Different suppressive effect of lidocaine on persistent Na^＋ current and transient Na^＋ current in dorsal root ganglion neurons

Objective ：To investigate the different suppressive effect of lidocaine on persistent Na^＋ current and transient Na^＋ current in injured or uninjured dorsal root ganglion neurons. Methods： Totally 23 SD rats were randomly divided into 2 groups： control group （n： 10） and chronically compressed DRG （dorsal root ganglion） group （CCD group, n= 13）. Rats were anesthetized and DRG was isolated. Single DRG neuron was isolated by enzymatic disassociation method. Persistent Na^＋ current （INap） and transient Na^＋ current （INaT） were elicited in voltage clamp mode. Results： The presence of INap was testified in most DRG neurons （38/46 neurons in CCD group and 31/39 neurons in control group, P〉0. 05）. However, the cur- rent density of INap in CCD group （4. 6±0. 6 pA/pF, n=38 neurons） was greater than that in control group （2.5±0.4 pA/pF, n=31 neurons） （P〈0. 05）. The characteristics of INap was observed and found that INap could he blocked by 0.2 μmol/L tetrodotoxin easily. Furthermore, the does-effect relationship of lidocaine on INaP and IN.T were also examined. INaP and IN.T were suppressed by different concentrations of li- docaine, the range for INap was 5-20 μmol/L and for INaT was 0. 05-2 mmol/L. Conclusion： INap and INaT were suppressed by different concentrations of lidocaine. INap was suppressed by very low concentration of lidocaine （5-20 μmol/L）. However, INaT could only be blocked by high concentration of lidocaine （0.05-2 mmol/L）.     

丙戊酸钠对大鼠损伤背根节神经元异位自发放电的抑制作用

目的: 探讨丙戊酸钠(sodium valproate, VPA)对损伤背根节神经元异位自发放电的影响及其时间和剂量关系. 方法: 分离背根单纤维,引导来自损伤背根节(dorsal root ganglion, DRG)神经元的异位自发放电,观察不同浓度VPA对放电频率和放电模式的影响. 结果: VPA可抑制异位自发放电,降低其放电数,并具有剂量依赖关系. 结论: 局部应用VPA可抑制DRG神经元自发放电,这可为外周应用VPA进行镇痛治疗提供依据.     

背根节压迫大鼠脊髓背角广动力神经元电生理学特性研究

目的探讨大鼠腰4、5背根神经节慢性压迫（chronic compression of dorsal root ganglion,CCD）损伤后,脊髓背角广动力（widedynamicrange,WDR）神经元电生理学特性的改变。方法健康SD大鼠随机分为正常组和CCD组（每组12只）,分别检测机械痛敏和热痛敏行为,并利用在体细胞外电生理学方法记录脊髓背角WDR神经元放电。结果CCD术后大鼠出现了机械痛敏和热痛敏行为。与正常组大鼠相比,CCD组大鼠脊髓背角WDR神经元兴奋性增高,表现为有自发放电的神经元比例增加、放电频率增加,对外周感受野轻刷、钳夹等刺激的反应性增强。36．36％（12／33）的CCD组大鼠WDR神经元对Aβ纤维刺激出现后放电现象。结论大鼠腰4、5背根节慢性压迫后引起WDR神经元的兴奋性增加,其可能参与神经病理性疼痛的发生。     

脊神经结扎慢性痛大鼠背根神经节细胞超极化激活电流(Ih)的变化

目的:研究超极化激活电流( hyperpolarization-activated current, Ih )在慢性神经源性痛中的作用.方法:以单侧L5和L6脊神经结扎制备神经源性痛大鼠模型,运用全细胞电压钳技术记录和分析背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)神经元Ih的表达和激活特征.结果:脊神经结扎后,相应节段小直径DRG神经元表达Ih的细胞比率升高,但大、中直径神经元Ih没有改变,另外大、中、小直径神经元Ih的活性增强.结论:神经损伤导致DRG神经元Ih的表达和电流活性发生改变,提示此种电流参与了神经源性痛"外周敏化"的发生.     

