天花粉蛋白诱导H22肝癌细胞凋亡的研究

目的观察天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)在体外诱导H22肝癌细胞凋亡的效果.方法以不同剂量的TCS加入到H22肝癌细胞溶液中,在24孔培养板上培养72h后荧光染色并涂片,激光共聚焦显微镜下观察TCS诱导H22肝癌细胞凋亡的作用效果.结果10μg/ml浓度的TCS就可诱导H22肝癌细胞出现典型的凋亡形态学特征.经统计学分析,100μg/mlTCS组与50μg/mlTCS组间差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间差异均有统计学意义(P<0.01).TCS的作用浓度与凋亡指数间有正相关关系(r=0.9713,P<0.01).结论TCS在体外可诱导H22肝癌细胞发生凋亡,诱导H22肝癌细胞凋亡是TCS抗肝癌作用的机制之一,具有成为肝癌治疗新药的潜在价值.     

激光共聚焦显微镜观察新生鼠海马齿状回神经干细胞的增殖

目的 观察新生鼠海马齿状回神经干细胞的形态及其分布.方法 新生7 d SD大鼠每天2次腹腔注射Brdu,至出生20 d及32 d分别取脑片标本,用Tritc(罗丹明)标记的麦芽凝集素及FITC标记的小鼠抗大鼠Brdu单克隆抗体行免疫荧光双染色,在激光共聚焦显微镜下观察大鼠海马齿状回神经干细胞的形态、分布特点及数量变化.结果 激光共聚焦显微镜观察显示,出生20 d大鼠海马齿状回Brdu阳性细胞主要聚集在颗粒下层,呈条带状分布,在海马的其他区域也有呈散在的阳性细胞存在,而出生32 d大鼠海马齿状回的神经干细胞呈散在分布,数目明显少于20 d大鼠.结论 新生SD大鼠海马齿状回存在一定数量的神经干细胞,其数量随着大鼠年龄的增大而减少.     

TUNEL技术原位检测肝癌细胞凋亡激光共聚焦显微镜观察

目的 用缺口末端标主技术（ＴＵＮＥＬ）对肝硬变,肝细胞肝癌及培养肝细胞癌细胞系的细胞凋亡进行形态学观察。方法 采用德国宝灵曼公司生产的原位末端标记试剂盒对福尔马林固定,石蜡包埋的肝组织和培养肝细胞进行ＴＵＮＥＬ染色,激光共聚焦显微镜观察会细胞凋亡的形态特征。结果：ＴＵＮＥＬ阳性信号为黄绿色或黄色强荧光,位于胞核,呈环行,小圆形或颗粒状,提示凋亡细胞有典型的新月体状染色质边集,核浓缩以及有大量微核体     

激光共聚焦显微镜观察FITC-Annexin V/PI双染色法检测人肺癌细胞凋亡

目的激光共聚焦显微镜观察FITC-Annexin V／PI双染色法检测人肺癌细胞凋亡的形态。方法对不同剂量含药血清处理的体外培养人肺癌PGLH7细胞株进行Annexin V／PI双染,激光共聚焦显徽镜观察细胞凋亡的形态特征。结果Annexin V／PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察,经含药血清作用的人肺癌细胞ee,凋亡早期细胞呈AnnexinV高染而PI低染,细胞膜呈绿色而细胞核不着色;凋亡中、晚期细胞则AnnexinV和PI均为高染,细胞膜呈绿色而细胞核呈红色;部分细胞的核呈碎片状或梅花状,为典型的细胞凋亡形态。结论FITC—AnnexinV／PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察凋亡细胞是目前观察凋亡的理想方法,特别适用于凋亡细胞的早期检测。     

激光共聚焦显微镜观察神经细胞孤啡肽受体的分布

目的：介绍激光共聚焦显微镜技术及其在观察受体细胞分布实验中的应用。方法：采用原位杂交、免疫荧光双标结合激光共聚焦显微镜技术。结果：孤啡肽受体ORL1在成年大鼠的皮层，海马及下丘脑区域的神经元，星型胶质细胞，小胶质细胞上均有表达。结论：激光共聚焦显微镜技术及免疫荧光双标技术在检测受体的细胞分布方面是一种实用的、简单的方法。     

天花粉蛋白治疗异位妊娠疗效观察

目的:观察天花粉蛋白注射液治疗异位妊娠的有效性和安全性。方法:300例异位妊娠随机分为研究组和对照组各150例。研究组采用天花粉蛋白注射液治疗,对照组采用甲氨蝶呤配伍米非司酮治疗,观察比较2组治疗成功率和副反应。结果:研究组治疗成功123例,成功率82%,对照组治疗成功121例,成功率80.6%,2组成功率比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组和研究组患者经过治疗后,患者体内的β-HCG和孕酮都出现了明显的下降,差异有统计学意义(P<0.05),但研究组的下降水平要优于对照组,2组之间的差异较大,具有统计学意义(P<0.05),研究组患者发生副反应的几率低于对照组,2组之间的差异较为显著,有统计学意义(P<0.05)。结论:天花粉蛋白注射液能有效治疗异位妊娠,副反应较少。     

