壳寡糖抑制肿瘤作用的实验研究

目的：通过建立H22肝癌荷瘤鼠作为实验动物模型，研究壳寡糖对肿瘤抑制作用的影响。方法：选择小鼠体内注射的方法，将不同浓度壳寡糖注入荷瘤小鼠体内，观察肿瘤生长情况，对其进行免疫功能的测定；同时通过MTT比色法观察壳寡糖对LH-7人肺癌细胞的体外生长抑制作用。结果：壳寡糖对肿瘤的生长有抑制作用；壳寡糖可提高荷瘤小鼠血清的IL-2和IFN-γ含量，增加荷瘤小鼠免疫器官脾脏和胸腺重量；显微镜观察肿瘤组织出现坏死；壳寡糖对LH-7细胞生长有抑制作用，抑瘤率与浓度有关，与时间无关；透射电镜显示细胞有凋亡趋势。结论：壳寡糖可抑制肿瘤生长，提高机体免疫功能；同时壳寡糖可能诱导LH-7肿瘤细胞凋亡。     

天麻多糖通过影响小鼠免疫系统抑制肿瘤生长

目的研究天麻多糖对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响及其对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法 MTT法检测不同质量浓度的天麻多糖对小鼠肝癌H22细胞体外增殖的影响;健康小鼠和接种H22瘤株造模昆明种小鼠分成7组(n=12):对照组(0.9%NaCl溶液2 ml),模型组(0.9%NaCl溶液2 ml),环磷酰胺(20 mg·kg-1)组,天麻多糖低、中、高剂量(30、60、90 mg·kg-1)组,观察天麻多糖对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果天麻多糖对肝癌H22细胞增殖有显著的抑制作用。且在小鼠体内能明显抑制对H22肿瘤瘤体生长,高剂量(90 mg·kg-1)效果明显(P0.05);环磷酰胺和天麻多糖合用可使环磷酰胺对白细胞计数、胸腺指数和脾指数的影响降低。结论天麻多糖能抑制肝癌H22细胞的增殖,与环磷酰胺联用可降低环磷酰胺对免疫系统的伤害。     

三取代型钛钨硅酸盐体内抑瘤效应的免疫机制探讨

目的:探讨三取代型钛钨硅酸盐(WT)体内抑瘤效应的免疫机制。方法:建立荷H22肝癌小鼠模型,WT连续灌胃10d,取出肿瘤称重测定抑瘤率。用MTT比色法测定荷H22肝癌小鼠淋巴细胞转化的活性及NK细胞的杀伤活性。通过形态学观察和流式细胞仪检测WT诱导BEL-7402细胞的凋亡。结果:WT可显著抑制荷瘤小鼠肿瘤生长(P<0.05),提高荷瘤小鼠淋巴细胞转化的活性及NK细胞的杀伤活性(P<0.05),并诱导肿瘤细胞发生凋亡。结论:WT的抑瘤作用与机体免疫功能的增强有关。     

羟基磷灰石纳米粒子对肝癌H22小鼠肿瘤细胞凋亡的研究

目的通过不同浓度的羟基磷灰石(HAP)纳米粒子作用于肝癌H22小鼠肿瘤细胞,研究其对肿瘤细胞凋亡的影响。方法100只肝癌H22小鼠随即分组并连续服用不同剂量的HAP纳米粒子,11d后处死小鼠,计算抑瘤率和细胞凋亡率,评价不同剂量的HAP纳米粒子与H22小鼠肿瘤细胞生长的关系。结果肝癌H22小鼠肿瘤细胞对纳米羟基磷灰石(HAP)较敏感,能明显延长小鼠生存期,高剂量组与丝裂霉素结果相近(P>0.05)。实验后小鼠体重没有明显下降,抑瘤率和细胞的凋亡率随浓度升高而增大,呈明显的剂量依赖性(P<0.01)。结论不同浓度的羟基磷灰石(HAP)纳米粒子能够抑制H22肿瘤细胞的增殖,诱导肿瘤细胞的凋亡,并呈剂量依赖性。     

