抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸单克隆抗体的制备与鉴定

目的获得一组抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸单克隆抗体(mAb),用于研究IL-6介导的信号转导.方法按照CD130分子胞内N752-G766区的氨基酸序列,化学合成Y759磷酸化的15肽作为抗原,应用细胞融合法制备一组抗CD130磷酸化酪氨酸的mAb,并用ELISA、Western blot、免疫沉淀和免疫组化染色等技术,对这组mAb的性质和功能进行探讨.结果(1)通过细胞融合获得了4株稳定分泌抗CD130胞内Y759磷酸化mAb的杂交瘤细胞株(MIY1、MIY2、MIY3和MIY4),这组mAb仅对合成肽N752-G766产生特异性反应.(2)Western blot分析表明,这组mAb识别的靶分子的相对分子质量(Mt)为13×104～14×104的.用此组mAb免疫沉淀的Mr为13×104～14×104蛋白,可被抗CD130 mAb所识别;同时用抗CD130mAb免疫沉淀的13×104～14×104分子也可被这组mAb所识别;(3)进一步研究证实,这组mAb可识别由IL-6诱导的细胞内酪氨酸磷酸化的蛋白分子.结论成功地研制了抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸的mAb.     

抗人FKBP52分子单克隆抗体的制备和鉴定

目的；研制抗人FKBP52单克隆抗体（mAb)，并分析其免疫生物学特性。方法：采用纯化的人FKBP52蛋白免疫BALB／c小鼠。用ELISA法鉴定mAb的特异性；用Western blot鉴定制备的9株mAb所识别的抗原相对分子质量（Mr)及结合人FKBP52分子的功能区。结果：共获得9株分泌抗人FKBP52 mAb的杂交瘤细胞。抗人FKBP52 mAb可识别相对Mr为52000在原核系统中表达的人FKBP52蛋白，也可识别Jurkat细胞浆中Mr为52000的天然FKBP52蛋白。两株mAb均可识别人FKBP52分子中的第2功能区。其余7株mAb可识别人FKBP52分子中的第3功能区。结论：成功地制备了抗人FKBP52分子mAb。     

抗人CD100单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的：研制可识别天然CD100分子的单克隆抗体（mAb)。方法：采用真核表达的CD100分子免疫BALB/c小鼠，以间接ELISA法筛选阳性杂交瘤，并分别用人急性T淋巴细胞性白血病细胞系MOLT-4，猿T淋巴细胞系MLA-144及猴EB病毒转化的B淋巴细胞系（BLCL），进行间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定mAb的特异性。结果：共获得7株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株。所有mAb均可识别人和猴细胞系的膜表面天然CD100分子，其中6株可识别猿细胞系膜表面的天然CD100分子，结论：成功地制备了7株抗CD100分子的特异性mAb。为研究人和猿，猴CD100分子的结构与功能提供了新的手段。     

抗CD34单克隆抗体HI273的制备和鉴定

ＣＤ３４抗原可选择性地表达于不成熟的造血干／祖细胞、血管内皮细胞和一些组织的成纤维细胞上。这一发现 ,不仅有利地促进了对造血干／祖细胞识别、发育、增殖和分化的研究 ,而且大大推动了临床上应用ＣＤ３４ 细胞回输体内治疗某些血液病和恶性肿瘤的开展。目前 ,抗ＣＤ３４ｍＡｂ已成为研究造血调控、识别、分离富集造血干／祖细胞 ,以及分析白血病细胞表型的非常有用的工具。国际上 ,经ＨＬＤＡ命名的抗ＣＤ３４ｍＡｂ近４０株〔１ ,２〕。国内仅于１９９５年见舒翠玲等〔３〕报道的用表达ＣＤ３４抗原的重组痘苗病毒为抗原 ,制备的４…     

抗人F蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

Ｆ蛋白是存在于哺乳动物肝细胞质中的一种水溶性不稳定的单链蛋白质,相对分子质量（Ｍｒ）为４４０００。正常人肝组织中大约含Ｆ蛋白２７４ｍｇ／ｇ〔１，２〕,而血清中仅含０．２ｍｇ／Ｌ,提示血清Ｆ蛋白作为判断肝损伤程度的可能性。为对Ｆ蛋白进行深入研究,并提高对其检测的灵敏度,１９９５年以来,我们先后制备了３株抗人Ｆ蛋白的单克隆抗体（ｍＡｂ）,并进行了初步鉴定。１材料和方法１．１材料人Ｆ蛋白抗原的制备〔３〕：取肝外伤手术切除的新鲜肝组织５０ｇ,剪成约５ｍｍ３的组织碎块后,置于含有１ｇ／ＬＩＶ型胶原酶（Ｓｉｇｍａ）…     

