反义金属蛋白酶组织抑制因子-1基因转染对大鼠肺纤维化的治疗作用

目的观察反义金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)基因转染对大鼠肺纤维化的治疗作用。方法于2005年1月至2006年6月在大连医科大学附属第一医院中心实验室将30只清洁级6周龄雌性SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分为5组,即正义TIMP-1转染组、反义TIMP-1转染组、空载体转染组、肺纤维化组、正常对照组,每组6只。正、反义TIMP-1转染组及空载体转染组为在给予博莱霉素(BLM)后第1,3,7,14,28,60,90天将含正、反义人TIMP-1cDNA逆转录病毒载体及空载体导入肺纤维化大鼠肺内,转染28d后处死;肺纤维化对照组仅给予BLM,时间与转染组相同;正常对照组取同期大鼠处死。观察反义TIMP-1基因转染的作用及肺组织羟脯氨酸的变化。结果给予BLM后第1,3天进行反义TIMP-1基因转染,与同一时间点的肺纤维化对照组及空载体转染组比较,纤维化程度减轻,羟脯氨酸含量减少。结论给予BLM后第1,3天进行反义TIMP-1基因转染可以在一定程度上抑制肺纤维化的发展。     

基质金属蛋白酶-9与肺纤维化

基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)是一种金属离子依赖的蛋白酶,通过多种途径参与特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)的发病机制,本文就MMP-9的基本特性及其与肺纤维化的关系进行综述。     

基质金属蛋白酶与肺纤维化

基质金属蛋白酶是一类含锌的蛋白水解酶,主要功能是降解细胞外基质的多种蛋白成分,本文综述了基质金属蛋白酶的概况,在肺纤维化中的作用和药物干预对其的影响。     

基质金属蛋白酶-9和组织金属蛋白酶抑制剂-1在食管鳞癌中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和组织金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）在食管鳞癌中的表达及其临床意义。方法用免疫组化和Western blot法分别检测41例食管鳞癌患者的癌及相应正常组织中MMP-9和TIMP-1的表达变化。结果食管鳞癌组织中MMP-9阳性表达率与食管癌淋巴结及静脉转移有关；MMP-9的阳性表达率与表达量均显著高于TIMP-1；MMP-9和TIMP-1的表达呈负相关。结论MMP-9与食管鳞癌的侵袭转移有关，其机制可能与食管鳞癌组织中的MMP-9／TIMP-1平衡失调有关；MMP-9与TIMP-1联合检测有助于食管鳞癌生物学行为的判断。     

他汀类药物对基质金属蛋白酶-1及组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1的影响

目的观察阿托伐他汀(立普妥)、普伐他汀(普拉固)对大鼠腹腔巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的影响。方法培养的大鼠腹腔巨噬细胞中先加入10ng/ml的白介素-1β(IL-1β),促进MMP-1的分泌,24h后加入不同浓度的阿托伐他汀、普伐他汀(1×10-7mmol/L、1×10-6mmol/L、1×10-5mmol/L、1×10-4mmol/L),继续孵育24h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测培养上清液中的MMP-1及TIMP-1的浓度;取阿托伐他汀10-5mmol/L浓度,分别在6h、24h、48h测培养上清液中的MMP-1的浓度。结果随着药物浓度的增加(1×10-7mmol/L、1×10-6mmol/L、1×10-5mmol/L、1×10-4mmol/L),阿托伐他汀对大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1的抑制作用逐渐增强(加药组MMP-1分泌较对照组分别减少17.36%、19.40%、26.54%、33.70%),与对照组有显著统计学差异,而不同浓度的普伐他汀虽使大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1略有降低,但与对照组比较无统计学差异,且各组间也无统计学差异;两组他汀使大鼠腹腔巨噬细胞TIMP-1的分泌均略有降低,但与对照组比较,均无统计学意义;随着药物作用时间的延长(6h、24h、48h),阿托伐他汀(1×10-5mmol/L)对大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1的抑制作用逐渐增强(加药组MMP-1分泌较对照组分别减少11.96%、26.54%、32.77%),与对照组有显著统计学差异。结论阿托伐他汀呈时间剂量依赖性抑制IL-1β介导的大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1,而对TIMP-1的分泌无影响;普伐他汀对IL-1β介导的大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1无影响,对TIMP-1的分泌也无影响。     

