低温对淡色库蚊海藻糖和海藻糖酶的影响

目的　了解低温环境对淡色库蚊体内海藻糖和海藻糖酶含量的影响。方法　在4 ℃环境中对淡色库蚊四龄初幼虫和雌成蚊分别冷处理0、1、3、6、12、18、24 h和0、1、3、6、12、18、24、36、48、72 h,采用酶联免疫吸附法测定低温处理不同时间淡色库蚊幼虫和成蚊体内海藻糖和海藻糖酶含量。结果　经低温处理后,淡色库蚊幼虫和雌成蚊体内海藻糖和海藻糖酶平均含量均明显增加。幼虫和雌成蚊体内海藻糖变化趋势一致,均在低温处理3 h达到最大值,平均值分别为（2.458 8 ± 0.379 2） mg/g 和（2.825 7 ± 0.211 1） mg /g。海藻糖和海藻糖酶在低温处理前6 h内变化幅度较大,经过一段时间适应后,稳定保持在相对较高水平。结论　低温能快速诱导淡色库蚊体内海藻糖和海藻糖酶产生,海藻糖和海藻糖酶在提高淡色库蚊抗寒性方面可能发挥重要作用。     

低温对淡色库蚊海藻糖和海藻糖酶的影响

目的　了解低温环境对淡色库蚊体内海藻糖和海藻糖酶含量的影响。方法　在4 ℃环境中对淡色库蚊四龄初幼虫和雌成蚊分别冷处理0、1、3、6、12、18、24 h和0、1、3、6、12、18、24、36、48、72 h，采用酶联免疫吸附法测定低温处理不同时间淡色库蚊幼虫和成蚊体内海藻糖和海藻糖酶含量。结果　经低温处理后，淡色库蚊幼虫和雌成蚊体内海藻糖和海藻糖酶平均含量均明显增加。幼虫和雌成蚊体内海藻糖变化趋势一致，均在低温处理3 h达到最大值，平均值分别为（2.458 8 ± 0.379 2） mg/g 和（2.825 7 ± 0.211 1） mg /g。海藻糖和海藻糖酶在低温处理前6 h内变化幅度较大，经过一段时间适应后，稳定保持在相对较高水平。结论　低温能快速诱导淡色库蚊体内海藻糖和海藻糖酶产生，海藻糖和海藻糖酶在提高淡色库蚊抗寒性方面可能发挥重要作用。     

淡色库蚊与骚扰库蚊触角嗅觉基因表达分析

目的了解淡色库蚊与骚扰库蚊触角中差异性表达的嗅觉基因,为揭示二者遗传分化特征提供参考依据。方法分别设置淡色库蚊吸血前、后,骚扰库蚊吸血前、后等4个实验组。每组共设4个生物学重复样品,每个样品取20只蚊虫触角。采用TRIzol法提取各组样品总RNA,采用NEBNext Ultra TM RNA R文库构建试剂盒构建文库。对转录组基因进行测序,通过FPKM值差异性分析,筛选淡色库蚊与骚扰库蚊分别在吸血前、后表达差异显著的嗅觉基因,并进行实时荧光定量PCR (qRT-PCR)验证。结果淡色库蚊吸血前、后触角转录组共注释了50个气味结合蛋白(OBP)和31个气味受体(OR)基因,骚扰库蚊吸血前、后触角转录组共注释了36个OBP和12个OR。淡色库蚊吸血后较吸血前显著上调的OBP有4个,无显著下调的OBP。骚扰库蚊吸血后较吸血前显著上调和下调的OBP分别有3个。淡色库蚊吸血后较吸血前无显著上调的OR,显著下调的OR有3个。骚扰库蚊吸血后较吸血前无显著上调的OR,显著下调的OR有1个。qRT-PCR验证结果显示,淡色库蚊吸血后OBP17显著上调;骚扰库蚊吸血后OBP31、 OBP44表达量显著上调,其中OBP44与测序结果一致,OBP31与测序结果相反。吸血前,骚扰库蚊OBP17显著高于淡色库蚊;吸血后,骚扰库蚊OBP31、 OBP44显著高于淡色库蚊,OBP99a显著低于淡色库蚊。骚扰库蚊吸血后OR31、 OR65、 CPIJ001069表达量均显著上调,其中OR65和CPIJ001069表达量显著高于淡色库蚊(P 0.05)。淡色库蚊吸血后无显著变化的OR基因。结论淡色库蚊与骚扰库蚊的嗅觉基因OBP和OR表现出了进化分化,OBP17、 OBP44可能参与调控骚扰库蚊吸血后行为。OR31、OR65、 CPIJ001069可能参与调控骚扰库蚊吸血后行为。     

