一氧化氮、诱导性一氧化氮合酶在实验性大鼠腹主动脉瘤中的作用

目的:探讨一氧化氮(NO)和诱导性一氧化氮合酶(iNOS)在实验性大鼠腹主动脉瘤形成中的作用和机制.方法:建立大鼠腹主动脉瘤灌注模型,对照组予以生理盐水腹主动脉灌注,余下予以猪胰弹性蛋白酶灌注制作腹主动脉瘤模型,并分为实验组(术后腹腔注射生理盐水)、药物组(术后腹腔注射氨基胍),观察各组大鼠血清NO、腹主动脉瘤壁组织学和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、iNOS的变化.结果:生理盐水灌注组大鼠术前术后血清NO无明显变化,iNOS、MMP-9表达弱阳性或阴性,动脉壁炎性细胞浸润轻、弹性蛋白降解少;实验组血清NO显著升高,iNOS及MMP-9表达强阳性,炎性细胞浸润重、弹性蛋白几乎完全降解;应用氨基胍后iNOS变化不明显,而NO显著降低,MMP-9表达显著减弱,炎性细胞浸润和弹性蛋白降解明显减轻.结论:iNOS、MMP-9的表达和血清NO水平在实验组均显著升高.iNOS及其合成的NO能促进腹主动脉壁炎性细胞的浸润、中膜基质的降解和MMPs的表达,从而导致了腹主动脉瘤的生成.     

腹主动脉瘤与尿激酶原型纤溶酶原激活剂及其Ⅰ型抑制剂的关系

腹主动脉瘤（AAA）是一种可危及生命的大动脉疾病，目前具体发病机制不明确。现在研究发现尿激酶原型纤溶酶原激活剂（u-PA）、纤溶酶原激活剂抑制剂Ⅰ（PAI-Ⅰ）在AAA发病中有一定作用，但其作用机制尚不清楚。我们采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学技术研究瘤壁组织中u-PA和PAI-1的mRNA和蛋白变化，探讨它们与AAA的相关性。     

胃癌组织中明胶酶A的表达

目的 探讨明胶酶A在胃癌组织中的表达及其意义。方法 采用免疫组化方法检测36例胃癌组织明胶酶A的表达。结果 明胶酶A在正常胃组织中表达极低（2／14），癌旁组织低表达（7／18），胃癌组织高表达（31／36）。明胶酶A表达与胃癌大小、Lauren分型无关。早期胃癌不表达，进展期胃癌特别是有浆膜侵袭和转移者，其明胶酶A呈显著高表达。明胶酶A表达定位于胃癌基质，以巨噬细胞为主。结论 明胶酶A表达可作为判断胃癌侵袭与转移的标志；巨噬细胞在此过程中可能发挥着重要作用。     

胃癌组织中明胶酶B的表达及其意义

近来的研究表明基质金属蛋白酶在肿瘤溶解细胞外基质向外侵袭中发挥了重要的作用。明胶酶Ｂ(ｇｅｌａｔｉｎａｓｅＢＭＭＰ9)是基质金属蛋白酶的一种 ,本研究旨在了解ＭＭＰ9在胃癌浸润、转移中的作用。资料与方法1.研究对象 :本组共 4 3例胃癌患者 ,其中男 31例 ,女12例 ;平均年龄 5 3± 6岁。内镜下取胃癌组织 ,同时取远离癌灶的正常胃粘膜组织。所有患者均经病理检查确诊 ,并行手术治疗。2 .方法 :总ＲＮＡ提取试剂盒、ＡＭＶ逆转录酶、ＲＮＡ酶抑制剂、寡核苷酸引物、Ｔａｑ酶均为Ｐｒｏｍｅｇａ公司产品。毛细管聚合酶链反应 (ＰＣＲ)…     