白细胞介素-6对人冠状动脉平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶-3和基质金属蛋白酶抑制剂-1的影响

目的 探讨炎症因子白细胞介素-6（IL-6）对人冠状动脉（冠脉）平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶-3（MMP-3）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的影响.方法 （1）应用10 μg/L浓度的IL-6刺激人冠脉平滑肌细胞,分别在共同培养0、2、4,8、24、36小时后收集细胞.（2）应用不同浓度的IL-6（0、5、10、50 μg/L）刺激人冠脉平滑肌细胞,共同培养6小时后收集细胞.（3）应用实时荧光定量PCR方法检测MMP-3、TIMP-1基因的表达量.结果 同剂量IL-6刺激下,MMP-3的表达量在2小时时就开始发生上调,8小时达高峰,而后开始下降;在不同剂量IL-6刺激下,MMP-3的表达量在实验剂量范围内随着IL-6的剂量加大呈上升趋势.而TIMP-1表达量在2小时时就开始发生下调,4小时达最低,而后开始上升;在不同剂量IL-6刺激下,TIMP-1的表达量在实验剂量范围内随着IL-6的剂量加大呈下降趋势.结论 炎症因子IL-6对人冠脉平滑肌细胞中斑块稳定相关标记物MMP-3、TIMP-1表达的影响,可能是炎症在急性冠脉综合征（ACS）发生发展中起作用.     

基质金属蛋白酶-9及组织抑制剂-1与肾小管间质纤维化

肾小管间质纤维化（TIF）是所有慢性肾脏疾病（CKD）进展到终末期肾病（ESRD）的共同途径,其主要病理特征为肾间质成纤维细胞的增生和细胞外基质（如I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白）的过度积聚。基质金属蛋白蓐每／基质金属蛋白酶组织抑制剂（MMPs／TIMPs）是调控细胞外基质（ECM）降解的重要酶系,大量研究表明其在肾小管间质纤维化的发生与发展中起重要作用,其中以MMP-9及TIMP-1最为重要。现对MMP-9及TIMP-1与肾小管间质纤维化关系的研究进展作一综述。     

急性心肌梗死合并心室震颤与基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1的相关性

目的探讨急性心肌梗死合并心室震颤(NF)与急性期基质金属蛋白酶(MMP)-9及基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1表达水平。方法 10例急性心肌梗死合并VF患者纳入实验组;同期10例急性心肌梗死未合并VF患者作为对照组。比较两组患者MMP-9与TIMP-1及空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、超敏C反应蛋白水平。结果实验组第1天MMP-9基因表达比对照组高1.73倍(1.03~2.96),第3天MMP-9基因表达比对照组高1.54倍(1.09~2.92),第5天MMP-9基因表达比对照组高1.61倍(1.07~3.09)(均P0.05);实验组TIMP-1水平显著高于同时相点对照组TIMP-1水平(P均0.05)。同时相点,实验组血清MMP-9与TIMP-1均呈明显正相关(均P0.05)。急性心肌梗死合并VF与hs-CRP(OR:1.742,95%CI:1.896~3.467)、收缩压(OR:2.835,95%CI:1.896~3.467)、空腹血糖(OR:1.801,95%CI:1.436~2.347)均呈正相关(P均0.05)。结论急性心肌梗死合并VF与血清MMP-9、TIMP-1水平升高存在关联性,即高水平的MMP-9和TIMP-1预示急性心肌梗死患者发生VF的可能性更高。     

普萘洛尔对大鼠动脉粥样硬化斑块内基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响

目的 研究普萘洛尔对大鼠动脉粥样硬化斑块内基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响,探讨β-受体阻滞剂稳定动脉粥样硬化斑块的机制.方法 30只Wistar大鼠经高脂、高维生素D、免疫损伤处理17 w造成动脉粥样硬化模型后,随机分为对照组和普萘洛尔组,每组15只.所有大鼠在继续高脂喂养基础上,普萘洛组予普萘洛尔5 mg·kg-1·d-1灌胃;对照组予生理盐水1 ml/d灌胃.分组处理1 w后处死全部大鼠,取主动脉粥样斑块用免疫组织化学方法检测动脉粥样硬化斑块内CD68巨噬细胞浸润、MMP-9及TIMP-1表达.结果 普萘洛尔组巨噬细胞浸润数目及MMP-9的表达较对照组明显减少(P<0.01),TIMP1表达明显增高(P<0.05).结论 普萘洛尔可减少大鼠动脉粥样硬化斑块处巨噬细胞浸润及MMP-9的表达,增高斑块处TIMP-1表达,具有稳定动脉粥样硬化斑块的作用.     

