Bcl—2及相关蛋白与细胞凋亡和前列腺疾病

细胞凋亡调控失调可引起许多临床疾病。Ｂｃｌ－２为一抗凋亡基因，Ｂａｘ能对抗Ｂｃｌ－２的抑制细胞凋亡作用，共同调节细胞凋亡的发生，细胞凋亡能导致前列腺增生和前列腺癌的发生。     

恢复期SARS患者T淋巴细胞凋亡相关基因蛋白表达

目的 :探讨SARS的免疫发病机理 ,研究恢复期SARS患者T淋巴细胞凋亡相关基因蛋白表达。方法 :流式细胞仪测定 15例恢复期SARS患者的T淋巴细胞及其亚群和凋亡相关基因蛋白———CD95、Bcl 2、DR5及人冠状病毒 2 2 9E受体—CD13表达 ;并以 10例高危、健康的医务人员为对照。结果 :恢复期SARS患者外周血T淋巴细胞亚群 (CD3、CD4、CD8)均恢复正常 ;CD4 DR5、CD13,CD8 DR5、CD13表达均阴性 ,与对照组无明显差异。但是 ,恢复期SARS患者CD4、CD8阳性细胞仍明显表达Fas和Bcl 2 ,其阳性细胞的百分数较对照组明显增多 (P <0 0 1)。结论 :Fas FasL途径导致T淋巴细胞凋亡可能是SARS患者的免疫发病机理之一 ,而恢复期Bcl 2表达增多对抑制T淋巴细胞的进一步凋亡、T淋巴细胞亚群恢复正常可能具有重要作用。SARS患者T淋巴细胞凋亡不通过Trail DR5 细胞凋亡途径。     

细胞凋亡与相关基因p16、bcl-2在人类皮肤肿瘤中表达

本实验运用三羟末端标记法和免疫组化技术 ,原位观察皮肤鳞癌及正常组织中细胞凋亡、ｐ16与ｂｃｌ 2蛋白的表达 ,探讨其在皮肤组织恶性转化进程中的作用和关系。1　材料与方法1.1　材料收集　我校附院病理科 1994～ 1999年活检的部分标本 ,皮肤鳞癌 80例 ,10例正常皮肤取自肿瘤边缘 5ｃｍ以上切缘 ,分别做ＨＥ、细胞凋亡及ｐ16与ｂｃｌ 2蛋白免疫组化染色。患者平均年龄 5 4 8岁。按ＷＨＯ分级标准分级 :Ⅰ级 38例 ,Ⅱ级 18例 ,Ⅲ级 2 4例。诊断均经两位病理主任医师证实。所有患者术前均未作放疗、化疗及免疫治疗。1.2　试剂与方法　与细胞…     

野生型p53基因诱导凋亡相关基因ANNEXIN A2的表达研究

目的探讨胡基因过表达介导不同转移潜能肿瘤细胞的凋亡分子机理，寻找与细胞凋亡和肿瘤转移的相关基因。方法应用mRNA差异显示方法分析腺病毒介导的野生型,053基因感染不同转移潜能的肺癌细胞系前后存在的表达差异基因，并用逆转录一聚合酶链反应、Northern印迹和Western印迹方法加以验证。结果分析发现，在柳基因诱导后ANNEXIN A2基因的表达显著差异有统计学意义，经加基因诱导后ANNEXIN A2基因的表达有明显下调。并且以Arfip 973细胞的表达缺失最为显著。经逆转录一聚合酶链反应、Northern印迹和Western印迹方法也验证了这种差异的存在。结论表明ANNEXIN A2基因的表达与p53基因诱导的肿瘤细胞凋亡存在密切的相关性。     

甲状腺癌组织中细胞凋亡及相关基因Fas和Bcl-2表达的研究

1　材料与方法1.1　一般资料　乳头状甲状腺癌组织为 1996 - 0 1～ 1999- 0 4期间济南军区总医院普外科手术切除的标本 ,其中男 6例 ,女37例 ,年龄 6～ 79岁 ,平均年龄 49.7岁。标本均经病理学检查证实为乳头状甲状腺癌。术中组织离体后即取非坏死癌组织 1g左右 ,PBS冲洗 2遍 ,用滤纸吸干后 ,即置液氮中存放。1.2　仪器与主要试剂　参见参考文献 [1]。1.3　单细胞悬液制备　参见参考文献 [1]。1.4　免疫反应　参见参考文献 [1]。1.5　细胞凋亡的检测　在一只试管悬液中加入 2 m L胰酶消化液。 37°C恒温水浴 30 m in,期间振荡 2次 ,加生理…     