交感神经传出兴奋对大鼠慢性压迫背根节神经元放电的调节作用

目的：研究大鼠慢性压迫背根节（dorsal root ganglion,DRG)的交感－感觉耦联现象。方法：采用单纤维记录神经元自发放电的方法,在DRG慢性压迫模型上,电刺激腰交感神经干,观察交感神经传出兴奋对受损DRG神经元自发放电的的调节作用。结果：57％有自发放电的受损DRG神经元对交感神经刺激有反应,其中反应类型有单纯兴奋,先兴奋后抑制和单纯抑制三种形式,反应的幅度随交感刺激持续时间的延长而逐渐增大,受损DRG神经元对交感刺激的这种反应可被静脉注射α受体阻断剂－酚妥拉明所阻断。53％的受损DRG凶对外源性去甲肾上腺素有元反应,其反应形式与交感刺激引起的反应类似,结论：在慢性压迫DRG神经元上存在交感－感觉耦联现象,交感神经节后纤维末梢通过释放去甲肾上腺素,作用于受损DRG神经元的α受体而影响其自发放电。     

Bukatoxin对大鼠背根神经节神经元河豚毒素不敏感型钠离子通道电流的影响

目的:研究东亚钳蝎毒素Bukatoxin对大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元河豚毒素不敏感型(tetrodotoxin-resistant,TTX-R)钠离子通道电流(INa)的影响.方法:在急性分离的大鼠DRG神经元上,应用全细胞膜片钳技术,观察Bukatoxin对DRG神经元TTX-R INa的影响.结果:Bukatoxin浓度依赖性地抑制TTX-R INa.在刺激电压为-10 mV时,20、40、80 μg/ml的Bukatoxin对TTX-R INa峰值的抑制率分别为(18.72±1.27)%、(27.40±4.97)%和(59.02±4.71)%.半数抑制浓度(IC50)为66.28 μg/ml,Hill系数(h)为1.48;80 μg/ml的Bukatoxin可以使TTX-R INa激活曲线向去极化方向移动约3 mV,稳态失活曲线向超极化方向移动6 mV.结论:Bukatoxin可以浓度依赖性的抑制DRG神经元上TTX-R INa,并改变TTX-R INa的激活和稳态失活特性,这可能是其降低外周伤害性信息传人,参与伤害性信息调制的机制之一.     

一种适合膜片钳记录的成年大鼠背根神经节细胞培养方法

目的建立一种适合膜片钳研究的成年大鼠背根神经节（D0rsal root ganglion,DRG）细胞培养方法。方法分离并培养成年大鼠DRG神经元,显微镜下观察培养神经元的形态,膜片钳技术记录培养神经元的基本膜电生理特性及ATP激活电流。结果培养的DRG神经元形态结构完整;其静息膜电位在正常范围内,可记录到诱发动作电位及钠电流;在膜片钳全细胞记录模式下,能稳定地记录到ATP诱发电流。结论培养的成年大鼠DRG神经元适合膜片钳试验。     

阈下膜电位振荡介导受损DRG神经元的交感敏化现象

目的:在背根节(dorsal root ganglion,DRG)慢性压迫这一神经病理性痛模型研究交感敏化的膜机制. 方法:采用离体细胞内记录,在受损DRG神经元观察去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对其膜电位的影响. 结果:NE在受损(40/45)及正常(15/22)DRG 神经元均可以诱发膜电位的去极化过程. NE诱发的膜电位去极化有浓度依赖性且可被酚妥拉明阻断. 仅有部分受损DRG 神经元可在NE诱发的膜电位去极化基础上出现阈下膜电位振荡(subthreshold membrane potential oscillation, SMPO)并随后出现重复放电. 当应用TTX选择性地消除SMPO后,虽然NE诱发的膜电位去极化仍然存在,但神经元的重复放电不再产生. 结论:触发及增大SMPO是NE诱发受损DRG 神经元兴奋效应产生的一个关键因素.     

CNTF、PDGF在成年猫背根节的分布

目的 观察睫状神经营养因子(CNTF)、血小板源性生长因子(PDGF)在成年猫背根节(dorsal root ganglion,DRG)的表达情况.方法 成年健康雄猫5只,心内灌注固定后,随机取一侧L6背根节制作厚20μm冰冻切片,采用免疫组织化学ABC法染色,观察CNTF、PDGF在正常背根节的分布.结果 CNTF、PDGF在成年猫背根节的大、中小神经元均有表达,但以中小神经元的表达为主;阳性反应物主要定位在胞浆;部分纤维也呈阳性反应,未见明显的卫星细胞着色.结论 CNTF、PDGF在成年猫的背根节有表达,可能与背根节神经元的生理功能有关.     

