JAK/STAT通路在脂多糖诱导肝细胞HMGB1释放中的作用

目的:探讨Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)信号通路在内毒素脂多糖诱导肝细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放中的作用?方法:观察100 μg/L 脂多糖诱导后,大鼠肝细胞BRL-3A细胞HMGB1 mRNA表达水平和细胞培养上清液中HMGB1含量的变化,及不同浓度的JAK/STAT通路抑制剂tyrphostin AG 490?氟达拉滨的影响?结果:脂多糖诱导BRL-3A细胞24 h后HMGB1 mRNA表达水平和培养上清液中HMGB1含量明显升高(P < 0.01),25 μmol/L tyrphostin AG 490和50 μmol/L氟达拉滨对以上2个指标显示一定程度的抑制作用(P < 0.05)?结论:内毒素脂多糖可诱导肝细胞HMGB1的表达和释放,其机制可能与细胞JAK/STAT信号通路有关?     

甘草黄酮对肺部炎症小鼠细胞因子表达和氧化反应的调节作用

目的 研究甘草黄酮对抗内毒素脂多糖 (LPS) 诱导小鼠肺部炎症的作用机制。方法 小鼠气管内滴入 LPS 或生理盐水,6 或 24 h 后取支气管肺泡灌洗液 (BALF) 和肺组织,测定 BALF 中的白细胞总数和中性粒细胞以及超氧化物歧化酶 (SOD) 活性,测定肺组织的含水量和病理变化,测定肺组织匀浆和 BALF 中的髓过氧化物酶 (MPO) 活性、肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 和白细胞介素-1β (IL-1β) 的 mRNA 表达以及 TNF-α 蛋白水平。结果 白细胞计数、肺含水量测定和肺组织病理检查等指标显示,小鼠气管内滴入 LPS 引起严重的肺部炎症。甘草黄酮给药后能预防 LPS 引起的这些变化。甘草黄酮能明显减少 BALF 中的总白细胞和中性粒细胞的数目,升高 SOD 活性。甘草黄酮能明显降低肺组织中的 MPO 活性,抑制 TNF-α和 IL-1β mRNA 的表达,抑制 TNF-α蛋白水平。结论 甘草黄酮能改善 LPS 引起的小鼠肺部炎症,其抗炎作用可能与抑制细胞因子的表达和调节氧化/抗氧化反应有关。     

缺氧诱导肺泡巨噬细胞HMGB1的释放及其可能机制

目的:研究缺氧对肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1,HMGB1)释放的作用及其信号通路?方法:采用大鼠肺泡巨噬细胞NR8383,观察不同时间缺氧培养对细胞HMGB1 mRNA表达和培养上清液中HMGB1含量的影响,及不同浓度JAK2抑制剂tyrphostin AG 490和STAT1抑制剂氟达拉滨对HMGB1释放的抑制作用?HMGB1含量采用酶联免疫吸附试验检测?结果:培养上清液中HMGB1含量和mRNA表达水平分别于缺氧培养6?12 h后明显升高(P < 0.01),并随缺氧培养时间延长而进一步升高和增强;tyrphostin AG 490和氟达拉滨对缺氧培养肺泡巨噬细胞释放HMGB1有不完全的抑制作用,并呈剂量依赖性?结论:缺氧诱导肺泡巨噬细胞释放HMGB1,JAK/STAT信号通路可能参与其释放过程?     

