半巢式PCR技术检测牙菌斑唾液及胃黏膜中幽门螺杆菌

本文通过半巢式PCR对 82例慢性胃炎和十二指肠溃疡患者的牙菌斑、唾液及胃黏膜中的幽门螺杆菌 (Hp)进行了检测。 82例患者中活动期十二指肠溃疡患者 2 4例 ,慢性浅表性胃炎 2 7例 ,慢性萎缩性胃炎 31例 ,其中男性 4 2例 ,女性 4 0例 ,平均年龄 4 2 .3岁。半巢式PCR首先以 1对引物扩增出磷酸葡萄糖胺变位酶基因 (phosphogluco saminemu tasegene ,glmM) 75 6bp的片段作为模板 ,再以半巢式引物扩增出 4 96bp的最终产物。引物 0 :5′ CGCGAGCCACAACCCTTTTGAAG 3′ ;引物 1:5′ CGCGCTCACTTGCAAAGCGCACAC 3′;引物 2 :5′…     

荧光定量PCR检测4种常见性传播疾病DNA

目的调查我市近5年来4种常见性传播疾病(STD)的感染情况及流行情况。方法用荧光定量PCR技术对15481例可疑性传播疾病患者,对四种最主要的性传播疾病病原体———淋球菌、沙[衣原体、解脲支原体和人乳头状病毒进行检测,并进行详细的统计分析。结果近5年来4种常见性传播疾病病原体:沙[衣原体、解脲支原体和人乳头状病毒阳性率持续上升,淋球菌略有下降。淋球菌、沙[衣原体、解脲支原体和人乳头状病毒阳性率分别为15.90%、22.0%、36.57%、36.06%。结论性传播疾病已构成流行,其原因可能与混合感染和治疗不彻底有关,应引起全社会的高度重视。     

三种方法检测胃黏膜活检标本幽门螺杆菌感染的病理诊断价值

目的 探讨不同检测方法对胃黏膜活检标本中幽门螺杆菌(helicobacter pylori,HP)感染的诊断价值。方法 收集胃黏膜活检标本200例,采用美蓝染色、荧光染色及免疫组化染色检测HP的感染情况,分析各方法HP检测结果的一致性。结果 胃黏膜活检标本中HP的检出率:美蓝染色75%(150/200),荧光染色79%(158/200),免疫组化染色68.5%(137/200)。荧光染色的阳性率最高,κ系数检验结果显示,三种方法的检测结果高度一致,差异有统计学意义(P0.05),免疫组化染色与美蓝染色的一致性最高(κ=0.840)。HP的感染率与炎症程度、活动度呈正相关,与肠化生呈负相关(P0.05)。结论 免疫组化染色可在蛋白水平检测HP的表达,并可预测疾病的发展,是检测胃黏膜活检标本中HP的最佳方法。     

荧光定量PCR技术研究进展

基于荧光能量传递技术的荧光定量PCR技术可实时监测PCR反应 ,准确敏感地测定模板浓度及检测基因变异等 ,它的出现 ,极大地克服了原有PCR技术存在的不足如交叉污染等问题 ,并改善了PCR技术的应用如可广泛应用于临床观测患者病情发展及预后 ,判断药物疗效等。本文概述了目前几种荧光定量PCR技术即Taqman、Amplisensor、分子信标、Lightcycler及复合探针法的原理及特点。便于更好地理解及应用这项技术。     

应用荧光定量PCR及ELISA法检测弓形虫感染分析

目的 :为了准确检测产前优生咨询妇女弓形虫感染及掌握不同时期弓形虫的量值变化情况。方法 :本室采用荧光定量PCR技术并结合ELISA法同时对 16 98例产前妇女进行联合检查。并将其结果进行对照分析。结果 :发现ELISA不同抗体阳性率和荧光定量PCR阳性率在检测结果上有一定的差异。在ELISA抗体仅一项阳性的患者中 ,IgG抗体阳性其荧光定量PCR检测值也为阳性的百分率最高 ,达 88.9% ,(P >0 .0 5 ,无差异 )。其次为IgM抗体阳性 ,符合率达 6 2 .5 % (P <0 .0 5 ,有差异 )。Cag循环抗原阳性最低 ,仅 31.8% (P <0 .0 1,有显著差异 )。在二项抗体同为阳性的患者中 ,IgG和IgM双阳其荧光定量PCR检测也为阳性的百分率最高 ,达 98.5 %。IgG与Cag双阳、IgM与Cag双阳的分别为 86 .8%、85 .4%。对 3项抗体全为阳性的 3名患者来说 ,两种方法结果一致。另外在 12 14名ELISA阴性的患者中 ,用荧光定量PCR法仍检测 5例阳性 ,阳性率为 0 .41%。结论 :由于荧光定量PCR技术增加了探针杂交 ,它的特异性及准确性都大大提高 ,可靠程度优于ELISA ,具有重要的临床参考价值。但在人体感染的某些时期 (Igm ,Cag单项阳性时 )荧光定量PCR法也会存在漏诊的情况。由此可见 ,这两种方法都各有其优缺点 ,只有将两种方法有机结合起来 ,才能对弓     

