苦参碱对小鼠H22细胞抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察苦参碱在体内和体外的抗肿瘤作用.方法:MTT法检测苦参碱对小鼠腹水瘤细胞H22的体外杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双标记法检测苦参碱对体外培养的H22细胞的诱导凋亡作用;在BALB/C小鼠H22移植瘤模型上观察苦参碱的体内抑瘤活性,透射电镜观察苦参碱治疗后荷瘤小鼠肝癌细胞的超微结构改变;免疫组化法检测荷瘤小鼠肝癌组织中Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:苦参碱在体外能够明显抑制H22细胞的生长和增殖,并可诱导细胞凋亡;对小鼠肿瘤生长也有明显抑制作用,高、低浓度组抑瘤率分别为60.71%和62.53%;用药组小鼠肿瘤组织中,电镜下可见较为典型的细胞凋亡的形态学改变;肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达增强,与荷瘤对照组相比有显著性差异(P＜0.01).结论:苦参碱在体内外对H22肿瘤细胞生长均有抑制作用,同时可促进肿瘤细胞表达Bax蛋白,抑制Bcl-2表达,诱导肿瘤细胞凋亡.     

iNOS转基因诱导裸鼠移植瘤细胞凋亡及其与p53表达相关性的实验研究

目的观察诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因转染对人喉鳞癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响,研究在体人喉鳞癌细胞中iNOS与突变型p53基因的表达,探讨二者的相关性及促进肿瘤细胞凋亡的机制。方法将iNOS基因转染人喉鳞癌Hep-2细胞并筛选出阳性克隆细胞进行扩增,制备荷瘤细胞小鼠模型,致瘤小鼠随机分为3组,转染组,转染空载体组,未转染组。应用逆转录-聚合酶链反应检测各组喉鳞癌组织中iNOS与p53 mRNA的表达,免疫组织化学检测各组喉鳞癌组织中iNOS与p53蛋白的表达,流式细胞术检测各组喉鳞癌组织中iNOS与p53蛋白、细胞凋亡及细胞周期的变化。结果转染组iNOS与p53蛋白及其mRNA的表达明显高于转染空载体组和未转染组,且iNOS与p53的表达呈明显的正相关(P<0.01)。转染空载体组和未转染组iNOS与p53蛋白及其mRNA的表达无明显差别。同转染空载体组和未转染组相比,转染组喉癌细胞发生了明显的G0/G1期阻滞,同时出现了明显的凋亡峰,瘤体积出现了明显的减小,转移发生率明显降低。结论iNOS基因转染能明显增加iNOS mRNA的表达从而增加了iNOS蛋白的表达,iNOS蛋白的表达使瘤细胞内合成大量的一氧化氮,从而诱导p53基因的大量表达,促进了肿瘤细胞凋亡,推测p53基因诱导肿瘤细胞凋亡的机制可能同细胞发生G0/G1期周期阻滞有关。     

靶向生存素siRNA抑制人喉鳞癌裸鼠动物模型的实验研究

目的 研究靶向生存素siRNA对喉鳞癌动物模型的抑制作用,探讨其可能的抑瘤机制.方法 建立人喉鳞癌裸鼠移植瘤模型,将33只裸鼠随机分为3组,对照组瘤体内注射PBS液,空载体组瘤体内注射空慢病毒载体(Ad-control),治疗组应用生存素siRNA (Ad-survivin)进行瘤内注射治疗,观察各组肿瘤生长情况,光镜及透射电镜观察肿瘤超微结构变化,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测Bcl-2蛋白的表达情况.结果 治疗组体内注射生存素siRNA(100 ng·mL-1·d-1),裸鼠肿瘤生长受到明显抑制,与对照组及空载体组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).光镜、电镜下观察到治疗组肿瘤组织发生坏死和凋亡改变,Tunel证实治疗组肿瘤细胞凋亡数目明显增多,与对照组及空慢病毒组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),免疫组化示治疗组Bcl-2表达下降.结论 生存素siRNA抑制喉鳞癌裸鼠生长,其作用机制可能与抑制Bcl-2表达诱导肿瘤细胞凋亡相关.     