STAT6圈套寡核苷酸对支气管哮喘小鼠Eotaxin表达及气道炎症的抑制作用

目的观察STAT6圈套寡核苷酸(ODN)对支气管哮喘小鼠嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)表达及气道炎症的影响,探讨STAT6圈套ODN治疗支气管哮喘的可行性。方法将BALB-C雌性小鼠随机分为:健康对照组(N组)、哮喘组(A组)、STAT6圈套ODN哮喘组(ST-ODN组)及无序ODN哮喘组(SC-ODN组),ODN经鼻气道滴入ST-ODN组及SC-ODN组小鼠肺部,荧光显微镜观察肺组织中异硫氰酸荧光素标记的寡核苷酸(FITC-ODN)的分布;测定肺泡灌洗液(BALF)中白细胞(WBC)、淋巴细胞(LYM)及嗜酸性粒细胞(EOS)数量;观察气道炎症病理变化;免疫组化法检测肺组织Eotaxin蛋白;RT-PCR法检测肺组织Eotaxin mRNA表达。结果 (1)FITC-ODN转染组小鼠肺部发现FITC着色,ODN肺组织转染成功。(2)小鼠肺组织ST-ODN组较哮喘组炎症病理反应明显减轻。(3)BALF中哮喘组与空白对照组比较,WBC、LYM、EOS均增高,差异有统计学意义(P<0.01);ST-ODN组则明显低于哮喘组,差异有统计学意义(P<0.01);而SC-ODN组与哮喘组比较差异无统计学意义(P>0.05);(4)Eotaxin蛋白及mRNA表达:哮喘组明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01);ST-ODN组低于哮喘组,差异有统计学意义(P<0.01);而SC-ODN组与哮喘组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 STAT6圈套ODN可经鼻气道滴入方式直接转染至小鼠肺组织;STAT6圈套ODN可抑制Eotaxin的表达,调控哮喘小鼠气道的EOS聚集;抑制哮喘小鼠气道炎症反应。     

慢性哮喘小鼠EGFR的表达及地塞米松对其的影响

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)在慢性哮喘气道重建中的作用. 方法:建立小鼠慢性哮喘模型,致敏前1 h气道内滴入地塞米松2 mg/kg,最后一次激发24 h后处死动物,常规病理切片观察小鼠肺内炎症情况、气管壁厚度及气道平滑肌厚度,ELISA法测定肺泡灌洗液中TGF-α的浓度,RT-PCR观察小鼠肺部EGFR mRNA的表达,免疫组化及Western Blot观察EGFR蛋白的表达. 结果:慢性哮喘组小鼠气道支气管及血管周围大量炎症细胞聚集、气管壁及气道平滑肌增厚、肺泡灌洗液中TGF-α浓度增高,肺组织EGFR mRNA及EGFR蛋白的表达增高(P<0.01). 哮喘小鼠致敏前使用地塞米松可减轻气道炎症,减少气管壁及气道平滑肌的增厚,肺泡灌洗液中TGF-α浓度、肺组织磷酸化EGFR蛋白的表达较慢性哮喘组均有所下降(P<0.01). 结论:慢性哮喘小鼠出现气道重建,早期使用地塞米松可以预防气道重建,降低BALF中TGF-α的浓度、抑制肺组织EGFR的表达和活化.     

苦参素对LPS诱导的人肾小球系膜细胞中p-STAT3和SOCS-3的影响

目的:观察苦参素对LPS诱导的人肾小球系膜细胞(HMC)中磷酸化信号转导和转录活化因子3(p-STAT3)和细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)的表达及相互关系.方法:体外原代培养的HMC,分为正常组、LPS(10 mg/L)组、LPS(10mg/L)+苦参素(320 mg/L)组,每组分3个时间点(12,24,48h).采用MTT法检测HMC的增殖,RT-PCR方法检测STAT3和SOCS3 mRNA的表达,Western Blot方法检测p-STAT3和SOCS3蛋白的表达.结果:苦参素能明显抑制LPS诱导的HMC增殖,与正常组相比,p-STAT3和STAT3 mRNA的表达在12,24,48 h均上调,SOCS3蛋白和mRNA的表达也同步上调.与LPS诱导组相比,苦参素组p-STAT3和STAT3 mRNA的表达在12,24,48 h均下调,而SOCS3蛋白和mRNA表达有明显上调的趋势.结论:苦参素能抑制LPS诱导的HMC的增殖,且能上调LPS诱导的HMC中SOCS3 mRNA和蛋白表达,下调P-STAT3和STAT3 mRNA的表达,其作用可能与上调SOCS3、抑制STAT3磷酸化有关.     