细胞凋亡对尖锐湿疣患者外周血单个核细胞的影响

目的 :探讨激活诱导细胞死亡 (AICD)对尖锐湿疣患者细胞免疫功能的影响。方法 :分离CA患者和健康体检正常人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,在PHA的刺激下体外培养 2 4小时后收集细胞和上清液 ,经流式细胞术检测凋亡细胞 ,采用酶联免疫吸附试验检测培养上清液IL 2及IL 10。结果 :发现CA组新鲜血PBMC的凋亡率很低和对照组相似 (P >0 0 5 ) ,培养 2 4小时后CA患者的外周血单个核细胞凋亡明显高于正常对照组 (P <0 0 0 1) ,CA患者的培养上清液IL 2浓度明显低于对照组 (P <0 0 0 1) ,而IL 10浓度显著高于对照组 (P<0 0 0 1)。结论 :AICD可能是引起尖锐湿疣患者细胞免疫功能低下的一个重要机制 ,在尖锐湿疣患者发病机制中起重要作用。     

人类睾丸生殖细胞凋亡相关基因的分子遗传学研究进展

人类睾丸生殖细胞的凋亡是一个多基因参与的复杂的过程 ,Bcl- 2 / Bax基因族、p5 3基因、CREM基因、Fas/ Apo- 1基因、HSP基因族、线粒体相关基因、i NOS基因、TRAIL及其受体基因以及 c- m yc基因等都在人类睾丸生殖细胞的凋亡过程中起到一定的作用。研究人类睾丸生殖细胞凋亡相关基因对一些临床疾病和抗生育都具有十分重要的意义。     

2型糖尿病相关基因研究进展

2型糖尿病(T2DM)是一种多基因遗传性疾病,每个基因的作用程度不同,不同基因之间存在交互作用,同时环境因素在2型糖尿病的发病过程中也发挥着十分重要的作用,提示糖尿病患者不仅存在基因结构的异常,而且在基因表达水平和表达后修饰过程中可能也存在缺陷。因此,确认2型糖尿病的易感基因实非易事。本文综述了目前对2型糖尿病致病易感基因的研究进展,包括基因组扫描与连锁分析和候选基因策略的遗传关联研究。     

Nitric oxide generation and poly(ADP ribose) polymerase activation precede beta-cell death in rats with a single high-dose injection of streptozotocin

Streptozotocin (STZ) is widely used for the induction of diabetes in animals by causing destruction of pancreatic beta cells. This experiment was designed to elucidate the sequential process of beta-cell destruction in rats with a single high-dose injection of STZ. At 0, 2, 5, 8 and 24 h after injection, rats were perfused with Krebs-Ringer buffer with dichlorofluorescein diacetate (DCF-DA), a marker for free radicals, and the pancreata were pathologically analyzed. Injection of STZ rapidly elicited an increase in fluorescence of DCF-DA in beta cells at 2 h after the injection. The fluorescence was diminished by carboxy-PTIO, a specific scavenger of nitric oxide (NO), but not by l-NAME, an inhibitor of NO synthase. During this process, an inducible form of NO synthase was not detected. Thereafter, upregulated expression of poly(ADP ribose) polymerase (PARP) and massive beta-cell death were detected at 5–8 h after injection. Migration of macrophages into the islet was conspicuous at 24 h, clearing up the debris of destroyed beta cells. Nicotinamide, a PARP inhibitor, significantly inhibited beta-cell death without apparent suppression of NO generation at 2 h. The current study documented serial processes of STZ-induced beta-cell death, starting with NO generation and PARP activation followed by a clearance with macrophages, where the activation of PARP plays a central role in beta-cell death.     