放射性核素标记的Ku70 反义寡核苷酸对甲状腺癌荷瘤小鼠疗效研究

目的研究放射性核素标记的Ku70反义寡核苷酸(ASODNs)对甲状腺癌荷瘤小鼠的放疗疗效及其作用机制。方法采用131I标记Ku70 ASODNs,建立甲状腺癌TT细胞荷瘤小鼠模型,通过Ku70 ASODNs和(或)放射处理,观察小鼠成瘤率、死亡率和肿瘤生长情况。利用AnnexinⅤ/PI染色后流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡水平。蛋白质印迹分析检测不同处理后小鼠肿瘤组织Ku70蛋白的表达以及细胞增殖(PCNA)和凋亡指标(Bcl-2)的表达。结果经131I标记Ku70 ASODNs处理后,肿瘤组织Ku70蛋白表达下调;肿瘤细胞生长抑制,与对照组相比肿瘤体积降低,而且小鼠成瘤率下降,死亡率亦降低(P<0.01);并且131I-ASODNs组肿瘤体积与单纯131I-Na处理组相比也有降低(P<0.05)。细胞凋亡检测发现131I-ASODNs组肿瘤细胞的凋亡率(35.6%)高于ASODNs组(10.4%)和生理盐水组(9.2%),与131I-Na组(26.6%)相比也有统计学差异(P<0.05)。进一步检测发现131I-ASODNs组肿瘤组织细胞中的PCNA和Bcl-2表达与对照组和ASODNs组相比都降低。结论 131I标记Ku70 ASODNs能显著抑制甲状腺癌肿瘤细胞的生长,促进肿瘤细胞凋亡,其作用机制与Ku70表达抑制和PCNA及Bcl-2信号通路相关。     

RNA干扰沉默survivin基因在抑制卵巢癌裸鼠移植瘤中的作用

目的 观察pshRNA-survivin在体内是否能抑制卵巢癌移植瘤体的生长.方法 建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,瘤内注射pshRNA-survivin,观察肿瘤生长情况.半定量RT-PCR、免疫组织化学检测移植瘤的survivin表达情况,TUNEL检测移植瘤的细胞凋亡情况.结果 pshRNA-survivin能明显抑制肿瘤组织中survivin的表达,促进肿瘤细胞的凋亡,减缓肿瘤生长速度.结论 pshRNA-survivin明显抑制了卵巢癌裸鼠移植瘤的增殖.     

榄香烯抗肝癌作用的实验研究

目的研究榄香烯对小鼠移植性肝癌(H22)的抗肿瘤作用及其机制。方法建立小鼠移植性肿瘤模型(H22肝癌),腹腔注射不同剂量的榄香烯,观察其抗肿瘤作用(抑瘤率),以免疫学方法检测小鼠治疗后的细胞免疫功能的改变(IL2、T淋巴细胞转化能力),并通过免疫组化的方法检测肿瘤组织癌基因(p53和Bcl-2)的表达。结果榄香烯具有明显的抑瘤作用,抑瘤作用的主要机制是增强小鼠的细胞免疫功能,促进肿瘤细胞凋亡和调节癌基因的表达。结论榄香烯具有显著的抑瘤作用,其作用机制是通过提高荷瘤小鼠机体免疫功能和诱导肿瘤细胞凋亡两条途径来抑制肿瘤的生长。     

不同治法方药对H22肝癌小鼠抑瘤作用的比较研究

目的 观察活血化瘀方、清热祛湿方和养阴柔肝方对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用.方法 采用皮下接种肝癌H22 细胞的方法建立荷瘤小鼠模型,分别连续灌胃上述三方的水煎剂进行干预11d,观察各组荷瘤小鼠的一般状况和肿瘤生长情况,采用免疫组化法检测肿瘤组织增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况,缺口末端标记法测定肿瘤细胞凋亡指数（AI）.结果 与模型组比较,三种方药作用后小鼠的平均瘤重、抑瘤率和瘤体细胞PCNA表达、AI均有显著性差异（P《0.05或P《0.01）;其中以清热祛湿方抑瘤率最高（50.91%）,活血化瘀方对瘤体细胞PCNA表达的抑制作用最为显著,清热祛湿组与养阴柔肝组AI明显高于活血化瘀组.结论 在本课题拟定的剂量下,三种治法方药均可抑制肝癌瘤体生长,其中清热祛湿方的抑瘤作用最为显著;三者抑制肿瘤生长的机制有所不同,在抑制瘤体细胞增殖方面以活血化瘀方的作用最为显著,诱导瘤体细胞凋亡方面以清热祛湿方与养阴柔肝方的作用最为显著.     

