应用羊水细胞间期荧光原位杂交技术诊断胎儿Down综合征

目的 建立以未培养的羊水间期细胞直接制片进行荧光原位杂交(FISH)的简便方法并应用于Down综合征产前诊断。方法 Down综合征患者外周血染色体标本,以及10例产前诊断的孕妇,在妊娠16～20周行羊膜腔穿刺术,羊水细胞制片并以胃蛋白酶进行简单处理后,用位于染色体21q22.3区域的人类基因组BAC克隆探针进行荧光原位杂交。结果 全部杂交成功,信号强,背景低。讨论 该技术简便、稳定、易掌握,适用于检测胎儿Down综合征的快速产前诊断。     

FISH技术在骨髓/血液标本中的应用体会

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术对白血病预后相关基因的检测结果已作为白血病危险度分层的参考指标。本文现介绍FISH技术在骨髓/血液标本中的一些应用体会。     

口腔脱落细胞结合荧光原位杂交方法诊断Pallister-Killian综合征一例

目的 通过1例 Pallister-Killian综合征(Pallister-Killian syndrome,PKS)的临床报道,介绍利用口腔脱落细胞结合荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术对PKS进行无创性快速临床诊断的方法.方法 用棉签拭子取患者两侧颊黏膜口腔脱落细胞,用Abbott/Vysis LSI TEL(12p13)/ AML1(21q22)以及CEP 12荧光探针进行荧光原位杂交检测.结果 患者双侧颊黏膜LSI TEL/AML1探针杂交区93%～95%(186/200～190/200)细胞核可见4个绿色荧光信号;CEP12探针杂交区93%～95.5%的细胞核(186/200～191/200)可见3个绿色荧光信号.结论 在接到标本15 h内准确得到FISH检测结果,显示为嵌合型12号短臂等臂染色体.确诊该患儿为 Pallister-Killian综合征.用FISH方法对口腔脱落细胞进行检测,为该类疾病进行准确、快速、无创性诊断提供了新的检测途径.     

实时控制FISH预处理中酶消化的操作

荧光原位杂交( fluorescence in situ hybridization, FISH)是通过荧光素标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交,在荧光显微镜下观察探针的杂交信号。在产前诊断、肿瘤遗传学等领域研究得到广泛应用。然而在FISH检测过程中,有多种因素(如组织标本的固定、切片厚度、酶的消化、杂交后洗涤)影响检测结果。其中影响最多的是蛋白酶的预处理,即蛋白酶的种类及消化时间[1-8]。作者在实验中发现,控制消化时间固然重要,但掌握组织或细胞消化的程度更重要。实验中预处理控制水浴温度、酶消化时间,均要达到组织去蛋白的效果,否则难以做出信号满意的FISH标本。本文采用镜下直接观察消化的组织或细胞,判定消化程度,结合消化时间来决定是否终止消化,有效保证FSIH检测的成功,现介绍如下。     

不同基因组合荧光原位杂交在黑色素瘤中的辅助诊断价值

目的探讨多基因组合联合CDKN2A及MYC基因荧光原位杂交(FISH)检测在黑色素瘤中的辅助诊断价值。方法对2017至2019年于复旦大学附属肿瘤医院确诊的56例黑色素瘤及36例良性黑色素细胞痣进行包括6p25(RREB1)、6q23(MYB)、11q13(CCND1)和CEP6基因位点的第一代组合FISH检测及9p21(CDKN2A)、8q24(MYC)基因FISH检测, 根据Gerami学者所建立的阳性标准对FISH结果进行判读, 分别统计不同基因组合FISH检测在黑色素瘤辅助诊断中的灵敏度及特异度, 并进一步分析不同临床病理特征与FISH检测灵敏度的关系。结果 56例黑色素瘤病例中有52例可准确判读FISH结果, 第一代4色组合FISH检测阳性病例为36例(69.2%), 其中最常见的基因异常为RREB1信号扩增(30/52, 57.7%), 其次分别为CCND1信号扩增(20/52, 38.5%)、MYB信号CEP6信号(17/52, 32.7%);进一步联合9p21、8q24及CEP9组合探针检测结果显示...     

