白细胞介素 22对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的影响及作用机制

目的探讨白细胞介素 22(IL?22)对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响以及作用机制。方法收集鄂州市中心医院 2017年 1月至 2019年 1月接收的经病理诊断为结肠癌的病人 67例,经手术获取结肠癌组织和正常癌旁组织,免疫组织化学染色检测其中的 IL?22表达情况;用浓度分别为 10 μg/L、20 μg/L、40 μg/L的重组人 IL?22处理结肠癌 SW480细胞,以未经任何处理的 SW480细胞作为对照组; 40 μg/L的重组人 IL?22处理 SW480细胞后再用磷脂酰肌醇 3激酶(PI3K)/蛋白激酶 B(AKT)通路抑制剂 LY294002处理作为 IL?22+LY294002组。蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组细胞蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖率; Transwell检测细胞侵袭和迁移。结果相较于癌旁组织,结肠癌组织中 IL?22阳性细胞表达率升高［(76.12±8.47)%比(28.35±4.21)%,t＝41.340,P＜0.001］;相较于对照组,三个不同浓度 IL?22处理组结肠癌 SW480细胞增殖率升高［(36.72±5.47)%、(115.67±10.48)%、(166.42±11.81)%比(0.00±2.06)%,F＝720.225,P＜ 0.001］Ki67蛋白表达水平升高［(0.77±0.08)、(0.84±0.11)(0.98±0.12)比(0.42±0.05)F＝57.720,P＜0.001］;迁移细胞数升［(123.79,±8.64)个、(163.79±11.85)个、(223.79±15.72)个比(80.96±6.53)个, F＝263.230,P,＜0.001］侵袭细胞数升高［(94.65± 11.13)个、(134.71±9.54)个、(154.27±12.78)个比(57.35±7.83)个, F＝152.287,P＜0.001］,MMP?2蛋白,表达水平升高［(0.71± 0.06)、(0.94±0.07)、(1.25±0.08)比(0.46±0.03)F＝257.772,P＜0.001］;磷酸化蛋白激酶 B(p?AKT)蛋白表达水平升高［(0.42± 0.05)、(0.58±0.06)、(0.66±0.08)比(0.28±0.03),F＝76.925,P＜0.001］;总 AKT(total?AKT)蛋白表达水平升高［(0.63±0.04)、(0.68±0.06)、(0.72±0.05)比(0.56±0.05),F＝16.7,94,P＜0.001］; E?cadherin表达水平降低［(0.31±0.04)、(0.19±0.03)、(0.15± 0.04)比(0.42±0.05)F＝81.591,P＜0.001］,Vimentin表达水平升高［(0.45±0.05)、(0.61±0.05)、(0.77±0.08)比(0.39±0.03)F＝ 85.366,P＜0.001］N?c,adherin表达水平升高［(0.51±0.06)、(0.58±0.07)、(0.71±0.08)比(0.45±0.03)F＝28.462,P＜0.001］。与,IL?22组相比, IL?22+,LY294002组结肠癌 SW480细胞中细胞增殖率降低［(141.69±13.58)%比(216.,64±17.36)%,P＜0.001］, Ki67蛋白表达水平降低［(0.68±0.07)比(0.94±0.09),P＜0.001］;迁移细胞数降低［(147.64±12.52)个比(246.19±18.56)个, P＜ 0.001］;侵袭细胞数降低［(97.45±11.68)个比(148.46±13.48)个, P＜0.001］; MMP?2蛋白表达水平降低［(0.74±0.08)比(1.13±0.11),P＜0.001］; E?cadherin表达水平升高［(0.33±0.04)比(0.19±0.03),P＜0.001］; Vimentin表达水平降低［(0.54±0.08)比(0.75±0.08),P＜0.001］; N?cadherin表达水平降低［(0.55±0.06)比(0.68±0.07),P＜0.001］。结论 IL?22可促进结肠癌 SW480细胞的增殖、迁移、侵袭和 EMT,其机制可能与 PI3K/AKT通路有关。     

长链非编码RNA HOTAIR促进胶质瘤细胞侵袭

目的探讨长链非编码RNA HOTAIR对人脑胶质瘤细胞侵袭的促进作用。方法采用HOTAIR-siRNA寡聚核苷酸转染胶质瘤U87和U251细胞系,通过实时荧光定量PCR技术检测HOTAIR在胶质瘤细胞中的表达水平。利用Western blot验证上皮间质化相关通路蛋白(Snail、Stat3和β-catenin)、标记蛋白(E-cadherin、CDH13和Vimentin)和侵袭迁移相关基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9)的表达变化。采用Transwell实验,观察敲低HOTAIR后其对胶质瘤细胞侵袭的影响。结果下调HOTAIR表达后,U87和U251细胞的上皮间质化相关信号通路蛋白降低,E-cadherin和CDH13升高,Vimentin降低,MMP2和MMP9表达下降,细胞侵袭能力减弱(P<0.01)。结论 HOTAIR通过诱导上皮间质化促进了胶质细胞侵袭能力。     