利用蛋白组学解析淡色库蚊对氯氰菊酯的抗性机制

目的 比较氯氰菊酯选育后抗性淡色库蚊与敏感淡色库蚊蛋白差异表达情况,揭示淡色库蚊抗氯氰菊酯杀虫剂的机制.方法 利用同位素相对和绝对定量(iTRAQ)技术,结合液相色谱/串联质谱(LC-MS/MS)分析技术,对氯氰菊酯敏感与抗性淡色库蚊进行蛋白组定量分析.结果 共鉴定出164种蛋白在氯氰菊酯抗性选育前后差异表达,其中上调...     

沃尔巴克氏体与淡色库蚊溴氰菊酯抗性关系初步研究

目的 目的 探讨沃尔巴克氏体与淡色库蚊溴氰菊酯抗性间的相关性。 方法 方法 以PCR鉴定本实验室饲养的淡色库 蚊体内的沃尔巴克氏体, 采用实时定量PCR技术 （qRT?PCR） 测定并比较淡色库蚊溴氰菊酯抗性和敏感品系中沃尔巴克 氏体表达差异。 结果 结果 本实验室饲养的淡色库蚊体内含有沃尔巴克氏体。淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系卵、 一龄蚊、 二 龄蚊、 三龄蚊、 四龄蚊、 雌蚊、 雄蚊体内沃尔巴克氏体表达水平分别是敏感品系的18.42、 3.69、 4.43、 3.96、 6.31、 1.55、 3.76 倍, 差异均有统计学意义 （P均< 0.05）, 而抗性品系和敏感品系蛹中沃尔巴克氏体表达水平差异无统计学意义 （P > 0.05）。南京江心洲溴氰菊酯抗性雌蚊体内沃尔巴克氏体表达水平是敏感雌蚊的2.64倍。 结论 结论 沃尔巴克氏体可能与 淡色库蚊对溴氰菊酯产生抗性有关。     

自育与非自育淡色库蚊体内菌群多样性比较

目的 了解自育与非自育淡色库蚊体内菌群组成与多样性差异,从而为探索淡色库蚊自育发生机制提供参考依据。方法 收集25℃自育与非自育淡色库蚊成蚊,利用Illumina NovaSeq 6000测序平台对细菌16S核糖体RNA基因高变区进行测序。采用α多样性指数分析菌群丰富度和多样性,采用β多样性指数分析菌群结构差异,通过线性判别分析效应大小(linear discriminant analysis effect size,LEfSe)鉴别组间在丰度上具有显著差异的菌群。结果 自育与非自育淡色库蚊体内菌群隶属18个门、28个纲、70个目、113个科和170个属,优势菌门主要有变形菌门、拟杆菌门等。在属水平,沃尔巴克氏体菌属为共有优势菌属,在自育及非自育淡色库蚊中的相对丰度分别为(77.6±11.3)%和(47.5±8.5)%;粪杆菌属(0.4%±0.1%)、杜氏杆菌属(0.5%±0.0%)、马赛菌属(0.5%±0.1%)等为自育淡色库蚊特有菌属。α多样性分析显示,自育淡色库蚊体内菌群Chao1指数和ACE指数大于非自育淡色库蚊(P均>0.05),而Shannon指数(P> 0.0...     

