三叶青提取物对肝癌细胞HepG2及原代大鼠肝细胞的体外毒作用研究

目的探讨三叶青提取物对肝癌细胞Hep G2及原代大鼠肝细胞的体外毒作用.方法采用体外细胞培养技术,以细胞活性、细胞乳酸脱氢酶(LDH)活力的改变为指标,观察三叶青提取物对肝癌细胞Hep G2,体外毒作用的时效、量效关系,共观察其对正常原代培养大鼠肝细胞的影响.结果三叶青提取物以1×10-4g/L的浓度与Hep G2共同培养,在24h较空白对照组的细胞活性有显著降低;不同浓度的提取物和Hep G2共同培养,乙酸乙酯提取部位对细胞活性及酶学改变有显著性影响;对原代培养大鼠肝细胞活性及LDH也有一定的影响.结论三叶青提取物对Hep G2细胞具有明显的体外细胞毒作用,其毒性作用与药物的浓度和作用时间呈明显正相关,但对正常原代大鼠细胞毒性较小.     

槲皮素拮抗酒精性肝损伤中胆红素的介导效应

目的探讨槲皮素诱导Ⅰ型血红素氧合酶(heme Oxygenase-1,HO-1)及其代谢产物胆红素对肝细胞酒精性氧化损伤的保护效应。方法二步胶原酶灌注技术分离培养SD大鼠原代肝细胞,在孵以200 mmol乙醇建立酒精性肝细胞氧化损伤模型的同时,加入槲皮素(100μmol)、hemin(20μmol)等及不同剂量(2-100μmol)的胆红素干预24 h后,检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及氧自由基(ROS)水平及培养基中总胆红素水平。结果槲皮素明显抑制了乙醇孵育后细胞MDA和ROS水平的升高,有效维持了细胞内GSH水平和SOD活力;加入外源性胆红素也显示出相同的保护效应,且具有一定的剂量依赖性;锌原卟啉IX(ZnPP-IX)则明显抑制了上述槲皮素的保护效应。结论槲皮素诱导HO-1对酒精所致大鼠原代肝细胞氧化损伤具有保护作用,其机制与HO-1的代谢产物之一胆红素有关。     

茶多酚对乙醇所致原代肝细胞损伤的保护作用研究

目的研究乙醇对原代肝细胞的氧化损伤作用,同时探讨茶多酚对乙醇所致的原代肝细胞损伤模型的保护作用。方法分离小鼠原代肝细胞,直接以不同浓度乙醇作用于肝细胞,或以茶多酚预处理后再用乙醇作用于肝细胞,测定各组细胞存活率、抗氧化酶及丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性的变化。结果随着乙醇浓度的增加,小鼠原代肝细胞存活率逐渐下降,抗氧化酶活性降低,转氨酶升高;而茶多酚的预处理对于乙醇所致的小鼠原代肝细胞损伤具有明显的保护作用,表现为相同乙醇浓度作用下,随茶多酚浓度的升高,细胞存活率逐渐升高,抗氧化酶活性增加,转氨酶下降,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论乙醇可以诱导小鼠原代肝细胞的氧化损伤,而茶多酚对其氧化损伤具有明显的保护作用。     

CCl_4诱导大鼠原代肝细胞损伤模型的建立

目的:通过实验研究建立大鼠受损肝细胞的病理模型。方法:采用酶消化法分离大鼠肝实质细胞、进行体外培养,并建立四氯化碳(CCl4)体外诱导肝细胞损伤的模型,选择CCl4最适损伤浓度,进一步研究含药血清对体外肝细胞损伤的保护作用。结果:选取了CCl4造模的最佳浓度为9 mmol/L。结论:通过四氯化碳成功诱导了大鼠肝细胞损伤的模型。     

急性乙醇暴露对人原代肝细胞血红素氧化酶的影响

目的　研究急性乙醇暴露对人原代肝细胞血红素氧化酶活力及蛋白水平的影响。方法　经体外灌流、分离培养人原代肝细胞 ,观察乙醇对人原代肝细胞上清液中天冬氨酸氨基转移酶 (AST)的释放及谷胱甘肽 (GSH)含量的变化 ,用westernblot方法检测乙醇对人原代肝细胞血红素氧化酶活力及蛋白水平的影响。结果　急性乙醇暴露导致人原代肝细胞上清液中释放的AST增加 ,并呈明显的剂量效应和时间效应关系 ;此外 ,在 10 0mmol L乙醇 2 4h暴露下 ,肝细胞中的GSH明显降低 ,而HO 1酶活力在 0 5～ 12h之间明显升高 ,随后开始降低 ,且HO 1蛋白水平变化趋势与此一致。结论　HO 1酶活力的升高可能与乙醇暴露下人原代肝细胞氧化损伤的保护有关     

