结核分枝杆菌的快速检测和药敏试验

由结核分枝杆菌（M TB）引起的结核病是全球最重要的公共卫生问题之一,据世界卫生组织统计,自1882年德国科学家柯霍发现 M TB 以来,全世界将近20亿人被 M TB 感染,每年又有将近800万 M TB 新感染者,并且300多万人死亡,其中大约25万死于耐多药 M TB 和广泛耐药 M TB ,而 M TB 耐药主要是由临床用药不规范引起［1‐2］。因此,只有准确、快速检测,及时做抗结核药物药敏试验（DST ）,正确用药,才能有效控制和治疗结核病。尽管 M TB 的诊断技术不断更新,新的诊断试剂盒和检测方法相继出现,但它们都有不足,很难完全满足临床诊断的需求。本文主要总结 M TB 的检测和药敏试验的有关知识。     

结核分枝杆菌快速药敏方法学研究进展

在结核病防治过程中 ,结核分枝杆菌耐药尤其是多重耐药结核分枝杆菌 (ＭＤＲ ＴＢ)问题已成为有效控制结核病的重要障碍[1] 。ＭＤＲ ＴＢ的产生与临床不规范治疗密切相关 ,而规范的治疗需要快速敏感的药敏试验为指导。建立快速敏感的结核分枝杆菌药敏试验方法已成为有效控制结核病的首要条件[2 ] 。然而目前分枝杆菌药敏试验仍多采用传统方法即绝对浓度法、比例法和抗性比例法 (ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒａｔｉｏｍｅｔｈｏｄ) ,这些方法均具有生长依赖性 ,在得到分离菌株后需要 3～ 4周才能获得药敏试验结果[3 ] 。建立于 2 0世纪 80年代的…     

112例非结核分枝杆菌药敏耐药分析

目的了解分析本院非结核分枝杆菌耐药情况,对2006—2010年非结核分枝杆茼耐药情况进行评价。方法采用绝对浓度法对10种抗结核药物利福平（RFP）、异烟肼（INH）、乙胺丁醇（EMB）、链霉素（SM）、力克肺疾（PNA）、阿米卡星（AMK）、左氧氟沙星（LOFL）、卷曲霉素（CPM）、环丙沙星（CIP）和对氨基水扬酸（PAS）进行药敏试验。结果2925例标本中鉴定出儿2例（3．82％）非典型结核分枝杆菌,总耐药率为100％。结论本院的非结核分支杆菌耐药情况应该引起高度重视。     

结核分枝杆菌快速检测方法研究进展

中国结核病发病人数居世界第二位,是22个结核病高负担国家之一1].结核分枝杆菌检测是结核病防治的重点和难点[2],传统的检测方法如结核分枝杆菌培养法,虽然具有很高的特异性和准确性,但同时存在检测周期长,阳性率低等缺点而不能满足快速诊断的需要[3].目前临床实验室关于结核菌的诊断方法主要包括全自动培养法、免疫学方法、分子生物学方法、基因芯片法等,本文将对以上结核分枝杆菌快速检测新技术进行综述. 1全自动培养系统 全自动培养系统已进入临床应用,如BACTEC MGIT960系统、BACTEC9000 MB系统、ESP培养系统Ⅱ和MB/BacT系统等.BACTEC MGIT960系统具有高容量、安全、无交叉污染、无放射性污染、自动存储数据等优点.与之相比,BACTEC9000 MB系统由于MB系统含有较多培养基而使标本稀释,因而使检出率大大降低.ESPⅡ培养系统检测耗时长,假阳性率高[4].     

非结核分枝杆菌469株临床药敏结果分析

目的:分析我院2009年469例非结核分枝杆菌(NTM)的临床药敏试验结果.方法:对469株NTM进行菌种鉴定和药敏试验.结果:NTM感染占分枝杆菌属培养阳性率为19.93%,感染菌株由高到低依次为鸟-胞内分枝杆菌(26.23%),龟分枝杆菌(18.37%),龟-偶发分枝杆菌复合群(13.43%),耻垢分枝杆菌(占9.59%),龟-脓肿分枝杆菌复合群(5.54%)等;469株NTM对异烟肼、力克肺疾呈高度耐药性,其他由高到低排列显示对链霉素、利福平、左氧氟沙星、乙胺丁醇、丙硫异烟胺、莫西沙星、利福布丁的耐药性也较强,而对克拉霉素、阿米卡星较为敏感.结论:NTM感染菌种的分布以Ⅳ组为主;NTM对常用的抗结核药呈高度耐药,有待更有效的治疗手段.     