凉膈散对内毒素致急性肺损伤大鼠信号转导与转录激活子1 表达的影响

目的观察凉膈散对内毒素致急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织中的信号转导与转录激活子1(STAT1)的影响及其作用机制。方法静脉注射内毒素脂多糖(LPS)制作大鼠急性肺损伤模型。将实验动物随机分为空白组、LPS组、LPS+凉膈散高、中、低剂量组、LPS+地塞米松组,LPS组又分为致伤后1、2、4、8、16h不同时间点组,用蛋白免疫印迹法测定大鼠肺组织STAT1及磷酸化STAT1的表达。结果与空白组比较,LPS组STAT1蛋白在4h、p-STAT1蛋白在2h表达最显著(P<0.01),凉膈散各组及地塞米松组在2、4、8h能显著下调STAT1及p-STAT1蛋白的表达,与LPS组比较,有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论内毒素致急性肺损伤中存在STAT1异常表达,凉膈散各组通过下调STAT1及p-STAT1的表达,从而减轻LPS所致的急性肺损伤,这可能是凉膈散治疗急性肺损伤的机制之一。     

磷酸氟达拉滨对MUTZ-1细胞作用及机制研究

目的：在体外研究磷酸氟达拉滨（fludarabine）对人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞的作用以及可能的作用机制。方法：采用MTT法、透射电境、DNA凝胶电泳、流式细胞仪以及RT-PCR等分析方法。结果：磷酸氟达拉滨能抑制MUTZ-1细胞的生长，24、48、72h的IC50分别为137．65mg／L、6．27mg／L、0．51mg／L，具有浓度和时间依赖性。经透射电境、DNA凝胶电泳和Annexin、V／PI检测，证实1～16mg／L磷酸氟达拉滨对MUTZ-1细胞作用24h后，可以诱导MUTZ-1细胞凋亡，其对Bcl-2、Bax、survivin、XIAP、cIAP1和cIAP2基因mRNA表达均无明显下调作用，但可以导致MUTZ-1细胞线粒体膜电位的下降。结论：1mg／L～16mg／L磷酸氟达拉滨不但能抑制MUTZ-1细胞生长而且能诱导细胞凋亡，诱导细胞凋亡是其主要细胞毒作用之一。线粒体膜电位下降是其诱导细胞凋亡的重要环节之一。     

IL-27通过STAT3信号通路改善脂多糖诱导的小鼠急性肺炎

目的：探讨IL-27通过调控STAT3信号通路在脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺炎中的作用。方法：32只雄性小鼠随机分为正常对照组、LPS组、LPS+IL-27组、LPS+IL-27抗体组,每组8只。麻醉处死后取小鼠肺脏,HE染色观察各组小鼠肺组织损伤情况;qRT-PCR检测各组小鼠肺组织及血清中STAT3、SOCS3的mRNA表达水平;Western blot检测各组小鼠肺组织中STAT3、p-STAT3、SOCS3的蛋白表达水平;采用ELISA法分别检测肺组织匀浆及血清中TNF-α、IL-1β、IL-10、TGF-β1的表达水平。免疫组织化学及Western blot检测TNF-α、IL-1β在肺组织中的蛋白表达。结果：HE染色结果发现,正常对照组,LPS组和LPS+IL-27抗体组肺泡结构被破坏,肺泡壁弥漫性增厚,有明显的炎性细胞浸润;LPS+IL-27组病理改变较LPS组明显减轻,炎性细胞浸润减少。与正常对照组比,LPS组和LPS+IL-27抗体组小鼠肺组织STAT3、p-STAT3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;LPS+IL-27组较LPS组和LPS+IL-27抗体组显著降低（P＜0.05）,LPS+IL-27组SOCS3表达水平显著高于LPS+IL-27抗体组（P＜0.05）。各组小鼠肺组织及血清TNF-α、IL-1β表达水平较正常对照组均显著升高（P＜0.05）;LPS+IL-27组TNF-α、IL-1β表达水平较LPS组和LPS+IL-27抗体组显著降低（P＜0.05）;LPS组和LPS+IL-27抗体组IL-10表达水平均显著高于正常对照组（P＜0.05）;LPS+IL-27组IL-10、TGF-β1的表达水平均显著高于LPS+IL-27抗体组（P＜0.05）。免疫组织化学结果显示,与正常对照组比,LPS组和LPS+IL-27抗体组TNF-α阳性表达主要表达在细胞浆中,IL-1β阳性表达主要表达与细胞膜与细胞浆中,Western blot结果发现TNF-α、IL-1β在肺组织中均呈高表达（P＜0.05）;LPS+IL-27组TNF-α、IL-1β的表达水平较LPS组和LPS+IL-27抗体组显著降低（P＜0.05）。结论：外源性IL-27可能通过抑制STAT3信号通路相关蛋白磷酸化水平改善LPS诱导的小鼠急性肺炎。     