漏芦水提取物抗脂质过氧化活性分析

目的 研究祁州漏芦水提取物(RUWE)的抗脂质过氧化活性.方法以铁还原法检测RUWE的总抗氧化能力,以硫代巴比妥酸(TBA)法测定H2O2、Fe2+以及Fe2+ H2O2所致肝匀浆丙二醛(MDA)生成量.结果RUWE具有较强的总抗氧化能力,其总抗氧化能力随浓度增高而升高,回归方程为y =4.475 9x +7.046 3,R2=0.995 8;呈量效关系.同时,RUWE可浓度依赖性地抑制肝组织脂质过氧化作用,其对HO2、Fe2+以及·OH诱导的肝匀浆体系脂质过氧化作用的半数抑制浓度(IC50)分别为o.775,0.886和1.99 mg/mL.结论RUWE具有体外抗脂质过氧化活性.     

枳实提取物对实验性糖尿病小鼠肝脏抗氧化防御功能的影响

目的研究枳实提取物对试验性糖尿病小鼠肝脏抗氧化能力的影响。方法用高、中、低剂量的枳实提取物治疗糖尿病小鼠5周后,观察其一般状况、肝脏的抗氧化能力及肝脏组织形态学变化。结果枳实提取物治疗组,与糖尿病模型组比较,血糖水平显著降低(P<0.05),谷胱甘肽含量(GSH)显著增加(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶活性、丙二醛和NO含量显著降低(P<0.01),超过氧化物歧化酶活性有所增加。光镜下枳实提取物治疗组肝组织细胞损伤较糖尿病组降低。结论枳实提取物具有增强肝脏的抗氧化能力,降低肝细胞损伤作用。     

铁路危险品货运站空气颗粒物诱导肺细胞氧化应激损伤

[目的 ]探讨铁路危险品货运站空气污染颗粒提取物诱导大鼠肺细胞氧化应激损伤作用的机制。 [方法 ]应用滤膜法采集铁路危险品货运站空气颗粒提取物。常规分离与原代培养大鼠肺Ⅱ型细胞 ,以N 乙酰半胱氨酸 (NAC)、维生素E(VitE)、维生素C(VitC)和甘露醇 (MT)等不同作用位点的抗氧化剂预处理 3 0min后 ,加入空气颗粒提取物染毒 2 4h。采用四氮甲基唑蓝比色法、溴乙锭荧光法检测肺细胞的生长情况和DNA交联的形成。 [结果 ]在 1 0 2～ 8 13mg/ml浓度范围内 ,铁路危险品货运站空气颗粒提取物对大鼠肺细胞有明显的细胞毒性和致DNA交联作用。加入NAC、VitE、VitC和MT可有效地减低铁路危险品货运站空气污染颗粒提取物所致的细胞毒性 ,VitE、VitC则具有减低铁路危险品货运站空气污染颗粒提取物所致的DNA损伤作用。 [结论 ]铁路危险品货运站空气污染颗粒提取物对大鼠肺细胞具有氧化应激作用 ,其可能途径是产生活性氧自由基、羟自由基或导致细胞过氧化等     

牛黄抗间二硝基苯所致氧化作用的研究

[目的]研究牛黄的抗氧化作用。[方法]分离培养原代大鼠肝细胞,采用正交试验设计,在0、0.1和0.5mmol/L间二硝基苯(m-DNB)诱导大鼠肝细胞氧化损伤的基础上,观察不同时间(0.5、2和5h)、不同剂量(0、5和10μmol/L)牛黄的抗氧化作用,测定大鼠肝细胞孵育系统丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力。同时,观察10μmol/L牛黄预处理对m-DNB0、0.01、0.10、0.25、0.50、1.00和2.00mmol/L不同剂量组肝细胞悬液水平和m-DNB0、0.01、0.05、1.00mmol/L组肝细胞悬液OH·水平的影响。[结果]经牛黄处理后,大鼠肝细胞孵育系统MDA含量明显下降,GSH含量下降,GSH-Px活力升高。10μmol/L牛黄预处理可以显著降低含m-DNB的肝细胞孵育系统中和OH·水平,水平分别由2.38、3.49、5.08、6.35、9.20、10.95μmol/L降为1.74、2.38、3.17、3.65、5.08和6.19μmol/L(P<0.05),而OH·水平由31.27、45.50和52.87mm降为20.60、26.30和30.6mm峰高(P<0.05)。[结论]牛黄可能通过抑制脂质过氧化,清除自由基和GSH发生联合抗氧化作用。     