荧光定量 PCR与半定量PCR检测HBV DNA的对比分析

目的：对照分析荧光定量PCR与半定量PCR检测血清HBV DNA的载量，为临床基因检测实验室提供方法学选择依据。 方法： 取164份临床检测标本各用荧光定量PCR与半定量PCR检测，结果作统计学分析。 结果: 两种检测方法的灵敏度和特异度没有显著差异（χ2 =1.75，P>0.05）。 结论: 临床基因检测实验室可用半定量PCR法替代荧光定量 PCR法检测血清HBV DNA的载量。     

荧光定量PCR法检测乙型肝炎病毒DNA

目的：了解不同乙型肝炎病毒(HBV)感染患者血清HBV-DNA含量与乙肝血清免疫标志物的关系并探讨其临床意义。方法：用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法定量检测375例不同临床类型HBV感染者及70例正常人血清HBV-DNA含量。结果：血清HBsAg阳性组与HBeAg阳性组HBV-DNA的检出率及含量均明显高于HBsAg阴性组和HBeAg阴性组，且HBeAg即使阴性，不论HBeAb阳性组或阴性组均仍有较高的HBV-DNA检出率。不同临床类型HBV感染者中均有HBV-DNA的检出。结论：定量PCR可真实反映HBV感染、复制及病程变化，对乙型肝炎临床诊断及治疗均有一定的临床意义。     

荧光定量PCR检测结果的报告方式探讨

目的 探讨荧光定量PCR检测结果的报告方式.方法 以荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA结果为例,用Poisson分布的概率函数公式计算一次抽样检测出现的三种结果的概率.结果 1次抽样Ct（阈循环数） ≥30时,总体起始拷贝数的95%可信区间上限是3.7;1次抽样Ct≤28,总体起始拷贝数为1的概率小于0.05（95%可信限）;1次抽样检测结果出现0时总体为1～8的概率之和是0.5818;2～6次抽样检测结果都出现0时,总体为1～8的概率之和分别是0.1565,0.0524,0.0187,0.0068,0.0025,要使报告血清中不存在HBV-DNA的可信度达95%以上（P＜0.05）,至少要进行4次抽样检测且Ct都≥30.结论 1次抽样检测Ct≥30时报告＂HBV-DNA≤4＊f拷贝/ml（Ct≥30）＂,其中f为抽样＂拷贝数/μl＂换算成报告拷贝数＂拷贝数/ml＂的换算因子;1次抽样检测Ct≤28时报告仪器自动计算的N值＊f;1次抽样检测28＜Ct＜30时,报告＂HBV-DNA＜4＊f拷贝/ml（Ct＝XX.X）建议追踪检查＂,其中XX.X为实测Ct值;报告单中参考范围应是＂HBV-DNA≤4＊f拷贝/ml（Ct≥30）＂.     

应用荧光定量PCR法检测病理组织中幽门螺旋杆菌感染

目的探讨荧光定量PCR方法检测病理组织中幽门螺旋杆菌（Hp）的效果,为临床Hp感染诊断提供快速有效的检测方法。方法应用荧光定量PCR法及苯胺蓝染色法分别对106例临床送检胃窦黏膜组织标本进行幽门螺旋杆菌检测,对检测结果进行对比分析。结果在106例胃窦标本中,荧光定量PCR法检测阳性例数68例,阳性率为64．2％,苯胺蓝染色法检测阳性例数46例,阳性率为43．4％。两种方法检测阳性率比较有显著性差异（P〈0．05）。结论荧光定量PCR技术用于检测病理组织中幽门螺旋杆菌,具有灵敏度高、特异性强的特点,对确诊胃镜活检标本中幽门螺旋杆菌感染具有重要应用价值。     