微小 RNA?671?5p对人结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨 miR?671?5p对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法培养人正常结肠上皮细胞 NCM460和结肠癌细胞 SW480、SW620、HT29和 LOVO,实时荧光定量 PCR(RT?qPCR)检测 miR?671?5p和染色盒同源物 4(CBX4)mRNA水平。转染 miR?671?5p mimics(miR?671?5p组)、阴性对照( miR?NC组)至 SW480细胞,四甲基噻唑蓝染色法( MTT)检测细胞增殖,克隆实验检测细胞克隆形成能力, Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法( Western Blot)检测 CBX4、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、 p21、基质金属蛋白酶 9(MMP?9)、基质金属蛋白酶 14(MMP?14)及酪氨酸激酶 1/信号转导子与转录激活子 3(JAK1/STAT3)信号通路相关蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证 miR?671?5p和 CBX4之间靶向关系。结果与 NCM460细胞比,结肠癌细胞 SW480、SW620、HT29和 LOVO中 miR?671?5p水平显著降低( P＜0.05),CBX4 mRNA水平显著升高( P＜0.05)。与 miR?NC组比, miR?671?5p组 SW480细胞培养 24、48、72 h后的 OD值、克隆形成率、迁移和侵袭细胞数及 CyclinD1、MMP?9、MMP?14、p?JAK1和 p?STAT3蛋白水平显著降低( P＜0.05),p21蛋白水平显著升高( P＜0.05)。 miR?671?5p负调控 CBX4表达,过表达 CBX4降低了 miR?671?5p过表达对 SW480细胞增殖、迁移和侵袭及 JAK1/STAT3信号通路的影响。结论 miR?671?5p过表达可抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制与下调 CBX4表达、抑制 JAK1/STAT3信号通路的激活有关。     

分泌型卷曲相关蛋白 1通过 MAPK/ERK信号通路抑制结直肠癌细胞的迁移侵袭

目的探讨分泌型卷曲相关蛋白 1(SFRP1)对结直肠癌细胞迁移和侵袭的影响机制。方法本研究起止时间 2018年 11月至 2019年 6月。运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测正常结肠上皮细胞 HCoEpiC、人结直肠癌细胞 HCT8、SW480、RKO中 SFRP1的 mRNA表达;将 pcDNA 3.1组(转染 pcDNA 3.1)pcDNA 3.1-SFRP1组(转染 pcDNA 3.1-SFRP1)、 pcDNA 3.1-SFRP1+DMSO组［转染 pcDNA 3.1-SFRP1,再用二甲基亚砜( DMSO)处、理］、 pcDNA 3.1-SFRP1+IGF组［转染 pcDNA 3.1-SFRP1,再用丝裂原活化蛋白激酶( MAPK)/细胞外信号调节激酶( ERK)信号通路激活剂( IGF1)处理］均用脂质体法转染至 HCT8细胞。蛋白质印迹法( Western blotting)检测细胞中 SFRP1、波形蛋白(Vimentin)、纤维黏连蛋白(FN)、,基质金属蛋白酶 9(MMP-9)、 N-钙黏蛋白( N-cadherin)、上皮钙黏蛋白( E-cadherin)、 MAPK/ERK信号通路关键基因( Ras)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、细胞外信号调节激酶 1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶 1/2(p-ERK1/2)、细胞外信号调节激酶( ERK)的蛋白表达;迁徙实验( Transwell)检测细胞的迁移侵袭。结果与正常结肠上皮细胞 HCoEpiC相比,人结直肠癌细胞 HCT8、SW480、 RKO中 SFRP1的表达显著降低［mRNA(1.00±0.06)比( 0.36±0.03)、(0.62±0.05)、(0.59±0.05);蛋白( 1.00±0.04)比( 0.24±0.02)、(0.48±0.04)、(0.47±0.04)均 P<0.05］。过表达 SFRP1可抑制 HCT8细胞的迁移( 120±11)比( 65±6)和侵袭( 98±8)比( 47±4)并下调Vimentin(0.96±0.05)比,(0.23±0.02)、FN(1.00±0.07)比(0.51±0.04)、MMP-9(0.98±0.08)比(0.35±0.03)、N-cadherin(1.01±0.09)比(0.43±0.04)上调 E-cadherin(0.99±0.06)比( 3.71±0.27)抑制 MAPK/ERK信号通路关键蛋白 Ras(0.97±0.07)比( 0.34±0.03)、mTOR(1.03±0.07)比(0.42±0.04)、 p-ERK1/2(0.98±0.08)比(0.29±0.03)和 ERK(1.01±0.06)比( 0.31±0.03)的表达。激活 MAPK/ERK信号通路可逆转过表达 SFRP1对结直肠癌细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 SFRP1可抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能与失活 MAPK/ERK信号通路相关,将可为 SFRP1用于结直肠癌的治疗提供依据。     