膀胱移行细胞癌Mta-1表达及与ER、u-PA/PAI-1、MVD的相关性研究

目的 研究膀胱移行细胞癌（BTCC）中转移相关基因（Mta-1）表达，分析其与BTCC临床分期、病理分级、转移及复发的关系，探求其可能的分子作用机制。方法 免疫组化方法检测42例BTCC组织Mta-1、雌激素受体（ER）、尿激酶型纤溶酶原激活物（u-PA）、Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制物（PAI-1）的表达；CD34标记血管内皮细胞，计数肿瘤组织微血管密度（MVD）；分析Mta-1与BTCC的侵袭转移、血管生成及复发间的关系及Mta-1表达与ER、u-PA、PAI-1表达及MVD的相关性。结果 BTCC Mta-1蛋白表达阳性率为73．8％（31／42），正常膀胱组织无一例阳性表达，P〈0．01；Mta-1蛋白表达阳性率随BTCC临床分期及病理分级的升高而增加，肿瘤复发组（100．0％，15／15）高于无复发组（59．3％，16／27），肿瘤转移组（100．0％，14，／14）高于无转移组（60．7％，17／28）（P〈0．05）。BTCC组织中ER表达阳性率随肿瘤临床分期和组织学分级的升高而降低；有转移者14例均无表达（0．0％），28例未转移者中13例有表达（53．6％）（P〈0．05）；复发组15例中仅1例表达（6．7％），未复发组27例中12例表达（44．4％）（P〈0．05）。BTCC中ER与Mta-1蛋白表达呈负相关（r=-0．739，P〈0．01）。BTCC组织和正常膀胱组织中u-PA表达阳性率分别为59．5％（25／42）和16．7％（2／12），BTCC组明显高于对照组（P〈0．05）。BTCC中u-PA蛋白表达与Mta-1蛋白表达呈正相关（r=0．875），而与PAI-1蛋白表达呈负相关（r=-0．535）。PAI-1表达阳性率对照组（50．0％，6／12）明显高于BTCC组（19．0％，8／42）（P〈0．05）。PAI-1蛋白表达与Mta-1蛋白表达呈负相关（r=-0．706）。BTCC中MVD与Mta-1蛋白表达呈正相关（r=0．683）。结论 Mta-1在BTCC中高度表达，并随肿瘤临床分期和病理分级的升高而增加，与肿瘤的转移及复发密切相关。Mta-1参与BTCC的侵袭、转移，可能与上调u-PA蛋白、下调PAI-1蛋白的表达，促进血管生成有关。Mta-1在BTCC侵袭和转移中的作用亦与ER的负调节机制有关。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)和其受体(uPAR)在肝细胞癌的表达及其临床和病理意义

目的　研究尿激酶型纤溶酶原激活剂 (uPA)和其特异性受体 (uPAR)在肝细胞癌 (HCC)的表达及其临床和病理意义。　方法　应用免疫组织化学和酶联免疫吸附法 (ELISA)检测uPA和uPAR在HCC和非癌组织中的表达 ,并与临床及病理指标相联系。　结果　HCC中uPA和uPAR的阳性表达率分别为 75 0 % (12 / 16 )和 6 8.8% (1/ 16 )。在进展性和侵袭性肿瘤与非进展性和非侵袭性肿瘤间uPA和uPAR阳性率无显著性差异 (P >0 .0 5 )。阳性染色主要位于癌细胞和基质细胞胞浆且主要位于癌侵犯的边缘。非癌组织仅见少量阳性染色细胞 ,对照组无特异性阳性染色。在ELISA中 ,癌与非癌组织uPA抗原水平分别为 (4 2 3± 0 5 7)ng/mg蛋白和 (1 2 6± 0 14)ng/mg蛋白 ,uPAR抗原水平分别为 (4 2 5± 0 2 1)ng/mg蛋白和 (3 15± 0 2 3)ng/mg蛋白 ,有显著性差异 (t=18.96 3,P =0 .0 0 0 ;t=13.6 93 ,P =0 .0 0 0 )。且进展性和侵袭性肿瘤中其抗原水平显著高于非进展性和非侵袭性肿瘤 (P <0 0 5 )。　　结论　uPA和uPAR在肝细胞癌表达较高并与其进展和侵袭密切关联。     