激光共聚焦显微重建鲜红斑痣三维结构的初步研究

目的：探讨利用激光共聚焦显微重建鲜红斑痣三维结构可行性,初步建立利用激光共聚焦显微重建鲜红斑痣三维结构的方法。方法：鲜红斑痣石蜡标本切取30μm厚的切片,用鼠抗人anti-cd34、羊抗鼠FITC标记二抗免疫荧光染色,再用激光共聚焦显微镜观察,重建鲜红斑痣三维立体结构图像。结果：利用激光共聚焦显微完成了对10μm及30μm厚鲜红斑痣组织的三维结构重建,获得了鲜红斑痣三维结构的高清图形。结论：利用激光共聚焦显微镜重建鲜红斑痣三维结构组织图像是可行的,对进一步了解鲜红斑痣的结构及治疗有一定的意义。     

激光共聚焦显微镜诊断棘阿米巴角膜炎

目的探讨激光共聚焦显微镜(LSCM)在棘阿米巴角膜炎(AK)快速诊断及随访中的价值。方法回顾分析4例(4眼)AK患者的临床表现、角膜组织刮片镜检及培养、LSCM检查结果。结果 4例患者中,2例裂隙灯检查见角膜混浊、浸润,基质雾状水肿,后弹力层皱褶,角膜溃疡形成;2例表现为典型角膜基质环形浸润。角膜真菌刮片镜检及培养均无阳性病例。LSCM显示,棘阿米巴包囊位于角膜上皮下或浅层基质150μm以内;1例患者角膜内查见多个包囊,余均见1个包囊;包囊形态为圆形至椭圆形高回声结构,双层囊壁,大小为25～150μm,内核形态类圆形。经治疗,2例患者包囊消失、基质炎症减退;2例包囊变小,形态发生改变,双层囊壁结构不清;仅在1例中查见滋养体。结论 AK检查手段较多,传统角膜刮片镜检及培养等方法易受角膜取材等因素影响,阳性率较低。LSCM可用于感染角膜快速无创的活体检查,具有高分辨率、准确深度定位、动态观察、纵向断层扫描等优势,是AK病原学快速诊断及随访的重要手段。     

激光共聚焦显微镜观察三磷酸肌醇对大鼠逼尿肌细胞内钙的影响

目的 探讨IP3/Ca2 信号转导过程与逼尿肌细胞内游离Ca2 浓度[Ca2 ]i的关系.方法 建立逼尿肌过度活动大鼠模型,利用激光共聚焦显微镜观察原代培养的逼尿肌稳定及逼尿肌过度活动大鼠逼尿肌培养细胞内钙荧光强度的变化以及10-5 mol/L IP3及其抑制剂肝素影响逼尿肌稳定大鼠逼尿肌培养细胞后细胞内钙荧光强度在有钙液及无钙液中的变化.结果 逼尿肌过度活动鼠逼尿肌培养细胞内钙荧光强度较逼尿肌稳定鼠显著增强(P＜0.01),经10-5 mol/LIP3处理后,逼尿肌稳定大鼠逼尿肌培养细胞内钙荧光强度较处理前显著增强(P＜0.01),且有钙液中细胞内钙荧光强度显著高于无钙液中细胞(P＜0.01).肝素能显著抑制由IP3引起的逼尿肌培养细胞内钙荧光强度的增强.结论 由IP3激活引起的逼尿肌细胞内游离钙浓度的升高可能是逼尿肌过度活动发生的重要原因之一.     

激光聚焦显微镜同步呈现听神经瘤单个细胞周期蛋白与merlin

目的 研究听神经瘤组织中merlin的穿梭运动及其与细胞周期蛋白表达水平间的相互影响.方法 4例听神经瘤组织石蜡包埋标本,用免疫荧光法同时标记各种细胞周期蛋白和merlin,并在激光共聚焦显微镜(CLM)下同步观察标记物在单个细胞中的表达.结果 可同步呈现听神经瘤组织中单个细胞的各种细胞周期蛋白和merlin的表达及分布.当肿瘤细胞处于G1期时,merlin表达以细胞核为主,核周次之,细胞浆较少;G1/S过度期,merlin表达以核周为主,细胞核和细胞浆次之;G2/M期,merlin表达以均匀分部于细胞核为主;而G2/M晚期时,merlin表达以核周为主.结论 用免疫荧光和CLM可以同步呈现听神经瘤组织中各种周期蛋白与merlin在单个瘤细胞中的表达.随细胞周期进程的变化,merlin在细胞核、核周和细胞质间进行穿梭运动.     

