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日本血吸虫(中国大陆株)FABPc重组抗原高效融合表达,纯化及 … 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 构建Sj-FABPc表达克隆,获得大量纯化rSj-FABPc重组(日本血吸虫脂肪酸结合蛋白)抗原,了解其作为侯选疫苗抗原的潜能。方法 以PCR法从Sj-cDNA库中扩增出目的基因片段后亚克隆入表达载体pGEX-6P-1进行融合表达,经Glutathione Sepharose ^TM 4B亲和层析柱和PreScission^TM Protease酶切后纯化出rSj-FABPc,Western 相似文献
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重组质粒pGEX—6P—1/Sj—FABPc的构建及在大肠杆菌中的表达 总被引:7,自引:2,他引:7
目的 构建基因工程菌株、获得重组蛋白Sj-FABPc(日本血吸虫脂肪酸结合蛋白)。方法 用PCR法从日本血吸虫cDNA文库中扩增Sj-FABPc基因片段,再将该片段重组于pGEM-T中并进行DNA测序鉴定,经酶切后将目的片段构建成重组质粒pGEX-6P-1/Sj-FABPc,转化于大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达。用Glutathione Sepharose^TM 4B亲和层析柱对表达产物进行纯 相似文献
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含日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(SjFABPc)基因DNA重组质粒 … 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 观察裸DNA重组质粒pCD-SjFABPc在体外转染HepG2细胞以及质粒DNA免疫鼠肌组织中的表达,为进一步应用该质粒进行DNA免疫实验奠定基础。方法 用脂质体介导DNA转染法将pCD-SjFABPc转染贴壁细胞HepG2,G418加压筛选获得阳性克隆细胞并传代培养,SDS-PAGE及Western-blot鉴定目的基因在HepG2细胞中的表达,将pCD-SjFABPc质粒肌注免疫BALB 相似文献
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两种佐剂对日本血吸虫重组抗原SjGST-Sj32保护效果的影响 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 比较弗氏完全佐剂(FCA)与单磷脂A(MPL)的免疫增强作用,为提高重组SjGST-Sj32(rSjGST-Sj32)的疫苗效果提供依据。方法 rSjGST-Sj32加弗氏完全佐剂(rSjGST-Sj32+FCA)或单磷脂A(rSjGST-Sj32+MPL)免疫小鼠3次,ELISA法检测抗体水平,用减虫率及减卵率表示保护性作用。结果 与PBS对照组相比,rSjGST-Sj32加FCA或MPL 相似文献
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60 kD人SSA抗原表位免疫反应的特异性 总被引:4,自引:3,他引:1
目的:根据60kD SSA抗原分子不表位的氨基酸序列,人工合成多倍体寡肽抗原表位(multiple antigenic peptides,MAPs),以检测这些表位的免疫特性。方法:用MAPs做亲和层析柱,用抗SSA抗体的病人血清过柱,纯化抗MAPs抗体。这些纯化后的抗MAPs抗体与60kDSSA抗原及MAPs反应。这种的反应能被60kD SSA抗原及相对应的MAPs抑制。以MAPs做抗原检测67 相似文献
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目的:对pGSj24克隆化基因进行核苷酸序列分析,了解其编码蛋白的属性。方法:常规制备pGSj24克隆化基因并重组入测序载体M13mp19,以DYEPRIMER荧光测序试剂盒进行核苷酸序列测定。分别以DNASIS和GOLDKEY软件对序列资料进行分析。结果:pGSj24克隆化基因长840bp,含一开放阅读框,可编码一分子量为22.6kDa的蛋白质。开读框上游和下游均有终止密码子。该基因与已发表的日本血吸虫22.6kDa蛋白的编码基因同源性达95%,编码区同源性达99.7%。在该基因内有一段典型的EF-Hand钙结合区序列,并有内质网导肽、微体导向信号等功能位点。预测该蛋白质内可能的抗原决定簇位置为第29-32、63-68和87-101等氨基酸片段。结论:pGSj24克隆化基因为日本血吸虫22.6kDa抗原编码基因。 相似文献
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目的:对pGSj24克隆化基因进行核苷酸序列分析,了解其编码蛋白的属性。方法:常规制备pGSj24克隆化基因并重组入测序载体M13mp19,以DYEPRIMER荧光测序试剂盒进行核苷酸序列测定。分别以DNASIS和GOLDKEY软件对序列资料进行分析。结果:pGSj24克隆化基因长840bp,含一开放阅读框,可编码一分子量为22.6kDa的蛋白质。开读框上游和下游均有终止密码子。该基因与已发表的日本血吸虫22.6kDa蛋白的编码基因同源性达95%,编码区同源性达99.7%。在该基因内有一段典型的EF-Hand钙结合区序列,并有内质网导肽、微体导向信号等功能位点。预测该蛋白质内可能的抗原决定簇位置为第29-32、63-68和87-101等氨基酸片段。结论:pGSj24克隆化基因为日本血吸虫22.6kDa抗原编码基因。 相似文献