超声微泡联合超声辐射介导基质金属蛋白酶抑制因子-1 siRNA抗大鼠肝纤维化的作用

基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）对MMPs的抑制是导致ECM在肝纤维化过程中过度沉积的关键，理论上抑制TIMP-1基因在肝组织中表达有利于MMPs降解过度沉积的胶原及防止肝窦毛细血管化。我们用RNA干扰（RNAi）技术构建了定点干扰TIMP-1表达的pRNAT-U6．2／Lenti siRNA病毒表达载体，体外实验证明该载体抑制TIMP-1表达的效果显著。为使目的基因在肝组织中释放而不影响其他器官TIMP1基因的正常表达，我们用超声造影剂微泡混合TIMP-1 siRNA表达载体，同时超声辐照大鼠肝脏，观察该方法定位释放靶基因到靶器官的有效性。[第一段]     

MMP-1、TIMP-1及其在肝纤维化中的作用

基质金属蛋白酶(MMP)和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)是细胞外基质(ECM)合成和降解调节中的两个重要的因素。其中MMP-1主要降解细胞外基质的主要成分Ⅰ、Ⅲ型胶原,TIMP-1可抑制MMP-1的活性。肝纤维化时MMP-1活性下降,而TIMP-1活性不断升高。研究显示,二者活性失衡是导致肝纤维化进展的重要因素。它们的来源结构、活性的调节及功能成为目前的研究热点。     

纤溶酶原激活物抑制物-1在肺血栓栓塞症、肺纤维化、支气管哮喘中的作用研究进展

纤溶酶原激活物抑制物-1是丝氨酸蛋白酶抑制剂家族成员之一,是纤溶酶原激活物快速、专一、有效的生理抑制剂,可影响由组织型纤溶酶原激活物参与的纤溶过程,以及尿激酶型纤溶酶原激活物参与的生理病理条件下纤维蛋白溶解、细胞外基质循环、细胞迁移、组织修复、肿瘤浸润及转移等过程.     

罗格列酮预防大鼠肝纤维化的实验研究

罗格列酮通过激活过氧化物酶体增生激活受体γ（PPARγ）而发挥作用，金属蛋白酶组织抑制剂（TIMPs）是组织中基质金属蛋白酶（MMPs）的主要内源性抑制因子，其表达增加有助于网状纤维和胶原纤维沉积。我们观察罗格列酮保护大鼠肝纤维化的作用，研究大鼠肝内TIMP-1的变化，旨在探讨罗格列酮预防肝纤维化的机制。     

慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者痰MMP-9和TIMP-1的变化

目的检测慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者痰基质金属蛋白酶-9（MMPO）和基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的变化,探讨COPD患者肺功能下降与MMPO、TIMP-1的关系。方法COPD急性加重期患者20例、稳定期患者12例和9例健康对照者提供了痰标本,同时进行肺功能测定。采用双夹心抗体酶联免疫吸附测定实验检测痰上清液MMPO、TIMP-1含量。结果痰上清液MMPO浓度COPD急性加重期组高于稳定期组和对照组（P〈0．01）,稳定期组高于对照组（P〈0．05）;痰上清液MMPO／~MP．1浓度COPD急性加重期组高于稳定期组和对照组（P〈0．001）,稳定期组低于对照组（P〈0．05）。COPD急性加重期患者痰MMPO、MMPO／TIMP-1与第一秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV,％pre）呈负相关（r=-0．573、P〈0．05,r=-0．625、P〈0．05）。结论COPD患者急性加重时痰MMP-9增加、MMPO／TIMP-1失衡,并且可能是肺功能下降的原因。     

