PLCE1基因对胃癌细胞侵袭转移的影响

目的 探讨干扰磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon 1,PLCE1)基因对胃癌细胞侵袭转移的影响及相关机制。方法 采用免疫组化SP法检测63例胃癌组织中PLCE1的表达,分析PLCE1表达与胃癌临床病理特征的关系;将胃癌SGC7901细胞株随机分为SiPLCE1组和对照组,分别转染PLCE1基因干扰慢病毒和阴性对照空载体慢病毒,采用细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞侵袭迁移能力;采用qPCR和Western blot法检测细胞PLCE1 mRNA和蛋白表达情况;采用Western blot法检测细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、vimentin)以及PKC/ERK信号通路蛋白的表达情况。结果 PLCE1高表达组胃癌患者的淋巴结转移率为37.93%、远处转移率为20.69%、Ⅲ～Ⅳ期患者占41.38%,均高于PLCE1低表达组(P<0.05)。细胞实验结果显示,Sh-PLCE1组24 h细胞迁移距离为(36.81±2.77)μm,细...     

纺锤菌素抑制胃癌细胞的侵袭和转移

目的探讨纺锤菌素(netropsin)对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响及其分子机制。方法用Transwell检测胃癌细胞侵袭和转移能力,用Western blot检测EMT相关标志物E-cadherin和vimentin表达,用免疫荧光检测β-catenin的细胞定位,验证netropsin作用前后Wnt/β-catenin信号通路活性。结果 Netropsin浓度25μmol/L时对MKN28细胞增殖有抑制作用,netropsin可以降低上皮标志物E-cadherin的表达,上调间质标志物vimentin的表达;netropsin可以通过抑制胃癌细胞的EMT,降低胃癌细胞侵袭和转移能力(P0.05),同时可阻止β-catenin进入细胞核。结论 Netropsin可以通过与HMGA2竞争结合转录因子结合位点抑制Wnt/β-catenin信号通路,降低胃癌细胞EMT的发生,从而抑制胃癌细胞侵袭能力。     

二氢杨梅素联合丝裂霉素对胃癌细胞的生长抑制作用

目的: 探讨二氢杨梅素(AMP)联合细胞化疗药物丝裂霉素(MMC)对胃癌细胞SGC-7901的抑制作用。方法: 体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,分别设空白对照组、AMP组、MMC组以及AMP+MMC组。用MTT法观察细胞生长;流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blotting检测细胞Bcl-2及survivin的表达情况。结果: 在AMP组中,当浓度在2.2 mg/L-14.84 mg/L时,AMP对胃癌细胞生长均有抑制作用,以14.84 mg/L抑制作用最明显(60.85%±1.13%,P<0.05)。MMC随着浓度由1×10^-3g/L增加至1×10g/L,其抑制率也由17.40%±0.30%增加至72.23%±1.36%,呈递增趋势。AMP联合MMC的抑制作用随着MMC浓度由1×10^-3 g/L增加至5×10^-3g/L,抑制率也由21.83%±2.50%增加至46.70%±1.45%。联合治疗组优于单独给药组。AMP、MMC及AMP+MMC均可以下调Bcl-2及survivin的表达,其中AMP+MMC组下调作用最明显。结论: AMP联合MMC可以增强对胃癌细胞的抑制作用,联合应用可以减低MMC的剂量;其抑制肿瘤作用可能与下调Bcl-2及survivin蛋白的表达有关。     

SPIN1通过调控上皮-间质转化促进胃癌细胞的迁移、浸润

目的 明确SPIN1在胃癌细胞系中的表达情况及其对胃癌细胞迁移、浸润的作用,初步探究其可能的分子机制.方法 qRT-PCR检测SPIN1在5种胃癌细胞系中的表达情况;Transwell小室实验观察过表达及沉默SPIN1后细胞迁移和侵袭能力的变化;Western blot法检测过表达及沉默SPIN1后上皮-间质转化(ep...     

