脲（ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ,Ｈｕ）及Ｈｕ联合粒系－巨噬系集落刺激因子（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｉｃ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ,ＧＭ－ＣＳＦ）对慢性粒细胞白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ,ＣＭＬ）细胞株Ｋ５６２细胞生长及凋亡相关基因表达的调节效应。方法：以Ｈｕ及Ｈｕ联合ＧＭ－ＣＳＦ培养Ｋ５６２细胞,采用逆转录－聚合酶     

IL-6受体在人白血病细胞膜上的表达及亲和力

目的：研究各种白血病细胞膜ＩＬ－６Ｒ的表达、密度及亲和力,为深入探讨对ＩＬ－６／ＩＬ－６Ｒ系统介导ＩＬ－６－ＰＥ４０外毒素融合蛋白靶向杀伤白血病细胞的敏感性提供可靠依据。方法：采用放射性配基结合实验（ＲＢＡ）并结合Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图法,系统分析ＩＬ－６Ｒ在８种极具代表性的人类白血病细胞系Ｕ９３７,ＨＬ－６０,ＫＧ１,ＴＦ１,Ｋ５６２,ＣＥＭ,ＨｕＴ２８和Ｒａｊｉ上的表达密度及亲和力,同时应用流式细胞术（ＦＡＣＳ）检测ＩＬ－６Ｒ的α和β亚单位在这些白血病细胞上的表达。结果：ＲＢＡ表明,粒、单、红白血病细胞系ＩＬ－６０,Ｕ９３７,ＫＧ１和ＴＦ１表面存在着高亲和力ＩＬ－６Ｒ,平均ＩＬ－６Ｒ密度／细胞分别为２５０２个,２８７４个,２３１９个及９３２９个,而淋系白血病细胞系ＣＥＭ,ＨｕＴ２８和Ｒａｊｉ以及慢粒Ｋ５６２     

超抗原活化Th1细胞介导的对肿瘤细胞杀伤效应的研究

目的：本文对超抗原葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）活化的Ｔｈ１细胞介导的对肿瘤细胞杀伤作用进行了研究。方法：人外周血淋巴细胞与ＳＥＢ共同培养,用流式细胞术测定增殖细胞亚群;用酶联双夹心法测定ＩＬ－２、ＩＬ－４水平,用Ｋ５６２,ＨＬ－６０肿瘤细胞和自身淋巴细胞作为靶细胞测定效应细胞和细胞因子的杀伤活性。结果：ＳＥＢ共同培养６ｄ的淋巴细胞,ＣＤ４＾＋Ｔ细胞由３７．５％增加到４８．５％;ＣＤ１６＾＋淋巴细胞由     

安吖啶诱导白血病细胞程序化死亡及bcl—2表达的研究

目的探讨安吖啶诱导不同分化阶段的人急性粒白血病细胞株ＨＬ－６０（ＡＭＬ２）及ＮＢ４细胞（ＡＭＬ３）程序化死亡的作用。方法应用光镜、ＤＮＡ电泳及流式细胞术检测程序化死亡细胞,应用免疫组化法检测ｂｃｌ－２基因表达。结果１～２０μｇ／ｍｌ的安吖啶作用６～１２小时后,ＮＢ４细胞的形态学改变较ＨＬ－６０细胞更明显;ＮＢ４细胞的ＤＮＡ梯带较ＨＬ－６０细胞明显;流式细胞术检测ＮＢ４程序化死亡细胞数较ＨＬ－６０细胞多;ＨＬ－６０细胞ｂｃｌ－２蛋白的平均水平明显高于ＮＢ４细胞。结论ＨＬ－６０细胞对安吖啶诱导程序化死亡作用的敏感性较低,可能与ｂｃｌ－２基因高表达有关。     

半边旗抗肿瘤有效成分6F对HL-60细胞周期的影响及体外增效作用

目的：研究半边旗抗肿瘤有效成分６Ｆ对ＨＬ－６０细胞周期的影响及对常用抗肿瘤药的体外增效作用。方法：应用流式细胞光度术（ＦＣＭ）测定细胞周期，应用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定药物对细胞的抑制率。结果：不同浓度６Ｆ作用６小时即可使ＨＬ－６０细胞Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期比例升高，Ｇ１期比例下降，并呈一定的剂量效应关系，当作用到２４小时后，Ｓ期比例进一步升高，但Ｇ２／Ｍ期比例稍有回落。低浓度６Ｆ分别与２－氯代脱氧腺苷（２－ＣＬｄＡｄｏ），顺铂（ＣＤＤＰ），长春新碱（ＶＣＲ），氟尿嘧啶（５ＦＵ）合用可增强它们对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用，ｑ值大于０．８５，与各药有相加或协同作用，６Ｆ对２－ＣｌｄＡｄｏ，ＣＤＤＰ，ＶＣＲ，５ＦＵ的增效倍数分别为１．５８，１．５３，１．５５，１．３８。结论：６Ｆ可明显阻断ＨＬ－６０细胞在Ｓ期及Ｇ２／Ｍ期；６Ｆ可增强上述药物对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用。已知，２－ＣｌｄＡｄｏ阻断细胞在Ｓ期，ＣＤＤＰ和ＶＣＲ阻断Ｇ２／Ｍ期，５ＦＵ阻断Ｇ１期。鉴于所试药物对细胞周期的影响不同，提示６Ｆ的体外增效作用可能与此有关。     

恶性肿瘤细胞株端粒酶活性的研究

目的：探讨非放射性定量的端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）在检测人类恶性肿瘤细胞株端粒酶活性中的应用价值。方法：采用银染定量的ＴＲＡＰ方法检测ＳＭＭＣ－７７２１、Ｋ５６２、ＣＮＥ－１、Ａ５４９、ＨＬ－６０细胞 的端粒酶活性。结果：９株人类恶性细胞株中８株呈端粒酶的阳性而其经热处理的标本均为阴性。结论：非放射性银染定量的ＴＲＡＰ方法具有高可信度、特异性及敏感性。且８株人类恶性肿瘤细胞株均有端粒酶活性表达