包裹E1A基因的纳米粒子制备及转染人肺腺癌细胞A549实验研究

目的制备包裹E1A基因（腺病毒早期表达基因）的纳米粒子,并观察其介导E1A基因转染人肺腺癌细胞A549的可行性和效率。方法应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载E1A基因,制备纳米级粒子混合物,检测其包埋率、体外释放情况及粒径大小。用制备的包裹DNA纳米粒子转染人肺腺癌细胞A549,并以阳离子脂质体为对照,用PCR、RT-PCR方法分别检测转染细胞中E1A基因DNA整合和mRNA表达。结果制备的纳米粒子粒径为150～280nm,包埋率为0.78%,体外释放约为22d;在转染相等质量的DNA情况下,纳米组所得克隆数较脂质体组多（P〈0.05）;PCR、RT-PCR结果表明纳米粒子和脂质体转染细胞均有E1A基因整合和mRNA表达。结论成功制备了纳米粒子,纳米粒子可携带外源基因进行基因转染。     

Apoptosis Inducing Effect of Andrographolide on TD-47 Human Breast Cancer Cell Line

Andrographolide isolated from Andrographis paniculata Ness (Acanthaceae) at 0.35 mM, 0.70 mM and 1.40 mM induced DNA fragmentation and increased the percentage of apoptotic cells when TD-47 human breast cancer cell line was treated for 24, 48 and 72 h. The results demonstrated that andrographolide can induce apoptosis in TD-47 human breast cancer cell line in a time and concentration-dependent manner by increase expression of p53, bax, caspase-3 and decrease expression of bcl-2 determined by immunohistochemical analysis.     

蟾酥胶囊含药血清诱导人肝癌细胞凋亡的检测

目的观察蟾酥胶囊含药血清对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的诱导作用。方法采用中药血清药理学方法,选择不同浓度含药血清作为实验组,分别与人肝癌BEL-7402细胞共同孵育24h、48h,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期变化及Ap02．7蛋白的阳性表达率;琼脂糖凝胶电泳测定DNA Ladder;均与10％无药血清组做对照。结果流式细胞仪检测可见,各实验组细胞G、S期下降,Q／M期升高,产生凋亡峰(sub-G1期),Apo2．7蛋白表达的阳性峰明显增高,细胞凋亡率与作用时间、含药血清浓度有一定的时效和量效关系;孵育48h,可见DNA Ladder出现。结论蟾酥胶囊含药血清可以诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡,提示蟾酥胶囊是一种有潜力的治疗肝癌药物。     

GFP和RFP报道基因在人体不同细胞中转导率的比较研究

目的 比较慢病毒载体介导的绿色荧光蛋白（GFP）和红色荧光蛋白（RFP）报道基因在人体不同细胞中的转导率,为再生医学和组织工程学研究中报道基因的选择提供依据.方法 将构建的GFP和RFP慢病毒载体分别转染人骨髓间充质干细胞（hMSC）、人脐静脉内皮细胞株（Eahy926）和人肺泡上皮细胞株（A549）.4d后,用流式细胞仪检测GFP和RFP的转导率,并利用激光共聚焦显微镜观察GFP和RFP的表达特征.结果 GFP和RFP在hMSC、Eahy926和A549三种细胞间的转导率均有显著性差异（P﹤0.01）;在hMSC或Eahy926或A549的同种细胞中GFP和RFP的转导率也有显著性差异（P﹤0.01）;RFP在部分Eahy926和A549细胞局部高表达.结论 慢病毒载体介导的GFP和RFP报道基因在人体不同细胞中的转导率明显不同.     

稳定表达ALB启动子及荧光素酶报告基因的肝干细胞株的构建

目的 构建稳定表达ALB启动子及荧光素酶报告基因的肝干细胞株.方法 PCR扩增获得ALB启动子,并与pBGLuc连接获得携带ALB启动子及荧光素酶报告基因的pBGLuc-ALB质粒,脂质体转染质粒到不同细胞,ALB-GLuc活性检测功能.构建逆转录病毒,感染HP14.5肝干细胞株获得携带ALB启动子及荧光素酶报告基因的稳定细胞株,经Dex、HGF体外诱导后第3、6、9、12天ALB-GLuc检测荧光素酶活性,免疫荧光检测ALB的表达.结果 PCR、酶切及测序结果显示ALB启动子正确插入至荧光素酶GLuc基因上游,HEK293、HP14.5、LC14d及Hepa1-6细胞中ALB-GLuc活性与免疫荧光结果一致.HP14.5 ALB-Gluc稳定细胞株在高浓度的稻瘟菌素中存活,免疫荧光结果显示Dex、HGF诱导后细胞中ALB的表达逐渐增强,并与ALB-Gluc活性升高一致.结论 成功构建了稳定表达ALB启动子及荧光素酶报告基因的肝干细胞株,为研究肝干细胞的体外成熟分化提供了重要的细胞手段.     