枸橘苷对胃癌细胞抑制作用及其机制研究

目的:探究枸橘苷对AGS胃癌细胞抑制作用及其机制。方法:MTT实验检测枸橘苷对AGS细胞活力的影响;流式细胞术分析细胞周期分布以及细胞凋亡;细胞核染色分析AGS细胞在枸橘苷处理之后的形态学变化;Western blot检测枸橘苷对AGS细胞中外源性凋亡通路相关蛋白FasL、caspase-8、caspase-3和PARP,以及内源性凋亡相关蛋白Bak、Bcl-xL、Bax和caspase-9蛋白水平的影响。结果:MTT实验表明枸橘苷抑制AGS胃癌细胞活力,并且呈时间、剂量依赖性(P0.05);流式细胞术分析结果表明枸橘苷使细胞停滞在G_1期,凋亡数量增加(P0.05);核染色结果说明,与对照组相比,150μmol/L枸橘苷处理后细胞核明显浓缩,细胞凋亡数量增加;Western blot实验表明枸橘苷上调FasL,激活caspase-8和caspase-3,促使活化的caspase-3底物PARP切割(P0.05),而对线粒体调节的内源性凋亡通路相关蛋白没有影响。结论:枸橘苷通过激活外源性凋亡通路促使AGs细胞凋亡,抑制胃癌细胞增殖,从而发挥抗肿瘤作用,在临床上可能成为治疗胃癌的新型药物。     

上皮-间质转化的信号转导机制

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)出现在各种生理和病理情况下,在胚胎发生与器官发育、肿瘤形成和转移以及纤维化过程中均有表现。TGF-β是EMT的一个重要诱导因素,其通过Smad和非Smad依赖通路对EMT的发生进行调节,对肿瘤的形成、转移和扩散起到了重要的作用。本文综述了近年来EMT信号转导机制的研究进展。     

沉默Twist基因对胃癌BGC-823细胞上皮-间质转化的影响

目的探讨干扰Twist基因表达对胃癌细胞株BGC-823细胞上皮-间质转化的影响。方法采用干扰技术并构建质粒、生物信息学软件、qRT-PCR技术、划痕实验、Transwell实验和Western blot法对BGC-823细胞进行体外实验。结果 Twist在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P0.05),且与胃癌患者的预后呈负相关性(P0.05)。干扰Twist表达后,胃癌细胞株的迁移、侵袭能力减弱(P0.05);E-cadherin的相对表达量增高(P0.01),而N-cadherin的相对表达量降低(P0.05)。结论胃癌细胞株BGC-823中Twist的表达可促进胃癌细胞发生上皮-间质转化,Twist在胃癌发生发展中起癌基因的作用。     

转化生长因子—β与胃癌

胃癌细胞中转化生长因子 β(TGF β)呈高表达 ,TGF β虽具有抑制肿瘤细胞生长的作用 ,但亦能TGF β诱导血管的形成 ,抑制机体的免疫系统 ;同时 ,转化生长因子受体表达低下或功能失活能阻滞凋亡信号的转导 ,使癌细胞逃逸TGF β的负性调节 ,并 ;共同参与了胃癌的演进过程。     

选择性环氧合酶-2抑制剂对结肠癌细胞的生长抑制作用及机制探讨

目的：研究NS-398（一种选择性环氧合酶-2抑制剂）对结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用并探讨其机制。 方法： 通过MTT法检测细胞的增殖情况，通过流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期，通过RT-PCR检测bcl-2 mRNA和bax mRNA表达，通过共聚焦激光扫描显微镜观察细胞骨架成分F-actin的变化。 结果： NS-398对结肠癌HT-29细胞生长的抑制具有时间和剂量依赖性。流式细胞术结果显示NS-398可剂量依赖地诱导HT-29细胞凋亡，使其停滞于G0/G1期。经不同浓度的NS-398处理72 h后，bcl-2 mRNA 在HT-29细胞的表达降低，bcl-2／bax比值降低。细胞骨架成分F-actin主要分布在HT-29细胞核周围，呈环状结构，NS-398作用后细胞核周围的环状结构消失。 结论： NS-398可显著抑制结肠癌细胞的体外生长并诱导其凋亡，这与下调bcl-2／bax比值以及细胞骨架的破坏有关。     