鳞癌瘤体内注射脂质体包裹的人α-干扰素基因的抗肿瘤作用

目的：研究瘤体内直接注射脂质体包裹的人ＩＦＮα基因的抗肿瘤效果。方法：在鳞癌荷瘤裸鼠的瘤体内注射体外已制备好的用脂质体包裹的ＩＦＮα ＤＮＡ,观察肿瘤生长状况及小鼠存活情况。结果：瘤体内注射脂质体包裹的人ＩＦＮα基因后,荷瘤裸鼠肿瘤的生长明显受抑,其中部分荷瘤裸鼠的肿瘤消失;荷瘤裸鼠的存活期明显延长,部分荷瘤裸鼠可长期存活。病理结果显示,治疗后的肿瘤细胞形状不一,有多数细胞质崩解,破坏明显。结论：瘤体内注射脂质体包裹的ＩＦＮα基因后,可在瘤体内原位直接转染肿瘤细胞并破坏该肿瘤细胞,从而达到抑制肿瘤生长的效果。     

三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌的抑制作用

目的探讨三叶青乙酸乙酯提取物对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑瘤效应及其作用机制。方法采用动物移植性肿瘤实验法腋下接种Lewis肺癌细胞制备小鼠荷瘤模型。观察三叶青乙酸乙酯提取物对瘤重、抑瘤率的影响;并用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡,免疫组化法和real time RT-PCR法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、caspase-3的表达。结果三叶青各剂量组抑瘤率和肿瘤细胞凋亡率均高于模型对照组(P<0.05或P<0.01),其效应呈浓度依赖性;各剂量组Bcl-2的蛋白和mRNA表达下降(P<0.05或P<0.01)、Bax的蛋白和mRNA表达上升(P<0.05或P<0.01)、高剂量组caspase-3的蛋白表达上升(P<0.05)。结论中药三叶青乙酸乙酯提取物能抑制小鼠Lewis肺癌细胞的生长,可能与其促进肿瘤细胞坏死及下调Bcl-2、上调Bax和caspase-3从而促进肿瘤细胞凋亡有关。     

S180瘤株对动物模型体内荷瘤的影响及致瘤机制

目的通过动物实验,观察S180瘤株对小鼠荷瘤形成的影响,探讨S180肉瘤细胞的致瘤机制。方法建立小鼠实体瘤模型,将昆明系小鼠36只,按体重随机分为3组,每组12只。空白组:每日灌胃给予蒸馏水,0.2 mL/10 g体重;模型组:皮下接种S180肉瘤细胞,制成小鼠实体瘤模型,其后每日口服灌胃1%羧甲基纤维素钠(CMC)溶液;环磷酰胺组:皮下接种S180肉瘤细胞,制成小鼠实体瘤模型后,注射0.02 g/(kg·d)环磷酰胺注射液。观察各组肿瘤生长情况,计算平均重量;与模型组比较,环磷酰胺组计算肿瘤生长抑制率;采用蛋白免疫印迹法技术方法,检测抑癌基因P53、P21及凋亡抑制基因Bcl-2在S180肿瘤动物模型瘤体组织中的蛋白表达。结果模型组小鼠荷瘤成功,与空白组比较,模型组小鼠出现肿瘤,其瘤重为(1.513±0.790)g,环磷酰胺组瘤重为(0.248±0.253)g,两组比较差异有高度统计学意义(P<0.01),环磷酰胺抑瘤率为83.63%。在被检瘤体中,三种蛋白表达空白组与模型组、空白组与环磷酰胺组相比差异均有高度统计学意义(P<0.01);与环磷酰胺组比较,模型组P53、P21抗体的蛋白表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),其中,P21表达差异有高度统计学意义(P<0.01),而Bcl-2变化不大,差异无统计学意义(P=0.66)。结论 S180肉瘤细胞可能通过抑制P53与P21的表达而起到促进肿瘤形成的作用,该机制的研究可为筛选肿瘤治疗药物及肿瘤机制探讨等的肿瘤动物模型提供重要的实验依据。     

白藜芦醇对宫颈癌细胞株Hela增殖的影响

目的研究白藜芦醇诱导宫颈癌细胞株Hela的细胞生长和发育的改变,细胞周期的进行和凋亡等。方法MTT法测定白藜芦醇对Hela细胞的作用。3H-TdR掺入法检测白藜芦醇对Hela细胞DNA合成的影响。流式细胞术分析细胞周期。结果白藜芦醇作用后,Hela细胞的增殖速度减缓,DNA合成减少。白藜芦醇在较低浓度时即可诱导较快的可逆的S期停滞。结论合适浓度的白藜芦醇可有效预防早期肿瘤,但不至于引起细胞毒作用和细胞死亡。     