利用激光共聚焦扫描显微镜观察根管外细菌的分布和活性

目的 :利用激光共聚焦扫描显微镜观察慢性根尖周炎患牙根尖区根管外细菌的分布范围和活性。方法:临床采集10例需拔除的伴有慢性根尖周炎的单根牙(实验组)和5例因正畸需要拔除的健康单根牙(对照组)。所有样本首先经LIVE/DEAD禄R Bac LightTM死活菌染色试剂盒染色,各样本包埋后由根尖向冠方切取5张1 mm厚的切片。每张切片上随机选择3个视野,用激光共聚焦扫描显微镜观察每张切片上根管外细菌的分布情况和细菌的活性。结果:对照组中,牙骨质有较弱的荧光信号,通过设定观察条件,以对照组切片上无荧光信号为基线进行观察。实验组10例样本中,8例样本的根尖区切片的牙根外表面可观察到由显示绿色荧光信号的活菌和显示红色荧光信号的死菌共同构成的根管外生物膜。根管外细菌主要分布于距根尖2~3 mm范围内的根面牙骨质上。在68%的被观察视野中,活菌的绿色荧光的强度强于死菌的红色荧光。结论:根管外生物膜由活菌和死菌共同构成,分布于部分慢性根尖周炎患牙的根尖区牙骨质外表面上。     

应用激光扫描共聚焦显微技术观察PDT导致癌细胞内钙水平的变化

肿瘤光动力治疗 (photodynamictherapy ,PDT)是现代癌症治疗中一种新的治疗法 ,为了更好地认识光动力诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制。方法 :用Fluo 3AM荧光探针负载培养的人肺腺癌GLC 82细胞 ,在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞内Ca2 浓度的变化。结果 :激光单独照射前后GLC 82细胞内Ca2 的浓度变化不大 ;在PDT作用下 ,激光照射前GLC 82细胞内Ca2 的浓度变化明显。结论 :本方法灵敏、简单、快速 ,能实时监测细胞内游离钙的变化。     

激光扫描共聚焦显微镜观察转基因马铃薯中hIL-12的表达

目的观察外源hIL-12基因在转基因马铃薯的不同组织部位的表达情况。方法采集转基因马铃薯的茎和块茎组织进行研究，以野生马铃薯为阴性对照，用间接荧光免疫标记法、激光共聚焦显微镜观察hIL-12在转基因马铃薯不同组织的表达情况。结果经激光共聚焦显微镜检测，转基因马铃薯茎与块茎中均有hIL-12的表达，而野生马铃薯中无hIL-12的表达。结论本课题组建立的人白介素-12转基因马铃薯表达体系中茎和块茎均能表达hIL-12。     

激光扫描共聚焦显微镜观察血小板内钙离子浓度的变化

观察血小板内钙离子浓度的变化及细胞外钙离子对其影响，为探讨血小板内Ｃａ＋＋与疾病的关系及阐明药物作用机制提供理论依据。方法用不同浓度的二磷酸腺苷（ＡＤＰ）、５－羟色胺（５－ＨＴ）、花生四烯酸、瑞斯托霉素、胶原、凝血酶诱导血小板，通过激光扫描共聚焦显微镜观察标记了Ｆｌｕｏ－３的单个血小板内钙离子变化，以及细胞外钙离子对其影响。结果（１）除凝血酶外，其余诱导剂均可引起血小板钙离子浓度变化，且随着诱导剂浓度增加，钙波动频率增加，持续时间延长；（２）ＡＤＰ引起的血小板钙波动，在细胞外无钙离子时，只是幅度减少，而无频率变化；（３）５－ＨＴ引起的钙波动，在细胞外无钙时，波动消失。结论（１）ＡＤＰ、５－ＨＴ、花生四烯酸、瑞斯托霉素、胶原可引起血小板产生钙浓度变化。（２）不同诱导剂诱发的钙波动，其钙离子来源不同。     

激光扫描共聚焦显微镜观察烧伤创面组织神经纤维的变化

目的  探讨激光扫描共聚焦显微镜观察烧伤后创面组织中神经纤维的形态结构及其分布特点的可行性。方法  取烧伤后1、2、3、4周创面组织，以神经丝蛋白（NF）为标记物，利用荧光免疫技术显示组织中的神经纤维，利用激光扫描共聚焦显微镜进行分层扫描，观察不同层面神经纤维的形态；并进行三维重建，观察神经纤维的立体形态。结果  伤后3周内神经纤维数目低于正常，3周后神经数目开始高于正常，并逐渐变长，随着时间延长出现扭曲缠绕或交错排列，分布呈现区域性集中。分层扫描和三维重建可见伤后2周神经稀疏、短小，3周后神经纤维有不规则肿胀和扭曲变形，内部结构不完整并伴有局部断裂、破损甚至崩解，可见明显的皱褶和出芽，并呈现较正常神经纤维更强的荧光信号，在不同层次以及不同角度的切片上观察到的病理改变程度不同。结论  激光扫描共聚焦显微镜能观察到烧伤后伤区神经纤维三维结构,发现组织修复过程中神经存在再生和重塑现象。     