荧光定量PCR法检测母乳巨细胞病毒感染和母婴传播

目的了解母乳人巨细胞病毒（HCMV）感染状况和母婴传播情况.方法应用荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测390份母乳中HCMV-DNA含量,其中236份母乳配对与患儿血液或尿液中HCMV-DNA含量作一定分析.结果可疑或确诊HCMV感染患儿母亲母乳HCMV-DNA阳性率达71.28%,HCMV-DNA阳性母乳喂养的婴儿,其血或尿HCMV-DNA阳性率明显高于HCMV-DNA阴性母乳喂养的婴儿.结论HCMV感染母乳是婴儿获得性感染的主要途径.     

PCR快速检测幽门螺杆菌

应用ＰＣＲ扩增１５个幽门螺杆菌分离株的ＤＮＡ，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳均显示一条２９８ｂｐ的区带，而１２株与幽门螺杆菌相关的肠道杆菌都不能扩增出该片段。ＰＣＲ可检出少至１００个幽门螺杆菌细胞，并能检出胃粘膜活检标本中的此菌，全部实验可在５小时内完成。     

利用荧光定量PCR技术对人肠道乳酸杆菌进行定量检测

目的应用荧光定量PCR技术对人粪便内乳酸杆菌进行定量检测,建立乳酸杆菌的荧光定量PCR检测体系。方法依据人肠道乳酸杆菌16S rDNA序列设计属特异性引物,应用荧光定量PCR技术检测乳酸杆菌的16S rDNA,对粪便中的乳酸杆菌进行定量检测和分析,并与用传统方法所获得的结果进行比较。结果荧光定量PCR检测乳酸杆菌和传统方法检测乳酸杆菌获得的结果接近,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论荧光定量PCR技术比传统方法省时、省力,且敏感性和特异性更高。     

实时荧光定量PCR检测幼儿腹泻腺病毒

目的:建立实时荧光定量PCR方法,并检测腺病毒Ad40或Ad41感染的粪便标本。方法:用T-A克隆技术构建含腺病毒基因的载体作为标准模板,采用Taqman探针标记技术,建立实时荧光定量PCR方法。采集幼儿腹泻标本248例,分别用直接免疫荧光法和实时荧光定量PCR检测腺病毒Ad40和Ad41,比较两种方法的阳性检出率。结果:实时荧光定量PCR灵敏度和准确度(95.60%和96.80%)均高于直接免疫荧光法(78.5%和82.40%)(P0.05),而两者特异度差异无统计学意义(97.30%vs 96.70%,P0.05)。248例待检样本,直接免疫荧光法检出率为2.42%(6/248),实时荧光定量PCR检出率为7.66%(19/248),明显高于直接免疫荧光法(χ2=3.675,P0.05)。结论:成功建立实时荧光定量PCR检测腺病毒Ad40或Ad41方法。其灵敏度、准确度和阳性检出率经均优于直接免疫荧光法,且简便快速。     

孕妇风疹病毒荧光定量PCR检测的研究

目的研究泉州地区孕妇风疹病毒的感染情况,为进一步诊断、预防和治疗提供科学的依据。方法应用实时荧光定量PCR技术对泉州地区800例孕妇血清中风疹病毒RNA（RV-RNA）进行量化的检测。结果检出阳性患者47例,阳性率为5.88%（47/800）。阳性患者的基因拷贝数均大于参考值（2.00%,每毫升拷贝数）,患者每毫升拷贝数范围位于1.31×10^2～9.38×10^8之间。结论荧光定量PCR检测风疹病毒有其众多的优越性,这对正确诊断、判断预后、研究母婴传播、指导临床都具有重要的理论意义和使用价值。     

荧光定量PCR检测细菌染色体上基因拷贝数

目的建立一种以细菌染色体上1个已知拷贝管家基因作为基准、通过荧光定量PCR检测其他被检基因拷贝数的方法.方法利用荧光定量PCR检测El Tor型霍乱弧菌染色体上目的基因zot与基准基因thyA的Ct（threshold cycle）值差值,根据已知拷贝数菌株N16961的两基因Ct值之差来推算待测菌株中zot基因的拷贝数.结果利用thyA基因作参照,确定11株E1 Tor型霍乱弧菌中zot基因的拷贝数在1～5个之间,对较少拷贝数的检测与Southern blot确认的相同,对多拷贝数检测优于Southern blot的判定.结论本方法可以准确检测菌株染色体上的基因拷贝数.     

肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立及应用研究

目的 建立特异、敏感、快速检测肝螺杆菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法.方法 针对肝螺杆菌flaB 基因的保守区设计特异性引物和探针,建立肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定最PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008-2011年期间采集的1081份临床样本中的肝螺杆菌进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测.结果 建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对肝螺杆菌的检测具有高度的特异性,对幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、泰泽氏菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均无交叉反应,检测的灵敏度达8.3拷贝.标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.227,TaqManMGB探针实时荧光定量PCR效率为100％.对1081份临床样本进行检测,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出86份肝螺杆菌阳性样本,而细菌分离培养则仅检出4份阳性.结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从临床样本中检出肝螺杆菌DNA,检测时间仅为2h.结论 研究建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于肝螺杆菌的快速检测.     

荧光定量PCR检测5种常见性传播疾病DNA结果分析

目的了解我院2009年-2010年2年来5种常见性传播疾病(STD)的感染情况,以期对性病患者的治疗有指导意义。方法应用实时荧光定量PCR技术对我院两年来有可疑性传播疾病病例3457例患者进行5种最常见的性传播疾病病原体—淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、单纯疮疹病毒Ⅱ型和人乳头状病毒进行检测,并进行统计分析。结果人乳头状病毒、解脲支原体和单纯疮疹病毒Ⅱ型阳性率较高,淋球菌、沙眼衣原体阳性率较低。淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、单纯疮疹病毒Ⅱ型和人乳头状病毒阳性率分别为1.66%、2.90%、43.3%、37.2%、60.4%。结论性传播疾病仍处于高发阶段,性病患者为病毒病原体者较难治愈,为细菌病原体者较易治愈,此结果应引起医务工作者的高度重视,同时加强青年人群的健康教育及行为干预是控制性传播疾病蔓延的重点。     

血清幽门螺杆菌抗体定量检测的临床价值

目的:分析体检人群幽门螺杆菌(HP)感染情况,并依据评价血清HP抗体定量检测的临床价值。方法:选取2019-10—2019-11于湖北省人民医院体检的405例体检者为研究对象,并根据尿素~(14)C呼气试验结果分为阳性组(n=223)和阴性组(n=182)。采用聚胶免疫比浊法法检测血清中HP抗体含量,以尿素~(14)C呼气试验结果为标准,评价血清HP抗体定量检测的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果:体检人群中尿素~(14)C呼气试验的阳性率为55.6%,与阴性组相比,阳性组中血清HP抗体含量显著升高(P<0.01)。在尿素~(14)C呼气试验阳性的223例受试者中,其血清HP抗体定量检测阳性的例数为193,该检测敏感度为86.55%;在尿素~(14)C呼气试验阴性的182例受试者中,血清HP抗体定量检测阴性的例数为138,该检测的特异度为75.82%。血清HP抗体定量检测阳性预测值为81.43%,阴性预测值为82.14%。结论:血清抗体定量检测与尿素~(14)C呼气试验结果一致性较好,或可补充尿素~(14)C呼气试验的不足,更好地辅助临床诊断。     

实时荧光定量PCR在检测人ANP基因表达的应用

目的建立心房钠尿肽（ANP）基因mRNA表达水平的实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行初步评价。方法以基因表达产物为模板,建立实时荧光定量PCR检测方法,对样本中的心房钠尿肽含量进行相对定量,比较不同样本组的基因表达水平。结果所建立的实时荧光定量PCR方法熔解曲线中熔解峰单一。肺癌患者胸腔样本的ANP含量为对照样本的4.68倍,血清样本为对照样本的16.03倍。结论所建立的ANP实时荧光定量PCR检测方法具有较高的特异性。肺癌患者胸腔液和血清中ANP的含量明显增高。     

实时荧光定量PCR的应用体会

对于病毒的监测和疾病的诊断,定性检测已不能满足临床需要,实时荧光定量PCR技术(realtime quantitative PCR)于1996年由美国Aplied Biosystems公司推出.