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目的 克隆并表达恶性疟原虫重组复合抗原,为疟疾疫苗研究奠定基础。方法 将恶性疟原虫MSP1中类表皮生长因子1(EGF-1)基因与人工化学合成的抗原复合基因PfCMR串接,插入高效非融合型蛋白表达载体pBV220,转化大肠杆菌DH5a,转化菌经42℃热诱导表达,表达产物用Western blot和Dot-ELISA分析。结果 构建成功重组质粒pBV220/PfCMR-EGF-1,经热诱导后表达出含外 相似文献
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目的探讨重组IFN-γ用作血吸虫抗原佐剂的可能性。方法用reSj26GST加鼠重组IFN-γ,reSj26GST加福氏佐剂以及IFN-γ分别免疫BALB/c 小鼠,攻击感染后45d解剖小鼠,比较各组小鼠成虫检获数及克肝卵数。结果IFN-γ/GST组小鼠的减虫率和减卵率均略高于FCA/GST组。结论IFN-γ可以增强reSj26GST保护性免疫效果,初步提示IFN-γ可作为血吸虫抗原佐剂使用。 相似文献
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日本血吸虫菲律宾株26kDa抗原的表达,纯化与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
利用亲和层析和Western-blot等分子生物学技术,表达,纯化,鉴定了重组日本血吸虫菲律宾株26kDa,抗原(rSjp26GST),并比较了其与日本血吸虫大陆株26kDa抗原(rSjc26GST)基因cDNA序列的异同,分析了其应用前景。分别以质粒pGEX和血吸虫大陆株总RNA为模板,经PCR或逆转录PCR(RT-PCR)扩增出的Sjp26GST和Sjc26GSTcDNA其片段长度均为654b 相似文献
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日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因在大肠杆菌的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 克隆并表达日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因以制备血吸虫疫苗候选分子。方法 利用 P C R 技术扩增日本血吸虫大陆株的c D N A 基因, 经 Bam H I和 Eco R I双酶切后定向克隆于原核表达质粒 P E G X2 - T, 并在大肠杆菌进行表达研究。结果 获得目的基因克隆, 在大肠杆菌可诱导表达约44k D 的融合蛋白, 该重组抗原能被慢性血吸虫病人血清特异性识别。结论 成功地表达了一种血吸虫疫苗候选抗原, 为进一步研究打下基础。 相似文献
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日本血吸虫(中国大陆株)FABPc重组抗原高效融合表达、纯化及免疫学活性鉴定 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 构建Sj-FABPc表达克隆 ,获得大量纯化rSj-FABPc重组 (日本血吸虫脂肪酸结合蛋白 )抗原 ,了解其作为候选疫苗抗原的潜能。方法 以PCR法从Sj-cDNA库中扩增出目的基因片段后亚克隆入表达载体pGEX - 6P - 1进行融合表达 ,经GlutathioneSepharoseTM4B亲和层析柱和PreScissionTMProtease酶切后纯化出rSj-FABPc ,Westernblot鉴定其抗原性 ,以rSj-FABPc免疫小鼠 ,制备特异性抗血清 ,并用ELISA法检测重组抗原的免疫活性。结果 纯化的rSj-FABPc能被血吸虫成虫免疫兔血清和急、慢性血吸虫病人血清所识别 ,并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答 ,抗体滴度为 1∶12 80 0。结论 rSj-FABPc具有良好的抗原性 ,能有效地诱导小鼠产生特异性抗体 相似文献
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弓形虫p35蛋白的基因克隆及其分子特征 总被引:8,自引:3,他引:5
目的 探讨p35蛋白作为一个鉴别急性感染的诊断抗原和疫苗候选的应用价值。方法 从弓形虫RH株分离总的RNA,应用弓形虫EST基因库合成扩增p35基因片段引物,结合5'和3'末端cDNA快速扩增法进行p35基因5'和3'末端cDNA的扩增,TA克隆RT-PCR产物及DNA顺序分析;用蛋白质分析软件解析p35基因编码的氨基酸的亲水性和可能存在的T、B细胞的表位。结果 p35基因含有1537个碱基,编码378个氨基酸,其氨基酸的亲水性区域分布在氨基酸的201到225和301到340号,且含有多个T、B细胞的表位。结论 p35蛋白的C端区有高的亲水性,并含有T、B细胞的表位,显示了p35蛋白应用于诊断和疫苗开发的可行性。 相似文献