IL-21基因治疗小鼠H22细胞皮下移植肝癌模型的效果评价

用已构建的mIL-21/pcDNA3.1重组质粒对H22细胞建立的小鼠肝癌模型进行基因治疗,观察IL-21对小鼠体内抗肿瘤免疫应答的影响及对小鼠生存的影响。采用BALB/c小鼠左腋皮下注射腹水型肝癌细胞株H22细胞建立小鼠移植肝癌模型,给荷瘤小鼠瘤体内注射mIL-21/pcDNA3.1进行基因治疗,MTT比色法检测IL-21对荷瘤小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性的影响,观察治疗后荷瘤小鼠生存情况及肿瘤生长情况的改变。病理检测结果显示,成功建立了小鼠移植型肝癌模型,MTT比色法显示基因治疗后小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性显著升高,荷瘤小鼠肿瘤生长速度减慢,生存期显著延长。IL-21基因治疗肝癌荷瘤小鼠可显著提高荷瘤小鼠体内抗肿瘤免疫应答水平,抑制肿瘤生长,延长荷瘤小鼠生存期。     

磷脂酰肌醇3激酶抑制剂BEZ235联合阿霉素处理促进HepG2细胞凋亡并抑制荷瘤小鼠肿瘤生长

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂BEZ235联合阿霉素(Dox)对肝癌细胞系HepG2细胞的协同抑制作用。方法 HepG2细胞分为对照组、BEZ235处理组、Dox处理组以及BEZ235联合Dox处理组,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)染色检测HepG2细胞的凋亡;Western blot法检测各处理因素对HepG2细胞Akt磷酸化的影响;制备荷瘤小鼠模型,观察各种处理因素对肿瘤生长的影响,HE染色观察肿瘤细胞形态特点,免疫组织化学染色检测各组肿瘤组织中活化caspase-3的表达。结果 与对照组相比,单独给予BEZ235或Dox都能够诱发细胞凋亡,但BEZ235联合Dox处理促凋亡作用更明显;联合应用BEZ235和Dox处理能下调磷酸化Akt(p-Akt)的表达,并显著抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长,促进活化caspase-3表达。结论 BEZ235联合Dox能够诱发HepG2细胞凋亡并抑制荷瘤小鼠肿瘤生长。     

蝎毒多肽提取物调控肝脏移植瘤中自然杀伤细胞浸润的机制研究

目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对H22细胞小鼠肝脏原位移植瘤模型中肿瘤浸润自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK cell)的浸润分布及活性的影响。方法:C57BL/6小鼠肝脏接种H22肝癌细胞株悬液构建原位移植瘤模型,设立正常对照组、荷瘤对照组、PESV小剂量组和PESV大剂量组,分别给予生理盐水及PESV灌胃干预14 d,观察比较各组小鼠给药后的肿瘤体积、肿瘤质量及生存期变化,通过HE染色比较各组肿瘤组织形态学变化,流式细胞术和免疫组化检测肝脏及癌组织中浸润NK1.1~+细胞的比例及分布特点,real-time PCR法检测癌组织中穿孔素、颗粒酶B的表达。结果:PESV大、小剂量组肝脏移植瘤的生长受到抑制,肿瘤体积和瘤质量均低于荷瘤对照组,肿瘤抑制率分别为30.77%和15.38%,生存期观察显示PESV大剂量组能显著延长荷瘤小鼠生存时间,生命延长率为34.06%,P0.05;荷瘤对照组肿瘤细胞排列紧密,异型性显著,呈浸润性生长,PESV大、小剂量组出现明显坏死区,细胞异型性减轻;PESV大剂量组小鼠肝脏NK细胞占肝脏总淋巴细胞的比例是(5.91±0.49)%,显著高于荷瘤对照组(3.69±0.50)%(P0.05),且大量浸润分布在肿瘤组织及癌旁组织中;PESV大剂量组瘤组织中穿孔素和颗粒酶的mRNA表达量分别是荷瘤对照组的3.62倍和5.82倍(P0.05)。结论:PESV可通过提高H22细胞肝脏原位移植瘤中浸润NK细胞的比例,促进NK细胞向肿瘤组织迁移,诱导穿孔素和颗粒酶B的产生,有助于NK细胞杀伤活性的恢复,从而增强对肿瘤细胞的清除,抑制肿瘤的浸润生长。     