三七总皂苷对脑梗死大鼠神经细胞 Wnt/β-连环素信号通路的影响

目的探究三七总皂苷对脑梗死大鼠神经细胞 Wnt/β-连环素(β-catenin)信号通路的影响。方法该研究起止时间为 2018年1月至 2019年3月。 60只雄性 SD大鼠采用随机数字表法分为空白对照组、模型组、低剂量三七总皂苷组(75 mg/kg)和高剂量三七总皂苷组(150 mg/kg),各 15只。将模型组、低剂量三七总皂苷组和高剂量三七总皂苷组大鼠制成脑梗死模型;低剂量、高剂量三七总皂苷组均腹腔注射三七总皂苷,空白对照组和模型组注射等量生理盐水,每日 1次,注射 3d。使用改良神经功能缺损评分(mNSS)评价大鼠神经功能;使用 Z-Longa评分评价大鼠姿势反射情况;检测各组大鼠脑梗死面积及脑含水率;使用蛋白质印迹法检测 Wnt/ β-catenin信号通路蛋白及自噬相关蛋白表达情况。结果与空白对照组相比,模型组大鼠 mNSS评分、大鼠姿势反射评分、脑梗死率、脑含水率、微管相关蛋白轻链 3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白表达水平升高(P<0.05)自噬蛋白 P62表达、 Wnt信号通路配体蛋白 Wnt3a蛋白表达(0.25±0.09比 1.68±0.25)和 β-catenin蛋白表达(0.40±0.10比 1.55±0.20),降低(P<0.05)。与模型组相比,低、高剂量三七总皂苷组大鼠 mNSS评分、大鼠姿势反射评分、脑梗死率、脑含水率降低, LC3-Ⅱ蛋白表达降低(P<0.05)P62蛋白、 Wnt3a蛋白(0.79±0.15,1.26±0.25比0.25±0.09)和β-catenin蛋白表达(1.23±0.25,0.90±0.15比0.40±0.10)升高(P<0.05)低剂量三七总皂苷组相比,高剂。与,量三七总皂苷组大鼠 mNSS评分、大鼠姿势反射评分、脑梗死率、脑含水率降低, LC3-Ⅱ蛋白表达降低(P<0.05)P62蛋白、 Wnt3a蛋白(1.26±0.25比 0.79±0.15)和 β-catenin蛋白表达( 1.23±0.25比 0.90±0.15)升高( P<0.05)。结论三七总皂可以,通过促进 Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达激活 Wnt/β-catenin信号通路,发挥调节大鼠神经元细胞的自噬,改善脑梗死大鼠神经损伤的作用。     

苯丁酸钠对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察分析苯丁酸钠( Sodium phenylbutyrate,NaPB)对乳腺癌 MDA?MB?231细胞增殖和凋亡的影响,初步探究其可能的作用机制。方法以不同剂量 NaPB(0 mmol/L、2 mmol/L和 4 mmol/L)处理乳腺癌 MDA?MB?231细胞株并进行实验分组:对照组, 2 mmol/L NaPB组 4 mmol/L NaPB组。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法( MTT法)检测各组乳腺癌细胞的增殖情况,使用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用蛋白质印迹法(Western Blot)检测凋亡相关蛋白 B细胞淋巴瘤 /白血病 ?2(Bcl?2)、Bcl?2相关 X蛋白( Bax)和乳腺癌易感基因 1(BRCA1)蛋白表达的水平。结果 NaPB能显著抑制乳腺癌 MDA?MB?231细胞的生长增殖,并可诱导乳腺癌细胞凋亡,对照组、 2 mmol/L NaPB组和 4 mmol/L NaPB组乳腺癌细胞的凋亡率分别为( 4.25±0.89)%、(14.11±2.98)%和( 32.73±1.89)%,两两比较均差异有统计学意义( P＜0.05)NaPB可诱导凋亡相关蛋白 Bcl?2表达水平下降,而 Bax表达水平升高, NaPB的抗肿瘤作用在高剂量组中表现得更明显。与对相比 NaPB可显著下调 BRCA1蛋白的表达,差异照组,有统计学意义(P＜0.05)。结论 NaPB可抑制乳腺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡,其作用机制可能与 NaPB下调 BRCA1表达有关。     