雾化吸入灭活草分枝杆菌对小鼠哮喘模型IL-17F表达的影响

目的：探讨雾化吸入灭活草分枝杆菌治疗小鼠支气管哮喘（哮喘）模型对白细胞介素17F（IL-17F）表达的影响.方法：雄性BALB/c小鼠24只,按数字随机表法分为3组,每组8只：分别为对照组、模型组、治疗组.建立OVA致敏的小鼠哮喘模型,以雾化吸入灭活草分枝杆菌治疗哮喘小鼠.取肺组织经HE染色,光镜下观察肺组织结构及病理改变;ELISA法检测肺泡灌洗液（BALF）和血清中IL-17F浓度;采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）的标准曲线法,测定小鼠肺组织IL-17F mRNA的表达情况.结果：小鼠BALF中IL-17F浓度均高于血清中IL-17F浓度;模型组BALF中IL-17F浓度明显高于对照组和治疗组（P＜0.01）;治疗组BALF中IL-17F浓度较模型组有所减少,但仍高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）.模型组和治疗组小鼠血清中IL-17F浓度高于对照组（P＜0.01）,治疗组较模型组小鼠血清中IL-17F浓度减少,但差异无统计学意义（P＞0.05）.模型组小鼠肺组织IL-17F mRNA的相对表达量显著高于对照组和治疗组（P＜0.01）.治疗组肺组织IL-17FmRNA的表达与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：小鼠哮喘模型气道炎症与IL-17F高表达有关,雾化吸入灭活草分枝杆菌减轻哮喘小鼠气道炎症,并下调IL 17F表达.     

甘草酸二铵脂质配体对大鼠急性肺损伤的改善作用*

目的: 研究甘草酸二铵脂质配体(DGLL)对大鼠急性肺损伤(ALI)及肺水肿的影响。方法: 雄性SD大鼠123只,体重170～200 g,(6±1)周龄,灌胃DGLL(30、60、120 mg/kg),1 h后通过腹腔内注射脂多糖(LPS)10 mg/kg建立大鼠ALI模型。6 h后,使用HE染色技术评估肺损伤。使用肺湿干重比、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白质含量和肺组织中的Evans蓝(EB)来评估肺水肿。用ELISA法测定肺组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL-1β)的表达水平。通过免疫组织化学染色法检测髓过氧化物酶(MPO)的表达水平。Western blotting法测定细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、黏附蛋白(ZO-1)、连接黏附分子(JAM-1)等与肺部炎症和微血管通透性有关的蛋白表达水平。结果: MPO免疫反应性降低,大鼠肺组织中TNF-α、IL-1β和ICAM-1的表达水平下降,证明DGLL缓解了LPS诱导的ALI。此外,DGLL可以抑制LPS诱导的肺水肿,降低BALF的蛋白浓度及EB外渗。DGLL也降低了VE-cadherin的表达水平以及抑制LPS引起的肺组织中的连接蛋白,包括ZO-1、JAM-1的表达。结论: DGLL对LPS诱导的大鼠ALI表现出保护作用,同时也抑制了炎症细胞的浸润和微血管屏障的破坏。     