内源性GDNF在针刺促进损伤脊髓神经元轴突出芽中的作用

目的探讨内源性胶质源性神经营养因子(glia derived neurotrophic factor,GDNF)在针刺促进SD大鼠脊髓神经元轴突出芽中的生物学机制。方法 25只雌性SD大鼠随机分为单侧备用根手术组、针刺组、针刺并GDNF抗体封闭组。切除脊髓单侧L1～L3及L5～L6背根节(dorsal root ganglion,DRG),保留L4背根为备用根,制备单侧备用根模型。选择足三里和悬钟、伏兔和三阴交两组穴位进行针刺实验。免疫组化和辣根过氧化物酶(HRP)追踪分别检测GDNF及背根神经节(DRG)源的神经纤维表达变化。结果针刺可显著增加GDNF在受损脊髓中的表达,而抗体封闭可显著逆转该作用。结论针刺可能通过增加内源性GDNF的表达促进损伤脊髓神经元形态和功能修复。     

丘脑背内侧核损毁对帕金森病大鼠内侧前额叶皮层电活动的影响

目的：探讨丘脑背内侧核（MD）损毁对帕金森病（PD）模型大鼠内侧前额叶皮层（m PFC）锥体神经元电活动的影响,阐明MD在PD病理生理过程中的作用。方法：以6-羟基多巴胺（6-OHDA）脑内注射损毁黑质致密部（SNc）复制PD大鼠模型,在大鼠脑中注射鹅膏蕈氨酸（IBO）损毁MD。将24只雄性SD大鼠随机分为正常组、SNc损毁组（PD模型组）、MD损毁组（MD中注射IBO）和SNc+MD联合损毁组（SNc损毁后1周损毁同侧MD）,每组6只。酪氨酸羟化酶免疫组织化学染色观察各组大鼠SNc和腹侧被盖区（VTA）中多巴胺神经元数量,尼氏染色判断电生理记录点的位置和MD损毁情况。观察各组大鼠m PFC中锥体神经元的放电频率、放电间隔（ISI）的变异系数和放电形式。结果：注射6-OHDA后,PD模型组大鼠损毁侧SNc中多巴胺神经元完全消失,同侧VTA中多巴胺神经元数较对侧明显减少（P<0.01）;与正常组比较,SNc损毁组大鼠m PFC锥体神经元的放电频率明显升高（P<0.05）,放电形式趋于爆发式活动（P=0.001）,平均ISI变异系数增加（P<0.01）;MD损毁2周后,S...     

糖尿病大鼠背根神经节神经元TTX-R钠离子通道电流变化及意义

目的:通过研究大鼠糖尿病神经病理性疼痛(DNP)中背根神经节(DRG)神经元TTX-R钠离子通道特征的变化,以探讨此疾病引起痛觉过敏可能的发生机制。方法:8只SD大鼠腹腔注射链尿佐菌素诱导制作糖尿病神经病理性疼痛模型(DNP组),取L5⁶DRG,贴壁消化法行神经元培养,电生理全细胞膜片钳记录离子通道电流;8只同月龄大鼠为正常对照。结果:大鼠糖尿病神经病理性疼痛小直径DRG神经元TTX-R INa电流密度较对照组增高。与对照组比较激活曲线向超极化移动3.9 mV(P<0.05),DNP组具有重复放电的神经元的比率增加。结论:大鼠糖尿病神经病理性疼痛小直径DRG神经元TTX-R钠通道电流的变化是痛觉过敏形成的原因之一。     

益气化瘀方对腰神经压迫模型大鼠背根节神经细胞凋亡和caspase-3表达的影响

目的：观察益气化瘀方对腰神经根压迫损伤大鼠背根节神经细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）的影响。方法：雄性SD大鼠40只随机分为假手术组、模型组、弥可保组和益气化瘀方组,每组10只。造模各组用自制胶块压迫于大鼠右侧L;神经根背根节处,假手术组仅切开皮肤和椎旁肌。造模后假手术组和模型组大鼠给予生理盐水灌胃,益气化瘀方组大鼠给予益气化瘀方煎剂灌胃,弥可保组大鼠肌肉注射弥可保。于造模10d后取右侧受压神经根,采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测神经细胞的凋亡情况;分光光度法结合考马斯亮蓝法检测受压迫神经根caspase-3活性;实时荧光定量聚合酶链式反应法检测神经根组织caspase-3mRNA表达变化。结果：腰神经根受压迫后背根节的神经细胞凋亡明显增加,模型组大鼠神经细胞的凋亡指数高于假手术组（P〈0．01）;益气化瘀方和弥可保可减少背根节神经细胞的凋亡,两组大鼠神经细胞的凋亡指数低于模型组（P〈0．05）。模型组大鼠神经根组织caspase-3活性和mRNA表达明显增高,与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）;益气化瘀方和弥可保可降低造模后大鼠神经根组织caspase-3活性及其mRNA表达,二者与模型组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论：腰神经根压迫可导致受压神经根组织caspsae-3的过表达和神经细胞凋亡的增加。益气化瘀方可抑制神经根组织caspase-3的过表达,减轻背根节神经细胞的凋亡。     