白藜芦醇对人下咽鳞状细胞癌裸鼠移植瘤的放射增敏作用

目的研究白藜芦醇对人下咽鳞状细胞癌（FADU）裸鼠移植瘤的放射增敏作用。方法放射增敏实验方案：43只移植瘤裸
鼠随机分为4组：对照组、单纯放射治疗组、单纯药物（白藜芦醇）治疗组及增敏（放射+白藜芦醇药物治疗）组,绘制生长曲线,计
算抑瘤率。对瘤体行CD31免疫荧光组化染色并进行微血管计数。结果增敏组肿瘤体积最小,瘤质量最轻,与其他3组比较差
异具有统计学意义（P<0.05）,抑瘤率达76.64%。增敏组MVD显著降低,与对照组、单纯药物组和放疗组比较差异具有统计学
意义（P<0.05）。结论白藜芦醇对FADU鳞状细胞癌裸鼠移植瘤通过抑制放疗后微血管形成实现放射增敏效果。
     

白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察白藜芦醇对人甲状腺乳头状癌细胞(IHH4)增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的机制?方法:采用CCK-8法检测白藜芦醇对IHH4细胞增殖的影响;倒置显微镜?透射电镜?DAPI染色观察细胞的形态学变化;细胞免疫荧光和Western blot法检测细胞内cleaved caspase-3蛋白的表达;应用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)观察细胞周期和凋亡的改变?结果:①白藜芦醇可以呈时间和浓度依赖性抑制IHH4细胞增殖;②与正常对照相比,加入白藜芦醇后IHH4细胞皱缩?变圆?脱落,细胞质中出现大小不等的空泡,胞质内容物增多;透射电镜下细胞核的染色质高度凝聚?边缘化;DAPI染色后荧光显微镜下观察,细胞核呈致密浓染;③细胞免疫荧光和Western blot显示,随着白藜芦醇作用浓度和时间的增加cleaved caspase-3蛋白的表达明显增加;④流式Annexin V-FITC/PI双染检测显示白藜芦醇呈浓度依赖性诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇可引起细胞S期阻滞?结论:白藜芦醇可抑制人甲状腺乳头状癌IHH4细胞增殖,诱导IHH4细胞凋亡?白藜芦醇阻滞细胞于S期,可能是抑制IHH4细胞增殖?促使其凋亡的原因之一?     

白藜芦醇抑制HepG2细胞生长和对细胞间隙连接通讯的影响

目的研究白藜芦醇对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用以及对细胞间隙连接通讯（GJIC）的影响。方法利用MTT法观察白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用。流式细胞仪检测细胞周期的时相分布，使用荧光探针5＇-CFDA／AM标记细胞．采用荧光漂白后重恢复技术（FRAP）和共聚焦显微镜技术观察白藜芦醇对HepG2细胞间隙连接通讯的影响。结果不同浓度的白藜芦醇处理细胞不同时间后，HepG2细胞的生长增殖明显受到抑制，抑制率最高达92．1％，各处理组间比较均有显著性差异（F=18．532，P〈0．05）；细胞周期分析显示，白藜芦醇能诱导HepG2细胞在S期停滞．抑制细胞DNA的合成并可诱导细胞凋亡：另外，白藜芦醇有恢复HepG2细胞间隙连接通讯的功能，且随浓度增加而增加。结论白藜芦醇可抑制HepG2细胞增殖，使细胞停滞于S期，并能诱导细胞凋亡；白藜芦醇还有恢复HepG2细胞间隙连接通讯功能的作用，提示此作用可能是白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖和抗肿瘤作用的机制之一。     

白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞凋亡的诱导作用

目的:探讨白藜芦醇对宫颈癌Hela细胞生长抑制及诱导凋亡的作用机制。方法:以不同浓度白藜芦醇处理Hela细胞,MTT法测定细胞增殖抑制率;TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Bad、Caspase-9的表达。结果:经白藜芦醇处理的Hela细胞,增殖作用呈明显时效和量效关系,细胞凋亡率明显增高并呈浓度依赖性;Bcl-2、Bax、Bad表达下降,Caspase-9表达增加。结论:白藜芦醇对Hela细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其机制与下调Bcl-2、Bax、Bad蛋白、上调Caspase-9蛋白表达有关。     

白藜芦醇抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的研究白藜芦醇对人脑胶质瘤细胞U251细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响,采用流式细胞仪检测白藜芦醇对U251细胞早期、晚期凋亡率的影响,用倒置显微镜观察不同浓度的白藜芦醇作用后U251细胞的形态学改变。结果白藜芦醇对U251脑胶质瘤生长有抑制作用,且具时间及剂量依赖性;白藜芦醇能诱导U251细胞早、晚期凋亡,且具时间及剂量依赖性。结论白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤的增殖并能诱导细胞凋亡。     