Dickkopf-1沉默通过下调β-catenin水平抑制胃癌细胞侵袭及上皮-间充质转化

目的:探讨分泌蛋白Dickkopf-1(DKK1)在人胃癌细胞中的表达及其对胃癌细胞侵袭能力的影响。方法:以real-time PCR和Western blot法检测DKK1在人胃黏膜细胞(GES-1)和胃癌细胞(MKN-45和SGC-7901)中的表达水平;以RNA干扰法沉默DKK1,沉默效果以real-time PCR、Western blot及ELISA法验证;Transwell实验检测细胞侵袭能力,以丝裂霉素C抑制细胞增殖;real-time PCR及Western blot法检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及β-连环蛋白(β-catenin)水平。结果:DKK1在MKN-45和SGC-7901细胞中的表达明显高于GES-1细胞,表明DKK1在胃癌细胞中表达显著升高;DKK1在MKN-45和SGC-7901细胞中被成功沉默后,细胞侵袭能力显著下降,并具有时间依赖性,同时伴随E-cadherin表达增高及N-cadherin和vimentin表达下降,表明DKK1沉默能够显著抑制胃癌细胞侵袭和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT);经外源性重组DKK1(r DKK1)转染肿瘤细胞后,进一步证实DKK1具有促胃癌细胞侵袭的作用,并可促进EMT进程;DKK1沉默通过下调β-catenin水平来实现其对胃癌细胞侵袭及EMT的抑制作用。结论:DKK1在人胃癌细胞中表达显著增高,且DKK1沉默能够通过下调β-catenin水平抑制胃癌细胞侵袭及EMT过程。     

透明细胞肾细胞癌中FOXD1的表达及其对786-O细胞增殖侵袭、上皮-间质转化的影响

目的 探讨转录因子FOXD1在透明细胞肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma, CCRCC)组织和细胞系中的表达及其对786-O细胞增殖侵袭、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 采用qRT-PCR技术检测CCRCC组织和细胞系中FOXD1基因表达,并分析FOXD1表达与CCRCC临床病理特征及预后的关系;检测敲低FOXD1表达对786-O细胞生物学行为和EMT相关标志物表达的影响。结果 CCRCC组织中FOXD1的表达量(0.917 2±0.096 58)高于对照组(0.556 9±0.074 82),差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤TNM分期、淋巴结转移及FOXD1高表达均为CCRCC患者预后相关的独立危险因子(P<0.05)。下调FOXD1基因发现,CCRCC细胞系786-O的体外侵袭与增殖活性明显减弱(P<0.05)。与对照组相比,敲低FOXD1表达后N-cadherin、Ki-67和vimentin表达下调(P<0.05),E-cadherin...     

双氢青蒿素通过抑制HMGB2表达及逆转EMT进程抑制肝癌细胞生长及侵袭北大核心CSCD

目的:观察双氢青蒿素(DHA)对体外生长的肝癌细胞生物学行为的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人肝癌细胞HepG2和LM3,采用不同浓度DHA处理,设立不加药的阴性对照组并以顺铂作为阳性对照。MTT、流式细胞术分别检测DHA对肝癌细胞增殖及凋亡的影响;划痕实验、Transwell实验分别观察DHA对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot检测DHA对肝癌细胞凋亡相关蛋白、HMGB2及EMT相关蛋白表达的影响。结果:与阴性对照组相比,DHA处理后的肝癌细胞存活率降低、凋亡率提高,迁移及侵袭能力降低(P<0.05),HMGB2蛋白表达显著降低,凋亡相关蛋白Cleavedcaspase3、Bax表达显著增加,Bcl-2表达显著减少,EMT相关蛋白E-cadherin表达显著增加,N-cadherin、Vimentin表达显著减少(P<0.05)。结论:DHA可抑制肝癌细胞生长,促进其凋亡,降低其迁移及侵袭能力,其机制可能为DHA通过降低HMGB2表达抑制肝癌细胞EMT进程。     