HER2银染色原位杂交结果与前处理条件的相关性

HER2基因扩增和／或HER2蛋白过表达是判断乳腺癌患者预后的重要风险评估因子,同时也是判断曲妥珠单抗靶向治疗是否适用的重要依据。评价HER2状态的方法有免疫组织化学染色法（ IHC）、荧光原位杂交（ FISH）、显色原位杂交（CISH）及银染原位杂交（SISH）。 SISH法在亮视野下观察切片,切片可长期保存,观察结果与FISH结果的符合率高达90％～99％［1-5］。2013年美国临床肿瘤学会／美国病理医师学院（ASCO／CAP）乳腺癌HER2检测指南及中国乳腺癌HER2检测指南（2014版）相应增加了亮视野原位杂交的检测及判读指南等内容［6-7］,使得HER2 SISH检测技术逐步走向规范化、标准化。为了更顺利的开展HER2 SISH的检测,提高检测的成功率,我们分析不同前处理条件对HER2 SISH染色结果的影响。     

一例套细胞淋巴瘤的临床和细胞遗传学分析

目的 对近期检出的1例外周血白细胞高于200×109/L的套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)进行细胞遗传学分析,为MCL的诊断提供依据.方法 通过骨髓及外周血涂片对患者进行形态学检查,采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)及荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检查对患者进行确诊.结果 骨髓细胞形态学显示淋巴系异常增生,成熟淋占90.0%,幼淋占1.5%.过氧化物酶和糖原染色阴性.经流式检测R1门淋巴细胞占93.9%,其中CD19+CD23+为7.6%,CD19+CD5+占96.9%,符合MCL的特征.FISH检测显示72%细胞存在IgH重排信号(144/200);66%细胞存在IgH/CCND1融合信号(132/200),提示患者存在t(11;14)易位;61.5%细胞存在p53缺失信号(123/200).结论 间期荧光原位杂交、FCM及免疫组化染色等检查有助于MCL的诊断.     

新疆地区950例荧光原位杂交技术联合羊水培养核型分析产前诊断的应用

目的探索荧光原位杂交(FISH)检测联合羊水培养核型分析在产前染色体疾病诊断中的应用价值;方法采集妊娠16周-26周、有产前诊断指针孕妇的羊水标本950例,采用13/18/21/X/Y染色体特异探针对未培养羊水进行FISH检测,同时将所有标本进行细胞培养核型分析;结果 FISH检测与细胞培养核型分析报告率均为100%;FISH在常见染色体非整倍体异常方面与核型分析保持高度一致性;FISH的检测结果可以提示部分嵌合体,可以明显提高异常病例核型报告检出的效率及准确度;结论荧光原位杂交(FISH)计数具有较高的细胞遗传检测效率;综合评估两种方法的优缺点及效率,关于我区产前诊断,理想中办法是将FISH检测与细胞培养核型分析联合运用。     

FISH在产前诊断及遗传咨询中的应用

荧光原位杂交(FISH)是近年发展起来的一种分子生物学、细胞遗传学及免疫学技术相结合的全新技术,在基础生物学领域和临床研究中得到广泛应用。FISH是一种非放射原性杂交法,它利用特殊的荧光素标记DNA探针,在染色体制片、细胞滴片或组织切片上进行DNA杂交,经免疫荧光显色,可以检测细胞内DNA或RNA存在与否,既可以显示染色体中期分裂相,又能显示未培养的间期核[1]。可用于性别鉴定、染色体非整倍体诊断、染色体结构异常诊断、基因定位、间期细胞遗传学及肿瘤遗传学方面的研究。一、FISH在产前诊断中的应用1.用于绒毛样本(CVS)的染色体分析绒毛细胞是胚胎外胚层细胞,其遗传信息与胎儿相同。因为绒毛膜绒毛取材获取的绒毛量相对较少,有时不能得到足够可够分析的染色体中期分裂相,给诊断带来困难,故同时应用FISH进行分析以提供更多的遗传信息,可及早做出诊断。孕早期的早检查、早诊断,可及时发现胎儿染色体异常,使孕妇在早期终止妊娠。当孕早期对绒毛检测无结果时,还可进一步于孕中期羊水细胞检测。Toth[2]等人为研究FISH技术用于诊断Down综合征,取331份标本,至少分析了50个细胞,无1例假阳性与假阴性。间期细胞FISH所分析...     