白藜芦醇通过诱导G MDSCs凋亡和M MDSCs分化延缓Lewis荷瘤小鼠肿瘤生长

目的: 探讨白藜芦醇对髓源抑制性细胞(myeloid derived suppressor cells, MDSCs)的影响及其抗肿瘤免疫的作用。方法: 建立小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,用白藜芦醇(白藜芦醇组,n=6)和PBS(对照组,n=6)分别灌胃处理,测量肿瘤体积和重量;用流式细胞术检测小鼠体内各群MDSCs细胞比率;用免疫磁珠分选技术分离出荷瘤小鼠脾脏粒系MDSCs(G MDSCs)及单核系MDSCs(M MDSCs),经白藜芦醇分别刺激12 h后,流式细胞术检测G MDSCs凋亡及M MDSCs分化情况。结果： 与对照组比较,白藜芦醇组荷瘤小鼠肿瘤体积显著减小(P<0.05),肿瘤重量减轻(P<0.01),脾脏中总MDSCs、M MDSCs比率无明显变化,G MDSCs比率下调;肿瘤组织中总MDSCs和G MDSCs比率均显著减少（P均<0.05）,M MDSCs比率无显著差异。白藜芦醇分别处理G MDSCs、M MDSCs后,早期和晚期凋亡的G MDSCs总数明显高于对照组,M MDSCs表面CD11c和F4/80的表达显著上调。 结论： 白藜芦醇可通过促进G MDSCs凋亡和M MDSCs分化抑制肿瘤生长。     

腺病毒介导hCTR1转染用于治疗顺铂耐受宫颈癌的基础研究

目的 诱导培养对顺铂耐药的人宫颈癌细胞株,并进一步研究针对宫颈癌细胞耐药的机制和相应的治疗方法。 方法 采用浓度梯度递增法使用顺铂处理人宫颈癌细胞C-33A,诱导出顺铂耐药细胞株C-33A/cis后,通过Western blot检测铜离子转运蛋白（copper transporter 1,CTR1）的表达改变,使用顺铂耐药细胞株C-33A/cis建立肿瘤皮下荷瘤模型,使用转染有hCTR1基因的腺病毒注射液（ad-hCTR1）并联合顺铂给药,观测肿瘤体积的改变,并在最后一次注射10 d后处死小鼠,通过免疫组化方法检测肿瘤组织中CTR1的表达。 结果 浓度梯度递增法诱导出的耐药细胞株C-33A/cis较亲代细胞C-33A对顺铂引起的细胞毒性敏感性下降,顺铂的半致死剂量浓度（IC₅₀）由（1.86±0.08）μmol/L提升至（8.11±0.21）μmol/L。Western blot结果显示耐药细胞C-33A/cis中CTR1的表达降低。利用顺铂耐药细胞株C-33A/cis建立的皮下瘤模型,在给予ad-hCTR1后,肿瘤组织内可检测到CTR1表达增高;对荷瘤鼠给予腺病毒转染CTR1联合顺铂给药后,肿瘤体积增长受到抑制。 结论 腺病毒转染CTR1联合顺铂给药可能提高耐药性宫颈癌的治疗效果。     

甘草查尔酮A通过调控PI3K/AKT信号通路诱导肺鳞癌细胞周期阻滞

目的 探究甘草查尔酮A（LCA）对肺鳞癌细胞增殖和周期的影响及相关分子机制。方法 通过MTT实验检测不同浓度LCA处理48 h对H226细胞增殖的影响并计算半数抑制浓度（IC50）;不同浓度LCA（0、10、20及40 μmol/L）处理H226细胞48 h,通过流式细胞术检测LCA对细胞周期的影响,通过Western blot检测LCA对细胞周期相关蛋白CyclinD1,以及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2和CDK4表达的影响,并探究PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达情况;选取雄性BALB/c-nu裸鼠构建皮下移植瘤模型,随机分为两组（对照组和LCA处理组）,腹腔注射LCA 24 d后取肿瘤测量瘤体体积及质量,从体内水平探究LCA的抗肿瘤作用。结果 MTT实验结果表明,与空白组比较,随着LCA浓度的增加,细胞存活率明显降低,48 h的IC50为28.3 μmol/L;流式细胞术的结果表明LCA处理可以使细胞周期阻滞在G1期（P<0.05）,Western blot的结果显示,LCA处理后,CyclinD1、CDK2和CDK4的表达均降低（P<0.05）;PI3K和Akt的表达无明显变化,但是它们的磷酸化水平（p-PI3K和p-Akt的表达）显著降低（P<0.05）;裸鼠荷瘤实验表明,LCA可使肿瘤体积和质量明显减小（P<0.05）。结论 LCA可以抑制肺鳞癌的增殖并诱导细胞周期阻滞,其作用机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。