一种新型结核分枝杆菌感染快速检测方法的应用

目的探讨酶联免疫斑点试验（ELISPOT）快速诊断结核病的价值。方法选取15例确诊为活动性肺结核的患者和100例入境人员的外周抗凝全血标本,采用ELISPOT检测试剂盒（TSPOT-TB）测定结核杆菌特异抗原刺激反应的效应T淋巴细胞数量。结果TSPOT-TB检测结核病的敏感性为93．3％,特异性为100．0％,阳性预测值为100．0％,阴性预测值为81．8％。采用该方法检测的结核潜伏感染率与病例来源呈密切相关,而与年龄和性别无相关性。结论TSPOT-TB的敏感性和特异性均较高,可用于结核感染的快速检测,但无法判断结核的活动性或潜伏感染。     

应用MPB64抗原检测快速鉴定结核分枝杆菌的研究

目的评价检测分枝杆菌MPB64抗原对快速鉴别分枝杆菌菌种的价值。方法采用结核分枝杆菌MPB64抗原胶体金法和传统对硝基苯酸(PNB)生长实验,对652株分枝杆菌临床分离株进行鉴别并比较分析。结果两种方法的检测结果相符647株,不符5株,符合率99.2%(647/652),两种方法对分枝杆菌复合群检出率差异无统计学意义(P>0.05),用胶体金法检测结核分枝杆菌复合群敏感性为99.1%,特异性为100.0%。结论与PNB方法相比,分枝杆菌MPB64抗原胶体金法有较高的特异性和灵敏性,方法简便、快速,是分枝杆菌菌种鉴别的有效方法。     

噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌的临床应用

目的 探讨噬菌体生物扩增法（Phab）快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法 应用Phab、BACTEC-460检测仪及厚涂片法共同检测206例痰标本。结果 58例涂片阳性、BACTEC-460培养阳性的标本中．Phab检测阳性55例（94．8％）;47例涂片阴性、BACTEC-460、培养阳性的标本中,Phab检测阳性35例（74．4％）;101例涂片阴性、BACTEC-460培养阴性的标本中,Phab检测阳性25例（24．8％）。结论 Phab快速、简便、灵敏,有助于结核分枝杆茵的快速检测,可用于结核病的初步诊断,但测定条件的选择非常重要。     

一种新型结核分枝杆菌感染快速检测方法的应用

目的探讨酶联免疫斑点试验(ELISPOT)快速诊断结核病的价值。方法选取15例确诊为活动性肺结核的患者和100例入境人员的外周抗凝全血标本,采用ELISPOT检测试剂盒(T SPOT-TB)测定结核杆菌特异抗原刺激反应的效应T淋巴细胞数量。结果TSPOT-TB检测结核病的敏感性为93.3%,特异性为100.0%,阳性预测值为100.0%,阴性预测值为81.8%。采用该方法检测的结核潜伏感染率与病例来源呈密切相关,而与年龄和性别无相关性。结论TSPOT-TB的敏感性和特异性均较高,可用于结核感染的快速检测,但无法判断结核的活动性或潜伏感染。     