Gabazine对大鼠黑质网状带GABA能神经元放电的影响

目的探讨γ-氨基丁酸A型（GABA—A）受体阻断剂Gabazine对大鼠黑质网状带GABA能神经元放电的影响。方法采用多管微电极细胞外电生理学记录的方法,观察Gabazine对大鼠黑质网状带GABA能神经元放电的影响。结果正常大鼠黑质网状带微量注射Gabazine可使神经元放电频率由（19．7±2．1）Hz升高到（32．0±5．4）Hz,平均升高（40．0±5．0）％,与生理盐水组相比较差异有显著意义（t=3．25,P〈0．01）。结论内源性GABA—A受体可调节黑质网状带GABA能神经元自发放电活动,这为进一步探究GABA—A受体在帕金森病发病中的作用提供了一定的理论依据。     

电针对慢性炎症疼痛大鼠背根神经节牛肾上腺髓质22肽及其受体基因表达的影响

【目的】观察电针对完全福氏佐剂（completefreund’sadjuvant,CFA）致慢性疼痛大鼠患侧腰背根神经节（dorsalrootganglion,DRG）牛肾上腺髓质22肽（BAM22）与其感觉神经元特异性受体（SNSR）、MOR与DOR基因表达的影响。[方法]200＋20g雄性sD大鼠30只,随机分成正常对照组、模型对照组、电针组,每组10只,模型对照组、电针组右足CFA造模。电针组从造模24h开始治疗,患侧“足三里”穴,2／100Hz,30min,1次／d,治疗10d,其余2组不予治疗。采用辐射热法检测大鼠缩爪潜伏期观察大鼠患侧热痛敏变化,免疫组化法检测患侧背根神经节BAM22多肽的含量,定量PCR（quantitativepotymerasechainreaction,qPCR）法检测患侧背根神经节SNSR、MOR与DORmRNA的表达。[结果]经过10d的治疗,电针组的痛阈与模型对照组相比,有显著提高（P〈0．05）。免疫组化结果显示,电针干预后,患侧背根神经节的BAM22阳性细胞率比模型对照组有显著的提高（P〈0.01）。定量PCR结果显示,电针极大地促进了SNSR（P〈0．01）、MOR（P〈0．01）与DORmRNA（P〈0．01）在患侧DRG中的表达。[结论]电针对CFA大鼠慢性疼痛有良好的干预作用,推测该作用与电针增强患侧腰背根神经节BAM22多肽表达,增强其非阿片受体SNSR与其阿片受体MoR与DoRmRNA表达相关。     

氯胺酮对糖尿病大鼠神经功能及神经病理痛的作用

目的探讨氯胺酮对糖尿病大鼠神经功能及神经病理痛的疼痛作用。方法雌性Wistar大鼠24只,体重180—220g,随机分为3组（n=8）：正常组（N组）、糖尿病神经病理性痛组（D组）、氯胺酮组（K组）。D组、K组腹腔注射链脲菌素65mg／kg制作糖尿病神经病理痛模型,大鼠自由进食饮水饲养4周。自第5周开始,K组大鼠腹腔注射10mg／kg氯胺酮,1次／d,持续4周。随后测定各组大鼠机械痛阈值（MWT）、神经传导速度（NCV）。并用砂罗铬花青法行神经髓鞘染色和缓冲亚甲蓝法进行尼氏体染色。应用ELISA法测定脊髓内超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量。结果D组脊髓和DRG神经元的尼氏体体积减小,并且有尼氏体的脱失和溶解。坐骨神经的髓鞘存在不同程度的水肿,空泡样变性,结构紊乱和局灶性脱失。K组髓鞘及尼氏体病变明显减轻。与N组比较,D、K组大鼠MWT、NCV、SOD降低,MDA升高（P〈0．05）;与D组比较,K组大鼠MWT、NCV、SOD升高,MDA降低（P〈0．05）。结论氯胺酮通过抗氧化对糖尿病神经病理痛大鼠有神经保护及疼痛治疗作用。     