乙酰紫草素对小鼠肝癌移植性肿瘤的抑制作用初步研究

目的：观察乙酰紫草素对小鼠移植性肝癌H22的抑瘤作用。方法：采用小鼠肝癌H22模型进行体内抑瘤实验。观察荷瘤动物的生长情况，测量各实验组肿瘤体积及瘤质量变化，绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率。结果：乙酰紫草素低、中、高三个剂量组的抑瘤率分别为23．39％、26．61％、37．90％（P〈0．05）。各实验组小鼠免疫器官未见明显抑制。结论：乙酰紫草素对小鼠肝癌H22具有一定的抑制作用。     

TIM2转基因细胞瘤苗对小鼠作用的初步研究

目的 观察小鼠TIM2转基因H22肝癌细胞瘤苗在小鼠体内的成瘤作用 ,初步研究其免疫原性.方法 构建TIM2基因真核表达载体pIRES2-EGFP - TIM2,脂质体法转染H22细胞,制备得到TIM2基因修饰的H22细胞瘤苗,建立小鼠肝癌移植瘤模型,观察其在小鼠体内的成瘤作用.结果 成功得到TIM2基因修饰的H22 细胞瘤苗,免疫接种小鼠后,可明显抑制小鼠体内肿瘤的发生和发展;给予H22-TIM2接种的小鼠CD4亚群、CD4/CD8比值显著高于H22-EGFP 细胞接种组、荷瘤对照组和正常对照组.结论 TIM2基因修饰H22细胞后,可显著降低H22细胞的体内成瘤性,抑制小鼠肿瘤生长,同时.在体内具有一定的免疫原性,为进一步探讨TIM2 在肿瘤生物治疗中的作用提供了初步的实验依据.     

陡脉冲电场对荷瘤BALB/C小鼠生存期的影响

观测陡脉冲对荷瘤 BAL B/ C小鼠癌细胞的杀伤效应和抑制作用。抑瘤观察中发现治疗组小鼠肿瘤体积明显减小 ,肿瘤生长受到抑制 ,治疗组和对照组间差异有显著性 ;生存期观察中发现经陡脉冲治疗后的荷瘤小鼠生存期明显延长。实验揭示了陡脉冲能有效地杀伤癌细胞 ,明显抑制了荷瘤小鼠恶性肿瘤的生长、增殖 ,有着良好的应用前景     

陡脉冲电场对荷瘤BALB/c小鼠癌细胞杀伤效应和抑制作用的实验研究

本研究观测了陡脉冲电场对荷瘤BALB/c小鼠癌细胞的杀伤效应和抑制作用。处理后的癌细胞在光镜下表现为细胞核固缩、核碎裂、核溶解 ;在电镜下表现为异染色质增加 ,边集 ,呈团块样改变 ,胞浆肿胀 ,脂滴数量增加 ,质膜破裂 ;核固缩 ,碎裂 ,线粒体肿胀。抑瘤观察中发现治疗组小鼠肿瘤体积明显减小 ,肿瘤生长受到抑制 ,治疗组和对照组间差异有显著性 ;生存期观察中发现经陡脉冲治疗后的荷瘤小鼠生存期明显延长。实验揭示了陡脉冲电场能有效地杀伤癌细胞 ,明显抑制了荷瘤小鼠恶性肿瘤的生长、增殖 ,有着良好的应用前景。     