一种新型结核分枝杆菌快速药敏系统的临床应用评价

目的 应用一种自主研发的新型结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)快速药敏系统(MB FS-1型)检测MTB对利福平(RIF)和异烟肼(INH)的耐药性,并对该系统的临床应用效果进行评价.方法 采用新型药敏系统对115株MTB临床分离株进行药敏试验,异烟肼以及利福平分别设置三个浓度梯度,与BECTEC MGIT 960法对比分析药敏结果,评估该系统检测多药耐药结核( Multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)的应用性价值.结果 以BECTEC MGIT 960法为参考标准,MB-FS-1型快速药敏系统检测INH的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为93.43％,94.88％,97.26％和88.10％,检测RIF分别为96.50％,94.83％,94.83％和96.50％.异烟肼浓度为0.2μg/ml或0.1 μg/ml,利福平浓度为1.0 μg/ml时两种药敏方法等效性最高,符合率分别为93.97％和95.69％.Kappa值分别为0.867和0.913,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 该新型MTB快速药敏系统检测MTB对异烟肼和利福平的耐药性与BACTEC MGIT 960符合率高,具有快速、价廉、操作简便的优点,可作为临床检测MDR-TB的快速检测方法之一.     

PCR-SSCP快速鉴别结核、非结核分枝杆菌临床分离株的研究

目的：应用分子生物学方法快速鉴别结核、非结核分枝杆菌临床分离株。方法：通过设计两对引物分别扩增16S rDNA两条片段，根据SSCP电泳图谱与结核分枝杆菌标准株的相似性鉴别结核、非结核分枝杆菌。结果：98株临床分离株中，经细胞学鉴定93株为结核分枝杆菌复合群，5株非结核分枝杆菌。用引物I、Ⅱ对结核分枝杆菌复合群进行PCR－SSCP析，有81株与标准株有相似图谱。用引物Ⅲ、Ⅳ对非结核分枝杆菌进行PCR－SSCP分析，均显示出与结核分枝杆菌标准株不同的电泳图谱。结论：PCR－SSCP可快速鉴别结核、非结核分枝杆菌。     

结核分枝杆菌药敏表型检测的应用价值

结核分枝杆菌（MTb）耐药性检测主要有表型检测法和基因型检测法两大类。通过研究MTb的生长活性或代谢特点来鉴定耐药性的一些表型检测法应用较多,利弊不一。本文对此作一评价。     

耐药结核分枝杆菌检测方法的研究进展

传统的结核分枝杆菌耐药性的检测,是依靠培养法进行药敏试验,是体外结核分枝杆菌耐药性的直接证据,但费时、费力。近年来,已建立了一些新的耐药性检测方法。西方不耐药基因突变的检测及耐药表型的检测这两方面作一综述。     

耐药结核分枝杆菌检测方法的研究进展

传统的结核分枝杆菌耐药性的检测,是依靠培养法进行药敏试验,是体外结核分枝杆菌耐药性的直接证据,但费时、费力。近年来,已建立了一些新的耐药性检测方法。本文就耐药基因突变的检测及耐药表型的检测这两方面作一综述。     

噬菌体生物扩增法快速检测临床标本中结核分枝杆菌及其耐药性

噬菌体生物扩增（PhaB）法是近年来发展起来的结核分枝杆菌（MTB）快速检测方法,操作简便、快速,价廉,无需特殊仪器,有较高的敏感性和特异性。为探讨其临床应用价值,我们于2007年10月至2008年7月间用PhaB法对临床标本进行MTB检测,并对其进行异烟肼、链霉素、利福平和乙胺丁醇4种抗结核药物的耐药性检测,同时实施改良罗氏培养法及比例法药敏试验作比对。     

用DNA芯片快速检测结核分枝杆菌对异烟肼的耐药性

本研究采取的方法是针对耐药性基因突变情况设计相应的探针 ,然后将合成好的寡核苷酸探针点阵 ,并固定于玻璃片表面制作DNA芯片 ,通过杂交的方法对结核分枝杆菌(TB)异烟肼耐药性进行检测。报告如下。一、材料与方法1 TB菌株均由上海市肺科医院提供 ,4 0株耐异烟肼菌株 ,5株异烟肼敏感株 ,1株标准株 (敏感株H3 7RV) ,均已通过常规的耐药性检测。2 DNA制备 :采用本实验室自制的标本前处理试剂盒提取DNA。3 探针及引物设计 :TB基因组中与耐异烟肼有关的基因主要有katG结构基因、inhA调节区域、ahpC调节区域 ,分别根据genebank中每个…     