肾小管间质纤维化大鼠u-PA/PAI-1的表达及桂枝茯苓胶囊对其影响

目的：观察桂枝茯苓胶囊对肾小管间质纤维化（tubulointerstitial fibrosis,TIF）的肾组织中的尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator,u-PA）及纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1）表达的影响。方法：雄性3月龄SD大鼠72只,随机分为：假手术组（24只）,模型组（24只）,预防组（24只）。行单侧输尿管结扎术单侧输尿管梗阻诱导TIF模型。预防组大鼠加以125 mg/kg桂枝茯苓胶囊,溶于生理盐水灌胃,日2次,模型组及假手术组每天以等体积生理盐水灌胃。各组分别于实验第7天、第14天、第21天时随机选取8只大鼠,处死后行光镜下观察梗阻侧肾脏组织病理学改变、免疫组织化学法（SP法）评价肾脏尿激酶型纤溶酶原激活物-PA、PAI-1表达变化。结果：（1）PAI-1表达量在假手术组各时间点差异无统计学意义（P〉0.05）。各时间点模型组、预防组均高于假手术组（P〈0.01,P〈0.05）,除PAI-1表达量在7 d时模型组与预防组无明显差异外,预防组均低于模型组（P〈0.01）。模型组、预防组表达量随梗阻时间延长而增加（P〈0.01,P〈0.05）。（2）各时间点预防组u-PA表达量均低于假手术组（P〈0.01）,高于模型组（P〈0.01,P〈0.05）。模型组、预防组14 d、21 d u-PA的表达量均较各自前一时间点减少（P〈0.01）,假手术组u-PA的表达量各时间点差异无统计学意义（P〉0.05）。（3）肾小管间质损害半定量评分与PAI-1（r=0.917,P〈0.01）表达量呈正相关,与u-PA表达量呈负相关（r=-933,P〈0.01）。结论：桂枝茯苓胶囊能减轻梗阻肾组织的病理损害,延缓TIF的进程。并参与纤维化形成的全过程。     

彩色B超在诊断腹主动脉瘤的价值(附32例分析)

目的探讨彩色多普勒B超在诊断腹主动瘤的价值。方法对我科从1995年1月～2004年10月收集32例经彩色B超诊断为腹主动脉瘤进行回顾性分析。结果本组32例彩色B超检查中,诊断为单纯腹主动脉瘤21例,夹层腹主动脉瘤是11例。与此同时,26例行CT强化扫查,13例行MRI检查,其诊断结果与彩色B超结果完全相符。彩色B超的正确诊断率为100％。结论彩色多普勒在诊断腹主动脉瘤中具有操作简便、费用低廉,诊断率高,值得临床推广使用。     

体外培养的人腹主动脉瘤血管平滑肌细胞中一氧化氮的生成和诱生型一氧化氮合酶的表达

目的探讨体外培养的人腹主动脉瘤 (AAA)血管平滑肌细胞 (SMC)及其表达诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)和培养液中生成一氧化氮 (NO)的情况。方法 0 0 2 %Ⅰ型胶原酶消化法进行AAA SMC原代培养 ,平滑肌α 肌动蛋白 (α SMA)鉴定SMC并绘制AAA SMC的增殖曲线 ;免疫细胞化学方法检测AAA SMC中iNOS蛋白的表达 ,并测定原代及 2代细胞培养液中亚硝酸盐和硝酸盐的浓度之和 (NO2 - NO3 -,NOX)。结果酶消化法成功培养AAA SMC ,α SMA阳性率为 4 5 %± 5 8% ,传代培养发现AAA SMC增殖力有限 ;AAA SMC中iNOS蛋白阳性率 86 7%± 4 6 % ,细胞培养液中存在高浓度的NOX。结论AAA SMC存在异常增殖但增殖力有限 ,且细胞可能存在表型变化 ;AAA SMC中iNOS蛋白的高表达及NO的过量生成 ,提示由SMC生成的过量NO可能在腹主动脉瘤发病机制中具有重要作用。     