荧光原位杂交技术用于羊水直接制片的研究

目的 为杜绝畸形儿出生。方法 应用简单重复序列DNA特异性探针，借助于荧光原位杂交技术，对3例孕妇行羊水穿刺，抽取10ml羊水直接制片，用FITC-AVIDIN检测，计数进行荧光原位杂交。分别做了21号，X，Y3种探针。同时作对照，以探讨孕早期产前诊断的新方法。结果 1例羊水间期细胞核中可见1个黄绿色X杂交信号，未见Y杂交信号，证明45，X，1例羊水间期细胞核中可见Y杂交信号。1例可见X，X杂交信号，3例均未见21号杂交信号。结论 FISH用于产前诊断，羊水直接制片方法快捷，准确。     

伴变异型Ph易位的慢性髓细胞白血病的分子遗传学研究

目的探讨荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）及多重荧光原位杂交（multiplex FISH．M-FISH）技术在检测伴变异型Ph易位（variant philadelphia translocation，vPh）的慢性髓细胞自血病（chronic myeloid leukemia，CML）中遗传学改变的意义。方法对10例常规R显带显示伴vPh的CML以双色双融合FISH技术检测其染色体标本。对于间期细胞中仅有单个融合信号的标本，观察其中期细胞，以确定是否为衍生9号染色体[der（9）]缺失。同时对这10例CML进行M—FISH技术检测。结果FISH技术在10例伴vPh的CML中检测到5例存在der（9）缺失。M—FISH检测到除22号染色体外，1、3、5、6、8、10、11和17号染色体也参与vPh，发现了常规细胞遗传学未发现的异常，包括2种未见报道的异常。结论对伴vPh的CML联合使用常规细胞遗传学、FISH、M—FISH技术可使遗传学诊断更加完善。     

用荧光原位杂交技术检测早期自然流产胚胎染色体数目异常

目的应用荧光原位杂交（FISH）技术检测早期自然流产胚胎染色体数目异常,以期发现经典的细胞遗传学方法可能遗漏的信息,探讨荧光原位杂交（FISH）技术用于诊断绒毛间期细胞染色体数目异常的临床应用价值。方法采用FISH技术对我院200例50—84天的自然流产胚胎的绒毛进行7条染色体数目（13、16、18、21、22、x和Y）的快速检测。同时,将绒毛接种、培养,进行常规细胞染色体核型分析,作为FISH检测结果的对照。结果被检测的200例样本中,用FISH检测,均获得诊断结果,检测成功率为100％,而常规细胞染色体核型分析,则只有169例获得诊断结果,检测成功率为84．5％。除一例染色体结构异常的标本FISH未检测出来外,余下标本,FISH检测结果与常规细胞染色体核型分析结果均相符合。结论FISH技术与传统的绒毛细胞培养染色体核型分析相比,过程迅速,方法简单,提高了诊断的成功率,但无法完全取代传统的染色体核型分析,应将两者结合应用于}临床。     

荧光原位杂交的原理及在产前诊断中的应用

荧光原位杂交（fhorescenceinsituhybridization．FISH）是近几年来由细胞遗传学、分子生物学及免疫学技术相结合而产生的一种新技术。由于其兼备了细胞遗传学与分子生物学技术，克服了使用单一细胞遗传学技术的局限性，故在产前诊断、基因定位、肿瘤细胞遗传学、临床遗传病检测等研究领域显示出重要应用价值。下面就有关荧光原位杂交的原理及在产前诊断中的应用作一简单介绍。所谓FISH即利用生物素（biotin）等标记的已知外源核酸作为探针，通过特定的碱基互补序列与玻片（包括组织切片、细胞滴片、染色体制片）上待测核酸进行原位杂交…     

双色双融合与额外信号探针在BCR/ABL融合基因检测中的比较及其意义

目的 探讨DCCF(dual color dual fusion)探针与ES(extra signal)探针在BCR/ABL融合基因检测中信号表现的特点,并明确其信号特征与染色体核型的相互关系.方法 对初治65例慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)及50例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓标本进行BCR/ABL的DCDF探针的荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测,FISH阳性标本则使用ES探针再次进行荧光原位杂交进行BCR断裂点的检测,同时对其中47例CML和40例ALL进行了核型分析.结果 FISH结果示65例CML均为BCR/ABL阳性,DCDFFISH中有17例为非典型信号表现,ES-FISH有12例为非典型信号表现;50例ALL中7例BCR/ABL阳性,ES探针显示5例BCR断裂点位于m-bcr,2例位于M-bcr.核型分析CML检出Ph阳性98%(43/44),ALL检出Ph阳性22%(7/32).结论 DCDF-FISH、ES-FISH以及核型分析各有其特性.根据每种方法的特性,对实验结果进行综合分析可对遗传学特征作出更准确判断.     