急性肺损伤大鼠前爪对应部位血EB含量变化研究

目的研究肺损伤前后大鼠前爪特定区域内血液中伊文思蓝（Evans blue,EB）含量的变化数据,通过数据的变化,研究肺与前爪特定区域的对应关系,为通过手部可以诊断西医疾病的手诊提供动物模拟实验依据。方法 20只雄性SD大白鼠按随机数字表法分为模型组（10只）、对照组（10只）,模型组大鼠腹腔注射内毒素复制急性肺损伤模型,6 h后两组均从尾静脉注射2.5%EB生理盐水溶液,然后测量手掌各个特定不同区域内EB的吸光度（A）值大小,根据A值大小的变化,间接地了解各区域内前爪特定部位左右两侧血液中EB含量的变化情况。结果对照组大鼠左右同一部位A值比较无明显差异,内毒素型肺损伤大鼠3区的A值左右之间比较,差异有统计学意义（P=0.018）。结论在急性肺损伤的状态下,前爪与内脏之间应该存在着特定的相关性联系。     

孕酮通过NF-κB调控脑损伤后大鼠海马神经元COX-2的表达

目的：研究NF-κB对脑损伤大鼠海马神经元环氧合酶-2（COX-2）的表达调控作用,探讨孕酮（PROG）对脑损伤（TBI）后大鼠海马神经元保护作用及其可能机制.方法：雄性SD大鼠45只随机分为假手术组、损伤组和PROG治疗组,按照改良的Feeney自由落体损伤装置制作大鼠脑损伤模型,用Nissl染色法、免疫组织化学法及免疫蛋白印记法,观察大鼠海马CA1区NF-κB,COX-2以及前列腺素E2（PGE2）的表达变化;并观察孕酮对上述指标的影响.结果：与假手术组大鼠相比,损伤组大鼠海马CA1区NF-κB（24.0±2.5）,COX-2（35.9±2.7）,PGE2（34.4±2.9）阳性神经元的数量较假手术组NF-κB（1.9±0.9）,COX-2（1.5±0.7）,PGE2（1.7±0.7）显著增加（P〈0.05）;PROG治疗组与损伤组比较,海马CA1区NF-κB（14.2±1.8）,COX-2（16.6±2.7）,PGE2（16.5±2.0）阳性神经元的数量明显减少（P〈0.05）.结论：NF-κB对脑损伤后海马神经元COX-2表达起调控作用;PROG可能通过影响NF-κB而调控COX-2的表达,对大鼠海马神经元起保护作用．     

针刺对高脂饮食肾损伤大鼠过氧化物酶增殖体活化受体γ蛋白表达的影响

目的观察针刺对高脂饮食肾损伤大鼠过氧化物酶增殖体活化受体γ(PPAPγ)蛋白表达及肾细胞凋亡的影响。方法 50只SD大鼠随机分为正常组(n=10)和高脂组(n=40),高脂组建立高脂饮食肾损伤大鼠模型,再随机分为模型组(n=10)和针刺组(n=10),针刺组大鼠取足三里穴、内庭穴和天枢穴行针刺治疗,模型组大鼠不做治疗,14 d后处死,苏木精-伊红染色法观察模型组和针刺组大鼠肾组织形态学变化,免疫组织化学法检测肾组织PPARγ蛋白表达变化,原位末端转移酶标记法检测肾细胞凋亡情况,并与正常组大鼠进行比较。结果正常组大鼠肾脏正常皮质结构存在,未见髓质结构;模型组大鼠有个别肾小球内毛细血管局灶性玻璃样变性,近曲小管肿胀、变性、空泡形成,肾间质可见大量炎性细胞浸润;针刺组大鼠仍可见肾小管上皮细胞玻璃样变性,与模型组大鼠相比,肾小球内毛细血管玻璃样变性减少,肾小管上皮细胞空泡变性显著减少。与正常组大鼠比较,针刺组肾组织PPARγ蛋白表达无显著变化(P>0.05),而模型组大鼠肾组织PPARγ蛋白表达显著降低(P<0.05);针刺组大鼠肾组织PPARγ蛋白表达与模型组比较显著升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组和针刺组大鼠的肾细胞凋亡指数均显著升高(P<0.05),但针刺组大鼠肾细胞凋亡指数与模型组比较显著降低(P<0.05)。结论针刺可能通过提高大鼠PPARγ蛋白表达,抑制肾细胞凋亡,减轻高脂饮食对肾脏的损伤。