腹主动脉瘤中细胞黏附分子差异表达的研究

目的研究腹主动脉瘤 (AAA)中细胞黏附分子的差异表达与AAA发病的关系。方法利用基因芯片技术筛查AAA和正常腹主动脉中差异表达的细胞黏附分子基因 ,再利用分子生物学方法在基因、蛋白质水平检测。结果AAA中有 3种细胞黏附分子存在差异表达 ,它们是VCAM 1,PECAM 1,TSP ,上调比率分别达到 5 7,3 6及 5 7 4倍。结论AAA中有细胞黏附分子的表达差异 ,差异表达基因可能在AAA的发病过程中起作用     

尿激酶受体在尿激酶诱导小鼠精子趋化运动中的作用

目的研究尿激酶受体(uPAR)在尿激酶(uPA)诱导精子趋化运动中的作用。方法采用精子聚集毛细管内法检测精子趋化性。实验分为对照组和处理组,处理组又根据uPAR抗体浓度的不同分为10、50、100μg/ml 3组。各组毛细管内的液体都是浓度相同的uPA;对照组精子培养皿内的液体为精子悬液与Ham’s F-10的混合液,处理组精子培养皿内液体是在对照组的基础上加有不同浓度的抗-uPAR抗体。分别在实验的第203、0 min检测每组毛细管内聚集的精子数量。结果随着uPAR抗体浓度的增加,uPA趋化精子的数目逐渐减少,与对照组之间差异有显著性(P<0.05)。抗-uPAR抗体与精子作用20 min时对精子趋化运动的抑制最明显,其中50、100μg/ml组与对照组比较,P<0.01。结论阻断精子uPAR可以抑制由uPA诱导的精子趋化运动,推测uPAR可能在精卵识别中起一定的作用。     

基质金属蛋白酶在腹主动脉瘤组织中的表达

目的探查基质金属蛋白酶类（MMPs）在腹主动脉瘤（AAA）组织中产生的源泉。方法采用间质胶原酶（MMP-1）和明胶酶以MMP-9）的mRNA探针在20例AAA组织及4例正常人腹主动脉组织的切片上行原位杂交实验结果MMP-1及MMP-9在巨噬细胞、平滑肌细胞和淋巴细胞均有表达,其中巨噬细胞的MMPs表达强烈。结论MMPs在AAA的形成和扩张中发挥重要作用,炎性细胞是产生MMPS的主要源泉,并影响问质细胞的MMPS表达。     

封闭负压引流技术对创面愈合过程纤溶酶原激活剂级联表达的影响

目的研究封闭负压引流技术对急慢性创面纤溶酶原激活剂(plasminogen activator,PA)级联中尿激酶型纤溶酶激活剂(urokinase-type plaminogen activator,uPA)和尿激酶型纤溶酶激活剂受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,uPA)表达的影响。方法雄性小家猪5头,背部两侧形成急性创面,分为实验组和对照组,仅实验组动物接受封闭负压引流治疗。分别在治疗前和治疗后第1、3、6、9、12、18、25天于创缘切取标本,用兔抗人uPA和uPAR单克隆抗体按ABC程序进行免疫组织化学染色,并计算uPAA和uPAR的标记指数。人慢性创面6例,清创后进行持续封闭负压引流治疗,在治疗后第13、、5、7天采集创面渗出液,并用ELISA法检测渗出液中uPA和uPAR的含量。结果猪急性创面在封闭负压引流治疗后uPA和uPAR均增加,在第3天达到高峰,然后急速下降,但实验组的基因表达量和染色强度均显著高于对照组。6例人慢性创面进行治疗前uPA和uPAR表达较多,随着治疗时间的延长而逐渐减少。结论封闭负压引流治疗既能上调急性创面伤口周围的表皮角质形成细胞的uPA和uPAR表达,使之迅速增殖迁移;又能通过抑制慢性创面uPA和uPAR表达,从而减少细胞外基质的降解。     