常规细胞遗传学和间期荧光原位杂交检测

常规细胞遗传学和间期荧光原位杂交检测Ｐｈ＋ＣＭＬ患者８三体［英］／ＦｕｇａｚｚａＧ…／／ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅｔＣｙｔｏｇｅｎｅｔ．－１９９４，７２．－２４～２７８三体是血液性疾病最常见的染色体异常之一。它与合并骨髓增生综合征，骨髓发育不良综合征的白血...     

双色双融合与额外信号探针在BCR/ABL融合基因检测中的比较及其意义

目的 探讨DCCF(dual color dual fusion)探针与ES(extra signal)探针在BCR/ABL融合基因检测中信号表现的特点,并明确其信号特征与染色体核型的相互关系.方法 对初治65例慢性粒细胞白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)及50例急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓标本进行BCR/ABL的DCDF探针的荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测,FISH阳性标本则使用ES探针再次进行荧光原位杂交进行BCR断裂点的检测,同时对其中47例CML和40例ALL进行了核型分析.结果 FISH结果示65例CML均为BCR/ABL阳性,DCDFFISH中有17例为非典型信号表现,ES-FISH有12例为非典型信号表现;50例ALL中7例BCR/ABL阳性,ES探针显示5例BCR断裂点位于m-bcr,2例位于M-bcr.核型分析CML检出Ph阳性98%(43/44),ALL检出Ph阳性22%(7/32).结论 DCDF-FISH、ES-FISH以及核型分析各有其特性.根据每种方法的特性,对实验结果进行综合分析可对遗传学特征作出更准确判断.     

应用荧光原位杂交技术检测慢性粒细胞白血病的融合基因

目的 应用荧光原位杂交技术(FISH)直接检测慢性粒细胞白血病(CML)的融合基因(BCR/ABL)以辅助临床诊断和治疗白血病.方法 应用FISH技术检测25例CML自1991年-2008年制备染色体剩余细胞悬液的BCR/ABL,6例是2008年的标本,7例是1991年-1995年的标本,余10例标本是2001年-20...     

FISH技术在分析染色体异常及染色体断裂点作图中的应用

荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）技术是一门新兴的分子细胞遗传学技术，不仅应用于科研，在对于疾病的预测、检测、诊断中也发挥了重要作用。该文主要从染色体水平，讨论以DNA探针为主的FISH在分析染色体异常（chromosomal aberrations，CA），包括染色体数目的改变、重复、扩增、缺失、易位，及染色体断裂点精细作图中的应用，以及展望FISH目前的发展状况。     

脂肪肉瘤中DDIT3荧光原位杂交分离探针判读陷阱及其意义分析

目的:探讨脂肪肉瘤中DDIT3荧光原位杂交（FISH）分离探针判读陷阱及其意义。方法:收集DDIT3端粒侧信号簇状扩增的脂肪肿瘤18例,回顾其HE形态、免疫组织化学及临床病理资料,加做MDM2、CDK4扩增FISH检测,结合临床资料、形态学、免疫学、分子结果对其重新诊断。结果:18例DDIT3端粒侧信号扩增的脂肪肿瘤均...     

HER-2/neu基因探针的制备及特异性分析

目的 筛选、制备乳腺癌标志基因--HER-2/neu的标记探针,利用间接荧光原位杂交(FISH)技术,探索其临床应用价值.方法 通过文库构建、多级筛选、PCR鉴定、序列分析等技术获得HER-2/neu基因组片段,缺口转移法制备生物素标记探针,与生物素-亲和素放大系统和多种荧光显色系统组合,针对病理标本、细胞涂片进行间接FISH检测.结果 制备的HER-2/neu基因探针可以特异性地检测乳腺癌阳性、胃癌阳性病理片,也可以特异性检测阳性、阴性细胞标本,并与不同的荧光显色系统结合使杂交信号可以选择性地呈现绿色或红色荧光.结论 高特异性的HER-2/neu基因探针和灵活的显色系统为FISH的临床应用奠定了基础.