膜型Tim-3分子促进荷瘤小鼠抗肿瘤免疫应答的研究

目的研究膜型Tim-3分子对H22肝癌细胞生长的抑制效应,探讨膜型Tim-3分子对荷瘤小鼠免疫系统的影响。方法以H22肝癌细胞接种于BALB/c小鼠大腿肌肉建立小鼠实体瘤模型,采用原位注射裸DNA的方法在小鼠体内表达膜型Tim-3进行基因治疗,观察Tim-3对肿瘤生长的抑制作用;采用RT- PCR技术在肿瘤生长不同时期检测Tim-3对4-1BB、IFN-γ、galectin-9等免疫相关基因表达的影响;流式细胞术检测膜型Tim-3对脾细胞增殖活性及细胞毒活性的影响;观察Tim-3 4-1BBL协同抗肿瘤作用。结果体内转染表达Tim-3对肿瘤的生长有明显的抑制作用。流式细胞术结果显示,在小鼠荷瘤早期,Tim-3可提高脾细胞在特异性抗原刺激下的增殖反应和对H22肿瘤细胞的细胞毒作用;Tim-3与4-1BBL协同作用时抗肿瘤作用更加明显。结论膜型Tim-3可在免疫启动阶段作为正向免疫调节因子增强抗肿瘤免疫应答,并可与4-1BBL协同产生更强的抑瘤效应。     

高强度聚焦超声治疗后荷瘤鼠的免疫变化及特异性抗肿瘤作用

目的：探讨高强度聚焦超声（HIFU）治疗H22移植性肝癌后的细胞免疫学变化及特异性抗肿瘤作用。方法：将C57BL/6J近交系小鼠分为HIFU治疗组、HIFU假照组和对照组,于治疗后2周流式细胞术测定各组小鼠外周血T淋巴细胞亚群的变化,采用MTT法测定脾淋巴细胞对肿瘤细胞的体外杀伤活性,ELISA法检测脾淋巴细胞与肿瘤细胞共培养24小时后上清液中IFN-γ、TNF-α的含量。结果：HIFU治疗组和对照组CD3^＋、CD4^＋T淋巴细胞,CD4^＋/CD8^＋比值明显高于假照组,CD8^＋T淋巴细胞低于假照组,差异有显著的统计学意义;HIFU治疗组与对照组比较,各指标均无明显差异;各组小鼠脾脏淋巴细胞对H22肿瘤细胞和S180肿瘤细胞的杀伤率,与假照组和对照组比较,HIFU组对H22肿瘤细胞的细胞毒活性明显增加,差异有显著的统计学意义,但各组对S180肿瘤细胞的杀伤率无明显的统计学差异;各组小鼠脾脏淋巴细胞与H22肿瘤细胞共培养上清液中TNF-α和INF-γ的浓度,与假照组或对照组比较,HIFU组上清液TNF-α和INF-γ浓度明显增加,差异有显著的统计学意义。结论：HIFU治疗H22移植性肝癌后,宿主细胞免疫功能明显增强,同时机体产生特异性抗肿瘤的免疫作用。     

癌迪针剂对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的:研究癌迪针剂对肿瘤的作用效果及其抗肿瘤免疫效应机制。方法:选用H22肝癌荷瘤小鼠注射癌迪针剂7天后,观察荷瘤小鼠肿瘤抑制率、胸腺、脾脏指数、淋巴细胞转化功能、腹腔巨噬细胞吞噬功能、TNF活性、IL-2及血清IFNα-水平。结果:癌迪针剂可明显抑制荷瘤小鼠肿瘤生长;能提高荷瘤小鼠的淋巴细胞转化功能;可增强巨噬细胞吞噬活性和TNF活性;能提高IL-2和IFNα-水平。结论:癌迪针剂能明显抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,增强机体的免疫功能。     

克癌新抑制荷瘤小鼠肿瘤生长的拆方研究

目的：研究克癌新及其组分对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响,探讨其组方的合理性。方法：建立小鼠肉瘤S180和小鼠肝癌H22移植性肿瘤模型,以瘤重抑制率为指标观察克癌新及其组分对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。结果：克癌新150mg·kg^-1与300mg·kg^-1对小鼠肉瘤S180的生长抑制率分别为38．52％与47．88％;对肝癌H22生长抑制率分别为32．17％与40．18%;其抑瘤作用明显强于各组分（P〈0．05）。结论：克癌新能产生显著协同抗肿瘤作用,组方较合理。     