中药博癌丸对人肝癌细胞株HepG-2细胞凋亡及相关调控基因的影响

目的:研究中药博癌丸诱导人肝癌细胞株HepG-2细胞凋亡及对相关调控基因表达的影响。方法:采用流式细胞术检测HepG-2凋亡细胞,采用免疫组织化学方法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2、P53的表达。结果:(1)10%、15%的博癌丸药物血清作用48h后,HepG-2细胞凋亡率均显著高于空白对照组,P<0.05;15%博癌丸药物血清组与阳性药物对照组比较无显著性差异,P>0.05。(2)5%、10%、15%博癌丸药物血清均能上调HepG-2凋亡调控基因Bax、P53的表达,P<0.05~0.01,并与剂量有关;15%博癌丸药物血清组与阳性药物对照组比较无显著性差异,P>0.05。结论:博癌丸能诱导HepG-2细胞凋亡,上调促凋亡基因Bax和P53的表达。     

可溶性人干细胞因子与EGFP融合基因的构建及真核表达

目的　可溶性人干细胞因子 (SCF)膜外活性区与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)融合基因表达载体的构建及其表达。方法　应用基因工程技术构建重组载体 ,电穿孔转染CHO K1细胞株 ,荧光分光光度计检测上清液中融合蛋白的表达 ,流式细胞仪检测其活性。结果　融合基因在瞬时转染的真核细胞中获得表达 ,并分泌至上清 ,且SCF EGFP融合蛋白中分子标签EGFP未影响可溶性人SCF膜外活性区的结构及其生物学活性。结论　可溶性人干细胞因子与EGFP融合基因载体构建成功 ,表达的融合蛋白具有生物活性 ,为进一步研究SCF对造血干细胞的生物学作用奠定了基础。     

蝎毒联合ADM对人乳腺癌MCF-7/细胞的凋亡诱导作用及其耐药逆转的研究

目的探讨蝎毒(BMK)联合阿霉素(ADM)对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞的凋亡诱导及其耐药逆转作用。方法MTT法、荧光分光光度法、流式细胞术、紫外分光光度术和免疫细胞化学法。结果①非细胞毒性剂量(3.0μg/m l)蝎毒能显著降低MCF-7/ADM的IC50(P<0.01),增加MCF-7/ADM细胞内ADM的药物积累(P<0.01)。②蝎毒(3.0μg/m l)联合ADM后增强了对耐药细胞的凋亡诱导作用,凋亡率由8.9±0.01%上升为12.6±0.21%(P<0.01)。③蝎毒(3.0μg/m l)能够显著降低耐药细胞内谷胱甘肽S转移酶(GSTs)酶的活性(P<0.01)。结论蝎毒能够部分逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性,其逆转机制与抑制耐药细胞GSTs活性有关。     

识别猪SLA的特异性人T细胞系TCR BV基因取用格局和CDR3结构多样性分析

不同T细胞克隆TCR分子的序列不同 ,所识别的抗原特异性也不同。其中第三互补决定区 (CDR3)变异最大 ,是TCR主要的抗原结合部位。本文采用荧光标记半定量PCR技术 ,用DNA测序仪作程序分析 ,了解猪细胞抗原致敏前后的人T细胞群和 5个T细胞系 2 4个TCRBV基因家族取用格局 ,并以TCRα链C区的基因片断作为内参对取用情况作定量估计。发现首次抗原致敏后培养 2周的T细胞除了BV2 4、BV8和BV10未能检测出 ,其它BV基因都有不同程度的取用。然而 ,5个细胞系的TCRBV基因呈现十分有限的取用格局 ,其中两个CD4+ T细胞系都取用BV12和BV14;3个CD8+ T细胞系中都优势取用BV1,有两个还取用BV19。CD4+ T细胞系和CD8+ T细胞系之间TCRBV无交叉取用 ,提示两类细胞识别的抗原表位存在差异。进一步用变性凝胶扫描分析上述T细胞系取用TCRBV中的CDR3的多样性 ,发现未经抗原致敏的T细胞BV的CDR3结构为多峰型且呈正态分布 ,表明涉及多种结构不同的细胞克隆 ;而抗原特异性T细胞系CDR3除了一个CD8+ T细胞系BV1有两个主峰外其它无例外地都显示单峰或者仅一个主峰 ,这从另一个角度证明建系T细胞的单克隆性。