DDX5通过上皮-间质转化促进人乳腺癌细胞侵袭

目的 探究DEAD box RNA解旋酶-5(DEAD-box helicase 5, DDX5)蛋白对乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移作用的影响及其机制。方法 利用慢病毒感染法,构建过表达Flag-DDX5的人乳腺癌MCF-7稳转细胞系,划痕实验和Transwell实验检测DDX5蛋白过表达后对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响;Western blot实验检测上皮-间质转化(EMT)标志物上皮-钙黏蛋白(E-cadherin),纤维连接蛋白(Fibronectin),波形蛋白(Vimentin)的表达。结果 成功构建了稳定过表达DDX5的乳腺癌MCF-7稳转细胞系;DDX5蛋白过表达后,乳腺癌细胞迁移和侵袭能力明显增强,乳腺癌细胞E-cadherin的表达明显下调,Fibronectin与Vimentin的表达明显上调。结论 DDX5可能参与乳腺肿瘤细胞EMT过程,促进乳腺癌的恶性转移,进而影响乳腺癌的进程。     

miR-372抑制卵巢癌细胞EMT、侵袭迁徙及可能机制

目的探讨miR-372在卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭迁徙中的作用及相关的机制。方法利用Lipofectamine2000瞬时转染miR-372 mimics于OVCAR3和A2780细胞中,并通过RT-PCR法检测在转染前后OVCAR3和A2780细胞中miR-372的表达,Transwell及细胞划痕实验检测OVCAR3和A2780细胞的侵袭迁徙能力,蛋白印迹法检测EMT相关蛋白N-钙黏蛋白和a-SMA蛋白的表达水平。结果转染miR-372 mimics后OVCAR3和A2780细胞的miR-372相对表达量显著升高(P0.05),细胞的侵袭迁徙能力显著降低(P0.05);Western Blotting结果表明转染miR-372 mimics后OVCAR3和A2780细胞的EMT相关间质蛋白N-钙黏蛋白和a-SMA蛋白的表达水平显著降低。结论miR-372过表达抑制卵巢癌细胞的体外侵袭及迁徙,并通过抑制N-钙黏蛋白和a-SMA蛋白水平的表达来抑制卵巢癌细胞的EMT过程。     

转化生长因子-β1的Smad4非依赖性途径对胰腺癌细胞生长的影响

目的探讨转化生长因子(TGF)-β1过表达对Smad4纯合性缺失的胰腺癌细胞生长的影响。方法将含TGF-β1的真核表达载体转染到人胰腺癌细胞BxPC3中,通过流式细胞仪、生长曲线以及细胞迁移试验观察其对BxPC3生物学行为的影响。用Western印迹法检测TGF-β1对BxPC3细胞中p21WAF/CLIP1表达的影响。结果转染TGF-β1基因的BxPC3细胞的形态发生明显改变,其生长速度自第4天开始较转染空载体pcDNA3的阴性对照组减慢。发现BxPC3细胞组S期细胞(27.53±0.02)%与pcDNA3组(26.32±0.01)%的比例均高于TGF-β1组(17.01±0.03)%,P<0.01,表明TGF-β1阻止细胞进入S期。细胞迁移试验表明转染的细胞运动能力明显增加。Western印迹法检测表明p21WAF/CLIP1的表达也相应增高。结论TGF-β1的Smad4非依赖性途径通过增强p21WAF/CLIP1的表达使细胞阻滞于G-G期,从而抑制细胞生长,并且该通路能诱导上皮细胞向间叶细胞转变。     

PTTG1通过上皮-间质转化促进非小细胞肺癌的迁移和侵袭

目的 研究PTTG1在非小细胞肺癌侵袭转移中的作用.方法 应用免疫组织化学染色法检测80例NSCLC组织中PTTG1、E-cadherin和Vimentin的表达,并分析其相关性.细胞分组:1)A549/con,转染空载的A549,2)A549/PTTG1,转染目的基因的A549,3)Scr/H1299,转染空载的H1299,4)SiPTTG1/H1299,敲除PTTG1的H1299;用Western blot检测细胞中PTTG1、E-cadherin、Vimentin蛋白的表达情况.结果 NSCLC组织中PTG1蛋白的阳性表达率为85％与E-cadherin的表达呈负相关(P＜0.05)而与Vimentin的表达呈正相关(P＜0.05).Western blot结果显示在SiPTTG1/H1299细胞中PTTG1蛋白表达水平明显降低,Vimentin蛋白表达水平降低而E-cadherin蛋白表达水平升高.同时在A549/PTTG1细胞中Vimentin蛋白表达水平升高而E-cadherin蛋白表达水平降低.结论 PTG1能促进NSCLC EMT的发生,从而促进NSCLC的侵袭和转移.     