反义核酸抑制抗敌百虫淡色库蚊扩增酯酶mRNA体外翻译的研究

目的　用反义核酸抑制抗敌百虫淡色库蚊扩增酯酶mRNA体外翻译。　方法　人工合成互补于抗性库蚊酯酶mRNA翻译起始点 18碱基 ,与淡色库蚊mRNA退火后加入无细胞翻译体系 ,进行体外翻译 ,翻译产物用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。　结果　 6 μmol/LODNs可抑制 5 0 %特异性酯酶翻译量 ,2 0 μmol/LODNs抑制 80 %特异性酯酶翻译量。电泳结果显示条带浓度接近敏感蚊虫所表达的酯酶量。　结论　针对抗敌百虫淡色库蚊扩增酯酶mRNA翻译起始点的反义核酸在体外能有效地抑制其mRNA的翻译     

基于iTRAQ的定量蛋白质组学技术探索 淡色库蚊越冬机制

目的　比较淡色库蚊越冬后与滞育准备阶段蛋白表达差异,探索淡色库蚊越冬休眠（滞育）的机制。方法　采用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术,对越冬滞育及准备阶段淡色库蚊进行定量蛋白质组学分析。结果　淡色库蚊越冬滞育前后共鉴定出244种差异表达蛋白,其中上调蛋白126种、下调蛋白118种。生物信息学分析表明,这些差异表达蛋白与能量产生及转化、脂代谢、细胞骨架重塑、糖代谢、蛋白质转运、分子伴侣、应激耐受以及各种代谢酶等有关。结论　本研究首次采用现代蛋白质组学工具鉴定淡色库蚊越冬滞育相关蛋白,初步揭示了与淡色库蚊越冬滞育相关的KEGG通路及蛋白,进一步扩展了对蚊媒越冬滞育机制的理解。     

酚氧化酶基因在3种淡色库蚊体内表达量比较

目的分析淡色库蚊抗性品系、敏感品系、微山湖现场品系蚊体内酚氧化酶基因表达量。方法根据酚氧化酶基因序列设计引物扩增基因片段,荧光定量PCR检测不同品系淡色库蚊体内的酚氧化酶基因表达水平差异。结果酚氧化酶在昆虫的正常发育过程中具有重要的生理作用,酚氧化酶基因在抗性品系蚊体内的表达量是敏感品系的6.74倍,微山湖现场品系是敏感品系的4.19倍。结论淡色库蚊酚氧化酶基因可做为新的抗性检测及治理基因靶标。     

苏云金杆菌以色列变种对伊蚊库蚊和按蚊幼虫毒效的实验观察

目的 目的 研究苏云金杆菌以色列变种 （Bti） 可湿性粉剂对伊蚊、 库蚊和按蚊幼虫的毒杀效果。方法 方法 采用生物测定 法, 测定Bti可湿性粉剂对白纹伊蚊幼虫、 淡色库蚊幼虫和中华按蚊幼虫的毒杀效果, 计算半数致死浓度 （LC50 ）。结果 结果 Bti 可湿性粉剂对Ⅲ龄白纹伊蚊幼虫、 淡色库蚊幼虫和中华按蚊幼虫的LC50 分别为0.104、 0.160 μg/ml和0.324 μg/ml, 效价 分别为0.125、 0.192 IU/ml和0.389 IU/ml; 连续接触中华按蚊Ⅲ龄幼虫 1、 2 d和 3 d的LC50分别为0.324、 0.092 μg/ml和0.032 μg/ml, 效价分别为0.389、 0.110 IU/ml和0.038 IU/ml; 对中华按蚊Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ龄和Ⅳ龄幼虫的LC50分别为0.024、 0.137、 0.324 μg/ml和0.450 μg/ml, 效价分别为0.029、 0.164、 0.389 IU/ml和0.540 IU/ml。结论 结论 Bti对3种蚊虫幼虫均有较好的毒杀效 果, 但对伊蚊和库蚊幼虫效果更好, 且幼虫虫龄越小, 毒杀效果越好。     