荷瘤小鼠肿瘤组织髓系抑制性细胞的比例变化及意义

研究荷瘤小鼠肿瘤组织中髓系抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)的比例变化及分布特点,探讨其在机体抗肿瘤免疫中发挥的作用。采用肝癌细胞原位移植法建立小鼠原位肝癌模型,流式细胞仪检测荷瘤小鼠不同时间肿瘤组织中MDSC的比例;免疫组织化学法检测MDSC在肿瘤组织中的分布情况,以正常小鼠作对照。MDSC的比例在荷瘤小鼠肿瘤组织中比正常小鼠肝组织中明显升高,差别具有统计学意义(P0.05),且随着荷瘤时间的延长,MDSC的比例逐渐增加。正常小鼠肝组织中仅有极少量MDSC,而荷瘤后大量增加的MDSC主要分布于肿瘤组织与正常组织交界处。可见荷瘤小鼠肿瘤组织中MDSC的比例与肿瘤进展密切相关,提示荷瘤小鼠体内MDSC增多可能参与肿瘤的免疫逃逸,促进肿瘤细胞的生长。     

采用sPD-1协同4-1BBL进行肿瘤免疫基因治疗的研究

目的探讨采用sPD-1协同4-1BBL进行肿瘤免疫基因治疗的效果及相关的免疫学机制。方法以不同剂量的H22肝癌细胞接种于BALB/c小鼠右后腿肌肉内,建立小鼠肿瘤模型;采用可溶性PD-1 (sPD-1)和4-1BBL真核表达质粒体内转染进行基因治疗;观察接种不同剂量肿瘤细胞、不同治疗时间小鼠的成瘤率及肿瘤治疗效果;RT-PCR检测肿瘤微环境中免疫调控相关基因的表达;组织切片检测肿瘤细胞浸润肌肉组织的组织学变化;流式细胞仪检测脾脏细胞毒性T细胞(CTLs)的杀瘤效率。结果转染4- 1BBL/sPD-1基因治疗后,接种低剂量(1×10~4个/ml)H22肿瘤细胞的小鼠肿瘤生长完全受到抑制;接种高剂量(1×10~5个/ml)H22肿瘤细胞的小鼠肿瘤也受到显著抑制。通过延长基因治疗,荷瘤小鼠的成瘤率随着治疗时间的延长逐渐递减,至8周时成瘤率为0;基因治疗不仅促进IFN-γ和IL-2基因表达上调,而且也使TGF-β、IL-10的表达下调;瘤组织中CD8~ T淋巴细胞数量增多和脾淋巴细胞的杀瘤效率显著增加。结论利用体内存在的少量肿瘤可作为抗原刺激淋巴细胞的激活;基因治疗适用于对手术、化疗、放疗后体内残存的少量肿增细胞的清除;当体内存在大量肿瘤细胞时,适当延长基因治疗时间可获得较好的治疗效果。     

CEA 迷你基因串联体疫苗免疫小鼠脾细胞对CEA 阳性肿瘤细胞的杀伤作用及疫苗的安全性评价

目的:观察CEA 迷你基因串联体疫苗pcDNA-triCEA625-667 免疫小鼠脾细胞对肿瘤细胞特异性杀伤作用并对疫苗免疫小鼠后的安全性进行评估。方法: BALB/ c 小鼠随机分为空白载体组(pcDNA3.0)、单倍体疫苗实验组(pcDNA-CEA625-667 )、串联体疫苗实验组(pcDNA-triCEA625-667 ),肌肉注射法免疫动物,每隔10 d 免疫1 次,共免疫4 次,记录免疫小鼠的体重变化、存活情况以及检测血清ALT、肌酐水平。以疫苗免疫小鼠的脾细胞为效应细胞,以LDH 释放法检测其对CEA 阳性的小鼠肝癌细胞株(H22-CEA+ )、胃癌细胞株(MFC-CEA+ )、结肠癌细胞株(CT26-CEA+ )以及CEA 阴性小鼠肝癌细胞株(H22-CEA- )的特异性CTL 的杀伤活性。结果:两种疫苗对CEA 阳性的肝癌、胃癌及结肠癌细胞均具有较强的杀伤活性,与PcDNA3.0 空载体组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。而对CEA 阴性肿瘤细胞(H22-CEA- )则几乎无影响。迷你串联体基因疫苗pcDNA-triCEA625-667 对肝癌细胞H22-CEA+及胃癌细胞MFC-CEA+的杀伤活性强于单倍体基因疫苗pcDNA-CEA625-667(P<0.05)。疫苗免疫对小鼠的存活状态、体重变化及肝肾功能指标均无影响。结论:CEA 迷你基因疫苗安全有效,能够诱导肿瘤特异性CTL 产生,且三倍体串联体疫苗免疫效果优于单倍体疫苗。     