三氧化二砷对大肠癌细胞的生长抑制作用

目的观察三氧化二砷（ＡＳ_２Ｏ_３）对大肠癌细胞株ＳＷ６２０的生长抑制作用并初步探讨其机制．方法大肠癌细胞株ＳＷ６２０用不同浓度ＡＳ_２Ｏ_３处理．①ＭＴＴ法观察不同浓度ＡＳ_２Ｏ_３作用不同时间后对ＳＷ６２０细胞生长的影响；②增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）单抗ＬＳＡＢ免疫组化染色－流式细胞仪检测 ＰＣＮＡ阳性细胞百分比．结果①ＡＳ_２Ｏ_３明显抑制大肠癌细胞株ＳＷ６２０细胞增殖，其作用随ＡＳ_２Ｏ_３浓度增加和作用时间延长而增加；②随ＡＳ_２Ｏ_３浓度增加，ＰＣＮＡ阳性细胞百分比逐渐下降（ｐ＜０． ０５）结论二氧化二砷可明显抑制大肠癌细胞株 ＳＷ６２０的生长，调控 ＤＮＡ合成及细胞增殖的 ＰＣＮＡ蛋白合成降低可能是 ＡＳ_２Ｏ_３的作用机制之一．     

IL-6调节Twist的表达对肝癌细胞BEL-7402上皮-间质转化的影响

目的探讨白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)通过调节Twist的表达调控肝癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchy-mal transition,EMT)及侵袭转移的相关机制。方法用IL-6处理肝癌细胞BEL-7402,采用Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力。采用Western blot和qRT-PCR技术检测低表达Twist对E-cadherin和vimentin蛋白表达水平的影响和mRNA表达的变化。结果 IL-6处理BEL-7402细胞后侵袭和迁移能力明显提高。相较于空白对照组(CON组)和RNA干扰阴性对照组(RNAi-NC组),在转染组RNAi-Twist细胞中,E-cadherin蛋白和mRNA的表达水平明显增加;vimentin的蛋白表达水平明显下调,而mRNA的表达水平差异无显著性。加入50 ng/ml IL-6孵育细胞24 h后,CON组和RNAi-NC组E-cadherin蛋白和mRNA表达均较未处理时明显减少,RNAi-Twist组减少的趋势不明显;vimentin蛋白表达均较未处理时明显升高,而RNAi-Twist组升高不明显,相应mRNA的表达水平差异均无显著性。结论 IL-6可提高肝癌细胞BEL-7402体外侵袭、迁移能力,促进EMT过程,其机制可能通过调节Twist的表达,从而诱导发生EMT和侵袭转移。     

miR-383-5p靶向ZEB2抑制食管癌细胞侵袭及间质转化北大核心CSCD

目的:探讨miR-383-5p靶向调节ZEB2对食管癌细胞增殖、侵袭及间质转化的影响。方法:RT-PCR验证miR-383-5p过表达效率;荧光素酶报告基因实验验证ZEB2和miR-383-5p的靶向关系;Western blot检测ZEB2蛋白、内皮生长因子(VEGF)、上皮-间质转化相关蛋白(E-cad、N-Cad)表达;CCK8法检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭。结果:初步确定miR-383-5p可靶向作用于ZEB2的3’UTR,且可在转录后水平负调控ZEB2表达。与ZEB2组相比,miR-383-5p/ZEB2联合转染组Eca-109细胞增殖率、侵袭细胞数及相关蛋白表达均明显降低,E-cad表达减少、N-cad表达增多,明显抑制肿瘤上皮细胞间质转化。结论:miR-383-5p可靶向下调ZEB2,进而抑制食管癌细胞Eca-109增殖、侵袭及上皮-间质转化,缓解食管癌发生发展。     

GKN2在胃癌细胞增殖、转移中的作用及机制

目的 探讨胃动蛋白2(gastrokine 2,GKN2)对胃癌细胞的生长增殖、侵袭、转移的影响及分子机制.方法 利用qRT-pCR和Western blot法检测GKN2在胃癌组织中的表达;构建对照细胞株AGS-CON、SGC-7901-CON与GKN2过表达细胞株AGS-GKN2、SGC-7901-GKN2,应用q...