山东省淄博市淄川区淡色库蚊kdr等位基因突变研究

目的　了解山东省淄博市淄川区淡色库蚊（Culex pipiens pallens）季节消长趋势及蚊虫击倒抗性（Knockdown resistance, kdr）相关钠通道基因多态性分布特征。方法　于2017–2018年蚊媒活动高峰期，使用诱蚊灯法对山东省淄博市淄川区进行蚊虫种群和密度调查，提取淡色库蚊DNA，通过PCR检测kdr等位基因突变类型和频率。结果　在山东省淄博市淄川区共捕获830只蚊虫，包括淡色库蚊、骚扰阿蚊、白纹伊蚊、刺扰伊蚊、中华按蚊和三带喙库蚊6种，其中淡色库蚊占83.13%，密度为12.32只/（台·夜）；淡色库蚊全年密度监测曲线呈双峰趋势，高峰出现在6月和9月。在kdr基因1 014位点共检测发现5种kdr等位基因类型，包括TTA（75.71%）、TTT（10.00%）、CTA（5.71%）、TCA（4.29%）、TTC（4.29%），同时发现2种核苷酸非同义突变，即亮氨酸（L1014）突变为苯丙氨酸（L1014F）、丝氨酸（L1014S）。罗村镇、太河镇两地淡色库蚊kdr基因突变频率分别为10.53%、40.63%，差异具有统计学意义（[χ2] = 8.559，P = 0.003）。结论　淡色库蚊为山东省淄博市淄川区优势蚊种。本研究首次在淡色库蚊中检测发现CTA、TTC两种kdr等位基因突变，kdr基因型呈多态性。     

山东省淡色库蚊越冬情况调查

目的 了解山东省淡色库蚊冬季生态习性。方法 于2015年12月至2016年1月,在山东省选取调查点进行淡色库蚊越冬情况的调查。结果 淡色库蚊在山东省以成蚊越冬,越冬场所在农村主要为地窖、水井、山洞等;在城市则以防空洞、城墙洞、下水道、花窖等处为主,在人房内和牲畜房内均较少。结论 山东省淡色库蚊越冬处所多为高温高湿且避光的地窖和坑洞为主,且其幼虫不能越冬。     

淡色库蚊细胞色素P450基因的克隆、序列分析及表达差异的鉴定

目的克隆淡色库蚊细胞色素P450（CYP6F1）基因并进行表达差异的鉴定。方法采用RT—PCR技术和RACE策略，从淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系4龄幼虫中克隆细胞色素P450基因（CYP6F1），用相应的软件进行生物信息学分析，并用实时定量PCR和RT—PCR分析敏感、抗性品系蚊的CYP6F1表达水平及对蚊各期CYP6F1进行表达鉴定。结果成功克隆出CYP6F1基因，基因全长1639bp，开放阅读框为1527bp，编码508个氨基酸（GenBank登录号：AY662654）。序列分析显示该基因与已克隆的日本致倦库蚊细胞色素P450基因（AB001324）有99％的同源性，并具有所有的细胞色素P450基因的保守性特征，1个膜锚定信号、2个还原酶结合位点、1个典型的血红素蛋白结合位点和ETLR基序等。实时定量PCR和半定量RT—PCR结果表明，CYP6F1在淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系中表达水平高于敏感品系，且CYP6F1基因在淡色库蚊各个发育阶段有不同的表达。结论CYP6F1基因可能与杀虫剂抗药性相关，并且在淡色库蚊各个发育阶段有不同的表达。     