保护素对原代肺成纤维细胞炎症及纤维化增殖的影响

目的：探讨保护素（PDX）对脂多糖（LPS）诱导的原代肺成纤维细胞环氧合酶-2（COX-2）表达的影响及对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导其纤维化增殖转化的影响。方法：分离、纯化、鉴定得到小鼠肺成纤维细胞,用LPS诱导建立成纤维细胞体外炎症模型,用TGF-β1诱导建立体外纤维化增殖模型。PDX分别作用于经过LPS或TGF-β1诱导的原代肺成纤维细胞。采用细胞浓度试剂盒测定细胞增殖,采用实时定量PCR测定基因表达,采用ELISA法检测细胞上清液前列腺素E2（PGE2）水平,应用Western blot检测COX-2蛋白的表达。结果：采用10 ng/mL TGF-β1刺激诱导体外培养的原代肺成纤维细胞48 h能建立较为合理的体外纤维化增殖模型。PDX抑制LPS诱导的原代肺成纤维细胞COX-2蛋白的表达及上清液PGE2水平,同时可能通过剂量依赖方式抑制TGF-β1诱导的原代肺成纤维细胞的增殖。PDX抑制TGF-β1诱导的原代肺成纤维细胞collagen 1α1、collagen 1α2的合成以及α-SMA、纤连蛋白的基因表达。结论：PDX能抑制LPS诱导的小鼠原代肺成纤维细胞COX-2表达及PGE2水平,同时能抑制TGF-β1诱导的小鼠原代肺成纤维细胞纤维化增殖、胶原蛋白合成及向肌成纤维细胞转化。     

芦丁对脂多糖致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨芦丁对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）小鼠的保护作用及可能机制。方法30只C57BL/6小鼠随机分为
对照组,模型组（LPS组）和治疗组（LPS+芦丁组）。利用HE染色观察肺组织病理变化,测量肺湿/干重比（W/D）,ELISA法检测
支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α和IL-1β水平,利用RT-PCR法和Western blot法检测α-ENaC的表达水平。结果病理检查
示模型组肺组织有明显的炎症充血水肿,治疗组较模型组炎症充血水肿明显减轻。模型组W/D值,BALF中TNF-α和IL-1β含
量均较对照组明显增高,而α-ENaC mRNA和蛋白表达水平较对照组显著降低。与模型组相比,治疗组W/D值,BALF中TNF-α
及IL-1β含量明显降低,而α-ENaC mRNA和蛋白表达水平明显增加。结论芦丁能够抑制急性肺损伤炎症反应,增加肺泡上皮
钠通道蛋白表达,有效减轻LPS所致的小鼠急性肺损伤。
     

布地奈德干预肺纤维化JAK-1/STAT1途径的研究

目的观察吸入布地奈德(BUD)对肺纤维化大鼠肺组织细胞黏附因子-1(ICAM-1)、Janus激酶-1(JAK-1)、信号转导子与转录激活子1(STAT1)表达的影响,并探讨其作用机制。方法实验分为博莱霉素(BLM)组、生理盐水(NS)组和BUD组,每组15只。BLM组、BUD组气管内灌注BLM,NS组气管内灌注NS,继之第0~6天每天雾化1次,BUD组雾化吸入BUD,BLM组和NS组雾化吸入NS,第7、14、28天分别处死3组大鼠各5只。用HE、Masson染色观察肺泡炎症和纤维化改变;免疫组化法测定肺组织中ICAM-1、JAK-1及STAT1的表达。结果第7、14天,BLM组肺泡炎程度重于BUD组(P<0.05);第7、14、28天,BLM组肺纤维化程度重于BUD组(P<0.05)。第7、14天,BUD组肺组织中ICAM-1、JAK-1、STAT1表达明显低于BLM组(P<0.05)。结论 JAK-1/STAT1信号途径参与了肺纤维化的发生发展,而吸入型BUD可分别通过抑制肺组织ICAM-1、JAK-1、STAT1的表达加强对肺组织的保护作用。