槲皮素对氧化应激大鼠肝细胞的保护作用

目的研究大鼠肝细胞对槲皮素的吸收以及吸收后对氧化应激损伤的作用。方法用高效液相色谱法（HPLC）测定原代培养的大鼠肝细胞对槲皮素的吸收。于培养液中加入过氧化氢诱导肝细胞氧化应激，观察槲皮素预处理后，氧化应激肝细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放量、培养液总抗氧化能力（T-AOC）、细胞匀浆脂质过氧化终产物丙二醛（MDA）含量以及细胞凋亡率的变化。结果大鼠肝细胞对槲皮素有一定量的吸收，24小时达到高峰。过氧化氢可导致大鼠肝细胞损伤，培养液中LDH活性增加、T-AOC增强，细胞匀浆的MDA含量增加，细胞凋亡率增高。槲皮素预处理能减少氧化应激肝细胞LDH的释放，进一步增强T-AOC，降低MDA含量，并降低细胞凋亡率。结论大鼠肝细胞对槲皮素有一定量的吸收，槲皮素预处理对氧化应激肝细胞有一定的保护作用。     

Diallyl trisulfide modulates cell viability and the antioxidation and detoxification systems of rat primary hepatocytes

This study investigated the effects of various concentrations of diallyl trisulfide (DATS) and incubation times on cell viability, glutathione (GSH) content, and GSH-related enzyme activity in rat primary hepatocytes. Isolated and cultured primary rat hepatocytes were used as an experimental model. Cells were treated with 0 (control), 0.025, 0.05, or 0.25 mmol/L DATS for 0, 4, 8, or 24 h. After 24 h of treatment, some cells were incubated in fresh medium without DATS for an additional 24 h (48-h incubations). Based on lactate dehydrogenase (LDH) leakage and morphological examination, hepatocytes treated with 0.025 mmol/L DATS did not differ from the control cells at 4, 8, 24, and 48 h of incubation. However, LDH leakage was higher than in the control cells (P < 0.05) when the hepatocytes were treated with 0.05 or 0.25 mmol/L DATS for 4 h or more. The intracellular GSH levels of hepatocytes treated with 0.025 or 0.05 mmol/L DATS were higher than those of the control cells (P < 0.05), whereas those treated with 0.25 mmol/L DATS did not differ. The activity of glutathione reductase (GRd) was higher than in the control cells at 24 h (P < 0.05) when the hepatocytes were treated with 0.025 mmol/L DATS. When the hepatocytes were treated with 0.025 mmol/L DATS, the activity of glutathione S-transferase (GST) was higher than in the control cells at 48 h (P < 0.05). In hepatocytes treated with 0.05 mmol/L DATS, the activity of GST and glutathione peroxidase (GPx) was higher than in the control cells (P < 0.05) at 24 and 48 h of incubation. The results indicate that 0.025 or 0.05 mmol/L DATS could enhance antioxidation and detoxification capabilities by increasing the intracellular GSH level and the activity of GPx, GRd, or GST in rat primary hepatocytes. However, 0.05 or 0.25 mmol/L DATS might adversely affect the viability of hepatocytes.     

氟化物对原代培养大鼠肝细胞酶活力及超微结构的影响

目的研究不同剂量的氟化物对原代培养大鼠肝细胞存活率、酶活力及超微结构的影响。方法采用半原位胶原酶消化法分离大鼠肝细胞;MTT法检测细胞存活率;赖氏法检测培养液中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性;透射电镜观察细胞超微结构改变。结果氟化钠染毒24小时后肝细胞存活率下降,且呈现明显的剂量-效应关系;2mmolL和4mmolL染氟组肝细胞培养液中ALT和AST的活性显著升高(P<005);透射电镜下染氟组肝细胞线粒体肿胀,内质网排列紊乱或断裂。结论过量氟化物对原代培养大鼠肝细胞有明显的毒作用,其主要作用方式是引起细胞膜和细胞器质膜损伤。     