血管紧张素Ⅱ调控基质金属蛋白酶 9的表达在蛛网膜下腔出血发病中的机制研究

目的 探讨血管紧张素 Ⅱ(AngⅡ)调控基质金属蛋白酶 9(MMP?9)的表达在蛛网膜下腔出血( SAH)发病中的机制。方法人脑微血管内皮细胞( HBMEC)株分为 AngⅡ组、 AngⅡ+SB203580组和对照组。其中 AngⅡ组以 100 μg/L浓度 AngⅡ处理 90 min、2h、4h、6h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测; AngⅡ+SB203580组以 5 μΜ的 SB203580处理 20 min后以 100 μg/L浓度 AngⅡ处理 90 min、2h、4h、6h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测;对照组加入 RPMI?1640培养液培养 90 min、2h、4h、6h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测。以酶联免疫吸附法( ELISA)检测各组细胞上清液 MMP?9水平,以实时荧光定量 PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞 p38丝裂原活化蛋白激酶( p38 MAPK)的 mRNA和蛋白表达水平。结果并与对照组比较, AngⅡ组细胞上清液 MMP?9［处理 12 h:(4.21±1.36)μg/L比( 5.81±1.72)μg/L,P＜0.01］水平升高, AngⅡ+ SB203580组细胞上清液 MMP?9［处理 12 h:(4.21±1.36)μg/L比( 3.64±1.45)μg/L,P＜0.01］水平降低( P＜0.05)。与 AngⅡ组比较, AngⅡ+SB203580组细胞上清液 MMP?9水平降低( P＜0.001)。与对照组比较, AngⅡ组细胞 p38 MAPK的 mRNA［处理 12 h:(0.422±0.057)比( 0.538±0.071),P＜0.05)］和蛋白表达水平［( 0.452±0.105)比( 0.635±0.133)P＜0.001］升高, AngⅡ+ SB203580组细胞 p38 MAPK的 mRNA［处理 12 h:(0.422±0.057)比( 0.375±0.066),P＜0.05］和蛋白表达,水平［(0.452±0.105)比(0.276±0.081)P＜0.001］降低( P＜0.05)。与 AngⅡ组比较, AngⅡ+SB203580组细胞 p38 MAPK的 mRNA和蛋白表达水平降低( P＜0.001)。结论,AngⅡ可能通过激活 p38 MAPK信号通路上调 MMP?9表达从而促进 SAH发生发展。     

芹菜素调控Wnt信号通路对卵巢癌细胞侵袭能力的影响

目的　探讨芹菜素对Wnt/β-catenin 信号通路的调控及其对卵巢癌细胞侵袭能力的影响。方法　在经芹菜素处理的人卵巢癌细胞系HO8910 中,通过实时PCR 和Western blot 检测Wnt/β-catenin 通路相关蛋白及下游蛋白的表达;采用Transwell 法检测细胞体外迁移和侵袭能力;利用Luciferase 双荧光素酶报告系统检测Wnt/β-catenin 通路的活化情况。结果　芹菜素作用24 h 能够有效抑制HO8910 细胞的迁移和侵袭能力,降低β-catenin 和E-catenin 的mRNA 相对表达量和蛋白表达水平。芹菜素对Wnt/β-catenin 信号通路中相关蛋白及下游靶蛋白具有调控作用（P<0.0001）。结论　芹菜素可以通过抑制人卵巢癌细胞中Wnt/β-catenin 信号通路,下调促转移靶蛋白的表达,抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力。     

下调miR-19b表达对骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移及Wnt/β-Catenin通路的影响

摘要：目的:探讨下调miR-19b表达对骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移能力的影响,并探讨可能机制。方法:采用脂质体转染法转染人骨肉瘤MG63细胞,实验分为空白组、miR-19b inhibitor NC组、miR-19b inhibitor组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况,通过Transwell小室法检测各组细胞侵袭、迁移情况,通过免疫印迹(WB)法检测侵袭、迁移以及Wnt/β-连环蛋白(β-Catenin)通路相关蛋白表达情况。结果:与空白组、miR-19b inhibitor NC组相比,miR-19b inhibitor组miR-19b相对表达量、转染后48 h、72 h吸光度(A)值、侵袭与迁移细胞数、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Wnt、细胞核β-Catenin表达水平显著降低(P<0.05),细胞质β-Catenin表达水平显著升高(P<0.05)。结论:下调miR-19b表达可能通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路激活,从而抑制骨肉瘤MG63细胞侵袭、迁移。     