氯喹对S_(180)荷瘤小鼠的抑瘤作用及其机制

目的探讨氯喹(CQ)对小鼠移植性肉瘤S_(180)的抑瘤作用及其可能机制。方法采用40只S_(180)荷瘤小鼠分为模型组,氯喹低剂量组,氯喹中剂量组,氯喹高剂量组进行体内抑瘤实验,观察不同浓度氯喹对小鼠肉瘤S_(180)的抑制作用;透射电子显微镜观察氯喹作用下荷瘤鼠肿瘤细胞超微结构的变化;流式细胞术检测氯喹诱导荷瘤鼠S_(180)细胞凋亡的情况;免疫组织化学方法检测相关凋亡因子Bcl-2、细胞色素C和Cle-Caspase-3的表达情况;Western blotting检测荷瘤组织Bcl-2和Cle-Caspase-3蛋白表达水平的变化以及线粒体和细胞质中细胞色素C蛋白含量的变化。结果与模型组相比较,氯喹处理组小鼠移植肉瘤S_(180)生长速度显著减慢,肿瘤体积和瘤质量明显减小(P0.05);透射电子显微镜观察发现,与模型组比较氯喹处理组肿瘤细胞形态出现明显凋亡损伤改变,凋亡小体形成;各剂量组氯喹均可诱导荷瘤鼠S_(180)细胞凋亡,使抗凋亡因子Bcl-2表达下调,凋亡因子Cle-Caspase-3表达上调(P0.05);并且氯喹能够降低线粒体内细胞色素C蛋白的表达,提高细胞质细胞色素C蛋白的表达(P0.05),促使线粒体内细胞色素C向细胞质内释放。结论氯喹能够抑制小鼠S_(180)肉瘤的生长,可能是通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,从而发挥抑瘤的作用。     

CEA 迷你基因串联体疫苗的体内抗肿瘤活性观察

目的:观察已构建的含有CEA625-667 基因单倍体疫苗pcDNA-CEA625-667 及三串联体的DNA 疫苗pcDNA-triCEA625-667 对荷瘤小鼠体内肿瘤的抑制情况及小鼠存活时间的改变。方法:建立小鼠肝细胞癌实验动物模型,应用单倍体疫苗pcDNA-CEA625-667 及三串联体DNA 疫苗pcDNA-triCEA625-667 免疫小鼠,以生理盐水为对照组,观察各实验组小鼠皮下肿瘤生长情况,记录皮下肿瘤生长曲线,观察疫苗对荷瘤小鼠肿瘤生长速度的影响以及疫苗对荷瘤小鼠生存时间的影响。结果:与生理盐水对照组相比,两种疫苗均能明显抑制CEA 阳性荷瘤小鼠的肿瘤体积以及生长速度(P <0.01),其中,pcDNA-triCEA625-667 疫苗组的抑制作用明显优于pcDNA-CEA625-667 疫苗组(P<0.01),而二者均不能抑制CEA 阴性荷瘤小鼠的肿瘤生长。pcDNA-CEA625-667 疫苗组平均生存时间为(48.50±6.73)d,与生理盐水对照组(39.00±6.64)d 相比有显著差异(P<0.01);pcDNA-triCEA625-667 疫苗组生存时间(48.50依6.73)d 明显高于生理盐水对照组和pcDNA-CEA625-667 疫苗组(P<0.01)。两组疫苗均不能延长CEA 阴性荷瘤小鼠的生存时间。结论:无论是单倍体还是三串联体的DNA 疫苗,均能够明显抑制CEA 阳性荷瘤小鼠的肿瘤生长速度(P<0.01)及明显延长其生存时间(P<0.01),而对CEA 阴性荷瘤小鼠则无治疗作用。