氟化钠对原代培养大鼠肝细胞的毒性作用

目的　探讨氟化钠 (NaF)对原代培养大鼠肝细胞的毒性作用。方法　采用原代培养的方法 ,观察氟化钠对原代培养大鼠肝细胞存活率和肝细胞培养液中谷草转氨酶 (AST)和谷丙转氨酶 (ALT)活性的影响。结果　氟化钠可使原代培养大鼠肝细胞存活率下降 ,且呈现明显的剂量 -效应关系 ,其IC50 为 3 5 8mmol/L ;肝细胞培养液中ALT和AST的活性随染毒剂量的增加而逐渐升高 ,2和 4mmol/L染氟组肝细胞培养液中ALT和AST的活性与对照组相比显著升高 (P <0 0 5 )。结论　氟化钠对原代培养大鼠肝细胞有明显的毒作用。     

槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用

目的:观察槲皮素(quercetin)对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的防护作用。方法:经二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞,用100mmol/L无水乙醇染毒细胞8h,作为酒精损伤模型。乙醇染毒前经不同剂量槲皮素(25～200μmol/L)预作用不同时间(0～8h),观察槲皮素干预对细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)活性,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果:大鼠原代肝细胞经100mmol/L酒精暴露8h后,LDH、AST活性,MDA、GSH含量和SOD、CAT活性与对照组相比,均有非常显著性差异;酒精暴露前1～4h经50～75μmol/L槲皮素干预效果最明显,LDH、AST、MDA和GSH、SOD、CAT水平分别较酒精组非常显著性降低和升高。结论:槲皮素可能通过减少GSH耗竭,提高抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞抗酒精性氧化损伤,保护作用呈剂量与时间效应关系。     

槲皮素对大鼠原代肝细胞HO-1蛋白表达及活性的影响

目的研究槲皮素对大鼠原代肝细胞中I型血红素氧化酶(HO-1)蛋白表达及酶活性的影响。方法二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞。用不同剂量(25、50、100、200 mol/L)槲皮素作用大鼠原代肝细胞12 h,或用50 mol/L槲皮素作用肝细胞不同时间(2～12 h)后,提取肝细胞微粒体,检测HO-1酶活性变化,并用WesternBlot方法检测HO-1蛋白表达水平的变化。结果大鼠原代肝细胞经50～200 mol/L槲皮素处理12 h,或用50 mol/L槲皮素处理4～12 h后,HO-1蛋白表达水平和酶活性与对照组比较明显升高(P<0.05)。结论槲皮素能够诱导大鼠原代肝细胞的HO-1蛋白表达,提高肝细胞内HO-1的酶活性。     

硒对氧化损伤大鼠肝细胞凋亡的影响

目的研究硒对于H2O2诱导大鼠肝细胞(BRL)凋亡的影响并探讨其作用机制。方法采用0.1mmol/L的H2O2建立氧化损伤的细胞模型,并施加不同剂量的补硒干预。通过测定细胞活力(MTT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPH-Px)活力、丙二醛(MDA)含量和细胞凋亡率,研究硒对氧化损伤肝细胞的保护作用,采用实时定量PCR技术检测细胞GPH-Px和凋亡信号调节激酶1(ASK1)的mRNA表达水平,并通过Western blot技术检测ASK1的蛋白表达水平。结果补硒组细胞MTT(OD)值和GSH-Px活力高于损伤组,MDA的含量和细胞凋亡率低于损伤组,差别有统计学意义(P<0.05)。补硒组GPH-Px的mRNA表达水平高于损伤组,差别有统计学意义(P<0.05),补硒组ASK1的mRNA和蛋白表达水平低于损伤组,差别有统计学意义(P<0.05)。结论硒可能通过增加细胞GSH-Px的mRNA表达和酶活性、下调ASK1 mRNA和蛋白的表达、降低细胞中MDA含量等作用,对氧化损伤所致的肝细胞凋亡起到一定的保护作用。[营养学报,2010,32(5):466-469]     

五味子乙素对苯并芘致HTR8-SVneo细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究环境污染物苯并芘（BaP）致人绒毛膜滋养层细胞HTR8-SVneo氧化损伤的作用机制,探讨五味子乙素（Sch B）的可能保护作用。方法：本实验分为空白组、BaP组、Sch B不同浓度组（0.1,0.5,2.0 μmol/L）,以HTR8-SVneo 细胞为载体,构建BaP氧化应激损伤模型,测定氧化和抗氧化指标。结果：与空白组比较,BaP组超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的浓度显著降低,而乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的浓度明显增加（P＜0.05）。不同剂量Sch B组SOD、GSH-Px的浓度明显提高,LDH、MDA、NO、iNOS的浓度减少,与BaP组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：Sch B能调节BaP所致的HTR8-SVneo细胞氧化系统和抗氧化系统的失衡,从而预防BaP致HTR8-SV neo细胞的氧化损伤。