Cyclophilin A在腹主动脉瘤形成中的作用

腹主动脉瘤是常见的血管疾病.炎性反应与细胞基质退化在该病形成中起到关键作用,其主要分子机制包括血管平滑肌细胞衰老、氧化应激、局部促炎性因子释放增多及基质金属蛋白酶活化增强.亲环素A(CypA)是亲环蛋白家族中最重要的成员,参与体内多种生理功能.其在血管平滑肌细胞大量表达,与腹主动脉瘤形成密切相关,可作为临床治疗的新靶点...     

骨肉瘤中尿激酶型纤溶酶原激活因子和受体的表达

目的研究尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)及其受体(uPAR)在不同外科分期骨肉瘤中的表达及意义.方法采用荧光定量RT-PCR方法检测32例骨肉瘤组织uPA和uPAR表达情况.结果肿瘤组织与癌旁组织和正常组织比较,uPA和uPAR表达的阳性率明显增高(P＜0.01).骨肉瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期表达uPA的阳性率分别为22.2%(2/9)、76.9%(10/13)、90.0%(9/10),表达uPAR的阳性率分别为33.3%(3/9)、84.6%(11/13)、90.0%(9/10).uPA和uPAR在Ⅰ期和Ⅱ期、Ⅰ期和Ⅲ期骨肉瘤中表达差异均有显著性(P＜0.05、P＜0.01).结论uPA/uPAR在骨肉瘤组织中表达明显升高.肿瘤恶性程度越高,uPA/uPAR表达阳性率越高,提示uPA/uPAR与骨肉瘤恶性进展有高度相关性.     

尿激酶型纤溶酶原激活物对高糖诱导大鼠系膜细胞增殖及表型转化的影响及其机制

目的 通过体外培养大鼠系膜细胞（MC）,观察尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）对高糖环境下MC增殖及表型转化的影响及其可能的信号转导机制。 方法 体外培养大鼠MC,分为4组：对照组、高糖组、高糖+渥曼青霉素组、高糖+uPA组。MTT法检测各组MC增殖情况。流式细胞仪分析各组MC细胞周期改变。Western印迹法检测各组MC表达CDK2与p27Kip1变化,并测定MC中信号蛋白Akt的活性。激光共聚焦显微镜检测各组MC中α-SMA表达方式及表达量变化。 结果 培养24 h后高糖组MC增殖程度较对照组显著增加（P < 0.01）,渥曼青霉素与uPA组可明显抑制细胞增殖（P < 0.01）。高糖刺激Akt活性,渥曼青霉素与uPA组Akt活性均较高糖组显著降低（均P < 0.01）。高糖组MC培养24 h后, p27Kip1蛋白表达较对照组显著减少（P < 0.01）;高糖+渥曼青霉素组、高糖+uPA组p27Kip1蛋白表达均较高糖组显著增加（均P < 0.01）;各组CDK2蛋白表达无明显变化。高糖组MC培养24 h后,胞质中α-SMA表达较对照组显著增加（P < 0.01）,并在核周出现聚集;高糖+渥曼青霉素组、高糖+uPA组α-SMA表达量均较高糖组显著减少（均P < 0.01）,其分布与对照组无显著差异。 结论 uPA可能通过抑制Akt信号分子活性,上调p27Kip1表达,拮抗高糖所致MC增殖与表型转化。     