基于Wnt/β-catenin信号对胡椒碱抗肿瘤作用机制的研究

目的 研究小剂量胡椒碱通过下调Wnt/β-catenin信号分子的表达调控胃癌细胞HGC-27增殖及侵袭的机制。方法 体外培养人胃癌HGC-27细胞,设置梯度浓度的胡椒碱,CCK-8法检测24 h细胞的活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。将细胞分为正常组（HGC-27）细胞、对照组（Wnt/β-catenin抑制剂组）、实验组（小剂量胡椒碱）。CCK-8法检测12,24,48 h细胞的活力,BrdU标记流式细胞术检测细胞增殖率、划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western-blot法检测Wnt/β-catenin信号分子的表达以及MMP2、MMP9和N-cadherin的表达水平,RT-qPCR检测β-catenin、MMP2、MMP9、N-cadherin的mRNA表达水平。结果 5 μmol·L^-1的胡椒碱可以抑制细胞的增殖但无明显细胞毒性,可以显著降低HGC-27细胞的增殖能力,且具有时间依赖性,相比正常组差异具有统计学意义（P<0.05）。划痕试验和Transwell小室试验结果显示,5 μmol·L^-1的胡椒碱可以降低HGC-27细胞的迁移能力和侵袭能力,相比正常组差异具有统计学意义（P<0.05）。胡椒碱可以显著下调Wnt/β-catenin信号分子的表达,以及关键蛋白MMP2、MMP9、N-cadherin的表达水平,相比正常组差异具有统计学意义（P<0.05）。RT-qPCR结果显示,β-catenin、MMP2、MMP9、N-cadherin的mRNA表达水平相比正常组显著下调（P<0.05）。结论 小剂量的胡椒碱可以通过下调Wnt/β-catenin信号分子的表达调控胃癌细胞HGC-27的增殖及侵袭,可能是胡椒碱抗肿瘤的作用机制之一。     

miR-199-3p过表达调控肺癌A549细胞生长、侵袭及上皮间质转化机制研究

目的 探究miR-199-3p过表达靶向抑制SOX5对肺癌A549细胞生长、侵袭及上皮间质转化(EMT)的影响。方法 荧光素酶实验检测miR-199a-3p与SOX5靶向关系。构建SOX5 pcDNA载体过表达SOX5,将miR-199-3p与pcDNA-SOX5单独或联合转染A549,将细胞随机分为对照组(Control组)、miR-199-3p过表达组(mimic组)、SOX5组和mimic+SOX5组进行后续实验。克隆形成法检测肺癌A549细胞增殖情况,流式细胞术检测肺癌A549细胞凋亡情况,Transwell检测肺癌A549细胞侵袭能力;荧光显微镜观察肺癌A549细胞EMT形态学变化;蛋白免疫印迹试验检测Ki-67、PCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果 与SOX5组比较,mimic+SOX5组细胞克隆形成率降低,Ki-67、PCNA蛋白水平降低,细胞凋亡率升高,Bax/Bcl-2和cleaved Caspase-3/Caspase-3比值升高,细胞侵袭数降低,E-cadherin蛋白水平...     

富含亮氨酸重复序列的 G蛋白偶联受体 6通过 Wnt/β-连环蛋白通路对结肠癌 SW480细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体6(LGR6)对人结肠癌SW480细胞增殖和侵袭的作用及机制.方法 在结肠癌细胞株SW480细胞中构建低表达LGR6的实验组、阴性对照组和空白对照组,用实时荧光定量核酸扩增检测(qPCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)验证LGR6 mRNA和蛋白的表达水平.用MTT法检测细胞增殖活性,用Transwell小室法检测细胞的侵袭能力,用Western Blot检测Wnt/β-连环蛋白(βcatenin)信号通路相关蛋白表达水平.结果 实验组、阴性对照组和空白对照组LGR6 mRNA表达水平分别为(0.42±0.08)、(1.12±0.08)、(1.13±0.31),转染LGR6 siRNA的SW480细胞LGR6 mRNA和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);转染后24、48、72 h时实验组细胞增殖活性[(0.24±0.04)、(0.27±0.06)、(0.45±0.08)、(0.63±0.09)]显著低于阴性对照组[(0.22±0.03)、(0.40±0.05)、(0.92±0.07)、(1.32±0.11)]和空白对照组[(0.26±0.04)、(0.42±0.07)、(0.94±0.09)、(1.21±0.12),均P<0.05].下调LGR6表达可促进结肠癌细胞Bax和Cleaved caspase 3蛋白的表达,并抑制结肠癌细胞βcatenin和c-Myc蛋白的表达(均P<0.05).结论 下调LGR6可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌SW480细胞的增殖和侵袭,并促进结肠癌SW480细胞的凋亡.     