Inhibiting effect of antisense oligonucleotides phosphorthioate on gene expression of TIMP-1 in rat liver fibrosis

AIM To observe the inhibition of antisenseoligonucleotides(asON)phosphorthioate to thetissue inhibitors metalloproteinase-1(TIMP-1)gene and protein expression in the liver tissue ofimmunologically induced hepatic fibrosis rats.The possibility of reversing hepatic fibrosisthrough gene therapy was observed.METHODS Human serum albumin(HSA)wasused to attack rats,as hepatic fibrosis model,inwhich asONs were used to block the gene andprotein expressing TIMP-1.According to theanalysis of modulator,structure protein,codingseries of TIMP-1 genome,we designed fourdifferent asONs.These asONs were injected intothe hepatic fibrosis models through coccygealvein.The results was observed by RT-PCR formeasuring TIMP-1 mRNA expression,immunohistochemistry and in situ hybridizationfor collagen Ⅰ,Ⅲ,special staining of collagenfiber,and electron microscopic examination.RESULTS Hepatic fibrosis could last within 363days in our modified model.The expressinglevel of TiMP-1 was high during hepatic fibrosisprocess.It has been proved by theimmunohistochemical and the electronmicroscopic examination that the asON phosphorthioate of TIMP-1 could exactly expressin vivo,The effect of colchicine wasdemonstrated to inhibit the expressing level ofmRNA and the content of collagen Ⅰ,Ⅲ in theliver of experimental hepatic fibrosis rats,However,the electron microscopy research andthe pathologic grading of hepatic fibrosisshowed that there was no significant differencebetween the treatment group and the modelgroup(P>0.05).CONCLUSION The experimental rat model ofhepatic fibrosis is one of the preferable modelsto estimate the curative effect of anti-hepaticfibrosis drugs.The asON phosphorthioate ofTIMP-1 could block the gene and proteinexpression of TIMP-1 in the liver of experimentalhepatic fibrosis rats at the mRNA level.It ispossible to reverse hepatic fibrosis,and it isexpected to study a new drug of anti-hepaticfibrosis on the genetic level.Colchicine has verylimited therapeutic effect on hepatic fibrosis,furthermore,its toxicity and side effects areobvious.     

丹酚酸B对肝纤维化大鼠TGF-β1、MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的:观察丹酚酸B盐(salvianolic acid B,SA-B)对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子-β1 (TGF-β1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)表达的影响,并探讨SA-B抗肝纤维化的可能机制.方法:♂SD大鼠30只随机分为正常对照组、模型组和丹酚酸B治疗组,以5 mL/L的二甲基亚硝胺(DMN)建立肝纤维化模型,治疗组在造模4 wk后给予SA-B治疗4 wk.应用HE,Masson染色观察肝组织病理纤维化分级,全自动生化分析仪检测ALT、AST和Alb,放免法检测HA和LN,S-P免疫组织化学方法检测TGF-β1、MMP-2和TIMP-2蛋白质的表达.结果:与模型组相比,SA-B能改善肝纤维化大鼠肝脏病理组织学结构,治疗组血清ALT、AST、HA和LN水平明显减低(87.0±28.7 U/L vs 190.4±27.4 U/L.85.6±25.3 U/L vs 178.2±15.9 U/L,179.7±32.8 mg/L vs 433.3±86.1 mg/L,135.6±21.1 mg/L vs 224.7±29.2 mg/L,均P<0.01),经SA-B干预后TGF-β1和TIMP-2表达明显下降,与模型组相比有显著性差异(18.53±2.54 vs 12.78±2.65,21.88±3.83 vs 14.69±4.51,均P<0.01),而MMP-2表达水平无明显变化.结论:SA-B能改善肝纤维化大鼠肝脏病理组织学结构,可能通过抑制TGF-β1和TIMP-2表达而促进肝纤维化的逆转.     

氧化应激促进肺间质纤维化的机制

肺间质纤维化是许多间质性肺疾病的共同结局,迄今为止发病机制还不是十分明确.目前发现氧化应激过程在肺纤维化的过程中发挥了重要促进作用,所以抗氧化治疗也越来越受到人们的重视.