抗人Fas单克隆抗体的制备及鉴定

Ｆａｓ／Ａｐｏ１／ＣＤ９５抗原的发现,始于对两株单克隆抗体（ｍＡｂ）的功能观察,即抗Ａｐｏ１ｍＡｂ和抗ＦａｓｍＡｂ〔１,２〕。由于二者都能识别细胞膜上ＣＤ９５蛋白抗原,且能诱导敏感细胞凋亡,才导致今天对Ｆａｓ抗原的生物医学研究。制备抗ＦａｓｍＡｂ对于Ｆａｓ抗原的深入研究,尤其是对Ｆａｓ抗原信号传导机制的阐明,以及生物医学应用都有重要的意义。本文利用Ｆａｓ＋的细胞作为免疫原,制备了１株鼠抗人ＦａｓｍＡｂ２Ａ１。１材料和方法１．１材料１．１．１细胞系Ｓｐ２／０小鼠骨髓瘤细胞、Ｊｕｒｋａｔ人Ｔ淋巴…     

gp130结合分子融合蛋白的表达,纯化及其mAb的制备

ｇｐ１３０结合分子（ＧＡＭ）是一种新发现的可与ｇｐ１３０胞浆内近膜区结合蛋白质，其在ｇｐ１３０信号传导中的作用尚待深入研究，我们在原核表达ＧＡＭ－ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ（Ｔｈｉｏ）融合蛋白的基础上，制备并纯化了抗Ｔｈｉｏ的多克隆抗体，将其与Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ偶联，经亲和层析提纯该融全蛋白，以此为免疫原，通过杂交瘤技术获得了３株抗ＧＡＭｍＡｂ，其中两株为ＩｇＧ１，１株为ＩｇＧ２ａ，与Ｔｈｉｏ及空     

抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析

目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株。大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应。结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖。结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段。     

gp130单克隆抗体B-S12的生物学特性研究

研究ｇｐ３０单克隆抗体Ｂ－Ｓ１２的生学特性。方法用细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入的方法观察人多发性骨髓瘤细胞株ＸＧ－１和ＸＧ－２在抗ｇｐ１３０的单抗Ｂ－Ｓ１２与它们的Ｆａｂ片段和Ｆ（ａｂ’）２片段作用下，细胞增殖和生长情况；此外，也观察ｇｐ１３０单抗Ｂ－Ｐ８以及ＩＬ－６和ＩＬ－６Ｒ单抗Ｂ－Ｅ８和Ｂ－Ｒ６对Ｂ－Ｓ１２单抗在这２个细胞株上作用的影响。结果Ｂ－Ｓ１２可刺激ＸＧ－１和ＸＧ－２细胞增殖，并维持     

抗人CD38单克隆抗体的制备、鉴定及其功能的初步研究

目的：研制抗人CD38抗原分子的单克隆抗体，进一步研究其生物学功能。方法：采用高表达CD38抗原的Daudi细胞免疫Balb/c小鼠；取其脾细胞与SP2/0细胞融合；用间接免疫荧光法进行杂交瘤筛选；流式细胞术、免疫沉淀法与CD38分子原核表达产物的Western-blot分析鉴定单克隆抗体的特异性。以MTT（四甲偶氨唑盐）法检测单克隆抗体抑制细胞增殖以及介导补体杀伤靶细胞的功能。结果：获得了一株抗人CD38分子的单克隆抗体1C6，流式细胞术显示它具有CD38抗原特异的细胞反应谱，其识别的抗原分子质量为45000u。与CD38分子原核表达产物的Western-blot分析表明，其可特异识别CD38分子胞外结构域。MTT法显示其可介导补体杀伤靶细胞。结论：成功制备了抗人CD38分子的单克隆抗体，并进行了初步的功能研究。     

Activation of the gp130 signaling pathway by monoclonal antibodies directed against the gp130 molecule

Six cytokines of the interleukin (IL)-6 family involved in various inflammatory or tumoral diseases share the same gp130 signal transducer chain. We made a panel of anti-gp130 monoclonal antibodies (mAb) to study the structure and function of the gp130 molecule. These mAb recognized different epitopes of the gp130 that we called A to J. Most of the mAb were found to be inhibitors and we studied whether some of them could also induce gp130 activation. When used alone, none of them was able to initiate the proliferation of IL-6-dependent cell lines. However, some particular associations of the mAb were able to induce a proliferative response. mAb B1 could activate the lines in association with F1 or with I2 but not with I1, which in ELISA was similar to I2. In contrast mAb B2, which in ELISA appeared to be very similar to B1, was able to activate the cells in association with I1 but not with F1 or I2. Two other mAb belonging to specificities A and C were found to be activators either in association with I1 only, or with I1 or B2, respectively. These associations of mAb appeared to be nearly as potent activators as IL-6 itself. Although we still have no precise idea of the mechanisms involved, they are interesting tools to study the molecular interactions leading to gp130 activation and, from a practical point of view, valuable growth factors of hematopoietic stem cells.     

Preparation and characterization of monoclonal antibodies against human apolipoprotein E

Laboratory of Lipoproteins, All-Union Research Center for Preventive Medicine, Ministry of Health of the USSR. Laboratory of Molecular and Cellular Cardiology, All-Union Cardiologic Scientific Center, Academy of Medical Sciences of the USSR, Moscow. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR V. N. Smirnov.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 112, No. 8, pp. 179–181, August, 1991.     

抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4～5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9～ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb ,为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件     

抗人滋养细胞单克隆抗体的制备及其免疫生物学特性鉴定

研制抗人滋养细胞单克隆抗体并分析其免疫生物学特性。方法采用滋养细胞免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠;用细胞ＥＬＩＳＡ法鉴定ｍＡｂ的特异性;用补体依赖的溶细胞作用测定ｍＡｂ的细胞毒性。结论利用细胞免疫法所获该组ｍＡｂ所针对的抗原表位,可能是诱发免疫性流产的滋养细胞膜特异性抗原。