蒲公英萜醇通过上调微小 RNA-610表达抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移侵袭

目的探讨蒲公英萜醇对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法 2019年 4月至 2020年 1月,将鼻咽癌细胞 SUNE1分为对照组、蒲公英萜醇低、中、高浓度组、微小 RNA(miR)-NC组、 miR-610组、蒲公英萜醇 +anti-miR-NC组、蒲公英萜醇 +anti-miR-610组。 MTT法检测 SUNE1细胞增殖;蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 1A(p21)、细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶( MMP)-2、MMP-9蛋白表达; Transwell检测细胞迁移和侵袭;实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)检测 miR-610表达水平。结果不同浓度蒲公英萜醇处理鼻咽癌细胞 SUNE1后,细胞增殖抑制率［( 16.72±1.42)%、(31.95±2.95)%、(54.59±5.0)%比( 0.00±0.00)%］和 p21、miR-610(1.68±0.14、2.37±0.21、3.09±0.29比 1.00±0.06)表达水平升高,迁移( 70.02±5.72、56.49±5.35、43.37±4.19比 86.71±7.05)、侵袭( 50.70±4.41、39.12±3.89、26.28±2.78比 69.12±4.80)细胞数和 Cy. clinD1、MMP-2、MMP-9水平降低,呈浓度依赖性( P<0.05)。过表达 miR-610可提高细胞增殖抑制率［( 46.66±4.48)%比( 7.11±0.74)%］和 p21表达水平,降低迁移( 52.18±5.35比 87.40±6.86)、侵袭( 33.11±3.29比 70.27±5.39)细胞数和 CyclinD1、MMP-2、 MMP-9表达水平(P<0.05)。抑制 miR-610表达逆转了蒲公英萜醇抗鼻咽癌 SUNE1细胞增殖、迁移和侵袭作用。结论蒲公英萜醇可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与上调 miR-610表达相关。     

circMTO1调控Wnt/β-catenin抑制乳腺癌细胞增殖和转移能力的机制研究

目的 研究环状RNA MTO1（circMTO1）对乳腺癌细胞增殖和转移的影响及其可能机制。方法 收集102例浸润性乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织,选用乳腺癌细胞系MDA-MB-231、HCC-70、MCF-7和人乳腺正常细胞系MCF-10A,采用荧光定量PCR（qPCR）检测circMTO1在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平。分别构建circMTO1过表达和circMTO1敲减质粒转染乳腺癌细胞系,分为NC组、oe-circMTO1组和sh-circMTO1组,qPCR检测转染效果。MTS实验检测各组细胞增殖能力,Transwell实验检测各组细胞转移能力。TOP/FOP荧光素酶实验检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路活性,Western blot检测各组细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt3a、β-catenin、cMyc、Cyclin D1和基质金属蛋白酶7（MMP7）的表达。结果 与癌旁组织和人正常乳腺细胞系相比,circMTO1在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的相对表达量降低（P<0.05）。有淋巴结转移和TNM分期为Ⅲ期的乳腺癌患者组织中circMTO1的相对表达水平较低（P<0.05）。与NC组相比,oe-circMTO1组circMTO1相对表达量增加,细胞的增殖、转移能力以及Wnt/β-catenin信号通路活性减弱,Wnt3a、β-catenin、cMyc、Cyclin D1和MMP7蛋白表达水平降低（P<0.05）;sh-circMTO1组circMTO1相对表达量降低,细胞的增殖、转移能力以及Wnt/β-catenin信号通路活性增强,Wnt3a、β-catenin、cMyc、Cyclin D1和MMP7蛋白表达水平增加（P<0.05）。结论 circMTO1在乳腺癌细胞中呈低表达,circMTO1通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活性,从而抑制乳腺癌细胞的增殖和转移能力。     