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目的 分析rSj338重组蛋白的氨基酸序列 ,了解该蛋白的特性 ,预测其抗原表位。方法 制备Sj338基因片段并重组入测序载体pGEM T ,对其核苷酸序列进行测定 ,分别以DNASIS和GOLDKEY软件对序列资料进行分析 ,并在BLAST网上进行同源性分析。结果 rSj338基因长 487bp ,含 1个由 45 9bp组成的开放阅读框 ,编码一由 15 3个氨基酸残基组成的多肽 ,分子量为 17 6kDa,氨基酸同源性分析发现 ,重组蛋白与人的线粒体传入受体亚单位氨基酸同源性为 46 % ,与褐鼠线粒体膜受体的前体氨基酸同源性为 44 % ,预测该蛋白的抗原表位位置为2 6~ 32、37~ 46、131~ 136和 147~ 15 1氨基酸肽段。结论 rSj338重组蛋白可能为日本血吸虫线粒体相关蛋白 相似文献
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目的构建基因工程菌株,获得重组蛋白Sj-FABPc(日本血吸虫脂肪酸结合蛋白).方法用PCR法从日本血吸虫cDNA文库中扩增Sj-FABPc基因片段,再将该片段重组于pGEMT中并进行DNA测序鉴定,经酶切后将目的片段构建成重组质粒pGEX-6P-1/Sj-FABPc,转化于大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达.用Glutathione SepharoseTM 4B亲和层析柱对表达产物进行纯化,PreScissionTM Protease酶对融合蛋白进行分离,获得纯化的14kDa Sj-FABPc.SDSPAGE和Western blot方法对表达产物进行鉴定.结果获得pGEX-6P-1/Sj-FABPc菌株,分离纯化出14kDa Sj-FABPc,表达量为10.52mg/L.Western blot显示,表达蛋白能被日本血吸虫免疫兔血清识别.结论重组蛋白Sj-FABPc可高效表达并有良好的抗原性. 相似文献
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弓形虫表面抗原P30基因分枝杆菌-大肠杆菌穿梭表达重组质粒的构建及序列测定 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 构建编码弓形虫RH株表面抗原P30基因的分枝杆菌 -大肠杆菌穿梭表达重组质粒并进行其序列测定。方法 弓形虫RH株腹腔接种小鼠 ,收集腹水 ,酚 /氯仿法抽提基因组DNA ;根据基因库P30基因序列设计合成一对引物 ,采用PCR法扩增编码P30的基因片段 ,经低熔点琼脂糖法回收并纯化 ;将P30基因定向克隆到分枝杆菌 -大肠杆菌穿梭表达质粒 ,转化大肠杆菌DH5dα,在卡那霉素阳性LB培养基平板筛选阳性重组子 ,并经双酶切及PCR鉴定 ;最后对重组子进行序列测定。结果 PCR所扩增的P30基因片段为 10 37bp ,阳性重组质粒pBCG -P30经XbaI+KpnI双酶切 ,获得包含P30和热休克蛋白 (hsp70 )启动子的复合基因片段 ,此片段的大小为 1170bp ,与预期的理论值相符合。序列测定分析进一步表明所克隆的基因为编码P30抗原的基因片段。结论 成功构建编码弓形虫表面抗原P30基因大肠杆菌 -分枝杆菌穿梭质粒pBCG -P30。 相似文献
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目的: 在家蚕细胞和幼虫中表达日本血吸虫脂肪酸结合蛋白( Sj14) 基因。方法: 将该基因克隆于昆虫病毒转移载体p Bac P A K His1 中, 再与修饰的家蚕核型多角体病毒( Bm N P V) 线性化 D N A 共转染家蚕细胞,经体内重组得重组病毒 Bm Sj14 , 再将 Bm Sj14 感染家蚕细胞和幼虫以表达 Sj14 , 用 Western blot 和间接 E L I S A测定表达产物的抗原性。结果: Bm Sj14 感染家蚕细胞和幼虫后 Sj14 获得较高表达; 表达产物r Sj14 ( His) 为18k Da 的融合蛋白, 在家蚕细胞中的产量约为100 μg/1 ×106 细胞, 在培养上清中产量为33 μg/ml; 在家蚕血淋巴中得量为4 mg/ml; 在家蚕幼虫组织的得量为46 mg/g 组织。 Western blot 和间接 E L I S A 显示r Sj14 ( His) 具有较高抗原性。结论: Sj14 在家蚕细胞和幼虫中获得高效表达且表达产物具有较高抗原性。 相似文献
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目的 为莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制提供靶抗原。方法 根据莱姆病螺旋体 83kD原浆柱蛋白 (p83)特异性区段的基因序列 ,设计一对引物 ,采用PCR技术从莱姆病螺旋体B31株基因组DNA中扩增p83特异性区段的基因片段 ,纯化扩增产物 ,用BamHI和EcoRI双酶切后定向克隆入质粒载体pBK -CMV ;转化大肠杆菌筛选重组克隆。用BamHI和EcoRI双酶切、PCR扩增和DNA序列测定对重组质粒进行鉴定 ,将重组质粒转化大肠杆菌 ,IPTG诱导表达后进行SPS -PAGE和Western -blotting分析。结果 1)从莱姆病螺旋体B31株基因组DNA中扩增出p83特异性区段的基因片段 ;2 )将扩增所得的目的基因片段正向插入pBK -CMV的BamHI和EcoRI位点 ,获得重组质粒pBX1。 3)pBX1在大肠杆菌中诱导表达后获得 2 9kD含 β -半乳糖苷酶氨基末端片段的重组抗原。 结论 成功构建了莱姆病螺旋体 83kD原浆柱蛋白特异性区段的基因重组表达载体 ,并在大肠杆菌中获得了稳定的表达 ,为进一步研究该重组抗原在莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制中的应用奠定了基础 相似文献