乳鼠心成纤维细胞波形蛋白和线粒体表达的激光扫描共聚焦显微镜观察

目的：激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察培养的乳鼠心成纤维细胞中细胞骨架波形蛋白（vimentum,Vim)、线粒体（mitochondrial,Mi)以及相互关系，方法：分离纯化乳鼠心成纤维细胞，免疫荧光双标记技术进行了Vim和Mi的标记，激光扫描共聚焦显微镜观察。结果：培养的乳鼠心成纤维细胞中Vim位于细胞的胞质中，呈粗细不等的绿色线条状或丝状分布，标记明显，许多细丝交织形成网状结构，Mi标记为红色颗粒状，遍布于细胞质中，Mi的颗粒大小不等，形态不一，可聚集成团，并有明显的沿着Vim分布的趋势。结论LSCM观察培养的心成纤维细胞中Vim呈细丝交织形成立体的网状结构，Mi有沿着细胞骨架Vim分布的趋势。     

激光共聚焦扫描显微镜观察变异链球菌高致龋力临床株与标准株合成胞外多糖能力差异

目的了解变异链球菌(简称变链菌)593号高致龋力临床分离株在生物膜状态不同时期与标准株ATCC25175(均为血清型c)合成胞外多糖的能力差异。方法在聚苯乙烯塑料片上分别形成3、12、20 h变链菌生物膜标本,采用异硫氰酸荧光素标记的伴刀豆球蛋白A对合成的胞外多糖进行染色,用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察。采用静置法培养形成黏附生长的细菌,蒽酮法测定3～24 h其合成胞外多糖的量。结果胞外多糖与染料结合后发出绿色荧光,各时间段593号临床株绿色荧光的分布较ATCC 25175标准株更致密和广泛。3～20 h 593号临床株合成水溶性葡聚糖能力强于标准株(P<0.05);3～16 h 593号临床株合成水不溶性葡聚糖能力强于标准株(P<0.05);其他时间两者合成胞外多糖的能力差异无统计学意义(P>0.05)。结论在生物膜形成过程中两菌株合成胞外多糖的模式相同,均随时间延长而合成量增加,但在生物膜形成早期(3～16 h)高致龋力临床株表现出不同于标准株的胞外多糖合成模式,其更强的合成胞外多糖能力可能是其具高致龋力的原因之一,提示研究致龋机制时使用临床株作为研究样本较标准株更为敏感。     

S－100和PTA1在垂体前叶共存的形态学证据

目的：观察S－100和血小板－T细胞活化抗原1（PTA1）在正常大鼠垂体前叶细胞的表达和共存。方法：免疫荧光双标记结合激光扫描共聚焦显微镜技术进行观察。结果：首次证实PTA1免疫反应阳性物质主要位于脑垂体血窦壁，与S－100免疫反应阳性细胞密切接触，并有一定程度的共存关系。结论：本结果为进一步明确PTA1分子在体内的分布及其功能提供了形态学依据。     

S-100 和PTA1在垂体前叶共存的形态学证据

目的观察S-100 和血小板-T细胞活化抗原1(PTA1)在正常大鼠垂体前叶细胞的表达和共存. 方法免疫荧光双标记结合激光扫描共聚焦显微镜技术进行观察. 结果首次证实PTA1免疫反应阳性物质主要位于脑垂体血窦壁,与S-100免疫反应阳性细胞密切接触,并有一定程度的共存关系. 结论本结果为进一步明确PTA1分子在体内的分布及其功能提供了形态学依据.     

激光共聚焦显微镜在骨计量学中的应用

激光共聚焦显微镜 (LSCM)是九十年代初出现的一种可用荧光标记进行微形态观察的高分辨显微镜 ,与传统方法比较 ,具有精确、清晰、动态和三维成像等突出优点。骨计量学是研究代谢性骨病的重要方法。本研究将激光共聚焦显微技术引入骨计量学中 ,达到了精确定位和定量分析骨微结构的目的 ,具有无须染色 ,对厚片可进行荧光染色观察的特点 ,其清晰度高 ,制片易 ,可与组织化学、免疫组织化学等方法结合 ,从多个角度、多个层次同时观察骨微结构与各种骨细胞的形态与功能。为代谢性骨病的研究和诊断提供了新的方法和途径。