丹皮酚抑制人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭及对MAPKs信号通路的影响

目的探讨中药单体丹皮酚对人肺癌A549细胞系增殖、侵袭和迁移能力以及MAPKs信号通路的影响。方法采用CCK-8法检测不同浓度丹皮酚对肺癌A549细胞系的抑制率,计算半数抑制浓度(IC50)。通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测丹皮酚对A549细胞迁移及侵袭能力的影响。酶联免疫吸附法(ELISA)检测丹皮酚处理24 h后培养上清中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达水平。Western blot法检测A549细胞内MAPKs信号通路中p-ERK、p-JNK及p-p38等关键蛋白表达水平的变化情况。结果丹皮酚对A549细胞的增殖具有抑制作用,呈浓度依赖性,对A549细胞的IC50为(54.68±3.59)μg·m L-1。丹皮酚以浓度依赖的方式抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移。ELISA检测发现丹皮酚可以抑制A549细胞分泌MMP-2、MMP-9蛋白。Western blot结果提示丹皮酚可抑制MAPKs信号通路中ERK通路磷酸化蛋白p-ERK的表达,而对p38、JNK通路的磷酸化水平无明显影响。结论在一定浓度范围内,丹皮酚可抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,下调分泌蛋白MMP-2和MMP-9的表达,其机制可能与抑制MAPKs信号通路中的ERK通路有关。     

非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白 2靶蛋白对非小细胞肺癌细胞迁移侵袭的影响及其机制

目的 研究非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)基因对非小细胞肺癌细胞迁移侵袭的影响及其机制.方法 2018年10月至2019年8月,将非小细胞肺癌A549、H1299细胞株分为三组:空白对照组(未经转染的细胞);阴性对照组[转染非特异性的小干扰RNA(siRNA)的细胞];siRNA-TPX2组(转染TPX2特异性的siRNA的细胞).采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)方法对转染小干扰RNA(siRNA)前后的非小细胞肺癌A549、H1299细胞株进行鉴定.人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)增殖实验检测细胞增殖能力.Tanswell小室迁移实验检测细胞迁移和侵袭的影响.蛋白质印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路关键分子及基质金属蛋白酶(MMPs)表达的变化.结果 siRNA-TPX2组中TPX2 mRNA和蛋白的相对表达水平显著低于阴性对照组及空白对照组(P<0.05).与阴性对照组相比,下调TPX2可抑制A549细胞的增殖[24 h(0.71±0.02)比(0.62±0.03);48 h(1.62±0.03)比(0.69±0.02);72 h(2.08±0.03)比(0.95±0.02)]、迁移[(91.18±13.97)个比(49.95±12.15)个]、侵袭[(165.46±19.19)个比(93.37±13.54)个](P<0.05).与阴性对照组相比,下调TPX2可抑制H1299细胞的增殖[24 h(0.81±0.03)比(0.65±0.02);48 h(1.73±0.02)比(0.78±0.01);72 h(2.18±0.03)比(1.16±0.02)]、迁移[(74.31±13.86)个比(38.76±9.05)个]、侵袭[(158.46±19.58)个比(88.47±11.23)个](P<0.05).TPX2表达下调能显著降低非小细胞肺癌A549、H1299细胞中PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶12(MMP12)蛋白的表达(P<0.05).激动剂胰岛素生长样因子1(IGF-1)能完全削弱TPX2-siRNA抑制A549、H1299细胞中PI3K/Akt信号通路活性及其下游MMP9和MMP12的表达(P<0.05).结论 TPX2通过调控PI3K/Akt信号通路活性及其下游MMP9和MMP12的表达促进非小细胞肺癌细胞侵袭转移.     

桔梗皂苷-D抑制非小细胞肺癌H460和A549细胞黏附、侵袭和迁移的作用机制研究

目的探究桔梗皂苷-D(platycodin-D,PD)抑制非小细胞肺癌(NSCLC)H460和A549细胞黏附、侵袭和迁移的作用及其作用机制。方法细胞黏附实验、划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测细胞黏附、迁移和侵袭能力。RT-PCR检测H460和A549细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA的表达。同时,Western blot法检测MMP-2和MMP-9蛋白、其上游ERK信号通路相关蛋白和p-Akt的表达水平。结果PD有效抑制H460和A549细胞黏附、侵袭和迁移能力,并呈浓度依赖性(P<0.05)。PD降低H460和A549细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA的表达(P<0.01);同时,PD下调H460和A549细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达,并抑制其上游Ras、p-c-Raf、p-ERK 1/2和p-Akt的表达,并呈浓度和时间依赖性。结论 PD抑制NSCLC细胞黏附、侵袭和迁移,并且此作用与下调MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白的表达,抑制其上游ERK信号通路和p-Akt表达有关。     