双氢青蒿素对人骨肉瘤细胞TE85细胞内尿激酶型纤溶酶原激活物和色素上皮衍生因子表达的影响

目的 观察双氢青蒿素(DHA)对人骨肉瘤细胞活性、转移能力以及细胞中尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响.方法 将不同浓度的DHA(5、10、20、40、80 μmol/L)作用于体外培养的正常人成骨细胞和人骨肉瘤细胞TE85 12、24、48 h后,噻唑蓝(MTT)法测定DHA对细胞活性的影响,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞中uPA和PEDF mRNA水平的表达,Westen blot法检测uPA和PEDF蛋白水平的表达.结果 DHA对人成骨细胞活性无明显影响(P＞0.05).DHA能够明显抑制人骨肉瘤细胞TE85的活性(P＜0.05).不同作用时间下DHA对人骨肉瘤细胞TE85的半数抑制浓度(IC50)分别为(12 h)=(41.66±0.53) μmol/L、IC50(24 h)=(32.28 ±0.27)μmol/L和IC50 (48 h)=(22.53±1.26) μmol/L.DHA能够明显减少人骨肉瘤细胞的迁移和细胞中uPA的表达水平,同时细胞中PEDF表达升高(P＜0.05).结论 DHA对正常人体骨组织无害,能够有效抑制骨肉瘤细胞生长和转移.     

Expression of urokinase-type plasminogen activator, urokinase-type plasminogen activator receptor and plasminogen activator inhibitors in patients with renal cell carcinoma: correlation with tumor associated macrophage and prognosis

PURPOSE: Urokinase-type plasminogen activator (uPA) has an important role in tumor progression through the degradation of extracellular matrix. In addition, uPA receptor (uPAR) and plasminogen activator inhibitors (PAIs), composed of PAI-1 and 2, are also known to affect such activities. Tumor associated macrophage (TAM) is an important regulator of tumor progression that is associated with the uPA system in various cancers. However, to our knowledge the clinical significance of PAI-2 and the relationship between the uPA system and TAM in human renal cell carcinoma (RCC) tissues have not been investigated. We investigated and clarified these issues. MATERIALS AND METHODS: The subjects of the current study were 106 consecutive surgically resected specimens from patients with RCC. The expression of uPA, uPAR, PAI-1 and PAI-2 was determined by immunohistochemistry. We also examined the relationships among these molecules, survival and TAM. RESULTS: The mean immunoreactive scores (range 0 to 6) of uPA, uPAR, PAI-1 and PAI-2 were 3.09, 2.22, 1.99 and 0.56, respectively. These scores correlated with the grade and presence of metastasis. The expression of uPA, uPAR and PAI-1 but not PAI-2 correlated negatively with cause specific survival. Of uPA family members multivariate analysis showed that PAI-1 independently influenced cause specific survival. TAM counts correlated with PAI-1 only (p <0.001). CONCLUSIONS: Our results suggest that PAI-1 is an important regulator of tumor progression and survival, and PAI-1 may modulate them via TAM. On the other hand, PAI-2 has a minimum role in survival. Our results may help discussions of treatment strategy in patients with RCC.     

尿激酶型纤溶酶原激活因子及其受体在神经母细胞瘤中的表达及其意义

目的：研究尿激酶型纤溶酶原活因子（uPA)及其受体（uPAR）在神经母细胞瘤（NB）中的表达和意义。方法：应用免疫组织化学方法研究uPA及uPAR在42例神经母细胞瘤中的表达，并应用逆转录-聚合酶链式反应（RT－PCR）方法检测患儿骨髓和外周血中的神经蛋白基因产物9．5（PGP9．5）。结果：uPA及uPAR阳性表达主在进展期肿瘤（均为85．7％）高于局灶期肿瘤（42．9％，28．6％）；预后不良型患儿（91．7％，83．3％）高于预后良好型患儿（均为44．4％），且差异均具有非常显著性（P＜0．01）。患儿骨髓和外周血中PGP9．5阳性检出率在uPA阳性患儿组（60．0％）显著高于uPA阴性患儿组（8．3％，P＜0．01）；uPAR阳性组（57．1％）高于uPAR阴性组（21．4％，P＜0．05）。uPA和uPAR同时阳性的10例患儿，骨髓和外周血中均有PGP9．5阳性表达，而同时阴性的5例患儿中，均未检测到PGP9．5。结论：uPA和uPAR在NB的浸润转移过程中发挥重要的作用。