结核分枝杆菌耐药机制及耐药性检测的研究进展

自 2 0世纪 80年代以来 ,结核病疫情重新上升 ,成为严重危害公共卫生的问题之一。据世界卫生组织估计 ,目前全球约有 2 0亿人感染结核分枝杆菌 (结核菌 ) ,其中约有 5 0 0 0万人感染耐药结核菌[1] 。因此对结核菌耐药机制和耐药性检测的研究意义重大。结核菌的耐药性的产生主要是由于不合理用药引起的结核菌内抗结核药物作用靶基因突变所致[2 ] 。目前检测结核菌耐药性的方法有表型检测和基因型检测两大类。一、结核菌的耐药机制染色体基因变异是结核菌产生耐药性的主要机制。结核菌 95 %以上的基因变异是直接由于抗结核药物引起[2 ] 。细菌…     

结核分枝杆菌快速微量直视培养药敏试验方法的研究

目的建立一种经济、适用、快速的微量结核分枝杆菌（MTB）直视培养药敏方法。方法研制电脑控制无级连续超倍放大、微量培养和图像采集组成的MTB快速培养药敏及鉴定系统;用该系统进行MTB标准菌株H37Rv及临床分离菌株药敏试验;以改良罗氏法（L—J法）为对照,确定药敏试验药物最适浓度。结果本法药敏试验的药物：硫酸链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇、硫酸阿米卡星、硫酸卷曲霉素、盐酸左氧氟沙星及对氨基水杨酸异烟肼应用浓度分别为：1、0．1、1、5、5、10、4、1μg／ml;检出时间H37Rv为3d;临床分离菌165株平均5．6d。每实验孔仅需培养基100μl。结论快速法显著缩短了MTB药敏试验时间,节省试剂,操作简便,适合基层单位应用。     

比例法检测1875株结核分枝杆菌的药物敏感性

1997～ 1999年 ,我们采用ＷＨＯ/ＩＵＡＴＬＤ全球结核病耐药监测项目[1] 推荐的比例法对 1875株临床分离结核菌株的耐药性进行测定 ,结果报告如下。一、材料和方法1 标本来源 :1997～ 1999年 3 0个县级结核病防治所的痰涂片阳性门诊病人 ,详细询问并记录病史、性别、年龄及用药情况 ,留痰做结核菌培养。培养用酸性Ｌｏｗｅｎｓｔｉｎ Ｊｅｎｓｅｎ(罗氏 )培养基 ,由我实验室统一提供 ,有效期内使用。2 耐药定义 :初治病例为从未接受过治疗或曾接受过少于 1个月治疗的病人 ,其感染的结核菌对 1种或多种抗结核药物的耐药为原发性耐药 ;复治…     

分子杂交法快速鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的初步评价

目的评价结核分枝杆菌鉴定试剂盒(分子杂交法)进行分枝杆菌菌种初筛的准确性,并探讨如何快速准确地鉴定结核分枝杆菌复合群(MTC)和非结核分枝杆菌(NTM)混合感染标本。方法采用分子杂交法对200株结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定。人工制备结核分枝杆菌和胞内分枝杆菌、结核分枝杆菌和脓肿分枝杆菌、结核分枝杆菌和偶发分枝杆菌的混合感染模型,评价基因测序法、芯片法和Hain test在检测分枝杆菌混合感染中的准确性。结果以对硝基苯甲酸(PNB)分离鉴定结果为参照,分子杂交法的敏感性和特异性分别为65.12%(65/86)和98.25%(112/114)。对于人工制备的13种不同比例混合的H37Rv和NTM,芯片法和Hain test均可以准确鉴定出混合感染标本中的混合菌种,而基因测序结果表明,H37Rv:偶发分枝杆菌的比例在10%~90%范围内才能区分出混合感染的类型。结论分子杂交法对于结核分枝杆菌诊断有较高的特异性,一旦经该法鉴定为NTM,则具有很高的诊断意义。明确标本中存在混合感染后可以采用芯片法或Hain test对临床上高致病的分枝杆菌进行菌种水平的鉴定。