多硫代二酮哌嗪类化合物1004体外对MDA-MB-231细胞转移能力的影响及机制研究

摘要：目的 检测多硫代二酮哌嗪类化合物1004体外对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞转移能力的影响,并初步研究其作用机制。方法 利用磺酰罗丹明染色法（SRB）检测1004作用于MDA-MB-231细胞24和72 h的细胞毒活性;细胞粘附实验检测1004对MDA-MB-231细胞外基质粘附的影响;划痕实验和Transwell侵袭实验,分别检测1004对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响;明胶酶谱法检测1004对MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶MMP9活性的影响;Western Blot检测1004对MDA-MB-231细胞N-cadherin、Snail、c-Myc和FGFR1的蛋白表达的影响,检测AKT和ERK表达和活化水平。结果 1004作用于MDA-MB-231细胞72 h的IC50为（6.28±1.25）μmol?L-1,而1004作用于MDA-MB-231细胞24 h的IC50超过100 μmol?L-1。1004作用于MDA-MB-231细胞可增加细胞粘附,并抑制细胞的迁移和侵袭。1004可以显著降低N-cadherin、c-Myc 及Snail 的表达水平,并抑制MMP9 的活性。1004 作用于MDA-MB-231细胞可以浓度依赖性地引起FGFR1的表达下调,并抑制下游ERK和AKT 的活化。结论 1004体外对MDA-MB-231细胞具有转移抑制活性,其机制可能与下调FGFR1的蛋白水平并抑制FGFR信号通路有关。     

藤梨根提取物通过 IL-6/STAT3信号通路调控食管癌细胞生物学行为的研究

目的探讨藤梨根提取物通过白细胞介素 -6/信号传导因子及转录激活因子 3(IL-6/STAT3)信号通路调控食管癌 EC9706细胞生物学行为的研究。方法本实验研究自 2018年 10月到 2019年 6月,分别用 1、5、10、100、500、1 000 mg/L的藤梨根提取物处理食管癌 EC-9706细胞,选取 100 mg/L作为最佳逆转实验浓度;用 IL-6/STAT3信号通路激活剂处理食管癌 EC-9706细胞。甲基噻唑基四唑( MTT)检测细胞的毒性;流式细胞术检测细胞的凋亡率; Transwell法检测细胞的迁移和侵袭;划痕实验检测细胞的运动能力;蛋白免疫印迹法( Western blotting)检测细胞周期蛋白 1(Cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶抑制因子(P21)、 B淋巴细胞瘤 -2相关蛋白(Bax)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、基质金属蛋白酶 -9(MMP-9)、信号传导及转录活化因子 3(STAT3)、磷酸化的信号传导与转录激活因、子-3(p-STAT3)蛋白的表达。结果藤梨根提取物明显促进了食管癌 EC-9706细胞凋亡( 37.35±2.37)并抑制了细胞增殖( 21.33±3.91)、迁移( 106.31±3.20)和侵袭( 67.29±2.99)(P<0.05);下调 CyclinD1(0.25±0.01)、 Bcl-2(0.26±0.03),、MMP-2(0.27±0.03)、 MMP-9(0.25±0.01)、 STAT3(0.34±0.03)、 p-STAT3(0.20±0.01)     

隐丹参酮通过 G蛋白偶联受体 55调节 Wnt/β?catenin信号通路抑制舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡及其作用机制研究

目的探讨隐丹参酮对舌鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法实验设置不同浓度隐丹参酮( CT)组、空白对照( NC)组、 pcDNA?con组、 pcDNA?GPR55组、 CT+si?con组、 CT+si?GPR55组。 MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡; qRT?PCR检测 GPR55 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测蛋白表达。结果 MTT法检测显示, 0 CT组、 2 CT组、 4 CT组、 8 CT组、 16 CT组、 32 CT组细胞增殖抑制率分别为( 0.00±0.02)%、(25.04±2.50)%、(68.56±5.86)%、(85.44±8.54)%、(88.25±8.82)%、(80.11±8.01)%,与不含隐丹参酮的细胞相比,不同浓度隐丹参酮处理组 TSCC细胞的增殖抑制率均显著升高( F＝284.028,P＜0.05)。隐丹参酮可抑制舌鳞状癌细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制 Bcl?2、β?catenin表达,促进 Bax、 GPR55表达。过表达 GPR55也抑制舌鳞状癌细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制 CyclinD1、Bcl?2表达,促进 Bax表达。低表达 GPR55逆转了隐丹参酮对舌鳞状癌细胞的增殖抑制、凋亡促进及对 β?catenin表达的抑制作用。与 NC组( 0.75±0.08)相比, CT组 TSCC细胞中 β?catenin表达水平( 0.26±0.03)显著降低;与 CT+si?con组( 0.30±0.03)相比, CT+si?GPR55组 TSCC细胞中 β?catenin表达水平( 0.62±0.06)显著升高( F＝176.212,P＜0.05)。结论隐丹参酮可抑制舌鳞状癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与调控 GPR55及 Wnt/β?catenin信号通路有关。