用核酸探针检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性

目的　用淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关胰蛋白酶核酸探针检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性。方法　用逆Northern鉴定抗药性品系和敏感品系中胰蛋白酶的表达差异 ,用随机引物法标记鉴定后的胰蛋白酶cDNA片段为探针Northernblot检测淡色库蚊的抗药性。结果　逆Northern显示胰蛋白酶在抗药性品系中的表达量是敏感品系的 4 33倍。以其为探针Northernblot检测显示 ,胰蛋白酶基因在抗药性品系中高表达 ,抗药性品系中胰蛋白酶的表达量是敏感品系的 3 90倍。结论　作为一种新的抗药性检测的分子生物学方法 ,胰蛋白酶核酸探针可用于区分抗药性品系和敏感品系     

盐城国家级珍禽自然保护区蚊虫密度调查与分析

目的 调查江苏省射阳县新洋港滩涂湿地盐城国家级珍禽自然保护区内外蚊虫密度及蚊种组成。 方法 2004年5～10月每两周用紫外诱蚊灯采集蚊虫1次, 鉴定蚊种、 统计数量， 记录气温、 湿度和降雨量等。 结果 自然保护区捕获蚊虫37 618只, 其中中华按蚊22 814只(占60.6%), 淡色库蚊13 970 只(占37.1%), 三带喙库蚊834 只 (占2.2%)。居民区捕获蚊虫3 294只, 其中淡色库蚊2 508只(占76.1%), 中华按蚊668只 (占20.3%), 三带喙库蚊114只 (占3.5%), 骚扰阿蚊4 只 (占0.12%)。自然保护区蚊虫总量占总采集量的92% (37 618/40 912), 居民区采集蚊虫总量占8.0% (3 294/40 912)。保护区优势蚊种为中华按蚊, 居民区为淡色库蚊。 保护区7月中、 下旬和9月中旬为蚊虫密度高峰, 蚊虫密度与气温变化呈正相关 (r=0.765, P=0.005)。 结论 滩涂湿地是中华按蚊和淡色库蚊的适宜孳生地, 7月中下旬和9月中旬为蚊虫密度高峰期。应当重视蚊媒对有关重要病原传播潜能的监测研究。     

双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫滋养体蛋白质的损伤

目的探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫(Giardialamblia)滋养体蛋白质的损伤作用。方法用改良TYI-S-33培养基培养蓝氏贾第鞭毛虫滋养体;设立实验组(DHA组)和正常对照组(C组)。实验组用含双氢青蒿素的培养基(含LC50=200μg/mL的DHA)培养;对照组培养基不含药物。提取各组虫体总蛋白,经Brad-ford法进行蛋白质定量,样本经2D-电泳和硝酸银染色后,扫描检测凝胶电泳图蛋白点的数量和种类,获取蛋白质点匹配信息,挑选匹配性高的蛋白点,进行质谱(MALDI-TOF MS)分析。结果经双氢青蒿素作用后虫体总蛋白质含量(0.6993μg/mL)明显低于对照组(4.8241μg/mL),二者差异有显著性(P0.001)。蛋白质二维电泳凝胶图分析结果显示,正常对照组(C组)蛋白点密集,约1253个点,布满整块凝胶,蛋白表达量高(蛋白点颜色深且清晰、明亮);与此相反,实验组(DHA组)蛋白点显著减少,DHA作用6h后约617个点,作用12h后约326个点,蛋白表达量明显降低(蛋白点颜色浅,不清晰)。其次,正常对照组与双氢青蒿素组的12kDa~30kDa、等电点pI3.0~7.6范围内蛋白点表达量存在明显差异,即实验组该范围内大多数蛋白点完全消失,45kD~60kDa的蛋白点仅剩6个点。质谱分析鉴定结果显示,在正常对照组胶图所选的80个匹配良好的蛋白点中,鉴定出6种骨架蛋白(14个点),而实验组(DHA组)蛋白胶图中相对应的蛋白点消失。结论双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的蛋白质具有明显的损伤作用,其中包括细胞骨架蛋白。